Nghiên cứu khả năng sinh hoạt chất đối kháng vi sinh vật gây bệnh cho cây trồng của các chủng nấm sợi phân lập từ rừng Đà Lạt

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ NHÃ VY NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH HOẠT CHẤT ĐỐI KHÁNG VI SINH VẬT GÂY BỆNH CHO CÂY TRỒNG CỦA CÁC CHỦNG NẤM SỢI PHÂN LẬP TỪ RỪNG ĐÀ LẠT TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2009 LỜI CÁM ƠN Lời tri ân sâu sắc xin gửi đến tới TS Trần Thị Thanh – Người trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực đề tài Xin chân thành cám ơn TS Trần Thanh Thủy toàn thể Thầy, Cô khoa Sinh trường Đại Học Sư Phạm Tp HCM hết lòng giúp đỡ trình học tập nghiên cứu Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới TS Lê Thị Châu cán nghiên cứu phòng vi sinh Viện Sinh Học Tây Nguyên; ThS Nguyễn Khoa Trưởng toàn thể Thầy, Cô khoa Sinh trường Đại Học Đà Lạt giúp đỡ tạo điều kiện suốt thời gian làm đề tài Cuối cùng, xin cám ơn người thân, bạn bè, chị khóa, em sinh viên trường Đại Học Đà Lạt sát cánh hoàn thành luận văn Tp Hồ Chí Minh, ngày 04 tháng 08 năm 2009 Nguyễn Thị Nhã Vy LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết trình tự tìm tòi nghiên cứu tôi, không chép thành công trình nghiên cứu hoàn toàn chịu trách nhiệm trước nội dung trình bày luận văn MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cám ơn Lời cam đoan Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục cách hình vẻ, đồ thị MỞ ĐẦU Chương : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nấm sợi .5 1.1.1 Đặc điểm nấm sợi .5 1.1.2 Phân loại nấm sợi 14 1.1.3 Vai trò nấm sợi 17 1.2 Chất kháng sinh từ nấm sợi 18 1.2.1 Lịch sử tìm chất kháng sinh 19 1.2.2 Ứng dụng chất kháng sinh từ nấm sợi 22 1.3 Thuốc trừ sâu Sinh học – giải pháp cho ngành Nông nghiệp xanh, sạch, an toàn .28 1.3.1 Đặc tính VSV kí sinh gây bệnh cho trồng 28 1.3.2 Tình hình phá hoại trồng sâu, bệnh 31 1.3.3 Một số nấm gây bệnh cho trồng 33 1.3.4 Tình hình sử dụng thuốc trừ sâu, bệnh 37 1.3.5 Những chế phẩm VSV phòng trừ sâu, bệnh 39 1.3.6 Tình hình sản xuất rau, hoa Đà Lạt 42 1.3.7 Tình hình bệnh hại Địa Lan (Cymbidium) 44 1.4 Vài nét giới thiệu Đà Lạt 52 1.4.1 Vị trí địa lý 52 1.4.2 Địa hình 52 1.4.3 Tài nguyên rừng 54 1.4.4 Khí hậu 56 Chương : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 59 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 59 2.1.2 Hoá chất 60 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ 60 2.1.4 Các môi trường sử dụng nghiên cứu 61 2.2 Phương pháp nghiên cứu 63 2.2.1 Phương pháp VSV 63 2.2.2 Phương pháp quan sát hình thái nấm sợi 65 2.2.3 Các phương pháp hoá sinh 66 2.2.4 Thử hoạt tính đối kháng với chủng nấm bệnh cho trồng 70 2.2.5 Phương pháp kiểm tra độ bền nhiệt hoạt chất đối kháng 71 2.2.6 Phương pháp bảo quản giống nấm sợi môi trường thạch có lớp dầu khoáng 72 2.2.7 Phương pháp xử lí số liệu toán thống kê đơn giản 72 2.2.8 Phương pháp định danh vi nấm phương pháp giải trình tự công ty Nam Khoa 72 Chương : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Kết phân lập khiết chủng nấm sợi từ rừng Đà Lạt 76 3.2 Khảo sát khả sinh hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi phân lập 77 3.3 Tuyển chọn chủng nấm sợi có họat tính đối kháng cao 81 3.4 Khảo sát phổ đối kháng với VSV gây bệnh 83 3.5 Các đặc điểm sinh học phân loại chủng nấm sợi tuyển chọn 90 3.5.1 Đặc điểm hình thái, phân loại 90 3.5.2 Một số đặc điểm sinh lý, sinh hoá chủng nấm sợi nghiên cứu 95 3.6 Bước đầu ứng dụng chủng nấm sợi tuyển chọn để phòng trị bệnh cho Địa Lan (Cymbidium) 110 3.6.1 Ứng dụng chủng Trichoderma atroviride phòng bệnh cho Địa Lan (Cymdibium) 110 3.6.2 Ứng dụng chủng ĐTN4.19 trị bệnh thối rễ Địa Lan (Cymdibium) 116 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BTT : Bào tử trần CKS : Chất kháng sinh DNC : Dịch nuôi cấy ĐKKL : Đường kính khuẩn lạc KL : Khuẩn lạc KS : Kháng sinh HS : Hệ sợi MT : Môi trường NC : Nghiên cứu VK Gr+ : Vi khuẩn Gram dương VK Gr- : Vi khuẩn Gram âm VSV : Vi sinh vật VSVKĐ : Vi sinh vật kiểm định TBT: Trung bình tháng TBN: Trung bình năm DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Hiệu việc sử dụng phối hợp glucose galactose phát triển Aspergillus niger (nuôi cấy tĩnh 20oC ngày) Bảng 1.2: Diện tích gieo trồng rau hoa cắt cành từ năm 1996-2005 Bảng 3.1 : Kết khảo sát khả sinh hoạt chất đối kháng chủng nấm phân lập từ rừng Đà Lạt – Lâm Đồng vị trí lấy mẫu Bảng 3.2 : Kết thống kê hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi phân lập từ rừng Đà Lạt – Lâm Đồng Bảng 3.3 : Những chủng nấm sợi có hoạt tính đối kháng cao Bảng 3.4: Khảo sát khả đối kháng với VSV gây bệnh trồng chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.5: Đặc điểm phân loại chủng nấm sợi ĐTN3.8 Bảng 3.6: : Hoạt tính enzyme chủng sợi tuyển chọn Bảng 3.7: Khả đồng hoá nguồn Cacbon, Nitơ khác chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.8: Khảo sát ảnh hưởng độ pH tới sinh trưởng, phát triển chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.9: Khảo sát ảnh hưởng độ pH lên hoạt tính đối kháng chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.10: Ảnh hưởng thời gian đến sinh trưởng, phát triển hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi tuyển chọn Bảng 3.11: Độ bền nhiệt dịch chiết hoạt chất đối kháng thô dịch lên men DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cấu trúc sợi nấm Hình 1.2: Sự phát triển hệ sợi nấm Hình 1.3: Nấm Trichoderma kí sinh nấm gây bệnh cho trồng Hình 1.4: Cuống bào tử bào tử Pyricularia oryzae (Sharma, 1998) Hình 1.5: Cuống bào tử bào tử Curvularia lunata (Sharma, 1998) Hình 1.6 : Vùng rau hoa Vạn Thành, Cam Ly Hình 1.7: Vườn Hoa Địa Lan Phường 7, Đà Lạt Hình 1.8: Hình thái Địa Lan (Cymbidium) Hình 1.9 : Cảnh quan nơi lấy mẫu nghiên cứu Hình 2.1: Vị trí lấy mẫu đồ Đà Lạt – Lâm Đồng Hình 2.2: Phương pháp giải trình tự đọc kết tự động (đánh dấu hóa chất huỳnh quang) Hình 3.1: Hoạt tính đối kháng với VSV kiểm định chủng ĐTN4.19 Hình 3.2: Hoạt tính đối kháng với VSV kiểm định chủng ĐTN3.7, ĐTN3.8, ĐTN3.9 Hình 3.3: Kháng với nấm gây bệnh cho trồng hoạt chất đối kháng Hình 3.4: Kháng với nấm gây bệnh cho trồng cách cạnh tranh Hình 3.5: Hình thái đại thể vi thể chủng ĐTN3.8 Hình 3.6: Khuẩn lạc ĐTN4.19 sau ngày nuôi cấy Czapek Dox Hình 3.7: Hình thái đại thể vi thể chủng ĐTN4.19 Hình 3.8: Hoạt tính enzyme cellulaza chủng ĐTN4.19 ĐTN3.8 Hình 3.9: Khả đồng hóa nguồn Cacbon khác Hình 3.10: Khả đồng hóa nguồn Nitơ khác Hình 3.11: Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng, phát triển chủng nghiên cứu Hình 3.12: Đốt Trấu Dớn làm giá thể trồng Địa Lan bổ sung Trichoderma atroviride Hình 3.13: Cây Địa Lan trồng loại giá thể khác Hình 3.14: Rễ Địa Lan sau tháng trồng loại giá thể khác Hình 3.15: Ứng dụng chủng ĐTN4.19 trị bệnh thối rễ cho Địa Lan DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ Đồ thị 3.1: Khả đồng hóa nguồn Cacbon khác chủng nấm sợi tuyển chọn Đồ thị 3.2: Khả đồng hóa nguồn Nitơ khác hai chủng nấm sợi tuyển chọn Đồ thị 3.3: Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng, phát triển hai chủng nấm sợi tuyển chọn Đồ thị 3.4: Ảnh hưởng độ pH ban đầu lên hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi tuyển chọn Đồ thị 3.5: Ảnh hưởng thời gian đến sinh trưởng, phát triển hai chủng nấm sợi tuyển chọn Đồ thị 3.6: Xác định thời gian sinh tổng hợp hoạt chất đối kháng MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngành Nông nghiệp đối mặt với đề nghiêm trọng xuất ngày nhiều loại sâu, bệnh nguy hiểm gây hại cho trồng Chúng gây tổn thất lớn đến suất sản lượng trồng Để đối phó với sâu bệnh, nông dân sử dụng rộng rãi lạm dụng nhiều loại thuốc trừ sâu hóa học mối lo ngại lớn người Bên cạnh đó, có nhiều chủng VSV gây bệnh lại lờn thuốc kháng sinh Một biện pháp hữu hiệu khắc phục tình trạng lờn thuốc VSV gây bệnh tìm thêm kháng sinh từ VSV thiên nhiên Trong nhóm VSV sinh kháng sinh, người ta quan tâm tìm hiểu nhiều nhóm nấm sợi xạ khuẩn Hiện nay, Khí hậu Đà Lạt biến đổi cách bất thường lịch sử hình thành Trước đây, nhiệt độ trung bình năm Đà Lạt 18-20°C Nhưng nay, khắc nghiệt gia tăng với biên độ nhiệt dãn cách đột biến chưa thấy: chênh nhiệt độ cao thấp bình quân từ 8-10 độ năm trước lên 12-15 độ Đà Lạt nóng lên 3-4°C so với trước kia; sương mù, năm, có lại vài lần Có thể nói thu hẹp nhanh rừng nội ô thành phố Đà Lạt, việc xây dựng công trình ạt, cộng với tượng El Nino diễn nguyên nhân dẫn đến tranh khí hậu tồi tệ Đà Lạt Trước tình hình đó, nhà chuyên môn đưa cảnh báo: biến đổi khí hậu theo chiều hướng tiêu cực chắn làm sâu, bệnh phát sinh gay gắt trồng, vật nuôi vùng sản xuất rau, hoa cao cấp lớn nước Theo quy luật đấu tranh sinh tồn: sâu, bệnh gia tăng xuất chủng sinh vật sinh hoạt chất đối kháng chống lại sâu, bệnh Trên đường tìm kiếm giống VSV có khả kháng sâu, kháng bệnh có hoạt tính cao Chúng nhắm đến nấm sợi tiến hành nghiên cứu khả tuyệt vời phòng trừ sâu, bệnh Hi vọng vùng đất Đà Lạt – Lâm Đồng với đặc điểm khác biệt địa hình, thời tiết – khí hậu, tìm chủng nấm sợi có đặc tính ưu việt phòng trừ bệnh hại trồng Theo thông tin mà thu thập được, có công trình nghiên cứu khu hệ nấm sợi rừng Đà Lạt Tài liệu mà thu thập đề tài: Nghiên cứu khu hệ vi nấm gây bệnh có lợi cho thông vùng Đà Lạt – Lâm Đồng năm 2004 Viện Khoa học công nghệ Miền Nam, Viện Sinh học Nhiệt đới, Phân viện Sinh học Đà Lạt (Nay Viện Sinh Học Tây Nguyên) thực Còn đề tài tìm hiểu khả sinh hoạt chất đối kháng hệ nấm sợi rừng Đà Lạt chưa thấy có tài liệu công bố Xuất phát từ thực tế trên, việc tiến hành thực đề tài : “Nghiên cứu khả sinh hoạt chất đối kháng VSV gây bệnh cho trồng chủng nấm sợi phân lập từ rừng Đà Lạt” việc làm cần thiết Mục đích đề tài Phân lập tuyển chọn chủng nấm sợi có khả sinh hoạt chất đối kháng ức chế, tiêu diệt VSV gây bệnh trồng Nội dung nghiên cứu đề tài: - Phân lập khiết chủng nấm sợi từ rừng Đà Lạt - Xác định khả sinh hoạt chất đối kháng chủng nấm sợi phân lập tuyển chọn chủng nấm sợi có hoạt tính đối kháng cao - Thử khả ức chế VSV gây bệnh trồng để tiến tới chọn chủng nấm sợi tiêu biểu - Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa chủng nấm sợi tiêu biểu tuyển chọn tiến tới định danh chủng - Bước đầu ứng dụng chủng nấm sợi tuyển chọn vào mục đích phòng trị bệnh cho Địa Lan (Cymbidium) Đà Lạt 3 Phạm vi nghiên cứu : - Vị trí lấy mẫu Suối Vàng, Thái Phiên, Tà Nung (Rừng Tà Nung rừng hổn giao rừng rộng thường xanh rừng kim nên xem hai vị trí), Lang Biang - Lấy mẫu lần: mùa nắng, thời điểm giao mùa mưa nắng mùa mưa Các phương pháp nghiên cứu: - Phân lập, tuyển chọn chủng nấm sợi phương pháp vi sinh - Nghiên cứu đặc điểm bản, phân loại chủng nấm sợi phương pháp hóa sinh, kỷ thuật di truyền - Xử lý số liệu thu thập phương pháp sử dụng toán học thống kê Đối tượng nghiên cứu: - Các chủng nấm sợi phân lập từ khu rừng Đà Lạt : Suối vàng, Thái phiên, Tà nung, Lang Biang - VSV kiểm định : Escherichia coli Gram (-) Bacillus subtilis Gram (+), Saccharosemyces cerevisier, nấm Aspergillus niger; Vi khuẩn Pseudomonas gladioli, Erwnia sp nhận từ phòng thí nghiệm vi sinh trường Đại học Đà Lạt nấm gây bệnh trồng nhận từ phòng thí nghiệm vi sinh Đại học Sư Phạm Tp HCM Cấu trúc luận văn Gồm: Mở đầu Chương : TỔNG QUAN TÀI LIỆU Chương : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chương : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Kết Luận Kiến nghị Nơi thực đề tài - Phòng thí nghiệm Vi Sinh thuộc khoa Sinh – ĐH Sư Phạm Tp HCM - Phòng thí nghiệm Vi Sinh thuộc khoa Sinh – ĐH Đà Lạt - Phòng thí nghiệm Vi Sinh – Viện Sinh học Tây Nguyên - Vườn Địa Lan 45 Bạch Đằng Phường Đà Lạt 5 Chương : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nấm sợi 1.1.1 Đặc điểm nấm sợi Nấm học (Mycology) khai sinh nhà thực vật học người Ý tên Pier Antonio Micheli (1729) qua tài liệu công bố “giống lạ” (Nova Plantarum Genera) theo Giáo sư Ekriksson Gunnan (1978) người có công nghiên cứu sâu nấm sợi lại Elias Fries (1794-1874) Theo Elizabeth Tootyll (1984) nấm sợi có khoảng 5.100 giống 50.000 loài mô tả Tuy nhiên, ước tính có 100.000 đến 250.000 loài nấm diện trái đất [45] 1.1.1.1 Hình dạng, kích thước, cấu tạo nấm sợi 1.1.1.1.1 Hình dạng kích thước Một số nấm thể đơn bào có hình trứng (yeast=nấm men), đa số có hình sợi (filamentous fungi=nấm sợi), sợi có ngăn vách (đa bào) hay ngăn vách (đơn bào) Sợi nấm (hypha) thường ống hình trụ dài có kích thước lớn nhỏ khác tùy loài Đường kính sợi nấm thường từ 3-5µm, có đến 10µm, chí đến 1mm Chiều dài sợi nấm tới vài chục centimet Các sợi nấm phát triển chiều dài theo kiểu tăng trưởng Các sợi nấm phân nhánh nhánh lại phân nhánh liên tiếp tạo thành hệ sợi nấm (mycelium) khí sinh xù xì Trên môi trường đặc số chất tự nhiên, bào tử nấm, tế bào nấm đoạn sợi nấm phát triển thành hệ sợi nấm có hình dạng định gọi khuẩn lạc nấm Vào giai đoạn cuối phát triển, khuẩn lạc xảy kết mạng (anastomosis) khuẩn ty với nhau, làm cho khuẩn lạc hệ thống liên thông mật thiết với nhau, thuận tiện cho việc vận chuyển chất dinh dưỡng đến toàn hệ sợi nấm Hiện tượng kết mạng thường gặp nấm bậc cao lại gặp sợi nấm dinh dưỡng nấm bậc thấp Hình thái, kích thước, màu sắc, bề mặt khuẩn lạc… có ý nghĩa định việc định tên nấm [45] Đầu sợi nấm có hình viên trụ, phần đầu gọi vùng kéo dài (extensionzone) Lúc sợi nấm sinh trưởng mạnh mẽ vùng thành tế bào phát triển nhanh chóng, vùng dài đến 30µm Dưới phần thành tế bào dày lên không sinh trưởng thêm Màng nguyên sinh chất có số phần có kết cấu gấp nếp hay xoăn lại, người ta gọi biên thể màng (plasmalemmasome) hay biên thể (lomasome) Nhiều chúng có tác dụng tiết xuất chất Các chất dự trữ thường gặp nấm glicogen, hạt volutin, giọt mỡ [46] Hình 1.1: Cấu trúc sợi nấm Hình 1.2: Sự phát triển hệ sợi nấm Phần lớn sợi nấm có dạng suốt, số nấm, sợi nấm mang sắc tố tạo nên màu tối hay mà sặc sỡ Sắc tố số nấm tiết môi trường làm đổi màu khu vực có nấm phát triển Một số nấm có chất hữu tạo nên tinh thể bề mặt khuẩn lạc Vì bào tử nấm thường có màu nên khuẩn lạc thường có màu [46] 1.1.1.1.2 Cấu tạo nấm sợi Tế bào nấm sợi có thành phần cấu tạo loài nấm lớn nhóm sinh vật có nhân thực khác, nghĩa gồm thành tế bào, chất nguyên sinh, nhân tế bào, không bào thể ẩn nhập Thành tế bào dày khoảng 0,2µm, có tính phản quang mạnh nên phân biệt rõ ràng kính hiển vi quang học [4] Vách tế bào nấm cấu tạo vi sợi chitin có cellulose Chitin thành phần vách tế bào hầu hết loài nấm trừ nhóm Oomycetina Những vi sợi chitin hình thành nhờ vào enzyme chitin syntase Nhân tế bào bao bọc màng nhân, màng nhân có nhiều lổ thủng, nhân có hạch nhân (nucleolus) Thường có nhiều nhân tập trung phần sợi nấm Trong tế bào phía sau thường có 1-2 nhân Nhân nấm thường nhỏ, khó thấy rõ kính hiển vi quang học Nhân tế bào nấm có hình cầu hay bầu dục với màng đôi phospholipid protein dầy 0,02µm, bên màng nhân chứa ARN DNA Trong tế bào nấm chứa mạng nội chất (endoplasmic reticulum), thể ribosomes (ribosome), không bào (vacuoles), bào nang (vesicle), thể Golgi (Golgi body, Golgi apparatus, dictyosome), giọt lipid (lipid droplet), tinh thể (chrystal) vi thể đường kính 0,5-1,5nm (microbody), thể Vôrônin đường kính 0,2µm (Woronin body), thể Chitôxôm đường kính 40-70nm (chitosome)…ty thể (mitochondria) hạt dự trữ (glycogen lipid) Đặc biệt cấu trúc ty thể tế bào nấm tương tự cấu trúc ty thể tế bào thực vật Ngoài tế bào chất có vi quản rỗng ruột, đường kính 25nm (microtubule), vi sợi đường kính 5-8nm (microfilament), thể màng biên (plasmalemnasome) [46] Tế bào nấm diệp lục tố, vài loài nấm có rải rác tế bào loại sắc tố đặc trưng mà Matsueda ctv (1978) ly trích gọi neocercosporin (C29H26O10) có màu tím đỏ nấm Cercosporina kikuchi Tế bào nấm không thiết có nhân mà thường có nhiều nhân [45] 1.1.1.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hoá Nấm sợi sinh vật dinh dưỡng hoá hữu cơ, thuộc loại hoại sinh Chúng có khả thu nhận lượng nhờ trình oxy hoá hiếu khí trình lên men kỵ khí chất hữu ngoại bào Kiểu dinh dưỡng cacbon hữu gọi kiểu dinh dưỡng cacbon dị dưỡng Chúng có khả phân giải xác hữu sử dụng hợp chất hữu bên thể sống để làm chất dinh dưỡng Cũng có loài thuộc loại ký sinh, chúng sống thể sinh vật khác (người, động vật, thực vật…) đem lại ảnh hưởng xấu thể Có loài lại ký sinh thể loài nấm khác gọi nấm ký sinh nấm [4] Nấm sợi sử dụng nguồn thức ăn cacbon khác Để thực trình sinh lí khác nấm sợi thường có nhu cầu không giống nguồn thức ăn cacbon Chúng sử dụng nhiều nguồn thức ăn khác từ cacbonhydrat, amino acid đến amonia Sự thích hợp nguồn gốc thức ăn cacbon đánh giá nhiều tiêu khác mức độ sinh trưởng tối đa hệ sợi nấm, mức độ hình thành tối đa số lượng bào tử, mức độ tích lũy tối đa chất chuyển hoá Sự sinh trưởng tối đa hệ sợi nấm thường không phù hợp với tích lũy tối đa sản phẩm trao đổi chất Hầu hết loại nấm sợi đồng hoá trực tiếp mantose, lactose, melibiose, rỉ đường… Nhiều loại nấm sợi có khả đồng hoá hợp chất hữu bền vững độc nhiều loại sinh vật khác (hợp chất n-alcan, alkaloid, phenol, sterin, nhiều chất kháng sinh, nhiều độc tố) [4], [13] Các loài nấm sợi thường đòi hỏi nghiêm khắc loại thức ăn cacbon Chúng thường có khả sử dụng nhiều loại cacbon khác nhau, nhiên loại hợp chất cacbon đồng hoá tốt loại hợp chất khác Trong nhiều trường hợp có mặt môi trường vài nguồn Cacbon khác chúng phát triển mạnh mẽ so với có riêng biệt loại Có thể lấy nghiên cứu Horr bảng 1.1 làm ví dụ: Bảng 1.1: Hiệu việc sử dụng phối hợp glucose galactose phát triển Aspergillus niger (nuôi cấy tĩnh 20oC ngày) Loại đường Nồng độ (g/l) Galactose 10 18 20 10 18+2 10+10 Glucose Galactose + Glucose Trọng lượng khô hệ sợi nấm 45,1 42,4 44,3 145,6 411,0 577,0 1151,6 Khi phát triển môi trường có nguồn thức ăn cacbon thích hợp người ta nhận thấy thời kỳ tiền phát (lag phase) thường rút lại ngắn hệ sợi nấm nhanh chóng tích lũy môi trường nuôi cấy Các loài nấm sợi khác có nhu cầu khác nguồn thức ăn nitơ Nấm sợi thường có khả sử dụng nguồn Nitơ hữu lần nguồn Nitơ vô Nhiều loài nấm sợi có khả đồng hoá muốn amon lẫn nitrat Có loài thích hợp sử dụng muốn amon nitrat ngược lại có loài thích hợp sử dụng nitrat muốn amon Đôi có loài vi nấm không phát triển môi trường chứa nguồn Nitơ muối amon nguyên nhân thân gốc NH4+ mà độ chua sinh lý muối amon tạo Ngược lại với muối amon, nitrat muối có tính kiềm sinh lý, sau nấm sợi đồng hoá gốc NO3- môi trường tích lũy lại cation Na+, K+… làm tăng độ pH môi trường