Nghiên cứu cố định enzyme lipase trên nano từ tính ứng dụng trong phản ứng chuyển hoá lipit

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ THÙY TRANG NGHIÊN CỨU CỐ ĐỊNH ENZYME LIPASE TRÊN NANO TỪ TÍNH ỨNG DỤNG TRONG PHẢN ỨNG CHUYỂN HÓA LIPIT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng – Năm 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ THÙY TRANG NGHIÊN CỨU CỐ ĐỊNH ENZYME LIPASE TRÊN NANO TỪ TÍNH ỨNG DỤNG TRONG PHẢN ỨNG CHUYỂN HĨA LIPIT Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS NGUYỄN BÁ TRUNG Đà Nẵng – Năm 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận văn Võ Thị Thùy Trang MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục đích nghiên cứu Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Cách tiếp cận phƣơng pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bố cục luận văn CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 KHÁI QUÁT VỀ CÔNG NGHỆ NANO 1.1.1 Giới thiệu công nghệ nano 1.1.2 Cơ sở khoa học công nghệ nano 1.1.3 Các phƣơng pháp điều chế vật liệu nano 1.2 TỔNG QUAN VỀ NANO TỪ TÍNH 1.2.1 Giới thiệu hạt nano từ tính 1.2.2 Cấu trúc hạt nano oxit sắt từ (Fe3O4 NPs) 10 1.2.3 Những tính chất đặc biệt MNPs 13 1.2.4 Các phƣơng pháp điều chế MNPs 15 1.3 ĐỘ BỀN VÀ ĐẶC TRƢNG CỦA MNPs 22 1.3.1 Bảo vệ cách bao bọc lớp phủ hợp chất hữu 22 1.3.2 Bảo vệ cách bao bọc lớp phủ hợp chất vô 23 1.4 SỰ BIẾN ĐỔI VÀ ỔN ĐỊNH CỦA MAGNETITE Fe3O4 24 1.5 ỨNG DỤNG SINH HỌC CỦA MNPs 24 1.5.1 Ứng dụng y sinh 24 1.5.2 Ứng dụng xử lý môi trƣờng 28 1.5.3 Chất mang xúc tác 29 1.6 GIỚI THIỆU VỀ ENZYME 30 1.6.1 Khái quát enzyme 30 1.6.2 Cơ chế xúc tác enzyme 30 1.7 ENZYME LIPASE 31 1.7.1 Giới thiệu enzyme lipase 31 1.7.2 Nguồn thu nhận enzyme lipase 31 1.7.3 Đặc điểm lipase 32 1.7.4 Tính đặc hiệu 33 1.7.5 Khả chịu nhiệt 34 1.7.6 Khả chịu lực cắt 34 1.7.7 Trung tâm hoạt động chế xúc tác 34 1.7.8 Ứng dụng lipase 35 1.8 ENZYME CỐ ĐỊNH 37 1.8.1 Sơ lƣợc enzyme cố định 37 1.8.2 Kĩ thuật cố định enzyme chất mang nano 38 1.9 PHẢN ỨNG THỦY PHÂN CỦA LIPIT 42 1.9.1 Lipit 42 1.9.2 Xúc tác enzyme cho phản ứng thủy phân 45 1.10 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỘC LĨNH VỰC CỦA ĐỀ TÀI 47 1.10.1 Ngoài nƣớc 47 1.10.2 Trong nƣớc 52 CHƢƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 54 2.1 HÓA CHẤT, DỤNG CỤ, THIẾT BỊ 54 2.1.1 Hóa chất 54 2.1.2 Dụng cụ thiết ị 55 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 55 2.2.1 Tổng hợp hạt nano sắt từ (Fe3O4NPs) phƣơng pháp đồng kết tủa 55 2.2.2 Biến tính bề mặt Fe3O4NPs cách phủ chitosan 57 2.2.3 Cố định enzyme lipase lên hạt nano sắt từ (Fe3O4NPs)–CS 58 2.2.4 Phản ứng thủy phân lipit với xúc tác enzyme cố định 59 2.2.5 Phân tích đặc trƣng vật liệu 60 2.2.6 Phân tích sản phẩm phản ứng thủy phân phƣơng pháp sắc kí GC-MS 62 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 63 3.1 TỔNG HỢP Fe3O4NPs BẰNG PHƢƠNG PHÁP ĐỒNG KẾT TỦA VÀ PHÂN TÍCH CÁC ĐẶC TRƢNG CỦA NĨ 63 3.1.1 Tổng hợp Fe3O4NPs 63 3.1.2 Phân tích đặt trƣng Fe3O4NPs 64 3.2 TỔNG HỢP VÀ PHÂN TÍCH CÁC ĐẶC TRƢNG CỦA VẬT LIỆU Fe3O4NPs – CHITOSAN (Fe3O4NPs – CS) 68 3.2.1.Tổng hợp vật liệu composit Fe3O4NPs – CS 68 3.2.2 Phân tích đặc trƣng Fe3O4NPs - CS 68 3.3 CỐ ĐỊNH ENZYME LIPASE LÊN BỀ MẶT VẬT LIỆU Fe3O4NPS-CS VÀ XÁC ĐỊNH ĐẶC TRƢNG SẢN PHẨM 73 3.3.1 Cố định enzyme lipase lên bề mặt vật liệu Fe3O4NPs- CS 73 3.3.2 Phân tích đặc trƣng Fe3O4NPs- CS - lipase 74 3.4 PHẢN ỨNG THỦY PHÂN LIPIT DẦU THỰC VẬT VỚI XÚC TÁC NANO ENZYME TỪ TÍNH Fe3O4NPs-CS-LIPASE 77 3.4.1 Phản ứng thủy phân lipit dầu thực vật dƣới tác dụng xúc tác nano enzyme từ tính Fe3O4NPs-CS-Lipase 77 3.4.2 Phân tích sản phẩm phản ứng thủy phân lipit dầu thực vật dƣới tác dụng xúc tác nano enzyme từ tính Fe3O4NPs-CS-Lipase 78 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 81 TÀI 1LIỆU THAM KHẢO QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI (bản sao) DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT FT-IR : Fourier Transform InfraRed GC-MS : Gas Chromatography - Mass Spectrometry GOD : Glucose Oxidase MNPs : Magnetic Nano Particles MRI : Magnetic Resonance Imaging SEM : Scanning Electron Microscope TEM : Transmission Electron Microscopy XRD : X-ray diffraction DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu Tên bảng bảng 1.1 Trang Kết nghiên cứu đặc tính tƣơng thích sinh học độc tính vật liệu nano từ tính có khơng có biến 15 tính 3.1 Thành phần axit béo có sản phẩm phản ứng thủy phân 79 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Mơ hình cấu trúc tinh thể Fe3O4 11 1.2 Cấu hình spin Fe3O4 12 1.3 1.4 1.5 Cơ chế hình thành phát triển hạt nano dung dịch Cơ chế tƣơng tác trình phản ứng điều chế MNPs ằng phƣơng pháp vi nhũ tƣơng (a) Nguyên tắc nhiệt phân bụi ; ( ) Nguyên tắc nhiệt phân laser 16 18 19 1.6 Nguyên tắc phân tách tế ằng từ trƣờng 25 1.7 Nguyên lí dẫn truyền thuốc dùng hạt nano từ tính 26 Cơ chế xác định protein dựa vào cảm biến từ (a) Anti ody đƣợc cố định bề mặt cảm biến, (b) Tƣơng 1.8 tác chọn lọc antibody antigen, (c) Tƣơng tác với 28 antibody có gắn nhãn từ tính tạo cấu trúc ―sandwich‖ (d) Cấu trúc ―sandwich‖ phát từ trƣờng 1.9 Cấu trúc enzyme lipase Candium 32 1.10 Trung tâm hoạt động enzyme 35 1.11 Mơ hình minh họa việc cố định enzyme lên hạt MNP oxit sắt sử dụng kĩ thuật (strept)avid 42 1.12 Cấu tạo tổng quát lipit đơn giản 43 1.13 Cấu tạo tổng quát photpholipit 44 2.1 Quy trình tổng hợp hạt nano sắt từ (Fe3O4 NPs) 56 71 Hình 3.8 Phổ hồng ngoại (IR) Fe3O4NPs; Chitosan; Fe3O4NPs- CS Kết đo độ từ bão hịa thể hình 3.10 cho thấy giá trị độ từ bão hòa Fe3O4NPs – CS 41,77 emu/g, thấp so với độ từ bão hòa an đầu Fe3O4NPs 47,92 emu/g Nguyên nhân chitosan phủ lên bề mặt Fe3O4NPs, làm giảm độ từ bão hòa vật liệu nhƣng giảm không đáng kể Lực kháng từ mẫu Fe3O4NPs – CS xác định đƣợc gần nhƣ ằng nên hạt sau phủ chitosan, Fe3O4NPs mang tính siêu thuận từ Nhƣ độ từ bão hòa Fe3O4NPs– CS đảm bảo cho ứng dụng cố định enzyme lipase để tách khỏi hỗn hợp phản ứng sau xúc tác 72 Hình 3.9 Phổ nhiễu xạ tia X hạt Fe3O4NPs (a); Fe3O4NPs-CS (b) 60,00 40,00 20,00 0,00 -15000 -10000 -5000 5000 10000 15000 -20,00 -40,00 -60,00 Fe3O4NPs Fe3O4NPs-CS Hình 3.10 Đường cong từ trễ Fe3O4NPs; Fe3O4NPs-CS 73 3.3 CỐ ĐỊNH ENZYME LIPASE LÊN BỀ MẶT VẬT LIỆU Fe3O4NPsCS VÀ XÁC ĐỊNH ĐẶC TRƢNG SẢN PHẨM 3.3.1 Cố định enzyme lipase lên bề mặt vật liệu Fe3O4NPs- CS Quá trình cố định enzyme lipase lên bề mặt Fe3O4NPs – chitosan đƣợc thực thông qua cầu nối glutaraldehyde Lợi dụng đặc điểm chung phân tử chitosan bề mặt Fe3O4NPs enzyme lipase có mặt nhóm amin (-NH2), glutaraldehyde cầu nối enzyme lipase Fe3O4NPs thông qua việc hình thành liên kết C=N tƣơng tác nhóm amin (-NH2) nhóm cacbonyl (-CHO) đƣợc trình ày nhƣ sau: Fe3O4NPs –Chitosan – N=CH – (CH2)3 – CH=N – Lipase Việc cố định enzyme lipase lên chất mang đƣợc thực theo quy trình 2.3.3: - Cho 2g Fe3O4NPs-CS sau đƣợc tổng hợp vào dung dịch đệm photphat (pH ≈ 4) đựng bình tam giác, thêm vào 20ml dung dịch glutaraldehyde 5% khuấy nhiệt độ phòng Sản phẩm đƣợc hoạt hóa glutaraldehyde đƣợc thu hồi rửa nƣớc cất - Chất mang sau hoạt hóa glutaraldehyde đƣợc trộn vào 20ml dung dịch enzyme lipase đệm photphat Hỗn hợp đƣợc khuấy nhẹ nhiệt độ phòng để enzyme tƣơng tác với phân tử glutaraldehyde gắn kết bền vững chất mang để yên 30 phút Sản phẩm Fe3O4NPs-CS - enzyme đƣợc thu hồi từ trƣờng bên ngoài, rửa nƣớc cất để loại bỏ enzyme tự không gắn kết Mẫu đƣợc bảo quản nhiệt độ thấp để tránh tƣợng biến tính tính làm giảm hoạt tính enzyme cố định 74 3.3.2 Phân tích đặc trƣng Fe3O4NPs- CS - lipase Chúng thu hồi sản phẩm, sấy khô nhiệt độ 400C tiến hành xác định đặc trƣng ằng phƣơng pháp nhƣ đo phổ hồng ngoại (IR), nhiễu xạ tia X độ từ bão hòa sản phẩm để kiểm chứng cố định enzyme lipase lên bề mặt chất mang (Fe3O4NPs/CS) Ngoài ra, chụp ảnh hiển vi quét qua SEM kiểm tra hình thái bề mặt xúc tác Fe3O4NPs- CS - lipase Từ phổ đồ IR thể hình 3.11 Fe3O4NPs- CS – lipase, có xuất dao động 1647cm-1 đặc trƣng cho khoảng dao động liên kết C=N Đó kết phản ứng nhóm cacbonyl (-CHO) phân tử glutaraldehyde nhóm NH2 chitosan enzyme lipase Ngồi ra, cịn có xuất dao động 1458 cm-1, 1054 cm-1 tƣơng ứng với dao động 1429 cm-1 1012 cm-1 phổ hồng ngoại enzyme lipase tự do, chứng tỏ lipase đƣợc cố định thành công chất mang Fe3O4NPs- CS 75 Hình 3.11 Phổ hồng ngoại (IR) enzyme lipase tự lipase cố định Kết phù hợp với kết thu đƣợc rút từ giản đồ nhiễu xạ tia X mẫu enzyme cố định thể hình 3.12 Trên giản đồ xuất đỉnh đặc trƣng cho cấu trúc tinh thể Fe3O4 có góc 2θ nhƣ giản đồ Fe3O4NPs-CS, nhƣng cƣờng độ nhiễu xạ thấp so với Fe3O4NPs-CS Tƣơng tự độ từ bão hịa mẫu enzyme cố định có giá trị 37,99 emu/g giảm so với Fe3O4NPs/CS điều đƣơc thể đƣờng cong từ trễ hình 3.13 Sự cố định enzyme lipase làm giảm độ tự bão hòa nhƣ thay đổi bề mặt chất mang Với kết thu thập trên, kết luận enzyme lipase đƣợc cố định thành cơng bề mặt chất mang 76 Hình 3.12 Phổ nhiễu xạ XRD Fe3O4NPs(a), Fe3O4NPs-CS(b) Fe3O4NP-CS-lipase(c) 60,00 40,00 20,00 0,00 -15000 -10000 -5000 5000 10000 15000 -20,00 -40,00 -60,00 Fe3O4 - Chitosan Fe3O4 Fe3O4 - CS - Lipase Hình 3.13 Đường cong từ trễ Fe3O4NPs, Fe3O4NPs-CS Fe3O4NPs-CS-Lipase 77 Qua kết chụp ảnh hiểm vi quét qua SEM chất mang sau cố định enzyme lipase đƣợc thể hình 3.14 Từ hình ảnh nhƣ so sánh với hình 3.7b, ta thấy đƣợc sau cố định enzyme lên bề mặt chất mang không làm thay đổi kích thƣớc nhƣ ảnh hƣởng đến đặc tính vốn có chất mang Hình 3.14 Ảnh chụp SEM Fe3O4NPs-CS-Lipase 3.4 PHẢN ỨNG THỦY PHÂN LIPIT DẦU THỰC VẬT VỚI XÚC TÁC NANO ENZYME TỪ TÍNH Fe3O4NPs-CS-LIPASE 3.4.1 Phản ứng thủy phân lipit dầu thực vật dƣới tác dụng xúc tác nano enzyme từ tính Fe3O4NPs-CS-Lipase Chúng tiến hành thực phản ứng thủy phân dầu thực vật hệ xúc tác tổng hợp Fe3O4NPs-CS-Lipase theo quy trình 2.2.4 Các mẫu thí nghiệm đƣợc ủ 35oC suốt thời gian phản ứng Sau 24 ủ, mẫu có khác rõ rệt độ đục Sản phẩm trình thủy phân lipit glixerol axit béo - hợp chất không tan 78 nƣớc Axit éo khơng tan nƣớc, khuấy tạo thành hệ nhũ tƣơng làm cho hỗn hợp bị đục (hình 3.15) Lƣợng axit béo tạo thành nhiều làm cho hệ nhũ tƣơng ị đục Hiện tƣợng thấy đƣợc hệ nhũ tƣơng dung dịch chứa enzyme cố định, chứng tỏ enzyme sau cố định lên chất mang cịn hoạt tính xúc tác Hình 3.15 Các mẫu phản ứng sau ủ 24 Tiếp tục ủ hỗn hợp phản ứng điều kiện ngày Dùng từ trƣờng thu hồi enzyme cố định Sau hỗn hợp sản phẩm phản ứng đƣợc chiết với n-hexan để thu lấy axit éo Phân tích hàm lƣợng axit béo sau thủy phân phƣơng pháp sắc kí khí để xác định hiệu chuyển hóa lipit enzyme nano từ tính tổng hợp 3.4.2 Phân tích sản phẩm phản ứng thủy phân lipit dầu thực vật dƣới tác dụng xúc tác nano enzyme từ tính Fe3O4NPs-CS-Lipase Kết phân tích sắc kí khí sản phẩm phản ứng thủy phân đƣợc trình bày hình 3.16 Thành phần axit béo dung dịch sau thủy phân đƣợc trình bày bảng 3.1 79 Bảng 3.1 Thành phần axit béo có sản phẩm phản ứng thủy phân Thời gian % diện Tên sản phẩm Kí hiệu 0.73 Tetradecanoic acid (C14:0) C14:0 9.82 32.33 Hexadecanoic acid (C16:0) C16:0 10.71 3.89 Octadecanoic acid (C18:0) C18:0 10.93 41.26 Cis-9-Octadecenoic acid (C18:1) C18:1 11.3 19.92 11.6 0.21 11.75 0.46 11.8 1.19 STT lƣu tích 8.99 Cis-9,12-Octadecadienoic acid (C18:2) 6,9,12-Octadecatrienoic acid (C18:3) Eicosanoic acid (C20:0) Cis-9,12,15-Octadecatrienoic acid (C18:3) C18:2 C18:3 C20:0 C18:3 Từ kết bảng 3.1 cho thấy phƣơng pháp GC-MS xác định đƣợc loại axit béo có hỗn hợp sau thủy phân dầu thực vật từ enzyme lipase cố định hạt nano từ tính Hai axit béo chủ yếu đƣợc thủy phân axitcis-9-Octadecenoic (41.26 %) axit Hexadecanoic (32.33%) 80 Hình 3.16 Phổ GC-MS dịch chiết n-hexan hỗn hợp sau thủy phân chất béo 81 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Sau tìm hiểu tài liệu tiến hành thực nghiệm đạt đƣợc kết sau: Thứ nhất, tổng hợp thành công Fe3O4NPs phƣơng pháp đồng kết tủa từ hỗn hợp muối FeCl2 FeCl3, với dung dịch amoniac chất tạo kết tủa Tiến hành phân tích đặc trƣng sản phẩm Fe3O4NPs xác định: - Sản phẩm tạo thành có cấu trúc mạng tinh thể Fe3O4 - Hạt Fe3O4NPs từ có kích thƣớc tƣơng đối đồng đƣờng kính hạt khoảng 12 – 18 nm - Sản phẩm Fe3O4NPs có tính siêu thuận từ với độ từ bão hòa 47,92 emu/g lực kháng từ gần Hạt nano oxit sắt từ đƣợc tổng hợp mang đầy đủ tính chất đặc trƣng thuận lợi cho ƣớc tiến hành thực nghiệm đề tài Thứ hai, xây dựng đƣợc quy trình phủ chitosan lên bề mặt hạt nano Fe3O4 với mục tiêu tạo lớp màng bao bọc để bảo vệ cấu trúc lõi Fe3O4, nhƣ tạo giá thể để cố định enzyme Sản phẩm Fe3O4NPs – CS thu đƣợc có thay đổi hình thái bề mặt tăng lên kích thƣớc nhƣng khơng đáng kể kích thƣớc nằm khoảng 13 – 22nm độ từ bão hòa giảm xuống 41,77 emu/g bao phủ phân tử chitosan nhƣng không phá vỡ cấu trúc mạng tinh thể Fe3O4 nhƣ đặc trƣng tính siêu thuận từ đặc trƣng vật liệu Fe3O4NPs Thứ ba, xây dựng đƣợc quy trình cố định đƣợc enzyme lipase lên bề mặt chất mang (Fe3O4-chitosan) Lợi dụng đặc điểm chung phân tử chitosan bề mặt Fe3O4 enzyme lipase có mặt nhóm amin (NH2), glutaraldehyde đƣợc chọn để tạo cầu nối enzyme lipase chất mang thơng qua việc hình thành liên kết C=N tƣơng tác nhóm 82 amin (-NH2) nhóm cacbonyl (-CHO) Việc cố định enzyme lipase phƣơng pháp hóa học thơng qua liên kết cộng hóa trị giúp cho enzyme gắn bền chặt chất mang mà không làm thay đổi đặc tính vốn quý Fe3O4NPs Lipase cố định chất mang thể độ ổn định cao, bền, khó bị biến tính Thứ tƣ thực thành công phản ứng thủy phân lipit dầu thực vật xúc tác hệ enzyme nano từ tính Fe3O4NPs – CS – lipase Sản phẩm phản ứng đƣợc thể sắc ký đồ KIẾN NGHỊ Dựa vào quy trình tổng hợp enzyme cố định lipase làm tiền đề tổng hợp enzyme cố định khác có tính ứng dụng cao nhƣ: glucose oxidase protease … Tiếp tục nghiên cứu điều kiện tối ƣu tổng hợp Fe3O4NPs-CS-Lipase Nghiên cứu quy trình tái thu hồi enzyme cố định hiệu suất hoạt tính cao Ứng dụng sản phẩm enzyme cố định vào nhiều lĩnh vực nhƣ: Cảm biến sinh học dƣợc phẩm, chụp cộng hƣởng từ (MRI) … TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Lê Thị Hồng Diễm (2009), Chế tạo hạt nano Fe3O4 khảo sát số tính chất đặc trưng Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh [2] Trần Thị Dung (2007), Chế tạo nghiên cứu tính chất từ hạt nano Fe3O4 ứng dụng y sinh, tạp chí khoa học ĐHQGHN Khoa học tự nhiên công nghệ [3] Nguyễn Bảo Dƣ (2011) Công nghệ cố định enzyme ứng dụng, Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh [4] TS Nguyễn Hồng Hải, Ứng dụng hạt nano từ tính oxit sắt Đại học Khoa học tự nhiên Hà Nội Tiếng Anh [5] Batlle,X.;Labarta (2002),A.J Phys.D:Appl Phys [6] Chen YZ, Ching CB, Xu R (2009), Lipase immobilization on modified zirconia nanoparticles: Studies on the effects on modifiers, Precess Biochem [7] Corr,S.A.; Gunko,Y.K.; Douvalis,A.P.; Venkatesan,M.; Gunning, R.D (2004),J.Mater Chem [8] Couto,G.G.;Klein,J.J.;Schreiner,W.H.;Mosca,D.H.;deOliveira,A.J A.;Zarbin,A.J.G (2007.),.J ColloidInterface Sci [9] Denizot,B.; Tanguy,G.; Hindre,F.; Rump,E.; Jacques Le Jeune, Jallet (1999),J.Colloid Interface Sci, 209, 66 [10] Duguet E et al (2006), Magnetic nanoparticles and their applications in medicine Nanomedicine [11] Fang C, Zhang MQ (2009), Multifunctional magnetic nanoparticles for medical imaging applications, J Mater Chem [12] Gupta,A.K.;Gupta (2005), Biomaterials, 26,3995 [13] Kim,D.;Zhang,Y.;Voit,W.;Rao,K.;Muhammed (2005),M.J.Magn.Magn Mater.225, 30 [14] Kruis, F E.; Fissan,H.; Peled (1998), A.Journal of Aerosol Science,29,511 [15] Laurent,S.;Forge,D.;Port, M.;Roch,A.;Robic,C.;VanderElst,L.;Muller (2008),R Chem Rev [16] Lim,J.K.;Tilton,R.D.;Eggeman,A.;Majetich (2007),S.A J.Magn.Magn Mater [17] Liu, Y.; Jia, S.; Wu, Q.; Ran, J.; Zhang (2011), Studies of Fe3O4chitosan nanoparticles prepared by co-precipitation under the magnetic field for lipase immobilization,Catal Comm [18] Lu,A.; Salabas, E.;Schuth (2007),F.Angew.Chem Int Ed [19] Lu,Y.; Yin,Y.; Mayers,B T.; Xia (2002), Y.NanoLett [20] Mateo, C.; Palomo, J.M.; Fernandez-Lorente, G.; Guisan, J.M.; Fernandez-Lafuente (2007) ―R.Improvement of enzyme activity, sta ility and selectivity via immo ilization techniques‖, Enzyme Microb Technol, 40, pp.1451–1463 [21] Molday R S and MacKenzie (2010) ― Immunospecific ferromagnetic iron–dextran reagents for the labeling and magnetic separation of cells‖ J Immunol Methods, 52, pp.353–67 [22] Nidumolu,B.G.; Urbina,M.C.; Hormes,J.; Kumar,C.S.;Monroe (2006), ― W.T.Functionalizationof Gold and Glass Surfaces with MagneticNanoparticlesUsingBiomolecularInteractions‖ Biotechnol.Prog, 22, pp.91–95 [23] Neuberger,T.; Schöpf,B.; Hofmann,H.; Hofmann,M.; VonRechenberg (2005), B.J.Magn Magn.Mater [24] Nomenclature Committee, Classification and Nomenclature of Enzymes by the Reactions they Catalyse, International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB) [25] Ozturk, N.; Akgol, S.; Arısoy, M.; Denizli (2007), ―A Reversible adsorptionof lipase on novel hydropho ic nanospheres‖ Sep Purif Technol, 58, pp 83–90 [26] Petkar M Lali A Caimi P Daminati M (2006) ―Immo ilization of lipase for nonaqueous synthesis‖ J Mol Catal B Enzym, 39, pp 8390 [27] Rossi, L.; Quach, A.; Rosenzweig (2004), ―Glucose oxidase–magnetite nanoparticle bioconjugate for glucosesensing‖ Anal Bioanal Chem 380, pp 606-613 [28] Shen,L.; Laibinis, P.E.; Hatton (1999),T.A.Langmuir [29] Wong D.W.S (1995), Food Enzyme: Structure and Mechamism, Chapman & Hall,New York [30] Wu Y, Wang YJ, Lou GS, Dai YY (2009), ―In situ preparation of magnetic Fe3O4-chitosan nanoparticles for lipase immobilization by cross-linking and oxidation in aqueous solution”, Bioresource Technol, 100, pp 3459-3464 [31] Xue,W.; Qiu,H.; Fang, K.;Li, J.; Zhao,J.; Li (2006), M.Synth.Met ... đề tài ? ?Nghiên cứu cố định enzyme lipase nano từ tính ứng dụng phản ứng chuyển hố lipit? ?? Mục đích nghiên cứu Mục tiêu tổng thể đề tài chế tạo hệ xúc tác nano enzyme từ tính có độ hoạt tính cao,... vi nghiên cứu 3.1 Đối tƣợng nghiên cứu - Nano từ tính sở oxit sắt từ đƣợc tổng hợp từ muối sắt II, III - Enzyme lipase 3 - Dầu thực vật cho phản ứng chuyển hóa lipit 3.2 Phạm vi nghiên cứu - Nghiên. .. GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG VÕ THỊ THÙY TRANG NGHIÊN CỨU CỐ ĐỊNH ENZYME LIPASE TRÊN NANO TỪ TÍNH ỨNG DỤNG TRONG PHẢN ỨNG CHUYỂN HĨA LIPIT Chun ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 14 LUẬN VĂN