Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)

Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)Nghiên cứu tổng hợp hệ nano dendrimer poly(amidoamine) mang thuốc chống ung thư (carboplatin, oxaliplatin) (Luận án tiến sĩ)

B GIÁO D C VÀ ÀO T O VI N HÀN LÂM KHOA H C VÀ CÔNG NGH VI T NAM H C VI N KHOA H C VÀ CÔNG NGH - H MINH NH T NGHIÊN C U T NG H P H NANO DENDRIMER POLY(AMIDOAMINE) MANG THU C CH NG UNG TH (CARBOPLATIN VÀ OXALIPLATIN) LU N ÁN TI N S KHOA H C V T LI U THÀNH PH H CHÍ MINH – 2021 B GIÁO D C VÀ ÀO T O VI N HÀN LÂM KHOA H C VÀ CÔNG NGH VI T NAM H C VI N KHOA H C VÀ CÔNG NGH - H MINH NH T NGHIÊN C U T NG H P H NANO DENDRIMER POLY(AMIDOAMINE) MANG THU C CH NG UNG TH (CARBOPLATIN VÀ OXALIPLATIN) Chuyên ngành: V t li u cao phân t t h p Mã s : 9440125 LU N ÁN TI N S KHOA H C V T LI U NG IH NG D N KHOA H C: GS TS NGUY N C U KHOA PGS TS NGUY N NG C VINH Thành ph H Chí Minh – 2021 i L I CAM OAN Cơng trình c th c hi n t i Vi n Khoa h c V t li u ng d ng − Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam Tơi xin cam oan ây cơng trình nghiên c u c a cs h ng d n khoa h c c a GS TS Nguy n C u Khoa PGS.TS Nguy n Ng c Vinh Các n i dung nghiên c u, k t qu tài trung th c, c hoàn thành d a k t qu nghiên c u c a k t qu c a nghiên c u ch a c dùng cho b t c lu n v n c p khác Tác gi lu n án H Minh Nh t ii L IC M L i N u tiên, xin bày t lòng bi t n sâu s c t i GS.TS Nguy n C u Khoa PGS.TS Nguy n Ng c Vinh, nh ng ng t n tình nh ng nh h i Th y ã dành cho s ng viên giúp ng khoa h c hi u qu su t trình th c hi n lu n án Tôi xin g i l i c m n n H c Vi n Khoa h c Công ngh Khoa ã t o i u ki n cho su t trình h c t p, nghiên c u hồn thành lu n án Tôi xin c m n s giúp khích l c a Anh Ch , B n Vi n Khoa h c V t li u ng d ng – Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam Sau cùng, xin c m n th c s không th quên th y cô, b n bè, anh em xa g n s c s giúp t n tình c a ng viên, t o i u ki n c a nh ng ng i thân gia ình su t trình tơi hồn thành lu n án Thành ph H Chí Minh, tháng 10 n m 2020 Tác gi H Minh Nh t iii M CL C Trang Trang ph bìa L i cam oan i L ic m n ii M cl c iii Danh m c ký hi u ch vi t t t viii Danh m c b ng xi Danh m c hình v th xii M U 1 tv n M c tiêu Ý ngh a khoa h c c a lu n án óng góp m i c a lu n án CH NG T NG QUAN 1.1 T ng quan v b nh ung th ph ng pháp tr li u b ng hóa tr 1.2 Thu c ch ng ung th d ng ph c platin 1.2.1 Carboplatin 1.2.2 Oxaliplatin 1.3 H ch t mang nano - dendrimer PAMAM 1.3.1 Gi i thi u h phân ph i thu c h ng ích th ng 1.3.2 C ch t ng tính th m hi u qu l u tr EPR 10 1.3.3 Dendrimer PAMAM 10 1.3.4 M t s y u t 1.3.5 Các ph nh h ng n tính ch t c a dendrimer 12 ng pháp t ng h p dendrimer 14 1.3.6 Bi n tính dendrimer PAMAM v i PEG 16 1.4 Tình hình nghiên c u 17 1.4.1 Tình hình nghiên c u th gi i 17 1.4.1.1 H dendrimer PAMAM bi n tính v i PEG 17 iv 1.4.1.2 Các h mang thu c khác (hydrogel, micelle, liposom, nanogel, ng nano cacbon) 21 1.4.2 Tình hình nghiên c u n 22 CH NG PH 2.1 Ph c NG PHÁP NGHIÊN C U VÀ TH C NGHI M ng pháp nghiên c u 2.1.1 Ph 26 26 ng pháp t ng h p dendrimer PAMAM 26 2.1.1.1 Ph n ng alkyl hóa (ph n ng Michael) 26 2.1.1.2 Ph n ng amid hóa 27 2.1.2 Ph 28 ng pháp bi n tính dendrimer PAMAM b ng PEG 2.1.2.1 Ph ng pháp bi n tính PAMAM th h ch n b ng mPEG-NPC 28 2.1.2.2 Ph ng pháp bi n tính PAMAM th h l b ng mPEG-NH2 29 2.1.3 Ph ng pháp nang hóa 30 2.1.4 Ph ng pháp phóng thích thu c 31 2.1.5 Ph ng pháp kh o sát t ng h p sinh h c dòng t bào L929 c dòng t bào ung th (ung th vú MCF-7, ung th ph i A549 ung th t cung Hela) 2.1.6 Ph 31 ng pháp xác 2.1.6.1 Ph c ng h 2.1.6.2 Ph kh i l nh c u trúc s n ph m ng t h t nhân (1H-NMR) ng (MS) 31 31 32 2.1.6.3 Ph t ngo i – kh ki n (UV-Vis) 32 2.1.6.4 Ph h ng ngo i (FT-IR) 32 2.1.6.5 Kính hi n vi i n t truy n qua (TEM) 32 2.1.6.6 Tán x ánh sáng ng (DLS) th zeta 33 2.1.7 Ph ng pháp xác nh gi m kh i l 33 2.1.8 Ph ng pháp xác nh hàm l 2.1.9 D c ng làm khô ng metanol t n d ng h c q trình gi i phóng thu c 33 34 2.2 Hóa ch t thi t b , d ng c nghiên c u 35 2.2.1 Hóa ch t 35 2.2.2 Thi t b , d ng c nghiên c u 36 2.3 T ng h p dendrimer PAMAM 36 2.3.1 T ng h p PAMAM G-0.5 t lõi etylene diamin 37 v 2.3.2 T ng h p PAMAM G0.0 37 2.3.3 T ng h p PAMAM G0.5 38 2.3.4 T ng h p PAMAM G1.0 38 2.3.5 T ng h p PAMAM G1.5 38 2.3.6 T ng h p PAMAM G2.0 39 2.3.7 T ng h p PAMAM G2.5 40 2.3.8 T ng h p PAMAM G3.0 40 2.3.9 T ng h p PAMAM G3.5 41 2.3.10 T ng h p PAMAM G4.0 41 2.4 Bi n tính dendrimer PAMAM v i PEG 42 2.4.1 T ng h p mPEG-NPC 42 2.4.2 T ng h p G3.0-PEG 42 2.4.2.1 L u tr dendrimer chu n b dung d ch PAMAM G3.0 42 2.4.2.2 T ng h p G3.0-PEG 43 2.4.3 T ng h p mPEG-NH2 44 2.4.4 T ng h p G3.5-PEG 45 2.4.4.1 L u tr Dendrimer PAMAM G3.5 d ng r n chu n b dung d ch 45 2.4.4.2 T ng h p G3.5-PEG 45 2.4.5 T ng h p G4.0-PEG 46 2.5 Nang hóa thu c oxaliplatin cacboplatin b ng PAMAM-PEG 48 2.6 Phóng thích thu c ch m 48 2.7 Kh o sát t ng h p sinh h c c t bào c a h ch t mang thu c 2.7.1 Pha thu c 2.7.1.1 Kh o sát 48 t ng h p sinh h c dòng t bào L929 2.7.1.2 Kh o sát c dòng t bào ung th 2.7.2 Nuôi c y t bào 2.7.3 Th nghi m 48 48 49 49 c 50 2.7.4 Nhu m màu t bào s ng/ch t (live/dead stain) 50 2.8 50 ng chu n nh l ng cacboplatin oxaliplatin b ng HPLC vi CH NG K T QU VÀ TH O LU N 51 3.1 T ng h p PAMAM dendrimer n th h G4.0 51 3.1.1 T ng h p PAMAM dendrimer n th h G2.5 51 3.1.1.1 Ph c ng h 3.1.1.2 Ph kh i l ng t h t nhân (1H-NMR) ng (MS) 51 52 3.1.2 T ng h p PAMAM dendrimer th h G3.0, G3.5 G4.0 54 3.1.2.1 Ph t ngo i – kh ki n (UV-Vis), ph h ng ngo i (FT-IR) ph c ng h ng t h t nhân ( 1H-NMR) 54 3.1.2.2 Tính tốn kh i l ng phân t PAMAM b ng 1H-NMR 56 3.1.2.3 Hình thái PAMAM 57 3.1.2.4 Th zeta 59 3.1.3 Hi u su t ph n ng t ng h p PAMAM dendrimer 59 3.2 Bi n tính PAMAM dendrimer b ng PEG 60 3.2.1 Ph t ngo i – kh ki n (UV-Vis) 61 3.2.2 Ph h ng ngo i (FT-IR) 61 3.2.3 Ph c ng h ng t h t nhân (1H-NMR) 63 3.2.4 Hình thái PAMAM bi n tính PEG 66 3.2.5 Th zeta 69 3.3 Kh o sát nang hóa 70 3.3.1 ng chu n nh l ng carboplatin oxaliplatin b ng HPLC 70 3.3.2 K t qu nang hóa thu c carboplatin v i PAMAM-PEG 72 3.3.2.1 Ph FT-IR 73 3.3.2.2 nh TEM 74 3.3.2.3 Th zeta 75 3.3.3 K t qu nang hóa thu c oxaliplatin v i PAMAM-PEG 75 3.3.3.1 Ph FT-IR 77 3.3.3.2 nh TEM 78 3.3.3.3 Th zeta 79 3.4 Kh o sát phóng thích thu c Carboplatin Oxaliplatin 80 3.4.1 Kh o sát phóng thích thu c Carboplatin 80 vii 3.4.2 Kh o sát phóng thích thu c Oxaliplatin 81 3.4.3 D 83 ốn mơ hình d c 3.5 Kh o sát t 3.6 Kh o sát c tính t bào ng h c h PAMAM-PEG mang thu c platin ng h p sinh h c v i t bào s i chu t L929 86 89 3.6.1 Dòng t bào ung th t cung HeLa 89 3.6.2 Dòng t bào ung th ph i A549 93 3.6.3 Dòng t bào ung th vú MCF-7 97 3.6.4 T ng h p chung k t qu 99 c tính t bào ung th K T LU N VÀ KI N NGH DANH M C CÁC CƠNG TRÌNH TÀI LI U THAM KH O 101 Ã CÔNG B 103 105 viii DANH M C KÝ HI U VÀ CH VI T T T 5-FU : 5-fluorouracil, thu c i u tr ung th A549 : Dòng t bào ung th ph i ADP : Adenosine diphosphat ATP : Adenosine triphosphat BDA : Butylen diamin CAR : Carboplatin CM : Ch t mang DCC : Ch t ho t hóa dicyclohexyl cacbodiimid DLC : Drug loading content, Kh n ng mang thu c c a ch t mang DLE : Drug loading efficiency, Hi u su t nang hóa DLS : Dynamic Light Scattering, Tán x ánh sáng DLVO : Mơ hình lý thuy t c a DLVO (theo tên nhà khoa h c Derjaguin, ng Landau, Verwey Overbeek) DMEM : Môi tr ng Dulbecco's modified Eagle's medium DMSO : Dimethyl sulfoxide DNA : Deoxyribonucleic acid DOPE : 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamin DOT : (–)- -d-(2r, 4r)-dioxolanethymine DOX : Doxorubicin, thu c i u tr ung th DPBS : Phosphate-buffered saline, N EB : Ethidium bromide EDA : Ethylene diamin EDC : 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide EDTA : Ethylenediaminetetraacetic acid EPR : Enhanced Permeability and Retention Effect, C ch t ng tính th m c mu i t ng hi u qu l u gi FA : Folic axit FBS : Fetal bovine serum, Huy t bò m photphat Ph FT-IR c a G3.5-PEG@OXA - 71 - Ph FT-IR c a G4.0-PEG@OXA - 72 - - 73 Ph l c Hình thái kích th Gi n Gi n Gi n c h t: tán x ánh sáng ng DLS th zeta th zeta c a PAMAM G3.0-PEG th zeta c a PAMAM G3.5-PEG th zeta c a PAMAM G4.0-PEG - 74 - Bi u phân b kích th c h t c a PAMAM G3.5 – PEG PAMAM G3.5 Bi u phân b kích th c h t c a PAMAM G4.0 – PEG PAMAM G4.0 Gi n th zeta c a G3.0-PEG(CAR) - 75 - Gi n th zeta c a G3.5-PEG(CAR) Gi n th zeta c a G4.0-PEG(CAR) Gi n th zeta c a G3.0-PEG(OXA) - 76 - Gi n th zeta c a G3.5-PEG(OXA) Gi n th zeta c a G4.0-PEG(OXA) - 77 - K t qu o kích th c PAMAM dendrimer G3.0-PEG s d ng DLS - 78 - K t qu o kích th c PAMAM dendrimer G3.5-PEG s d ng DLS - 79 - K t qu o kích th c PAMAM dendrimer G4.0-PEG s d ng DLS - 80 Ph l c Kh o sát B ng hình nh k t qu o t t ng h p sinh h c ng h p sinh h c c a PAMAM,PAMAM-PEG - 81 B ng hình nh k t qu o c dòng t bào ung th t cung HeLa c a PAMAM-PEG mang thu c carboplatin oxaliplatin 10 g/ml 25 g/ml 50 g/ml 75 g/ml 100 g/ml Carboplatin G3.0PEG@CAR G3.5PEG@CAR G4.0PEG@CAR Oxaliplatin G3.0PEG@OXA G3.5PEG@OXA G4.0PEG@OXA - 82 B ng hình nh k t qu o c dòng t bào ung th ph i A549 c a PAMAM-PEG mang thu c carboplatin oxaliplatin 10 g/ml 25 g/ml 50 g/ml 75 g/ml 100 g/ml Bocartin G3.0PEG@CAR G3.5PEG@CAR G4.0PEG@CAR Lyoxatin G3.0PEG@OXA G3.5PEG@OXA G4.0PEG@OXA - 83 B ng hình nh k t qu o c dòng t bào ung th vú MCF-7 c a PAMAM-PEG mang thu c carboplatin oxaliplatin 10 g/ml 25 g/ml 50 g/ml 75 g/ml 100 g/ml Bocartin G3.0PEG@CAR G3.5PEG@CAR G4.0PEG@CAR Lyoxatin G3.0PEG@OXA G3.5PEG@OXA G4.0PEG@OXA G1.5 PAMAM G1.0 PAMAM G0.5 PAMAM 0.0 PAMAM G G-0.5 PAMAM T ng h p 20 g G1.0 PAMAM 20g G0.5 PAMAM 20 g G 0.0 PAMAM 20 g G-0.5 PAMAM s d ng PAMAM Th h 90 130 45 35 150 (ml) (ml) 20 MA EDA 245 290 235 330 170 (ml) metanol môi Dung (ngày) ph n ng Th i gian ng pháp tinh ch Cô quay chân không k t h p b sung Metanol Hút m t hút chân không Cô quay chân không s d ng toluene:Metanol (9:1) lôi kéo EDA, sau ó dùng Metanol lo i b toluene Cơ quay chân không k t h p b sung Metanol Hút m t hút chân không Cô quay chân không s d ng toluene:Metanol (9:1) lôi kéo EDA, sau ó dùng Metanol lo i b toluene Cô quay chân khơng k t h p b sung Metanol Ph Tóm t t quy trình t ng h p dendrimer G4.0 t EDA 84 G4.0 PAMAM G3.5 PAMAM G3.0 PAMAM G2.5 PAMAM G2.0 PAMAM T ng h p 30 g G3.5 PAMAM 30 g G3.0 PAMAM 30 g G2.5 PAMAM 40 g G2.0 PAMAM 30 g G1.5 PAMAM s d ng PAMAM Th h 100 110 0 50 75 (ml) (ml) 120 MA EDA (400) Metanol (350) Metanol (410) Metanol 475 420 (ml) metanol môi Dung (ngày) ph n ng Th i gian Ph ng pháp tinh ch Cô quay chân không s d ng toluene:Metanol (9:1) lơi kéo EDA, sau ó dùng Metanol lo i b toluene Ti p n th m tách b ng màng 6-8 kDa Metanol Cô quay u i Metanol Cô quay chân không k t h p b sung Metanol Sau ó th m tách b ng màng 6-8 kDa Metanol Cô quay u i Metanol Cô quay chân không s d ng toluene:Metanol (9:1) lơi kéo EDA, sau ó dùng Metanol lo i b toluene Ti p n th m tách b ng mànG3.500 Da Metanol Cô quay u i Metanol Cô quay chân không k t h p b sung Metanol Cô quay chân không s d ng toluene:Metanol (9:1) lôi kéo EDA, sau ó dùng Metanol lo i b toluene 85 ... mang thâm nh p vào t bào t t h n [5,6] Trên c s ó, chúng tơi xu t lu n án: ? ?Nghiên c u t ng h p h nano dendrimer poly(amidoamine) mang thu c ch ng ung th (carboplatin oxaliplatin)? ?? M c tiêu Nghiên. .. H MINH NH T NGHIÊN C U T NG H P H NANO DENDRIMER POLY(AMIDOAMINE) MANG THU C CH NG UNG TH (CARBOPLATIN VÀ OXALIPLATIN) Chuyên ngành: V t li u cao phân t t h p Mã s : 9440125 LU N ÁN TI N S KHOA... ng ung th CAR OXA ho t tính c ch hi u qu ng th i v n th hi n i v i s phát tri n c a t bào ung th (trên dòng t bào: ung th t cung HeLa, ung th ph i A549 ung th vú MCF-7) óng góp m i c a lu n án