Thông tin tài liệu
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƢỜNG - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN, PHƢƠNG PHÁP BAO GÓI VÀ THU NHẬN TẾ BÀO NẤM MEN CHỨA TINH DẦU MÀNG TANG (LITSEA CUBEBA) ỨNG DỤNG TRONG NUÔI TRỒNG THỦY SẢN GVHD: ThS Lê Nhã Uyên ThS Phạm Thị Lan SVTH: Nguyễn Thị Tú Linh MSSV: 58131203 KHÁNH HỊA- 2020 TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CƠNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƢỜNG BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN, PHƢƠNG PHÁP BAO GÓI VÀ THU NHẬN TẾ BÀO NẤM MEN CHỨA TINH DẦU MÀNG TANG (LITSEA CUBEBA) ỨNG DỤNG TRONG NUÔI TRỒNG THỦY SẢN GVHD: ThS Lê Nhã Uyên ThS Phạm Thị Lan SVTH: Nguyễn Thị Tú Linh MSSV: 58131203 Khánh Hịa , tháng 08/2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu ngun tơi Các số liệu, kết đƣợc nêu báo cáo trung thực chƣa đƣợc công bố nghiên cứu trƣớc Khánh Hịa, ngày…tháng…năm… Sinh viên thực Nguyễn Thị Tú Linh LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn đến Trƣờng Đại học Nha Trang tạo điều kiện hỗ trợ trang thiết bị vật chất để em học tập nghiên cứu đề tài tốt nghiệp Em xin cảm ơn đến thầy cô Bộ môn Công nghệ sinh học - Viện Công nghệ sinh học Môi trƣờng Trƣờng Đại Học Nha Trang quan tâm, hỗ trợ bảo tận tình để em hoàn thành đề tài tốt nghiệp thời hạn Dƣới giúp đỡ tận tình thầy giáo, bạn bè ngƣời thân em hồn thành đƣợc đề tài tốt nghiệp Do em xin bày tỏ lòng biết ơn đến tập thể cá nhân giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp Em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến ThS Lê Nhã Uyên ThS Phạm Thị Lan hƣớng dẫn tận tình, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm cho em suốt trình thực đề tài tốt nghiệp Cuối em cảm ơn bạn bè ngƣời thân hỗ trợ, sát cánh động viên em thời gian thực đồ án Với kinh nghiệm sinh viên nên trình thực đề tài cịn vài thiếu sót Em kính mong thầy nhận xét, đóng góp ý kiến bảo để em có thêm kiến thức để chuẩn bị hành trang cho tƣơng lai Em kính chúc thầy cô Trƣờng Đại học Nha Trang lời chúc sức khỏe ngày thành công công việc sống Khánh Hòa, tháng năm 2020 Sinh viên thực Nguyễn Thị Tú Linh MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC HÌNH ẢNH ii DANH MỤC BẢNG iii LỜI MỞ ĐẦU .1 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN .3 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN .4 1.1 Công nghệ vi nang sử dụng tế bào nấm men .4 1.1.1 Nấm men Saccharomyces cerevisiae 1.1.2 Cấu tạo nấm men 1.1.3 Sinh sản 1.1.4 Đặc tính sinh học 1.2 Công nghệ vi nang sử dụng nấm men 1.2.1 Sự tƣơng đồng tế bào nấm men vi nang 1.2.2 Tính chất bề mặt tế bào nấm men 1.3 Q trình bao gói tế bào nấm men 1.4 Những phƣơng pháp thu nhận sinh khối nấm men chứa tinh dầu .10 1.4.1 Phƣơng pháp lọc 10 1.4.2 Phƣơng pháp ly tâm 11 1.4.3 Phƣơng pháp lắng 12 1.5 Tổng quan tinh dầu Màng tang .13 1.5.1 Định nghĩa tinh dầu 13 1.5.2 Tính chất vật lý tinh dầu Màng tang 13 1.5.3 Công dụng tinh dầu Màng tang 14 1.5.4 Tính chất kháng khuẩn tinh dầu Litsea cubeba 14 1.5.5 Các phƣơng pháp tách chiết tinh dầu 16 1.6 Trích ly tế bào nấm men chứa tinh dầu .17 1.6.1 Khái niệm trích ly 17 1.6.2 Q trình trích ly 17 CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Nguyên vật liệu 19 2.1.1 Nấm men Saccharomyces cerevisiae 19 2.1.2 Tinh dầu Litsea cubeba 19 2.1.3 Hóa chất- dụng cụ-thiết Bị 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 30 3.1 Xây dựng phƣơng pháp định lƣợng hàm lƣợng tinh dầu 30 3.1.1 Xây dựng đƣờng chuẩn theo phƣơng pháp đo quang phổ hấp thụ .30 3.1.2 Xây dựng đƣờng chuẩn độ hấp thụ tinh dầu .31 3.1.3 Xác định bƣớc sóng hấp thụ cực đại mẫu vi nang nấm men 32 3.1.4 Khảo sát tỉ lệ sinh khối: nƣớc: tinh dầu lên khả bao gói .33 3.2 Xây dựng phƣơng pháp thu hồi sinh khối nấm men chứa tinh dầu 35 3.2.1 Phƣơng pháp ly tâm 36 3.2.2 Phƣơng pháp lọc 36 3.2.3 Phƣơng pháp lắng 37 3.2.4 Phƣơng pháp tối ƣu thu hồi sinh khối nấm men chứa tinh dầu 38 3.3 Xác định hàm lƣợng tinh dầu sau trích ly từ tế bào nấm men .39 3.3.1 Trích ly từ tế bào nấm men 39 3.3.2 Xác định hàm lƣợng tinh dầu sau trích ly .40 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 4.1 Kết luận 42 4.2 Kiến nghị .42 TÀI LIỆU TRÍCH DẪN 43 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH PL1 PHỤ LỤC BẢNG PL4 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt/ ký hiệu Tên tiếng việt Tên tiếng anh CNSH Công nghệ sinh học Biotechnology FAO Tổ chức lƣơng thực nông nghiệp liên hợp quốc Food and Agriculture Organization of the United Nations UV-VIS Quang phổ tử ngoại- Khả kiến Ultra violet- Visible YPD HDL Lipoprotein mật độ cao High density lipoprotein MIC Nồng độ tối thiểu chất có tác dụng ức chế tăng trƣởng vi khuẩn mức quan sát đƣợc Minimum inhibitory concentration MBC Nồng độ tối thiểu để tiêu diệt vi khuẩn Minimum bactericidal concentration Abs Độ hấp thụ quang A Absorbance Yeast- peptonedextrose i DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Cấu tạo nấm men Saccharomyces cerevisiae Hình 1.2: Sự tƣơng đồng vi nang nấm men Hình 1.3: Cấu trúc thành màng tế bào nấm men Hình 1.4: Sự vận chuyển hợp chất kỵ nƣớc qua màng tế bào Hình 1.5: Phƣơng pháp lọc 11 Hình 1.6: Phƣơng pháp ly tâm .12 Hình 1.7: phƣơng pháp lắng 13 Hình 1.8: Tinh dầu Màng tang .14 Hình 1.9: Nồng độ ức chế vi khuẩn Citral 15 Hình 1.10: Sơ đồ trích ly 18 Hình 2.1: Nấm men Saccharomyces cerevisiae .19 Hình 2.2: Tinh dầu Litsea cubeba 20 Hình 3.1: Phổ UV-VIS tinh dầu Màng tang (10 µg/ml) ethanol: có đỉnh hấp thụ cực đại λ= 321 nm 30 Hình 3.2: Phƣơng trình hồi quy truyến tính tinh dầu Màng tang 32 Hình 3.3: Phổ UV-VIS mẫu vi nang dung môi ethanol 33 Hình 3.4: Hàm lƣợng tinh dầu có vi nang 34 Hình 3.5: Hiệu suất bao gói vi nang nấm men .35 Hình 3.6: Sinh khối nấm men chứa tinh dầu sau ly tâm 36 Hình 3.7: Sinh khối nấm men chứa tinh dầu sau lọc .37 Hình 3.8: Sinh khối nấm men chứa tinh dầu sau lắng .37 Hình 3.9: Biểu đồ khối lƣợng sinh khối nấm men chứa tinh dầu 38 Hình 3.10: Khối lƣợng mẫu vi nang nghiền 39 Hình 3.11: Vi nang ngâm ethanol 40 ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Dụng cụ thiết bị sử dụng trình nghiên cứu .20 Bảng 2.2: Danh sách hóa chất sử dụng 21 Bảng 3.1: Độ hấp thụ theo nồng độ tinh dầu Màng tang, đo bƣớc sóng 321 nm 31 Bảng 3.2: Hàm lƣợng tinh dầu sau trích ly 41 iii Tài liệu Internet https://sachthucpham.com/ung-dung-vi-sinh-vat-trong-len-men-bia-1562210601 https://www.thuocdantoc.org/duoc-lieu/mang-tang http://v2bnc00223.v2.webbnc.net/tinh-dau-mang-tang-1-1-467593.html 47 PHỤ LỤC HÌNH ẢNH Hình 1: Máy UV-VIS biochrom Hình 2: Máy ly tâm PL1 Hình 3: tủ sấy nhiệt Hình 4: Bể ổn nhiệt PL2 Hình 5: ống fancol PL3 PHỤ LỤC BẢNG Phụ lục 1: Thành phần hóa học (%) tinh dầu Màng tang chiết từ phận theo (Hammida & Ahmad, 2015) Thành phần hóa học Thành phần phần trăm (%) Trái β-myrcene Vỏ Rễ 2.0 Α-Phellandrene 0.3 D-limonene 10.4 24.6 Eucalyptol 1.4 9.2 Β-Ocimene Hoa 4.5 3.2 3.59 1.1 0.9 21.1 44.0 22.0 0.3 0.2 2.6 0.4 5.5 0.8 4.4 0.6 2.4 0,4 ϒ -Terpinene Β-Linalool Thân 0.2 4-Carene Melon heptanal Lá 3.8 1.9 P-Menth-2-en-1-ol 0.9 Citronellal 51.5 26.8 45.6 Isopulegol 3.9 6.1 11.8 Borneol 1.7 Terpinen-4-ol 0.9 Trans-Piperitol 2.09 7.0 5.9 5.6 2.24 5.41 0.2 Α-Terpicol 0.8 2.6 2.9 18.6 11.6 Citronellol 8.9 26.3 26.0 1.3 5.8 PL4 Cis- Citral 1.1 Trans-Geraniol 7.2 Α-Citral 1.5 Citronellic acid 1.2 Terpin hydrate 3.7 Copaene 1.3 Β-Elemene Β-Caryophyllene 1.8 1.5 3.2 0.2 0.4 5.5 3.2 Α-Farnesene 0.1 Elixene 0.9 2.1 Β-Cadinene 0.5 1.5 Globulol 0.3 Spathulenol 0.5 Caryoplyllene oxide 0.1 0.3 0.8 Α- Thujene 0.1 0.37 3.47 1.56 1.85 Α-Pinene 2.87 5.41 3.25 6.94 2.87 Canphene 3.12 1.91 2.34 1.9 Β- Phellandrene 1.01 5.21 5.23 18.74 5.75 Β-Pinene 1.37 1.41 3.57 7.12 7.25 Methyl heptenone 3.54 4.32 1.23 0.65 6-methylhept-5er-2- 0.78 0.87 PL5 one 3-Carene 1.7 0.43 Α-terpinene 1.25 1.67 p- Cymene 2.14 0.65 0.78 Cineole 0.49 1.34 13.79 Limonene 7.38 4.27 6.78 Β-trans-Ocimene 2.62 4.67 0.27 13.68 9.82 5.43 2.15 Β-terpinene 33.17 ϒ -Terpinene 0.17 1.27 1.52 5.23 0.87 Linalool 1.34 0.45 6.94 0.87 1.06 2,6-Dimethylocta- 0.23 1.18 2,4,6-triene Α-thujanol 1.72 1.37 0.54 9.43 Camphor 1.7 0.87 0.68 (E)-p-Menth-2-en- 1.38 0.31 1.31 4.26 0.17 1-ol Citral B 63.57 Eugenol Geraniol 21.53 0.72 0.99 5.27 1.24 2,25 0.64 0.25 Bornuy acetate 0.38 5.34 0.12 Caryophylle 1.89 8.04 2.47 PL6 1.9 Β-elemene 1.37 5.87 1.34 0.27 0.71 0.67 Α-Farnesene 0.21 Safrol 1.12 Geranyl acetate 1.01 4.32 n-trans-Nerolidol 0.73 3.54 0.12 ϒ -Elemene 2.47 8.27 Selin-6-en-4-ol 0.78 0.21 0.52 17.13 24.04 32.12 59.86 68.31 70.52 60.09 27.2 33.13 26.98 0.21 6.00 22.89 4.48 2.80 8.59 6.94 12.91 1.41 Monoterpene 0.78 hydrocarbons Oxygenated monoterpene Sesquiterpene hydrocarbons Khác PL7 Phụ lục 2: Độ hấp thụ tinh dầu mẫu vi nang dựa vào tỉ lệ tinh dầu Màng tang Tỉ lệ sinh khối: nƣớc: tinh dầu Nồng độ muối (%) H2 1% 2% 3% 4% 5% Trung bình 1:4: 0.6 1.149 2.367 2.208 2.217 1.981 2.163 2.614 2.112 2.682 2.154 2.292 2.032 2.436 2.363 2.214 2.419 2.252 2.682 2.24 1: 4: 0.5 1.66 1.52 1.50 2.04 1.93 2.15 2.54 2.08 2.56 1.57 1.75 2.07 2.75 2.13 2.86 1.60 1.42 1.03 1.95 1: 4: 0.4 1.664 1.798 1.534 1.818 1.713 1.753 1.917 1.818 1.731 1.593 1.665 2.565 1.879 2.49 1.875 1.466 1.355 1.79 PL8 1: 4: 0.3 1.98 1.754 1.574 1.528 1.449 1.462 1.918 1.922 1.809 1.865 1.449 1.629 1.987 1.793 1.765 1.289 1.303 1.313 1.65 1:4: 0.2 1.538 1.93 1.497 1.955 1.928 1.971 2.851 1.84 1.864 1.956 1.999 1.976 1.887 1.852 1.753 1.482 1.458 1.401 1.84 Phụ lục 3: Hàm lƣợng tinh dầu có vi nang nấm men Nồng độ muối (%) H20 1% 2% 3% 4% 5% Trung bình 1:4:0.6 Tỉ lệ sinh khối: nƣớc: sinh khối 1:4:0.5 1:4:0.4 1:4:0.3 1:4:0.2 17.64 48.09 44.12 44.34 38.44 42.99 54.27 41.72 55.97 42.77 46.22 39.72 49.82 47.99 44.27 49.39 45.22 55.97 44.94 30.32 26.99 26.47 39.99 37.22 42.64 52.44 40.97 52.99 28.17 32.69 40.64 57.54 42.24 60.42 28.82 24.39 14.69 37.76 27.37 37.17 26.34 37.79 37.12 38.19 60.19 34.92 35.52 37.82 38.89 38.32 36.09 35.22 32.74 25.97 25.37 23.94 34.94 30.52 33.87 27.27 34.37 31.74 32.74 36.84 34.37 32.19 28.74 30.54 28.99 53.04 35.89 51.17 35.79 25.57 22.79 33.69 PL9 38.42 32.77 28.27 27.12 25.14 25.47 36.87 36.97 34.14 35.54 25.14 29.64 38.59 33.74 33.04 21.14 21.49 21.74 30.29 Phụ lục 4: Hiệu suất bao gói tinh dầu (%) Nồng độ muối (%) H2 1% 2% 3% 4% 5% Trung bình 1:4:0.6 3.45 8.20 7.40 7.59 6.65 7.69 8.48 6.53 7.86 6.14 7.78 6.05 9.73 8.27 7.66 6.74 6.53 7.48 7.24 Tỉ lệ sinh khối: nƣớc: sinh khối 1:4:0.5 1:4:0.4 1:4:0.3 2.92 2.39 5.51 4.12 3.53 3.92 5.36 4.68 5.96 3.29 4.20 5.52 5.83 5.23 5.76 4.90 3.24 4.07 4.47 3.62 2.85 2.13 3.29 2.56 3.21 2.73 2.89 3.18 2.90 2.98 2.54 4.15 2.83 3.44 2.32 2.02 2.60 2.90 PL10 1.90 2.35 1.58 1.55 1.38 1.63 2.89 2.10 2.05 2.22 1.19 1.38 3.27 2.97 3.12 2.01 1.87 1.89 2.07 1:4:0.2 1.37 2.32 1.88 1.57 1.74 3.11 2.18 1.68 1.45 1.60 1.89 1.71 2.40 1.66 1.03 1.12 1.09 1.38 1.73 Phụ lục 5: Khối lƣợng thu hồi sinh khối nấm men chứa tinh dâu phƣơng Nồng độ muối Lần Lần Lần Trung bình H2 4.92 5.11 5.43 5.15 1% 4.66 483 4.54 4.68 2% 4.48 4.58 4.84 4.63 3% 5.01 5.51 4.94 5.15 4% 4.46 4.82 3.47 4.31 5% 4.99 4.32 3.51 4.27 pháp ly tâm Phụ lục 6: Khối lƣợng thu hồi sinh khối nấm men chứa tinh dâu phƣơng pháp lắng Nồng độ muối Lần Lần Lần Trung bình H2 3.23 3.84 3.19 3.42 1% 3.94 3.52 2.94 3.47 2% 2.3 4.15 2.94 3.13 3% 3.64 3.74 3.95 3.78 4% 2.87 3.12 3.59 3.19 5% 4.24 4.13 4.12 PL11 Phục lục 7: Khối lƣợng thu hồi sinh khối nấm men chứa tinh dâu phƣơng pháp lọc Nồng độ muối Lần Lần Lần Trung bình H2 4.64 4.14 5.12 4.63 1% 4.13 4.13 5.15 4.47 2% 3.74 4.15 3.52 3.80 3% 4.85 5.26 5.24 5.12 4% 4.93 4.63 5.23 4.93 5% 3.6 4.27 4.66 4.19 Phục lục 8: Khối lƣợng mẫu vi nang nấm men chứa tinh dầu nghiền phƣơng pháp ly tâm Nồng độ muối Lần Lần Lần H2 1.887 1.852 1.753 1.83 1% 1.918 1.922 1.209 1.68 2% 1.865 1.449 1.629 1.65 3% 1.525 1.798 1.534 1.62 4% 2.436 2.133 2.114 2.23 5% 1.689 1.624 1.846 1.72 PL12 Trung bình Phụ lục 9: Khối lƣợng mẫu vi nang nấm men chứa tinh dầu nghiền phƣơng pháp lắng Nồng độ muối Lần Lần Lần Trung bình H2 1.17 1.34 1.45 1.32 1% 1.25 1.56 1.209 1.35 2% 1.65 1.35 1.534 1.59 3% 1.25 1.68 1.25 1.39 4% 1.11 1.31 1.11 1.18 5% 0.96 1.21 0.89 1.02 Phụ lục 10: Khối lƣợng mẫu vi nang nấm men chứa tinh dầu nghiền phƣơng pháp lọc Nồng độ muối Lần Lần Lần H2 1.56 1.36 1.65 1.52 1% 1.64 1.86 1.03 1.51 2% 1.25 1.37 1.26 1.29 3% 1.45 1.64 1.36 1.48 4% 1.37 1.47 1.27 1.37 5% 1.38 1.86 1.96 1.73 PL13 Trung bình Phụ lục 11: Hàm lƣợng tinh dầu dịch (µg/ml) Mẫu Nc 1% 2% 3% 4% 5% Trung bình 1:4:0.6 Hàm lƣợng tinh dầu có dịch 1:4:0.5 1:4:0.4 1:4:0.3 1:4:0.2 17.643 48.093 44.118 44.343 38.443 42.993 54.268 41.718 55.968 42.768 46.218 39.718 49.818 47.993 44.268 49.393 45.218 55.968 44.94 30.318 26.993 26.468 39.993 37.218 42.643 52.443 40.968 52.993 28.168 32.693 40.643 57.543 42.243 60.418 28.818 24.393 14.693 37.76 27.368 37.168 26.343 37.793 37.118 38.193 60.193 34.918 35.518 37.818 38.893 38.318 36.093 35.218 32.743 25.968 25.368 23.943 34.94 30.518 33.868 27.268 34.368 31.743 32.743 36.843 34.368 32.193 28.743 30.543 28.993 53.043 35.893 51.168 35.793 25.568 22.793 33.69 PL14 38.418 32.768 28.268 27.118 25.143 25.468 36.868 36.968 34.143 35.543 25.143 29.643 38.593 33.743 33.043 21.143 21.493 21.743 30.29 ... tịi nghiên cứu để khắc phục hạn chế tinh dầu Màng tang em lựa chọn đề tài ? ?Nghiên cứu điều kiện, phƣơng pháp bao gói thu nhận tế bào nấm men chứa tinh dầu Màng tang (Litsea cubeba) ứng dụng nuôi. .. HỌC VÀ MÔI TRƢỜNG BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU CÁC ĐIỀU KIỆN, PHƢƠNG PHÁP BAO GÓI VÀ THU NHẬN TẾ BÀO NẤM MEN CHỨA TINH DẦU MÀNG TANG (LITSEA CUBEBA) ỨNG DỤNG... dụng nuôi trồng thủy sản? ?? MỤC TIÊU ĐỀ TÀI 1.1 Nghiên cứu tỉ lệ sinh khối: nƣớc: tinh dầu lên khả bao gói nấm men 1.2 Nghiên cứu đƣợc phƣơng pháp thu nhận nấm men chứa tinh dầu Màng tang 1.3 Định
Ngày đăng: 17/05/2021, 14:18
Xem thêm:
