Nghiên cứu sản xuất và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của muối chitosan chloride

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG - VÕ KHÁNH LINH NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA MUỐI CHITOSAN CHLORIDE LUẬN VĂN THẠC SỸ KHÁNH HÒA – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG - VÕ KHÁNH LINH NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VÀ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA MUỐI CHITOSAN CHLORIDE LUẬN VĂN THẠC SỸ Ngành: Công nghệ Sinh học Mã số: 60420201 Quyết định giao đề tài: 551/QĐ-ĐHNT, ngày 21/06/2017 Quyết định thành lập Hội đồng: 800QĐ/ĐHNT Ngày bảo vệ: Người hướng dẫn khoa học: PGS TS TRANG SĨ TRUNG Người hướng dẫn khoa học 2: ThS NGUYỄN CÔNG MINH Chủ tịch Hội đồng: PGS TS NGÔ ĐĂNG NGHĨA Khoa Sau Đại học: KHÁNH HỊA - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan kết đề tài: Nghiên cứu sản xuất khảo sát hoạt tính kháng khuẩn muối chitosan chloride” cơng trình nghiên cứu cá nhân chưa công bố cơng trình khoa học khác thời điểm Khánh Hòa, ngày 15 tháng 08 năm 2017 Tác giả luận văn iii LỜI CẢM ƠN Trước tiên xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám hiệu quý thầy cô trường Đại học Nha Trang giúp đỡ tận tình truyền đạt cho kiến thức năm học qua Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Bộ KH&CN cung cấp kinh phí cho tơi thực phần đề tài Nghị Định Thư “Nghiên cứu sản xuất sản phẩm giá trị gia tăng từ phế liệu tôm để ứng dụng Nông nghiệp” PGS TS Trang Sĩ Trung làm chủ nhiệm Đặc biệt, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy PGS TS Trang Sĩ Trung người định hướng truyền đạt kinh nghiệm cho tơi, giáo viên hướng dẫn thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy ThS Nguyễn Công Minh, thầy TS Nguyễn Văn Hịa giúp đỡ hướng dẫn tơi nhiều q trình tơi thực đề tài nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy cán quản lý Phịng thí nghiệm Cơng nghệ Thiết bị cao, Phịng thí nghiệm Bộ môn Công nghệ Chế biến tạo điều kiện thuận lợi hỗ trợ cho thực tập phịng thí nghiệm Xin gửi lời cảm ơn đến bạn nhóm nghiên cứu “Sản xuất sản phẩm giá trị gia tăng từ phế liệu tôm” PGS TS Trang Sĩ Trung chủ trì Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến ba mẹ bạn bè động viên tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn! Khánh Hòa, ngày 15 tháng 08 năm 2017 Tác giả luận văn iv MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH .ix TRÍCH YẾU LUẬN VĂN .xi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan chitosan dẫn xuất 1.1.1 Cấu tạo tính chất chitosan 1.1.1.1 Cấu tạo chitosan 1.1.1.2 Tính chất lý, hóa, sinh học chitosan 1.1.2 Muối chitosan 10 1.1.2.1 Giới thiệu muối chitosan 10 1.1.2.2 Phương pháp sản xuất muối chitosan 11 1.1.2.3 Tình hình nghiên cứu muối chitosan 14 1.2 Chủng vi khuẩn G- G+ 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1 Bố trí thí nghiệm tổng quát 20 2.2.2 Bố trí thí nghiệm chi tiết 22 2.2.2.1 Bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng kích thước chitosan, nhiệt độ, thời gian phản ứng chitosan khí HCl đến độ tan, độ nhớt chitosan chloride từ chitosan có DD 70-80%, DD 80-90%, DD >90% 22 2.2.3 Các phương pháp phân tích 25 v 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Ảnh hưởng kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng quy trình tạo chitosan chloride đến độ tan độ nhớt chitosan chloride 27 3.1.1 Ảnh hưởng kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng đến độ tan độ nhớt chitosan chloride tạo thành từ chitosan có DD 70-80% 27 3.1.2 Ảnh hưởng kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng đến độ tan độ nhớt chitosan chloride tạo thành từ chitosan có DD 80-90% 31 3.1.3 Ảnh hưởng kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng đến độ tan độ nhớt chitosan chloride tạo thành từ chitosan có DD > 90% 33 3.1.4 So sánh độ tan độ nhớt chitosan chloride từ chitosan DD 70 – 80%, DD 80 – 90% DD >90% theo quy trình khác kích thước chitosan,thời gian nhiệt độ phản ứng 36 3.2 Đề xuất quy trình tạo muối đánh giá chất lượng chitosan chloride 39 3.3 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chitosan muối chitosan chloride hai chủng vi khuẩn Gram – (Escherichia coli, Vibrio parahaemolyticus), hai chủng vi khuẩn Gram+ (Bacillus cereus, Staphylococcus aureus) 41 KẾT LUẬN 51 KIẾN NGHỊ 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC 57 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Diễn giải Cp Centipoise CTS Chitosan DD Độ deacetyl EMB agar Môi trường Eosin Methylene Blue agar LMWC Chitosan phân tử lượng thấp (Low molecular weight chitosan) LSB Môi trường Lauryl Sulphate Broth MIC Nồng độ ức chế tối thiểu (Minimum Inhibitory Concentration) MW Khối lượng phân tử (Molecular Weight) NA Môi trường Nutrient agar NB Môi trường Nutrient Broth TCBS agar Môi trường Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose agar vii DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Các dung mơi dùng để hịa tan chitosan Bảng Các thơng số hóa lý vi hạt muối chitosan 13 Bảng Tỷ lệ % thành phần thành tế bào vi khuẩn 15 Bảng 2.1 Chỉ tiêu chất lượng chitosan đầu vào 18 Bảng Mối tương quan độ tan độ nhớt với biến kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng 27 Bảng Giá trị độ tan độ nhớt theo biến kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng 31 Bảng 3 Giá trị độ tan độ nhớt theo biến kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng 34 Bảng Chỉ tiêu chất lượng sản phẩm muối chitosan chloride 41 Bảng Ảnh hưởng nồng độ chitosan (%, w/v) đến tỷ lệ chết (%) chủng vi khuẩn khảo sát 42 Bảng Ảnh hưởng nồng độ chitosan chloride (%, w/v) đến tỷ lệ chết (%) chủng vi khuẩn khảo sát 44 viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hóa học chitin, chitosan cenllulose Hình 1.2 Hình dạng màu sắc chitosan Hình 1.3 Phức hợp Ag với chitosan Hình Cấu tạo chitosan (a), muối chitosan (b) 11 Hình Cơ chế tạo muối chitosan 12 Hình Cơ chế tạo muối chitosan chloride 12 Hình Cơ chế tạo muối methylated N-(4- N,N-dimethylaminocinnamyl) chitosan chloride 14 Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 20 Hình 2.2 Hệ thống sản xuất chitosan chloride trạng thái rắn 21 Hình Quy trình khảo sát hoạt tính kháng khuẩn chitosan chitosan chloride 23 Hình Ảnh hưởng điều kiện quy trình tạo muối chitosan chloride từ chitosan nguyên liệu DD 70-80% đến hàm lượng Cl- (%) pH muối 30 Hình Ảnh hưởng điều kiện quy trình tạo muối chitosan chloride từ chitosan nguyên liệu DD 80-90% đến hàm lượng Cl- (%) pH muối 33 Hình 3 Ảnh hưởng điều kiện quy trình tạo muối chitosan chloride từ chitosan nguyên liệu DD >90% đến hàm lượng Cl- (%) pH muối 36 Hình Ảnh hưởng điều kiện tạo chitosan chloride từ loại chitosan DD 70-80%, DD 80-90%, DD >90% đến độ tan sản phẩm muối 37 Hình Ảnh hưởng điều kiện tạo chitosan chloride từ loại chitosan DD 70-80%, DD 80-90%, DD >90% đến độ nhớt sản phẩm muối 38 Hình Quy trình sản xuất muối chitosan chloride từ chitosan DD 70-80%, DD 8090%, DD >90 40 Hình Chitosan chloride từ chitosan DD 70-80% (a), DD 80-90% (b), DD >90% (c) 41 ix Hình Các ống nghiệm nuôi vi khuẩn môi trường có chứa muối chitosan chloride Ống 15 tương ứng với nồng độ chitosan chloride từ 0-0.2% (w/v), ống ống chứng có muối chitosan chloride mà khơng có vi khuẩn 45 Hình Kết kháng B.cereus mẫu (a) dung dịch muối chitosan chloride 0% (w/v) (mẫu pha loãng 10-6 trước trải đĩa), (b) dung dịch muối chitosan chloride 0,1% (w/v) (mẫu pha loãng 10-2 trước trải đĩa) 45 Hình 10 Kết kháng S aureus mẫu (a) dung dịch muối chitosan chloride 0% (w/v) (mẫu pha loãng 10-2 trước trải đĩa), (b) dung dịch muối chitosan chloride 0,1% (w/v) (mẫu pha loãng 10-2 trước trải đĩa) 46 Hình 11 Kết kháng E.coli mẫu (a) dung dịch muối chitosan chloride 0% (w/v) (mẫu pha loãng 10-6 trước trải đĩa) (b) dung dịch muối chitosan chloride 0,1% (w/v) 48 Hình 12 Kết kháng V.parahaemolyticus mẫu (a) dung dịch muối chitosan chloride 0% (w/v), (b) dung dịch muối chitosan chloride 0,1% (w/v) 48 x S = 0.352816 PRESS = 4.48125 R-Sq = 97.12% R-Sq(pred) = 93.52% R-Sq(adj) = 95.86% Analysis of Variance for tan (coded units) Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Main Effects 33.8278 33.8278 11.2759 90.58 0.000 kich thuoc 3.6426 3.6426 3.6426 29.26 0.000 thoi gian 6.8801 6.8801 6.8801 55.27 0.000 nhiet 23.3051 23.3051 23.3051 187.22 0.000 2-Way Interactions 28.2353 28.2353 9.4118 75.61 0.000 kich thuoc*thoi gian 23.3051 23.3051 23.3051 187.22 0.000 kich thuoc*nhiet 4.6376 4.6376 4.6376 37.26 0.000 thoi gian*nhiet 0.2926 0.2926 0.2926 2.35 0.145 5.0876 5.0876 5.0876 40.87 0.000 5.0876 5.0876 5.0876 40.87 0.000 Residual Error 16 1.9917 1.9917 0.1245 Pure Error 16 1.9917 1.9917 0.1245 23 69.1424 3-Way Interactions kich thuoc*thoi gian*nhiet Total Unusual Observations for tan Obs StdOrder tan Fit SE Fit Residual 11 11 94.3000 94.9000 0.2037 -0.6000 St Resid -2.08R R denotes an observation with a large st vàardized residual Estimated Coefficients for tan using data in uncoded units Term Coef Constant 59.8976 kich thuoc 0.374077 thoi gian 7.41825 nhiet 1.13810 kich thuoc*thoi gian -0.0810615 kich thuoc*nhiet -0.0108631 thoi gian*nhiet -0.208730 kich thuoc*thoi gian*nhiet 0.00219246 Predicted Response for New Design Points Using Model for tan Point Fit SE Fit 95% CI 95% PI 93.3000 0.2037 (92.8682, 93.7318) (92.4364, 94.1636) 65 97.8500 0.2037 (97.4182, 98.2818) (96.9864, 98.7136) 94.9000 0.2037 (94.4682, 95.3318) (94.0364, 95.7636) 93.6667 0.2037 (93.2348, 94.0985) (92.8030, 94.5303) 96.8500 0.2037 (96.4182, 97.2818) (95.9864, 97.7136) 97.8000 0.2037 (97.3682, 98.2318) (96.9364, 98.6636) 97.0500 0.2037 (96.6182, 97.4818) (96.1864, 97.9136) 95.9000 0.2037 (95.4682, 96.3318) (95.0364, 96.7636) 93.3000 0.2037 (92.8682, 93.7318) (92.4364, 94.1636) 10 97.8500 0.2037 (97.4182, 98.2818) (96.9864, 98.7136) 11 94.9000 0.2037 (94.4682, 95.3318) (94.0364, 95.7636) 12 93.6667 0.2037 (93.2348, 94.0985) (92.8030, 94.5303) 13 96.8500 0.2037 (96.4182, 97.2818) (95.9864, 97.7136) 14 97.8000 0.2037 (97.3682, 98.2318) (96.9364, 98.6636) 15 97.0500 0.2037 (96.6182, 97.4818) (96.1864, 97.9136) 16 95.9000 0.2037 (95.4682, 96.3318) (95.0364, 96.7636) 17 93.3000 0.2037 (92.8682, 93.7318) (92.4364, 94.1636) 18 97.8500 0.2037 (97.4182, 98.2818) (96.9864, 98.7136) 19 94.9000 0.2037 (94.4682, 95.3318) (94.0364, 95.7636) 20 93.6667 0.2037 (93.2348, 94.0985) (92.8030, 94.5303) 21 96.8500 0.2037 (96.4182, 97.2818) (95.9864, 97.7136) 22 97.8000 0.2037 (97.3682, 98.2318) (96.9364, 98.6636) 23 97.0500 0.2037 (96.6182, 97.4818) (96.1864, 97.9136) 24 95.9000 0.2037 (95.4682, 96.3318) (95.0364, 96.7636) Values of Predictors for New Observations kich thoi nhiet New Obs thuoc gian 80 120 80 4 120 5 80 25 120 25 80 25 120 25 80 10 120 11 80 12 120 13 80 25 14 120 25 15 80 25 16 120 25 17 80 18 120 66 19 80 20 120 21 80 25 22 120 25 23 80 25 24 120 25 Alias Structure I kich thuoc thoi gian nhiet kich thuoc*thoi gian kich thuoc*nhiet thoi gian*nhiet kich thuoc*thoi gian*nhiet Residual Plots for tan Factorial Fit: nhot versus kich thuoc, thoi gian, nhiet Estimated Effects Coefficients for nhot (coded units) Term Effect Constant kich thuoc Coef SE Coef T P 22.68 0.1137 199.39 0.000 -4.67 -2.33 0.1137 -20.52 0.000 7.89 3.95 0.1137 34.69 0.000 -21.93 -10.96 0.1137 -96.38 0.000 kich thuoc*thoi gian -1.33 -0.67 0.1137 -5.86 0.000 kich thuoc*nhiet 4.12 2.06 0.1137 18.10 0.000 -14.09 -7.05 0.1137 -61.95 0.000 2.15 1.08 0.1137 9.45 0.000 thoi gian nhiet thoi gian*nhiet kich thuoc*thoi gian*nhiet S = 0.557233 PRESS = 11.1783 R-Sq = 99.89% R-Sq(pred) = 99.76% R-Sq(adj) = 99.85% Analysis of Variance for nhot (coded units) Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Main Effects 3388.92 3388.92 1129.64 3638.03 0.000 kich thuoc 130.71 130.71 130.71 420.97 0.000 thoi gian 373.75 373.75 373.75 1203.67 0.000 67 nhiet 2884.45 2884.45 2884.45 9289.45 0.000 1303.99 1303.99 434.66 1399.85 0.000 kich thuoc*thoi gian 10.68 10.68 10.68 34.40 0.000 kich thuoc*nhiet 101.72 101.72 101.72 327.60 0.000 thoi gian*nhiet 1191.59 1191.59 1191.59 3837.55 0.000 27.76 27.76 27.76 89.39 0.000 89.39 0.000 2-Way Interactions 3-Way Interactions 27.76 27.76 27.76 Residual Error kich thuoc*thoi gian*nhiet 16 4.97 4.97 0.31 Pure Error 16 4.97 4.97 0.31 23 4725.63 Total Unusual Observations for nhot Obs StdOrder nhot Fit SE Fit Residual St Resid 2 21.2000 20.0000 0.3217 1.2000 2.64R 10 10 19.0000 20.0000 0.3217 -1.0000 -2.20R R denotes an observation with a large st vàardized residual Estimated Coefficients for nhot using data in uncoded units Term Coef Constant -34.0480 kich thuoc 0.171597 thoi gian 24.4377 nhiet 2.70825 kich thuoc*thoi gian -0.107609 kich thuoc*nhiet -0.0106806 thoi gian*nhiet -1.18317 kich thuoc*thoi gian*nhiet 0.00512103 Predicted Response for New Design Points Using Model for nhot Point Fit SE Fit 95% CI 95% PI 25.3000 0.3217 (24.6180, 25.9820) (23.9360, 26.6640) 20.0000 0.3217 (19.3180, 20.6820) (18.6360, 21.3640) 50.7700 0.3217 (50.0880, 51.4520) (49.4060, 52.1340) 38.5000 0.3217 (37.8180, 39.1820) (37.1360, 39.8640) 15.5000 0.3217 (14.8180, 16.1820) (14.1360, 16.8640) 14.1333 0.3217 (13.4513, 14.8153) (12.7693, 15.4974) 8.4833 0.3217 ( 7.8013, 9.1653) ( 7.1193, 8.7500 0.3217 ( 8.0680, 9.4320) ( 7.3860, 10.1140) 25.3000 0.3217 (24.6180, 25.9820) (23.9360, 26.6640) 10 20.0000 0.3217 (19.3180, 20.6820) (18.6360, 21.3640) 68 9.8474) 11 50.7700 0.3217 (50.0880, 51.4520) (49.4060, 52.1340) 12 38.5000 0.3217 (37.8180, 39.1820) (37.1360, 39.8640) 13 15.5000 0.3217 (14.8180, 16.1820) (14.1360, 16.8640) 14 14.1333 0.3217 (13.4513, 14.8153) (12.7693, 15.4974) 15 8.4833 0.3217 ( 7.8013, 9.1653) ( 7.1193, 16 8.7500 0.3217 ( 8.0680, 9.4320) ( 7.3860, 10.1140) 17 25.3000 0.3217 (24.6180, 25.9820) (23.9360, 26.6640) 18 20.0000 0.3217 (19.3180, 20.6820) (18.6360, 21.3640) 19 50.7700 0.3217 (50.0880, 51.4520) (49.4060, 52.1340) 20 38.5000 0.3217 (37.8180, 39.1820) (37.1360, 39.8640) 21 15.5000 0.3217 (14.8180, 16.1820) (14.1360, 16.8640) 22 14.1333 0.3217 (13.4513, 14.8153) (12.7693, 15.4974) 23 8.4833 0.3217 ( 7.8013, 9.1653) ( 7.1193, 24 8.7500 0.3217 ( 8.0680, 9.4320) ( 7.3860, 10.1140) Values of Predictors for New Observations kich thoi nhiet New Obs thuoc gian 80 120 80 4 120 5 80 25 120 25 80 25 120 25 80 10 120 11 80 12 120 13 80 25 14 120 25 15 80 25 16 120 25 17 80 18 120 19 80 20 120 21 80 25 22 120 25 23 80 25 24 120 25 Alias Structure 69 9.8474) 9.8474) I kich thuoc thoi gian nhiet kich thuoc*thoi gian kich thuoc*nhiet thoi gian*nhiet kich thuoc*thoi gian*nhiet Residual Plots for nhot DD >90% Factorial Fit: tan versus kich thuoc, thoi gian, nhiet Estimated Effects Coefficients for tan (coded units) Term Effect Constant Coef SE Coef T P 97.7958 0.04496 2175.29 0.000 0.04496 1.67 0.115 kich thuoc 0.1500 0.0750 thoi gian -1.2417 -0.6208 0.04496 -13.81 0.000 nhiet 0.2917 0.1458 0.04496 3.24 0.005 kich thuoc*thoi gian 0.0500 0.0250 0.04496 0.56 0.586 kich thuoc*nhiet -0.4500 -0.2250 0.04496 -5.00 0.000 1.4583 0.7292 0.04496 16.22 0.000 -0.1500 -0.0750 0.04496 -1.67 0.115 thoi gian*nhiet kich thuoc*thoi gian*nhiet S = 0.220246 PRESS = 1.7463 R-Sq = 96.87% R-Sq(pred) = 92.96% R-Sq(adj) = 95.50% Analysis of Variance for tan (coded units) Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Main Effects 9.8958 9.8958 3.2986 68.00 0.000 kich thuoc 0.1350 0.1350 0.1350 2.78 0.115 thoi gian 9.2504 9.2504 9.2504 190.70 0.000 nhiet 0.5104 0.5104 0.5104 10.52 0.005 13.9904 13.9904 4.6635 96.14 0.000 kich thuoc*thoi gian 0.0150 0.0150 0.0150 0.31 0.586 kich thuoc*nhiet 1.2150 1.2150 1.2150 25.05 0.000 thoi gian*nhiet 12.7604 12.7604 12.7604 263.06 0.000 0.1350 0.1350 0.1350 2.78 0.115 0.1350 0.1350 0.1350 2.78 0.115 16 0.7761 0.7761 0.0485 2-Way Interactions 3-Way Interactions kich thuoc*thoi gian*nhiet Residual Error 70 Pure Error Total 16 0.7761 23 24.7974 0.7761 0.0485 Unusual Observations for tan Obs StdOrder tan Fit SE Fit Residual 11 11 95.5000 95.9000 0.1272 -0.4000 St Resid -2.22R R denotes an observation with a large st vàardized residual Estimated Coefficients for tan using data in uncoded units Term Coef Constant 104.748 kich thuoc -0.0064286 thoi gian -2.27063 nhiet -0.299603 kich thuoc*thoi gian 0.00642857 kich thuoc*nhiet 0.000357143 thoi gian*nhiet 0.105159 kich thuoc*thoi gian*nhiet -3.57143E-04 Predicted Response for New Design Points Using Model for tan Point Fit SE Fit 95% CI 95% PI 98.8000 0.1272 (98.5304, 99.0696) (98.2609, 99.3391) 99.2000 0.1272 (98.9304, 99.4696) (98.6609, 99.7391) 95.9000 0.1272 (95.6304, 96.1696) (95.3609, 96.4391) 96.7000 0.1272 (96.4304, 96.9696) (96.1609, 97.2391) 97.9333 0.1272 (97.6638, 98.2029) (97.3942, 98.4725) 97.7333 0.1272 (97.4638, 98.0029) (97.1942, 98.2725) 98.2500 0.1272 (97.9804, 98.5196) (97.7109, 98.7891) 97.8500 0.1272 (97.5804, 98.1196) (97.3109, 98.3891) 98.8000 0.1272 (98.5304, 99.0696) (98.2609, 99.3391) 10 99.2000 0.1272 (98.9304, 99.4696) (98.6609, 99.7391) 11 95.9000 0.1272 (95.6304, 96.1696) (95.3609, 96.4391) 12 96.7000 0.1272 (96.4304, 96.9696) (96.1609, 97.2391) 13 97.9333 0.1272 (97.6638, 98.2029) (97.3942, 98.4725) 14 97.7333 0.1272 (97.4638, 98.0029) (97.1942, 98.2725) 15 98.2500 0.1272 (97.9804, 98.5196) (97.7109, 98.7891) 16 97.8500 0.1272 (97.5804, 98.1196) (97.3109, 98.3891) 17 98.8000 0.1272 (98.5304, 99.0696) (98.2609, 99.3391) 18 99.2000 0.1272 (98.9304, 99.4696) (98.6609, 99.7391) 19 95.9000 0.1272 (95.6304, 96.1696) (95.3609, 96.4391) 71 20 96.7000 0.1272 (96.4304, 96.9696) (96.1609, 97.2391) 21 97.9333 0.1272 (97.6638, 98.2029) (97.3942, 98.4725) 22 97.7333 0.1272 (97.4638, 98.0029) (97.1942, 98.2725) 23 98.2500 0.1272 (97.9804, 98.5196) (97.7109, 98.7891) 24 97.8500 0.1272 (97.5804, 98.1196) (97.3109, 98.3891) Values of Predictors for New Observations kich thoi nhiet thuoc gian 80 120 80 4 120 5 80 25 120 25 80 25 120 25 80 10 120 11 80 12 120 13 80 25 14 120 25 15 80 25 16 120 25 17 80 18 120 19 80 20 120 21 80 25 22 120 25 23 80 25 24 120 25 New Obs Alias Structure I kich thuoc thoi gian nhiet kich thuoc*thoi gian kich thuoc*nhiet thoi gian*nhiet kich thuoc*thoi gian*nhiet 72 Residual Plots for tan Factorial Fit: nhot versus kich thuoc, thoi gian, nhiet Estimated Effects Coefficients for nhot (coded units) Term Effect Constant Coef SE Coef T P 36.17 0.07369 490.88 0.000 kich thuoc -3.76 -1.88 0.07369 -25.50 0.000 thoi gian -6.42 -3.21 0.07369 -43.60 0.000 nhiet -37.91 -18.95 0.07369 -257.23 0.000 kich thuoc*thoi gian 2.51 1.25 0.07369 17.02 0.000 kich thuoc*nhiet 1.66 0.83 0.07369 11.25 0.000 thoi gian*nhiet -1.84 -0.92 0.07369 -12.50 0.000 kich thuoc*thoi gian*nhiet -0.58 -0.29 0.07369 -3.90 0.001 S = 0.360988 PRESS = 4.69125 R-Sq = 99.98% R-Sq(pred) = 99.95% R-Sq(adj) = 99.97% Analysis of Variance for nhot (coded units) Source DF Seq SS Adj SS Adj MS F P Main Effects 8954.68 8954.68 2984.89 22905.67 0.000 kich thuoc 84.75 84.75 84.75 650.36 0.000 thoi gian 247.68 247.68 247.68 1900.69 0.000 nhiet 8622.25 8622.25 8622.25 66165.95 0.000 74.60 74.60 24.87 190.83 0.000 kich thuoc*thoi gian 37.75 37.75 37.75 289.69 0.000 kich thuoc*nhiet 16.50 16.50 16.50 126.62 0.000 thoi gian*nhiet 20.35 20.35 20.35 156.17 0.000 1.98 1.98 1.98 15.22 0.001 15.22 0.001 2-Way Interactions 3-Way Interactions 1.98 1.98 1.98 Residual Error kich thuoc*thoi gian*nhiet 16 2.09 2.09 0.13 Pure Error 16 2.08 2.08 0.13 23 9033.35 Total Unusual Observations for nhot Obs StdOrder nhot Fit SE Fit Residual 73 St Resid 3 53.1000 54.0000 0.2084 -0.9000 -3.05R 19 19 54.9000 54.0000 0.2084 0.9000 3.05R R denotes an observation with a large st vàardized residual Estimated Coefficients for nhot using data in uncoded units Term Coef Constant 118.254 kich thuoc -0.481448 thoi gian -10.1968 nhiet -2.39683 kich thuoc*thoi gian 0.0825595 kich thuoc*nhiet 0.00942460 thoi gian*nhiet 0.0492063 kich thuoc*thoi gian*nhiet -0.00136905 Predicted Response for New Design Points Using Model for nhot Point Fit SE Fit 95% CI 95% PI 61.6667 0.2084 (61.2248, 62.1085) (60.7830, 62.5503) 53.1667 0.2084 (52.7248, 53.6085) (52.2830, 54.0503) 54.0000 0.2084 (53.5582, 54.4418) (53.1164, 54.8836) 51.6667 0.2084 (51.2248, 52.1085) (50.7830, 52.5503) 23.3667 0.2084 (22.9248, 23.8085) (22.4830, 24.2503) 19.3333 0.2084 (18.8915, 19.7752) (18.4497, 20.2170) 13.1667 0.2084 (12.7248, 13.6085) (12.2830, 14.0503) 13.0000 0.2084 (12.5582, 13.4418) (12.1164, 13.8836) 61.6667 0.2084 (61.2248, 62.1085) (60.7830, 62.5503) 10 53.1667 0.2084 (52.7248, 53.6085) (52.2830, 54.0503) 11 54.0000 0.2084 (53.5582, 54.4418) (53.1164, 54.8836) 12 51.6667 0.2084 (51.2248, 52.1085) (50.7830, 52.5503) 13 23.3667 0.2084 (22.9248, 23.8085) (22.4830, 24.2503) 14 19.3333 0.2084 (18.8915, 19.7752) (18.4497, 20.2170) 15 13.1667 0.2084 (12.7248, 13.6085) (12.2830, 14.0503) 16 13.0000 0.2084 (12.5582, 13.4418) (12.1164, 13.8836) 17 61.6667 0.2084 (61.2248, 62.1085) (60.7830, 62.5503) 18 53.1667 0.2084 (52.7248, 53.6085) (52.2830, 54.0503) 19 54.0000 0.2084 (53.5582, 54.4418) (53.1164, 54.8836) 20 51.6667 0.2084 (51.2248, 52.1085) (50.7830, 52.5503) 21 23.3667 0.2084 (22.9248, 23.8085) (22.4830, 24.2503) 22 19.3333 0.2084 (18.8915, 19.7752) (18.4497, 20.2170) 23 13.1667 0.2084 (12.7248, 13.6085) (12.2830, 14.0503) 24 13.0000 0.2084 (12.5582, 13.4418) (12.1164, 13.8836) 74 Values of Predictors for New Observations kich thoi nhiet New Obs thuoc gian 80 120 80 4 120 5 80 25 120 25 80 25 120 25 80 10 120 11 80 12 120 13 80 25 14 120 25 15 80 25 16 120 25 17 80 18 120 19 80 20 120 21 80 25 22 120 25 23 80 25 24 120 25 Alias Structure I kich thuoc thoi gian nhiet kich thuoc*thoi gian kich thuoc*nhiet thoi gian*nhiet kich thuoc*thoi gian*nhiet Residual Plots for nhot 75 PHỤ LỤC KẾT QUẢ PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU Cl- VÀ pH CỦA CÁC SẢN PHẨM MUỐI CHITOSAN CHLORIDE DD 70-80% Bảng P3.1 Giá trị nồng độ Cl pH theo biến kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng N X1 (mesh size) X2 (giờ) X3 (ºC) Cl- (%) pH 80 0,16b ± 0,00 3,83B ± 0,08 120 0,19c ± 0,02 3,59A ± 0,07 80 0,14a ± 0,00 4,01D ± 0,08 120 0,16b ± 0,00 4,02D ± 0,04 80 25 0,21d ± 0,00 3,85BC ± 0,01 120 25 0,21d ± 0,00 3,86BC ± 0,01 80 25 0,22d ± 0,00 3,94CD ± 0,04 120 25 0,16b ± 0,00 3,91BC ± 0,01 *Kết tính lượng chất khơ tuyệt đối Các giá trị trung bình cột có ký tự khác khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê (p < 0,05) DD 80-90% Bảng P3.2 Giá trị nồng độ Cl pH theo biến kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng N X1 (mesh size) X2 (giờ) X3 (ºC) Cl- (%) pH 80 0,18abc ± 0,01 3,89BC ± 0,02 120 0,16ab ± 0,00 3,93C ± 0,06 80 0,15a ± 0,00 3,93C ± 0,04 120 0,19bcd ± 0,04 3,86BC ± 0,03 80 25 0,23d ± 0,01 3,83B ± 0,05 120 25 0,22cd ± 0,05 3,75A ± 0,04 80 25 0,22d ± 0,01 3,83B ± 0,02 120 25 0,16ab ± 0,00 3,90 ± 0,05 76 *Kết tính lượng chất khơ tuyệt đối Các giá trị trung bình cột có ký tự khác khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê (p < 0,05) DD > 90% Bảng P3.3 Giá trị nồng độ Cl pH theo biến kích thước chitosan, thời gian nhiệt độ phản ứng N X1 (mesh size) X2 (giờ) X3 (ºC) Cl- (%) pH 80 0,18a ± 0,00 3,87AB ± 0,02 120 0,23a ± 0,00 3,84A ± 0,06 80 1,00b ± 0,00 3,77A ± 0,09 120 1,11c ± 0,10 3,97B ± 0,04 80 25 0,18a ± 0,00 3,85AB ± 0,13 120 25 0,20a ± 0,01 3,87AB ± 0,03 80 25 0,20a ± 0,01 3,86AB ± 0,05 120 25 0,22a ± 0,01 3,87AB ± 0,01 *Kết tính lượng chất khô tuyệt đối Các giá trị trung bình cột có ký tự khác khác biệt có ý nghĩa mặt thống kê (p < 0,05) 77 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH MỘT SỐ THIẾT BỊ DÙNG TRONG ĐỀ TÀI Hình (a) Tủ cấy vi sinh Nuaire, (b) Tủ ấm 37ºC ShelLab Hình (a) Máy đếm khuẩn lạc Stuart Scientific, (b) Tủ sấy Memmert 78 Hình (a) Máy đo độ nhớt Brookfield, (b) Tủ lạnh -8ºC Sanyo Hình (a) Nồi hấp trùng Hirayma, (b) Lị vi sóng Sanyo 79 ... nghiên cứu ứng dụng chitosan muối chitosan Mục tiêu nghiên cứu Nghiên cứu quy trình tạo muối chitosan chloride trạng thái rắn khảo sát hoạt tính kháng khuẩn số chủng vi khuẩn G- G+ chitosan chloride. .. trường,…(Kumar, 2000) Hiện nghiên cứu sản xuất chitosan chloride trạng thái rắn cịn hạn chế Chính đề tài: ? ?Nghiên cứu sản xuất khảo sát hoạt tính kháng khuẩn muối chitosan chloride? ??, thực Kết đề... nghiệm hoạt tính kháng khuẩn muối chitosan chloride cho thấy muối chitosan giữ hoạt tính kháng khuẩn tương tự chitosan ban đầu Giá trị MIC chitosan nguyên liệu muối chitosan chloride chủng vi khuẩn