Nghiên cứu cắt mạch chitosan ở trạng thái rắn bằng tác nhân vi sinh vật

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CẮT MẠCH CHITOSAN Ở TRẠNG THÁI RẮN BẰNG TÁC NHÂN VI SINH VẬT Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Trang Sĩ Trung Ths Nguyễn Công Minh Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Ngọc Mã số sinh viên: 58132559 Khánh Hòa, tháng 8/2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CẮT MẠCH CHITOSAN Ở TRẠNG THÁI RẮN BẰNG TÁC NHÂN VI SINH VẬT GVHD: PGS TS Trang Sĩ Trung Ths Nguyễn Công Minh SVTH: Nguyễn Thị Ngọc MSSV: 58132559 Khánh Hòa, tháng 8/2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết đề tài: “Nghiên cứu cắt mạch chitosan trạng thái rắn tác nhân vi sinh vật” công trình nghiên cứu cá nhân tơi Các số liệu kết nghiên cứu đề tài phân tích cách trung thực, khách quan chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khoa học khác thời điểm Khánh Hòa, tháng năm 2020 Sinh viên Nguyễn Thị Ngọc i LỜI CẢM ƠN Thời gian học tập thực đồ án trình cố gắng, nỗ lực không ngừng thân em giúp đỡ, động viên khích lệ thầy giáo, bạn bè người thân Qua em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến người giúp đỡ em thời gian vừa qua Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban giám hiệu quý thầy cô trường Đại học Nha Trang thầy cô khoa Công Nghệ Thực Phẩm giúp đỡ tận tình, truyền đạt cho em kiến thức năm học vừa qua Em xin tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc đến Thầy PGS.TS Trang Sĩ Trung Thầy Ths Nguyễn Công Minh – hết lịng bảo, quan tâm hướng dẫn tận tình, thường xuyên theo dõi trình thực đề tài hỗ trợ em mặt để em hoàn thành tốt đề tài tốt nghiệp Em xin cảm ơn cô Ths Phạm Thị Đan Phượng tập thể thầy cơ, cán quản lý Trung tâm thí nghiệm thực hành Công Nghệ Cao trường Đại học Nha Trang bạn bè tạo điều kiện thuận lợi, giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình ln quan tâm, lo lắng, chia sẻ động viên suốt trình học tập thực đề tài Xin chân thành cảm ơn người! Khánh Hòa, tháng 08 năm 2020 Sinh viên Nguyễn Thị Ngọc ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC BẢNG vii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN VỀ ĐỀ TÀI 1.1 Tổng quan Chitosan .3 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Cấu tạo Chitosan 1.1.3 Tính chất Chitosan 1.1.4 Ứng dụng Chitosan 1.2 Cắt mạch chitosan trạng thái rắn 10 1.3 Cắt mạch chitosan phương pháp sinh học .11 1.4 Tình hình nghiên cứu thuộc lĩnh vực đề tài 13 1.4.1 Tình hình nghiên cứu nước 13 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu .17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Bố trí thí nghiệm tổng quát 18 2.2.2 Bố trí thí nghiệm chi tiết 20 2.2.2.1 Nghiên cứu khả cắt mạch chitosan trạng thái rắn tác nhân vi sinh vật ……………………………………………………………………………… ……………………………………………………… 20 2.2.2.2 Bố trí thí nghiệm phân lập vi sinh vật có khả phân giải chitosan 26 2.2.2.3 Nghiên cứu khả cắt mạch chitosan chủng vi sinh vật phân lập từ dịch tăng sinh từ vỏ tôm lột xác 30 iii 2.2.3 Các phương pháp phân tích 32 2.2.4 Phương pháp tính tốn xử lý số liệu .32 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Tính chất chitosan ban đầu 34 3.2 Ảnh hưởng thời gian tăng sinh dịch vi sinh vật đến mật độ vi sinh vật hiệu suất cắt mạch chitosan dịch tăng sinh vi sinh vật từ vỏ tôm lột 35 3.3 Ảnh hưởng thời gian cắt mạch đến độ nhớt chitosan hiệu suất cắt mạch dịch tăng sinh vi sinh vật từ vỏ tôm lột 38 3.4 Ảnh hưởng kích thước chitosan đến hiệu suất cắt mạch chitosan dịch tăng sinh từ vỏ tôm lột 41 3.5 Phân lập vi sinh vật có khả cắt mạch chitosan từ vỏ tôm lột 44 3.5.1 Đặc điểm khuẩn lạc chủng vi sinh vật 45 3.5.2 Đặc điểm tế bào chủng vi sinh vật 46 3.6 Ảnh hưởng chủng vi sinh vật có khả phân giải chitosan phân lập từ dịch tăng sinh vỏ tôm lột đến hiệu suất cắt mạch chitosan 49 3.7 Đề xuất quy trình cắt mạch chitosan trạng thái rắn dịch tăng sinh vi sinh vật từ vỏ tôm lột xác .52 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 PHỤ LỤC 59 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Diễn giải DD Độ deacetyl Mw Khối lượng phân tử HSCM Hiệu suất cắt mạch HMWC Chitosan khối lượng phân tử cao MMWC Khối lượng phân tử trung bình LMWC Khối lượng phân tử thấp VSV Vi sinh vật VTL Vỏ tôm lột v DANH MỤC HÌNH Hình 1.Cấu trúc hóa học Chitin, Chitosan Cellulose (Elson, 2011) Hình Vỏ tơm lột xác 17 Hình 2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 18 Hình Sơ đồ thí nghiệm xác định ảnh hưởng thời gian tăng sinh dịch tăng sinh vi sinh vật từ vỏ tôm lột đến hiệu suất cắt mạch chitosan 20 Hình Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng thời gian cắt mạch chitosan đến hiệu suất cắt mạch dịch vi sinh vật tăng sinh từ vỏ tơm lột 23 Hình Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng kích thước chitosan đến hiệu suất cắt mạch chitosan dịch tăng sinh vi sinh vật từ vỏ tơm lột 25 Hình Sơ đồ thí nghiệm phân lập vi sinh vật có khả phân giải chitosan 26 Hình Nhuộm Gram (Mẫn Hương, 2010) 28 Hình Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng chủng vi sinh vật có khả phân giải chitosan phân lập từ dịch tăng sinh vỏ tôm lột đến hiệu suất cắt mạch chitosan 30 Hình Ảnh hưởng thời gian tăng sinh dịch vi sinh vật đến mật độ vi sinh vật hiệu suất cắt mạch chitosan dịch vi sinh vật tăng sinh từ vỏ tơm lột 35 Hình Ảnh hưởng thời gian tăng sinh dịch vi sinh vật đến độ nhớt chitosan sau cắt mạch .37 Hình 3 Ảnh hưởng thời gian cắt mạch đến độ nhớt chitosan 39 Hình Ảnh hưởng thời gian cắt mạch đến hiệu suất cắt mạch chitosan dịch tăng sinh vi sinh vật từ vỏ tôm lột .40 Hình Ảnh hưởng kích thước chitosan đến độ nhớt chitosan sau cắt mạch .42 Hình Ảnh hưởng kích thước chitosan đến hiệu suất cắt mạch chitosan dịch tăng sinh từ vỏ tôm lột 43 Hình Khuẩn lạc sau nuôi cấy từ dịch tăng sinh môi trường phân lập 44 Hình Ảnh hưởng chủng vi sinh vật có khả phân giải chitosan phân lập từ dịch tăng sinh vỏ tôm lột đến hiệu suất cắt mạch chitosan 50 Hình Mật độ chủng vi sinh vật sau tăng sinh 51 Hình 10 Sơ đồ quy trình cắt mạch chitosan trạng thái rắn dịch vi sinh vật tăng sinh từ vỏ tôm lột .53 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Các dung dịch acid thường sử dụng để hòa tan chitosan Bảng Một số enzyme dùng để cắt mạch chitosan 15 Bảng Tính chất chitosan .34 Bảng Vi sinh vật phân lập từ vỏ tôm lột 44 Bảng 3 Đặc điểm khuẩn lạc chủng vi sinh vật phân lập từ dịch tăng sinh vỏ tôm lột 46 Bảng Đặc điểm tế bào chủng vi sinh vật 47 vii LỜI MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Chitosan polymer sinh học khơng độc hại, có nhiều đặc tính tốt nên ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực công nghệ sinh học, y tế, mỹ phẩm, nông nghiệp, thực phẩm, xử lý nước,… Tuy nhiên việc ứng dụng chitosan nước ta cịn chưa hiệu Nguyên nhân chủ yếu chitosan có trọng lượng phân tử lớn nên khả hòa tan thấp nhiều loại dung môi Điều giới hạn ứng dụng đặc biệt ngành thực phẩm y tế Để cải thiện khả hòa tan đặc tính sinh học, hóa học, vật lý chitosan nhiều phương pháp tiến hành để sản xuất chitosan khối lượng phân tử thấp Chitosan khối lượng phân tử thấp có nhiều đặc tính đặc biệt kháng khuẩn, kháng nấm, tăng cường hệ miễn dịch có nhiều ứng dụng y dược Theo Kondon cộng sự, 2000 chitosan có trọng lượng phân tử khoảng 20 kDa có khả ngăn ngừa phát triển bệnh đái tháo đường biểu lực cao với lipopolysaccharides chitosan có trọng lượng phân tử 140 kDa Để có chitosan phân tử lượng thấp, người ta thường sử dụng phương pháp hóa học, sinh học vật lý để cắt mạch chitosan có phân tử lượng cao Hiện nay, nhiều tác nhân cắt mạch hóa học vật lý sử dụng HCl, H2SO4, H2O2, dùng tia gamma, vi sóng hay sóng siêu âm để tạo chitosan phân tử lượng thấp (Einbu cộng sự, 2007; Zamni Taherzadeh, 2010; Quyên, 2012; Gryczka cộng sự, 2009; Czechowska cộng sự, 2005) Các tác nhân có nhiều ưu điểm dễ áp dụng quy mơ lớn, chi phí thấp,… nhiên lại cho chất lượng sản phẩm không ổn định, sản phẩm không tinh nguy cao gây ô nhiễm môi trường Trong giai đoạn nay, ngành công nghệ sinh học có bước phát triển mạnh mẽ Phát triển ứng dụng công nghệ sinh học điều tất yếu điều kiện ngành sản xuất truyền thống gây ô nhiễm môi trường nghiêm trọng Cắt mạch chitosan sử dụng phương pháp sinh học an toàn, dễ điều chỉnh trình sản xuất sản phẩm có độ tinh cao Tuy nhiên, cắt mạch chitosan phương pháp sinh học thường sử dụng tác nhân enzyme cắt mạch trạng thái Bảng PL1.1 Dựng đường chuẩn phương pháp Biuret Ống nghiệm Dung dịch hóa chất BSA chuẩn (ml) 0,2 0,4 0,6 0,8 Nước cất (ml) 0,8 0,6 0,4 0,2 Thuốc thử Biuret (ml) 4 4 4 10 Hàm lượng BSA (mg/ml) Sau cho đầy đủ hóa chất, ủ ống nghiệm nhiệt độ phòng 30 phút Sau ủ, dung dịch ống nghiệm đo mật độ quang học bước sóng 570nm để đọc giá trị OD570 (sử dụng ống làm mẫu blank)  Cơng thức tính hàm lượng protein Hàm lượng protein (%) Trong : V: Tổng thể tích dịch lọc (ml) C: Hàm lượng protein ml dịch lọc (mg/ml) C xác định theo công thức sau : Từ phương trình đường chuẩn ta có : C = -0.051 +18.756A A độ hấp thụ quang học bước sóng 570nm m : khối lượng mẫu ban đầu (g) w : hàm lượng mẫu (%) 1000 : hệ số chuyển đổi từ đơn vị mg sang g (mg/g) Phương pháp xác định độ tan chitosan Nguyên lý: Chitosan hòa tan dung mơi thích hợp, phần khơng tan được, lọc thu nhận sau sấy khơ đến trọng lượng khơng đổi từ xác định tỷ lệ chất khơng tan chitosan Tiến hành: Giấy lọc sấy không đổi 105°C, cân xác định khối lượng W1 Cân 1g chitosan muối chitosan lactate (tính theo hàm lượng chất khơ tuyệt đối) đem hịa tan dung mơi tương ứng để 24h, sau lọc qua giấy lọc Đem sấy giấy lọc phần không tan 1050C/24h, cân xác định khối lượng W2 Phần trăm chitosan/muối chitosan lactate khơng tan tính theo cơng thức: % 𝑘ℎ ô𝑛𝑔 𝑡𝑎𝑛 = *100% = (W2 – W1)* 100% Từ đó, tính độ tan chitosan chitosan lactate là: Độ tan (%) = 100%−% 𝑘ℎ ô𝑛𝑔 𝑡𝑎𝑛 Phụ lục Kết thí nghiệm Bảng PL1 Ảnh hưởng thời gian tăng sinh dịch vi sinh vật đến mật độ vi sinh vật hiệu suất cắt mạch chitosan dịch vi sinh vật tăng sinh từ vỏ tôm lột Thời gian Mật độ vi sinh vật (107 Hiệu suất cắt Độ nhớt (mPa.s) tăng sinh CFU/ml) mạch (%) (giờ) 265,86e ± 1,68 Mẫu CTS ban đầu 0 3,4A ± 1,05 256,7f ±4,18 24 20,33.1010a ± 5,69.1010 16,16B ± 0,93 222,77g ± 1,31 48 41,33.1010b ± 3,21.1010 89,55C ± 0,89 27,9h ± 3,00 72 73,33.1010c ± 6,11.1010 88,02C ± 0,98 31,83h ± 2,51 96 7.1010d ±2,11.1010 72,16D ± 1,44 73,93k ±4,02 Oneway ANOVA nhot Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 193972.664 38794.533 105.507 12 8.792 194078.171 17 ANOVA Sum of Squares mat VSV Hieu suat cat mach F Sig 4412.36 df Mean Square 26369000 00000000 40000000 000 16800000 00000000 10 000000.00 Between Groups 1054760000 0000001000 00000.000 Within Groups 1680000000 0000000000 000.000 Total 1071560000 0000001000 00000.000 14 Between Groups 20230.688 5057.672 Within Groups Total 11.587 20242.275 10 14 1.159 000 F Sig 156.9 58 000 4364 979 000 Homogeneous Độ nhớt thoi gian tang sinh Duncana 48.00 72.00 96.00 N Subset for alpha = 0.05 27.9000 31.8333 73.9333 24.00 ĐC Control 222.766 256.700 Sig .130 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 thoi gian tang sinh ĐC 96.00 24.00 Duncana 48.00 72.00 1.000 265.73 33 1.000 1.000 Mật độ vi sinh vật N Subset for alpha = 0.05 3 0000 7000000000 0.0000 2033333333 33.3333 4133333 33333.3 333 Sig .063 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 733333 333333 3334 1.000 1.000 Hiệu suất cắt mạch thoi gian tang N Subset for alpha = 0.05 sinh ĐC 3.4000 24.00 16.1567 72.1600 Duncan 96.00 a 72.00 88.0200 48.00 89.5533 Sig 1.000 1.000 1.000 112 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Bảng PL2: Ảnh hưởng thời gian cắt mạch đến hiệu suất cắt mạch dịch vi sinh vật tăng sinh Thời gian cắt mạch (giờ) Độ nhớt (mPa.s) Mẫu chitosan ban đầu 267,17a ± 2,57 ĐC 263,67a ± 3,51 1,83A ±1,23 Cắt mạch 193,49b ± 15,78 27,59B ± 5,57 ĐC 261,4a ± 1,25 2,15A ± 0,84 Cắt mạch 29,65c ± 9,22 89,54C ± 3,37 ĐC 258,67a ± 1,15 3,18A ± 0,53 Cắt mạch 10,65d ± 5,55 95,75D ± 2,49 Hiệu suất cắt mạch (%) 24 48 72 Oneway ANOVA HIệu suất cắt mạch Sum of Squares Between 29693.492 Groups Within 102.330 Groups Total 29795.822 df Mean Square F 5938.698 696.417 12 Sig .000 8.528 17 ANOVA Độ nhớt Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 236376.348 773.494 14 237149.843 20 F 39396.058 713.056 55.250 Homogeneous Sig .000 Hiệu suất cắt mạch Thời gian cắt N Subset for alpha = 0.05 mạch ĐC24 1.8033 ĐC48 2.1467 ĐC72 3.1767 Duncan 24.00 27.5900 a 48.00 89.5433 72.00 95.7500 Sig .594 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Độ nhớt Thời gian cắt mạch N Subset for alpha = 0.05 72.00 10.6500 48.00 29.6500 193.496 24.00 258.666 ĐC72 a Duncan 261.400 ĐC48 263.666 ĐC24 267.166 ĐC00 Sig 1.000 1.000 1.000 217 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Bảng PL3: Ảnh hưởng kích thước CTS đến hiệu suất cắt mạch dịch vi sinh vật tăng sinh Kích thước chitosan Hiệu suất cắt mạch (%) Độ nhớt (mPa.s) ĐC 0,96a ± 0,76 320,57E ± 2,79 Cắt mạch 8,13A ± 1,63 300,33F ± 5,5 35 mesh size ĐC 1,46a ± 0,79 288,03F ± 1,05 Cắt mạch 20,10B ± 4,02 233,6G ± 12,64 ĐC 2,72a ± 0,25 260,03H ± 2,00 Cắt mạch 81,16C ± 4,09 50I ± 10 60 mesh size 80 mesh size Oneway ANOVA Sum Squares Between Groups hieu suat cat Within mach Groups Total Between Groups nhot Within Groups Total of df Mean Square F Sig 476.971 000 581.398 000 14645.045 2929.009 73.690 12 6.141 14718.735 17 146862.823 29372.565 606.247 50.521 12 147469.069 17 Homogeneous hieu suat cat mach kich thuoc N Subset for alpha = 0.05 cts ĐC35 9633 ĐC60 1.4633 ĐC80 2.7167 a Duncan 35.00 8.1267 60.00 20.1033 80.00 81.1633 Sig .426 1.000 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 nhot kich thuoc cts N Subset for alpha = 0.05 10 80.00 50.0000 60.00 ĐC80 260.0333 C80 267.1667 ĐC60 288.033 C60 292.333 292.3333 35.00 300.3333 ĐC35 320.56 67 C35 323.70 00 233.600 Duncana Sig 1.000 1.000 165 394 122 533  ĐC mẫu đối chứng chitosan kích thước  C mẫu chitosan ban đầu kích thước Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Bảng PL4: Ảnh hưởng chủng vi sinh vật đến hiệu suất cắt mạch chitosan Chủng vi sinh vật Hiệu suất cắt mạch (%) Mật độ vi sinh vật (CFU/ml) K1 12,93ab ± 1,44 41,5.106A ± 4,9.106 K2 27,78c ± 2,13 11,8.107B ± 7.106 K3 11,15a ± 1,55 7,05.107CD ± 2,1.106 K4 27,22c ± 2,94 8,3.107DE ± 8,48.106 11 K5 12,06a ± 1,71 9,6.107E ± 8,48.106 K6 17,24ab ± 1,17 6,1.107C ± 4,24.106 K7 28,39c ± 1,55 8.107CDE ± 14,14.106 Oneway Sum of Squares Between Groups Hieu suat Within cat mach Groups Total ANOVA df Mean Square 761.355 126.892 24.425 3.489 785.780 13 F 36.366 ANOVA Mat VSV Sum of df Mean Square F Sig Squares Between 72564285714 Groups 28571.000 Within Groups Total 44100000000 0000.000 76974285714 28571.000 12094047619 04761.800 19.197 001 63000000000 000.000 13 Homogeneous Chung VSV 3.00 5.00 Duncan 1.00 a 6.00 4.00 2.00 Hieu suat cat mach N Subset for alpha = 0.05 1.7202 11.1531 12.0605 12.9301 12.9301 17.2401 27.2212 27.7883 12 Sig .000 7.00 28.3932 Sig .390 054 564 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2.000 Mat VSV Chung VSV N Subset for alpha = 0.05 1.00 6.00 3.00 7.00 4.00 5.00 2 4150000 0.0000 61000000 0000 70500000 70500000.0 0000 000 80000000 80000000.0 80000000.000 0000 Duncana 000 83000000.0 83000000.000 000 96000000.000 118000 2.00 000.000 Sig 1.000 055 173 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 2.000 13 094 1.000 Phụ lục Một số hình ảnh thí nghiệm đề tài Vỏ tôm 58 ngày Vỏ tôm 64 ngày Vỏ tôm bắt đầu tăng sinh 14 Vỏ tôm lột sau tăng sinh Phân lập từ VTL 58 ngày Phân lập từ VTL 64 ngày 15 Phụ lục Một số máy móc, thiết bị sử dụng đề tài Cân phân Máy đo tích UV- Vis Máy Xay Máy đo Chitosan độ nhớt Tủ sấy Máy đo quạt pH 16 Lị vi sóng Máy lắc ổn nhiệt GLF Máy Nồi hấp khuấy từ nhiệt trùng Tủ nuôi Tủ cấy VSV vi sinh 17 Tủ sấy ẩm Tủ nung Máy đồng mẫu Kính hiển vi 18 ... đầu nghiên cứu cắt mạch chitosan trạng thái rắn tác nhân vi sinh vật? ?? Mục tiêu nghiên cứu Bước đầu thử nghiệm cắt mạch chitosan trạng thái rắn tác nhân vi sinh vật Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu. .. tăng sinh để thực nội dung công vi? ??c sau Nghiên cứu khả cắt mạch chitosan trạng thái rắn dịch tăng sinh vi sinh vật - Dịch tăng sinh sử dụng để cắt mạch chitosan trạng thái rắn yếu tố nghiên cứu. .. khác cắt mạch chitosan trạng thái rắn phương pháp sinh học tác nhân vi sinh vật Ý nghĩa thực tiễn Các chủng vi sinh vật phân lập có khả cắt mạch chitosan trạng thái rắn thu đề tài đặt tảng cho nghiên