Nghiên cứu khả năng sinh hoạt chất đối kháng vi sinh vật gay bệnh cho cây trồng của các chủng nấm sợi phân lập từ rừng đà lạt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ NHÃ VY NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH HOẠT CHẤT ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT GÂY BỆNH CHO CÂY TRỒNG CỦA CÁC CHỦNG NẤM SỢI PHÂN LẬP TỪ RỪNG ĐÀ LẠT TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2009 LỜI CÁM ƠN Lời tri ân sâu sắc xin gửi đến tới TS Trần Thị Thanh – Người trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài Xin chân thành cám ơn TS Trần Thanh Thủy tồn thể Thầy, Cơ khoa Sinh trường Đại Học Sư Phạm Tp HCM hết lòng giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới TS Lê Thị Châu cán nghiên cứu phòng vi sinh Viện Sinh Học Tây Nguyên; ThS Nguyễn Khoa Trưởng tồn thể Thầy, Cơ khoa Sinh trường Đại Học Đà Lạt giúp đỡ tạo điều kiện suốt thời gian làm đề tài Cuối cùng, xin cám ơn người thân, bạn bè, chị khóa, em sinh viên trường Đại Học Đà Lạt sát cánh hồn thành luận văn Tp Hồ Chí Minh, ngày 04 tháng 08 năm 2009 Nguyễn Thị Nhã Vy LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết q trình tự tìm tịi nghiên cứu tôi, không chép thành công trình nghiên cứu tơi hồn tồn chịu trách nhiệm trước nội dung trình bày luận văn MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cám ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục cách hình vẻ, đồ thị MỞ ĐẦU Chương : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nấm sợi .5 1.1.1 Đặc điểm nấm sợi .5 1.1.2 Phân loại nấm sợi 14 1.1.3 Vai trò nấm sợi 17 1.2 Chất kháng sinh từ nấm sợi 18 1.2.1 Lịch sử tìm chất kháng sinh 19 1.2.2 Ứng dụng chất kháng sinh từ nấm sợi 22 1.3 Thuốc trừ sâu Sinh học – giải pháp cho ngành Nơng nghiệp xanh, sạch, an tồn .28 1.3.1 Đặc tính VSV kí sinh gây bệnh cho trồng 28 1.3.2 Tình hình phá hoại trồng sâu, bệnh 31 1.3.3 Một số nấm gây bệnh cho trồng 33 1.3.4 Tình hình sử dụng thuốc trừ sâu, bệnh 37 1.3.5 Những chế phẩm VSV phòng trừ sâu, bệnh 39 1.3.6 Tình hình sản xuất rau, hoa Đà Lạt 42 1.3.7 Tình hình bệnh hại Địa Lan (Cymbidium) 44 1.4 Vài nét giới thiệu Đà Lạt 52 1.4.1 Vị trí địa lý 52 1.4.2 Địa hình 52 1.4.3 Tài nguyên rừng 54 1.4.4 Khí hậu 56 Chương : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 59 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 59 2.1.2 Hoá chất 60 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ 60 2.1.4 Các môi trường sử dụng nghiên cứu 61 2.2 Phương pháp nghiên cứu 63 2.2.1 Phương pháp VSV 63 2.2.2 Phương pháp quan sát hình thái nấm sợi 65 2.2.3 Các phương pháp hoá sinh 66 2.2.4 Thử hoạt tính đối kháng với chủng nấm bệnh cho trồng 70 2.2.5 Phương pháp kiểm tra độ bền nhiệt hoạt chất đối kháng 71 2.2.6 Phương pháp bảo quản giống nấm sợi mơi trường thạch có lớp dầu khoáng 72 2.2.7 Phương pháp xử lí số liệu toán thống kê đơn giản 72 2.2.8 Phương pháp định danh vi nấm phương pháp giải trình tự cơng ty Nam Khoa 72 Chương : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết phân lập khiết chủng nấm sợi từ rừng Đà Lạt 76 3.2 Khảo sát khả sinh hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi phân lập 77 3.3 Tuyển chọn chủng nấm sợi có họat tính đối kháng cao 81 3.4 Khảo sát phổ đối kháng với VSV gây bệnh 83 3.5 Các đặc điểm sinh học phân loại chủng nấm sợi tuyển chọn 90 3.5.1 Đặc điểm hình thái, phân loại 90 3.5.2 Một số đặc điểm sinh lý, sinh hoá chủng nấm sợi nghiên cứu 95 3.6 Bước đầu ứng dụng chủng nấm sợi tuyển chọn để phòng trị bệnh cho Địa Lan (Cymbidium) 110 3.6.1 Ứng dụng chủng Trichoderma atroviride phòng bệnh cho Địa Lan (Cymdibium) 110 3.6.2 Ứng dụng chủng ĐTN4.19 trị bệnh thối rễ Địa Lan (Cymdibium) 116 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BTT : Bào tử trần CKS : Chất kháng sinh DNC : Dịch ni cấy ĐKKL : Đường kính khuẩn lạc KL : Khuẩn lạc KS : Kháng sinh HS : Hệ sợi MT : Môi trường NC : Nghiên cứu VK Gr+ : Vi khuẩn Gram dương VK Gr- : Vi khuẩn Gram âm VSV : Vi sinh vật VSVKĐ : Vi sinh vật kiểm định TBT: Trung bình tháng TBN: Trung bình năm DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Hiệu việc sử dụng phối hợp glucose galactose phát triển Aspergillus niger (nuôi cấy tĩnh 20oC ngày) Bảng 1.2: Diện tích gieo trồng rau hoa cắt cành từ năm 1996-2005 Bảng 3.1 : Kết khảo sát khả sinh hoạt chất đối kháng chủng nấm phân lập từ rừng Đà Lạt – Lâm Đồng vị trí lấy mẫu Bảng 3.2 : Kết thống kê hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi phân lập từ rừng Đà Lạt – Lâm Đồng Bảng 3.3 : Những chủng nấm sợi có hoạt tính đối kháng cao Bảng 3.4: Khảo sát khả đối kháng với VSV gây bệnh trồng chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.5: Đặc điểm phân loại chủng nấm sợi ĐTN3.8 Bảng 3.6: : Hoạt tính enzyme chủng sợi tuyển chọn Bảng 3.7: Khả đồng hoá nguồn Cacbon, Nitơ khác chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.8: Khảo sát ảnh hưởng độ pH tới sinh trưởng, phát triển chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.9: Khảo sát ảnh hưởng độ pH lên hoạt tính đối kháng chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.10: Ảnh hưởng thời gian đến sinh trưởng, phát triển hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.11: Độ bền nhiệt dịch chiết hoạt chất đối kháng thơ dịch lên men DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc sợi nấm Hình 1.2: Sự phát triển hệ sợi nấm Hình 1.3: Nấm Trichoderma kí sinh nấm gây bệnh cho trồng Hình 1.4: Cuống bào tử bào tử Pyricularia oryzae (Sharma, 1998) Hình 1.5: Cuống bào tử bào tử Curvularia lunata (Sharma, 1998) Hình 1.6 : Vùng rau hoa Vạn Thành, Cam Ly Hình 1.7: Vườn Hoa Địa Lan Phường 7, Đà Lạt Hình 1.8: Hình thái Địa Lan (Cymbidium) Hình 1.9 : Cảnh quan nơi lấy mẫu nghiên cứu Hình 2.1: Vị trí lấy mẫu đồ Đà Lạt – Lâm Đồng Hình 2.2: Phương pháp giải trình tự đọc kết tự động (đánh dấu hóa chất huỳnh quang) Hình 3.1: Hoạt tính đối kháng với VSV kiểm định chủng ĐTN4.19 Hình 3.2: Hoạt tính đối kháng với VSV kiểm định chủng ĐTN3.7, ĐTN3.8, ĐTN3.9 Hình 3.3: Kháng với nấm gây bệnh cho trồng hoạt chất đối kháng Hình 3.4: Kháng với nấm gây bệnh cho trồng cách cạnh tranh Hình 3.5: Hình thái đại thể vi thể chủng ĐTN3.8 Hình 3.6: Khuẩn lạc ĐTN4.19 sau ngày ni cấy Czapek Dox Hình 3.7: Hình thái đại thể vi thể chủng ĐTN4.19 Hình 3.8: Hoạt tính enzyme cellulaza chủng ĐTN4.19 ĐTN3.8 Hình 3.9: Khả đồng hóa nguồn Cacbon khác Hình 3.10: Khả đồng hóa nguồn Nitơ khác Hình 3.11: Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng, phát triển chủng nghiên cứu Hình 3.12: Đốt Trấu Dớn làm giá thể trồng Địa Lan bổ sung Trichoderma atroviride Hình 3.13: Cây Địa Lan trồng loại giá thể khác Hình 3.14: Rễ Địa Lan sau tháng trồng loại giá thể khác Hình 3.15: Ứng dụng chủng ĐTN4.19 trị bệnh thối rễ cho Địa Lan 28 Lê Xuân Phương (2001), “VSV Công nghiệp”, NXB Xây dựng ĐH Đà Nẵng 29 Lương Đức Phẩm (2007), “Công nghệ VSV”, NXB Nông Nghiệp 30 Lương Đức Phẩm (2007), “Các chế phẩm sinh học dùng chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản”, NXB Nông Nghiệp 31 Lương Đức Phẩm, Hồ Sưởng (1978), “Vi sinh tổng hợp”, NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội 32 TS Trần Thị Thanh (2007), “Công Nghệ Vi Sinh” , NXB Giáo Dục 33 Nguyễn Xuân Thành (chủ biên), Nguyễn Như Thành, Dương Đức Tiến (2004), “VSV Nông nghiệp”, NXB Đại học Sư Phạm 34 Nguyễn Xuân Thành, Lê Văn Hưng, Phạm Văn Toản (2003), “Giáo trình Cơng nghệ VSV sản xuất Nông Nghiệp xử lý ô nhiễm môi trường”, NXB Nông Nghiệp 35 Trần Thanh Thuỷ (1999), “Hướng dẫn thực hành VSV học” , NXB Giáo dục 36 Nguyễn Thị Thu (2005), “Nghiên cứu đặc tính sinh học khả sinh kháng sinh chủng Streptomyces phân lập từ rừng ngập mặn Việt Nam”, Luận văn tốt nghiệp Trường ĐH Sư Phạm Hà Nội 37 Lê Đức Tuấn (2002), “Khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ”, NXB Nông Nghiệp Tp.HCM 38 Nguyễn Ngọc Tú, Nguyễn Cửu Thị Hương Giang (1997), “Bảo vệ trồng chế phẩm từ vi nấm”, NXB Nông Nghiệp Tp HCM 39 Ủy ban nhân dân tỉnh Lâm Đồng (2008), “Địa Chí Đà Lạt”, NXB Tổng hợp TP.HCM 40 Phân viện Khoa học Việt Nam (1976 – 1982), “Nghiên cứu sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh Bt” 41 Liên hiệp khoa học sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh B thuringiensis (1984) 42 Viện Sinh học Nhiệt Đới (1998), “Tuyển tập cơng trình nghiên cứu khoa học (1993 – 1998), (1999-2000)”, NXB Nông Nghiệp Tp HCM 43 Các báo cáo Viện Khoa học, “Sử dụng VSV chống trùng bệnh có hại cho trồng” 44 http://www.diepluc.com/1/content/view/25/65/lang,vietnam/ 45 http://www.vocw.edu.vn 46 http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/vinam01a.htm 47 http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/vinam01b.htm 48 http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/namsoi 49 http://www.medcastle.com/?p=2716&lang=vi 50 http://www.tuoitre.com.vn/Tianyon/Index.aspx?ArticleID=321042&ChannelID=2 51 http://dantri.com.vn/c36/s36-330612/who-tuyen-bo-cum-ah1n1-la-dai-dich-trentoan-cau.htm 52 http://www.khoahoc.com.vn/khampha/sinh-vat-hoc/vikhuancontrung/24428_Virus_H1N1_nguy_hiem_hon_nhieu_so_voi_suy_nghi_cu a_con_nguoi.aspx 53 http://tuyenquangkhcn.org.vn/TrongTrot 54 http://www.dalat.gov.vn/web/books/Cymbidium 55 http://www.baovietnam.vn/cong-nghe/9075/18/Khi-hau-co-dau-hieu-khong-binhthuong 56 http://www.dalat.gov.vn/web/baolamdong/tabid/572/Add/yes/ItemID/4538/catego ries/37/Default.aspx 57 http://www.tuoitre.com.vn/Tianyon/Index.aspx?ArticleID=189863&ChannelID=8 58 http://www.sggp.org.vn/ngoaithanh/2006/11/72690/ 59 http://www.nongthon.net/apm/modules.php?name=News&file=save&sid=3807 60 http://khuyennonghue.org.vn/default.asp?sq=News&naid=78&caid=17 61 http://www.maydietcontrung.com/tin-tuc/109-con-trung-gay-hai-ngay-cang-cokha-nang-khang-thuoc.html 62 http://niengiamnongnghiep.vn/index.php?self=article&id=88 63 http://www.monre.gov.vn 64 http://monre.vietnamnet.vn/khoahoc 65 http://vndgkhktnn.vietnamgateway.org 66 http://www.dalat.gov.vn 67 http://www.skhcn.vinhlong.gov.vn 68 http://vst.vista.gov.vn 69 http://www.cesti.gov.vn 70 http://www.tuyenquangkhcn.org.vn 71 http://www.dongnai.gov.vn 72 http://www.hau1.edu.vn 73 http://www.ppd.gov.vn 74 http://www.khoahocphattrien.com.vn 75 http://www.tchdkh.org.vn 76 http://www.donre.hochiminhcity.gov.vn 77 http://www.vaas.org.vn 78 http://www.dalatrose.com 79 http://www.vt.tuwien.ac.at/division/project.php?project_id=6 80 http://www.nysaes.cornell.edu/ent/biocontrol/pathogens/trichoderma.html 81 http://skhcn.vinhlong.gov.vn/Default.aspx?tabid=143&ctl=Detail&mid=535&Arti cleID=1106 82 http://www.dostbinhdinh.org.vn/MagazineNewsPage.asp?TinTS_ID=275&TS_I D=15 83 http://www.attra.org/attra-pub/soilborne.html PHỤ LỤC Khuẩn lạc chủng T atroviride môi Khuẩn ty cuốg sinh bào tử chủng trường Czapek Dox sau ngày nuôi cấy Trichoderma atroviride Khuẩn lạc chủng ĐTN4.19 mơi trường khoai tây sau ngày ni cấy Hình thái vi thể chủng ĐTN4.19 Hình thái vi thể chủng ĐTN4.19 Hoạt tính đối kháng với B subtilis E coli chủng ĐTN4.19 (mặt sau đĩa petri) Khả bền nhiệt dịch chiết hoạt chất Cây Địa Lan - Cam Lửa bị bệnh thối rễ đối kháng thô chủng ĐTN4.19 nhiệt độ 121oC Cây Địa Lan phát triển mạnh hỗn hợp Địa Lan trồng Trấu Dớn đốt có bổ Trấu Dớn đốt có bổ sung Trichoderma sung Trichoderma atroviride rễ phát triển atroviride so với Địa Lan trồng hỗn nhanh trắng trồng Dớn hợp Trấu Dớn không đốt ... 3.1 : Kết khảo sát khả sinh hoạt chất đối kháng chủng nấm phân lập từ rừng Đà Lạt – Lâm Đồng vị trí lấy mẫu Bảng 3.2 : Kết thống kê hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi phân lập từ rừng Đà Lạt – Lâm... chọn chủng nấm sợi có khả sinh hoạt chất đối kháng ức chế, tiêu diệt VSV gây bệnh trồng Nội dung nghiên cứu đề tài: - Phân lập khiết chủng nấm sợi từ rừng Đà Lạt - Xác định khả sinh hoạt chất đối. .. phát từ thực tế trên, vi? ??c tiến hành thực đề tài : ? ?Nghiên cứu khả sinh hoạt chất đối kháng VSV gây bệnh cho trồng chủng nấm sợi phân lập từ rừng Đà Lạt? ?? vi? ??c làm cần thiết Mục đích đề tài Phân lập