Xây dựng quy trình định lượng (s) amlodipin bằng phương pháp hplc pha đảo sử dụng pha động có chứa tác nhân đối quang

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - TRẦN MỸ THIÊN THANH XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG (S)-AMLODIPIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC PHA ĐẢO SỬ DỤNG PHA ĐỘNG CÓ CHỨA TÁC NHÂN ĐỐI QUANG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - TRẦN MỸ THIÊN THANH XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG (S)-AMLODIPIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC PHA ĐẢO SỬ DỤNG PHA ĐỘNG CÓ CHỨA TÁC NHÂN ĐỐI QUANG Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất Mã số: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS LÊ THỊ THU CÚC TS PHAN VĂN HỒ NAM Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan dây công trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Người cam đoan Trần Mỹ Thiên Thanh Luận văn Thạc sĩ – Khóa 2016 – 2018 Ngành: Kiểm nghiệm thuốc độc chất – Mã số: 8720210 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG (S)-AMLODIPIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC PHA ĐẢO SỬ DỤNG PHA ĐỘNG CÓ CHỨA TÁC NHÂN ĐỐI QUANG Trần Mỹ Thiên Thanh Hướng dẫn khoa học: TS Lê Thị Thu Cúc, TS Phan Văn Hồ Nam Từ khóa: HPLC, amlodipin, phân tách đồng phên, đồng phân quang học Mở đầu Amlodipin hệ thứ ba thuốc ức chế kênh cacli thuộc nhóm dihydropyridin có khả chặn kênh cacli sử dụng điều trị bệnh cao huyết áp chứng đau thắt ngực Amlodipin có hai đồng phân đối quang (S)-amlodipin (R)-amlodipin Tuy nhiên, có dạng (S) có hoạt tính sinh học, cịn dạng (R) có nhiều tác dụng phụ Phần lớn chế phẩm thị trường dạng racemic amlodipin Tuy nhiên, để cải thiện tính an toàn hiệu quả, amlodipin sản xuất dạng đồng phân (S)-amlodipin đưa thị trường vài năm trước Trong nghiên cứu này, giới thiệu kết phân tích đồng phân quang học (S)-amlodipin phương pháp HPLC pha đảo sử dụng pha động có chứa tác nhân đối quang Đối tượng phương pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: hoạt chất amlodipin (S)-amlodipin Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát số điều kiện quan trọng ảnh hưởng trình tách (thành phần tỉ lệ pha động) nhằm chọn điều kiện phân tích đáp ứng thơng số: hai pic đồng phân phải tách hoàn toàn với độ phân giải Rs >1,5; hệ số bất đối As nằm khoảng 0,8-1,5 Sau tìm điều kiện thích hợp, tiến hành thẩm định quy trình phân tích bao gồm: khảo sát tính phù hợp hệ thống, tính đặc hiệu, tính tuyến tính, giới hạn phát hiện, độ xác độ Quy trình phân tích sau thẩm định áp dụng để định lượng hoạt chất (S)-amlodipin xác định tạp (R)-amlodipin số chế phẩm chứa (S)-amlodipin thị trường Kết Để xác định điều kiện sắc ký thích hợp để phân tích đồng phân quang học amlodipine sau: sử dụng cột C18 Germini NX Pha động hỗn hợp methanol – dung dịch đệm NaH2PO4 mM có chứa 17,5 mM SBE-β-CD 0,3 mM PEG, pH 2,5 (25: 75, tt/tt) Tốc độ dòng ml/ phút, nhiệt độ 30 oC, thể tích tiêm mẫu 10 µl, bước sóng phát 237 nm Độ phân giải đồng phân lớn 1,5 Giới hạn định lượng 250 - 750 µg.mL-1 Độ lệch chuẩn tương đối 2% (n = 6), độ phục hồi 98 -102%, phương pháp phù hợp kiểm tra chất lượng Kết luận Đã xây dựng quy trình phân tách đồng phân quang học amlodipin phương HPLC sử dụng pha động có chứa tác nhân đối quang Quy trình có tính chọn lọc, giới hạn phát thấp, cho kết xác độ lặp cao Quy trình áp dụng để định lượng (S)-amlodipin, xác định tạp đồng phân (S)-amlodipin số chế phẩm chứa (S)-amlodipin Master’s Thesis – Academic course: 2016 – 2018 Specialty: Drug Quality Control & Toxicology – Code: 8720210 CHIRAL SEPARATION OF (S)-AMLODIPINE ENANTIONMER BY RP-HPLC USING CHIRAL MOBILE PHASE ADDITIVE Tran My Thien Thanh Supervisor: Assoc Dr Le Thi Thu Cuc; Dr Phan Van Ho Nam Keywords: HPLC, amlodipine, chiral separation, enantiomers Introduction Amlodipine, a third generation dihydropyridine calcium antagonist that is in a group of drugs called calcium channel blockers It is used to lower blood pressure - to treat high blood pressure (hypertension) - or to prevent chest pain (angina) Amlodipine has two enantiomers called (S)-amlodipine and (R)-amlodipine Only (S)-amlodipine is biologically active, while the R) -amlodipine has many side effects Most of the products on the market are racemic amlodipine However, to improve safety and effectiveness, amlodipine is produced in the form of isomer (S)-amlodipine and was marketed several years ago In this study, we present the results of optical (S)-amlodipine analysis by reverse-phase HPLC using a mobile phase containing the chiral separation agent Material and methods This subject of this study was amlodipine and (S)-amlodipine The aim of the study was to investigate some important conditions affecting the separation process in order to select analytical conditions that suitable in some chromatographic the parameters Two isomers must be completely separated With the resolution of the enantiomers were more than 1.5; the asymmetry factor is between 0.8 and 1.5 After finding out the appropriate chromatographic conditions for separatation of amlodipine enantiomers, the method was validated is system suitability, selectivity, linearity and range, limit of detection, precision and accuracy Then, the validated method was applied for quantification of (S)amlodipin and determination of (S)-amlodipin’s enantionmeric impurity in some available (S)-amlodipin finhised products Results The appropriate chromatographic conditions for a HPLC method was developped for the chiral separation of amlodipine The two enantiomers were separated on a Germini NX C18 column The mobile phase was methanol - phosphate buffer (5 mmol.mL-1 NaH2PO4, pH 2.5; containing 17.5 mM sulfobutylether-β-cyclodextrin (SBE-β-CD) and 0.3 mM polyethylene glycol-20000 (PEG) (25: 75, v/v) and UV detection at 237 nm The resolution of the enantiomers were more than 1,5 The effective range of quantification for both enantiomers was 250 – 750 µg.mL-1 Relative standard deviation was below 2% (n=6), the recovery range was 98 -102% The method is suitable in quality control Conclusion The HPLC approach for quality control of (S)-amlodipine and its enantiomeric impurity was successfully developed using Germini NX C18 column The validated method was applied for quantification of (S)-amlodipine and determination of (S)-amlodipine’s enantiomeric impurity in some available S)-amlodipine drugs MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ……………… iv DANH MỤC CÁC BẢNG……………………………………………… vi DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ……………………… ix MỞ ĐẦU………………………………………………………………… CHƯƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU………………………… 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ AMLODIPIN…………………………………… 1.1.1 Tính chất vật lý 1.1.2 Tính chất hóa học………………………………………………… 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.1.4 Chỉ định 1.1.5 Tương tác thuốc 1.1.6 Định tính định lượng…………………………………………… 1.2 ĐẠI CƯƠNG VỀ ĐỒNG PHÂN ĐỐI QUANG…………………… 1.2.1 Khái niệm đồng phân đối quang………………………………… 1.2.2 Các phương pháp phân tích đồng phân đối quang………………… 1.2.3 Sắc ký lỏng hiệu cao phân tích đồng phân đối quang………… 1.2.4 Điện di mao quản phân tích đồng phân đối quang………………… 10 1.2.5 Một số phương pháp phân tích đồng phân đối quang khác………… 10 1.3 SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)……………………… 11 1.3.1 Khái niệm phương pháp HPLC………………………………… 11 1.3.2 Pha tĩnh sắc ký pha đảo ……………………………………… 11 1.3.3 Pha động sắc ký pha đảo……………………………… …… 12 1.4 PHA ĐỘNG ĐỐI QUANG (CHIRAL MOBILE PHASE) …… 14 1.4.1 Khái niệm………………………………………………………… 14 1.4.2 Các tác nhân quang hoạt …………………………………………… 15 1.5 MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG (S)-AML……………… 16 1.5.1 Một số đề tài nghiên cứu nước……………………………… 17 i 1.5.2 Một số đề tài nghiên cứu nước……………………………… 16 CHƯƠNG 2- ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU… 19 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU……………………………………… 19 2.1.1 Đối tượng………………………………………………………… 19 2.1.2 Hóa chất…………………………………………………………… 18 2.1.3 Trang thiết bị, dụng cụ……………………………………………… 19 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………………………………… 21 2.2.1 Xây dựng quy trình định lượng (S)-amlodipin ……………………… 21 2.2.2 Thẩm định quy trình phân tích …………………………………… 23 2.3 ỨNG DỤNG QUY TRÌNH ĐỂ ĐỊNH LƯỢNG MỘT VÀI CHẾ PHẨM (S)-AML TRÊN THỊ TRƯỜNG………………………………… 25 2.3.1 Định lượng (S)- amlodipin………………………………………… 25 2.3.2 Xác định tạp đồng phân (R)-amlodipin 26 CHƯƠNG – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 27 3.1 XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC (S)-AMLODIPN BẰNG HPLC SỬ DỤNG PHA ĐỘNG CÓ CHỨA TÁC NHÂN ĐỐI QUANG 27 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 27 3.1.2 Thẩm định quy trình phân tích (S)-amlodipin HPLC sử dụng 40 pha động có chứa tác nhân đối quang 3.1.3 Dự thảo quy trình phân tích đồng phần quang học (S)-amlodipin phương pháp HPLC sử dụng pha động có chứa tác nhân đối quang 50 3.1.4 Úng dụng quy trình để định lượng vài chế phẩm (S)-amlodipin 52 trên thị trường………………………………………………………… 3.2 XÂY DỰNG QUY TRÌNH PHÂN TÁCH ĐỒNG PHÂN QUANG HỌC AMLODIPN BẰNG HPLC SỬ DỤNG CỘT CELLULOSE- 53 3.1.1 Khảo sát điều kiện sắc ký 53 3.1.2 Thẩm định quy trình phân tích (S)-amlodipin HPLC sử dụng cột cellulose-4 57 i 3.2.3 Dự thảo quy trình phân tích đồng phân quang học (S) amlodipin phương pháp HPLC sử dụng cột cellulose-4.……………………… 68 3.2.4 Úng dụng quy trình để định lượng vài chế phẩm (S)-amlodipin 70 trên thị trường………………………………………………………… CHƯƠNG – BÀN LUẬN………………………………………… 72 CHƯƠNG –KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ 76 5.1 Kết luận 76 5.2 Kiên nghị 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 PHỤ LỤC 82 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tên tiếng Anh Tên Tiếng Việt (R )-AML (R)-amlodipin (R)-amlodipin (S)-AML (S)-amlodipin (S)-amlodipin ACN Acetonitril AML Amlodippin BDS Base deactivated Silanol CE Capillary electrophoresis CM-β-CD Carboxymethyl- beta-cyclodextrin CSPs Chiral stationary phases Từ viết tắt Amlodippin Điện di mao quản Pha tĩnh bất đối Đối chiếu ĐC DE Dextrose DHP Dihydropyridin EMEA European Medicines Evaluation Agency FDA Food and Drug Administration HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu Dihydropyridin cao HP-β-CD Hydroxyl propyl - beta- cyclodextrin HS-α-CD Highly sulfated-alpha-cyclodextin IR Infrared Hồng ngoại LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng MeOH Methanol MIP- Molecularly Imprinted Polymer- column colum MS Mass spectrometry Khối phổ NSAID Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs PEG Polyethylene glycol RP-HPLC Revesed phase -high performance liquid Sắc kí lỏng hiệu chromatography cao pha đảo SBE-β-CD Sulfobutylether- beta- cyclodextrin Sắc ký đồ SKĐ TEA Triethylamin TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử UV Ultra violet α-CD Alpha-cyclodextrin β-CD Beta-cyclodextrin Tử ngoại ... ? ?Xây dựng quy trình định lượng (S)- amlodipin phương pháp HPLC pha đảo sử dụng pha động có chứa tác nhân đối quang? ?? thực với mục tiêu sau: - Khảo sát pha động có chứa tác nhân đối quang tách (S)- amlodipin. .. tích (S)- amlodipin HPLC sử dụng 40 pha động có chứa tác nhân đối quang 3.1.3 Dự thảo quy trình phân tích đồng phần quang học (S)- amlodipin phương pháp HPLC sử dụng pha động có chứa tác nhân. .. tách (S)- amlodipin phương pháp HPLC - Thẩm định phương pháp định lượng (S)- amlodipin HPLC sử dụng pha động có chứa tác nhân đối quang - Ứng dụng quy trình để định lượng vài chế phẩm (S)- amlodipin