Luận văn tốt nghiệp phân lập chất trong cao cloroform của rau má lá sen hydrocotyle bonariensis l thu hái ở mỹ tho

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC  LÊ HỜNG SEN PHÂN LẬP CHẤT TRONG CAO CLOROFORM CỦA RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS L THU HÁI Ở MỸ THO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: HÓA HỌC CẦN THƠ - 2011 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MƠN HĨA HỌC  ḶN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC PHÂN LẬP CHẤT TRONG CAO CLOROFORM CỦA RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS L THU HÁI Ở MỸ THO Hướng dẫn khoa học: ThS Tôn Nƣ̃ Liên Hƣơng Sinh viên thực hiện: Lê Hồ ng Sen - 2077094 Chuyên ngành: HÓA HỌC – K33 CẦN THƠ - 2011 LỜI CẢM ƠN - Kính dâng cha mẹ suốt đời tận tụy khơng quản khó khăn chăm lo cho tƣơng lai chúng Chân thành cảm ơn sâu sắc cô Tôn Nữ Liên Hƣơng, ngƣời tận tình hƣớng dẫn, gợi ý cho lời khuyên bổ ích việc nghiên cứu hoàn thành luận văn Chân thành cảm ơn tồn thể q thầy khoa Khoa học Tự nhiên, trƣờng Đại học Cần Thơ dìu dắt truyền đạt kiến thức quý báu cho em suốt thời gian em theo học trƣờng Chân thành biết ơn cô Nguyễn Thị Ánh Hồng cô Lê Thị Bạch cố vấn lớp Hóa Học K33 quan tâm, giúp đỡ em suốt khóa học Thân thƣơng gởi bạn sinh viên Hóa Học K33, ngƣời chia sẻ niềm vui, nỗi buồn động viên, giúp đỡ thời gian học tập nhƣ làm đề tài Trƣờng Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập – Tự – Hạnh phúc Bộ Mơn Hóa Học NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN Cán hƣớng dẫn: Ths Tôn Nữ Liên Hƣơng Tên đề tài: “Phân lập chất cao Cloroform rau má sen Hydrocotyle bonariensis L thu hái Mỹ Tho” Sinh viên thực hiện: Lê Hồng Sen MSSV: 2072094 Lớp Cử nhân Hóa học K33 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN: - Đánh giá nội dung thực đề tài: - Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày tháng….năm 2011 Cán hƣớng dẫn Ths Tôn Nữ Liên Hƣơng Trƣờng Đại Học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Độc lập – Tự – Hạnh phúc Bộ Mơn Hóa Học NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán phản biện: Tên đề tài: “Phân lập chất cao Cloroform rau má sen Hydrocotyle bonariensis L thu hái Mỹ Tho” Sinh viên thực hiện: Lê Hồng Sen MSSV: 2072094 Lớp Cử nhân Hóa học K33 Nội dung nhận xét: a Nhận xét hình thức LVTN: b Nhận xét nội dung LVTN: - Đánh giá nội dung thực đề tài: - Những vấn đề hạn chế: c Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm có): d Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày tháng….năm 2011 Cán phản biện Luận văn tốt nghiệp LỜI MỞ ĐẦU Ngày nay, việc dùng loại thuốc có nguồn gốc tự nhiên ngày đƣợc ƣa chuộng Do đó, phân lập hợp chất có hoạt tính sinh học từ thực vật đƣợc nhà khoa học quan tâm Việt Nam nƣớc nhiệt đới nên thực vật đa dạng Trong đó, rau má lồi có tiềm nhƣng chƣa đƣợc khai thác, sử dụng nhƣ loại rau quen thuộc gần gũi đời sống ngày Về mặt y học, rau má có khả chữa số bệnh: chống oxy hóa, chữa bệnh ngồi da, phịng chống ung thƣ….Tuy nhiên, với rau má sen Hydrocotyle bonariensis chƣa có tài liệu cơng bố thành phần hóa học nhƣ dƣợc tính Trong đề tài này, tiến hành sắc ký cao cloroform Hydrocotyle bonariensis, với mục đích vận dụng kiến thức học để tiến hành thực nghiệm tách chiết rau má sen; cụ thể cô lập hợp chất, tinh chế, khảo sát số vật lý, phân tích cấu trúc hợp chất cô lập đƣợc SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang i Luận văn tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC NHỮNG TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC v DANH MỤC CÁC HÌNH vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT 1.1 KHÁI QUÁT VỀ CHI HYDROCOTYLE 1.2 GIỚI THIỆU VỀ RAU MÁ LÁ SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS 1.2.1 Danh pháp phân loại 1.2.2 Đặc điểm thực vật 1.2.3 Nguồn gốc phân bố 1.3 NHỮNG NGHIÊN CỨU HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC 1.3.1 Những nghiên cứu hóa học 1.3.2 Hoạt tính CHƢƠNG 2: TÌM HIỂU VỀ NHĨM HỢP CHẤT TRITERPENOID 2.1 KHÁI QUÁT VỀ TERPENOID 2.2 KHÁI QUÁT VỀ TRITERPENOID 2.2.1 Triterpenoid khơng vịng 2.2.2 Triterpenoid vòng 2.2.3 Triterpen vòng 2.3 Hoạt tính sinh học lupeol 10 CHƢƠNG 3: CƠ SỞ LÝ THUYẾT MỘT SỐ PHƢƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 12 3.1 PHƢƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT HỢP CHẤT HỮU CƠ RA KHỎI CÂY 12 3.1.1 Các kỹ thuật tách chiết hợp chất khỏi 12 3.1.2 Dung môi 17 3.2 MỘT SỐ KỸ THUẬT SẮC KÝ 18 3.2.1 Sắc ký cột (Column Chromatography) 18 3.2.2 Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography, TLC) 22 CHƢƠNG 4: PHƢƠNG PHÁP – PHƢƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 25 4.1 PHƢƠNG PHÁP 25 4.1.1 Nguyên liệu 25 4.1.2 Phƣơng pháp chiết tách 25 SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang ii Luận văn tốt nghiệp 4.1.3 Phƣơng pháp phân lập tinh chế 26 4.1.4 Phƣơng pháp xác định cấu trúc 26 4.2 PHƢƠNG TIỆN 27 4.2.1 Dụng cụ 27 4.2.2 Hóa chất 27 4.2.3 Thời gian, địa điểm 27 CHƢƠNG 5: THỰC NGHIỆM 28 5.1 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 28 5.1.1 Nguyên liệu 28 5.1.2 Điều chế cao tổng 29 5.1.3 Điều chế cao có độ phân cực khác từ cao alcol tổng 29 5.2 CÔ LẬP CHẤT TỪ CAO C CỦA CÂY HYDROCOTYLE BONARIENSIS 32 5.2.1 Khảo sát cao C sắc ký cột 32 5.2.2 Khảo sát phân đoạn C2-2 34 5.2.3 Biện luận cấu trúc hóa học hợp chất HB-A1 35 CHƢƠNG 6: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 6.1 KẾT QUẢ 39 6.2 KIẾN NGHỊ 39 SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang iii Luận văn tốt nghiệp Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): Hợp chất HB-A1 có 49H (khơng tính H nhóm –OH, –COOH ) Các tín hiệu vùng từ trƣờng cao ppm): 4,68 4,56 2H tín hiệu proton olefin; 3,18 tín hiệu proton ─CH─OH (1H, dd, J1 = Hz J2 = 11,5 Hz); 2,37 tín hiệu proton alyl C=C–CH (1H, m, J1 = Hz, J2 = 11 Hz) Phổ 13C-NMR và phổ DEPT-NMR: Hợp chất HB-A1 có 30C, 6C tứ cấp (6 mũi biến không DEPT 135) Phổ DEPT 90: có nhóm –CH< (6 mũi dƣơng , khoảng δ 38,21 – 79,16 ppm) Phổ DEPT 135: Có nhóm –CH3 (7 mũi dƣơng khoảng δ 14,70 – 28,14 ppm không xuất phổ DEPT 90), 11 nhóm –CH2– (11 mũi âm khoảng δ 18,47-109,47 ppm) Từ tín hiệu 1H 13C DEPT, so sánh với phổ chuẩn lupeol thấy số liệu trùng khớp nên đề nghị cấu trúc hợp chất HB-A1 lupeol 30 H 29 21 20 19 12 25 11 H 17 14 10 HO 18 26 22 13 28 16 15 27 23 24 Lupeol SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 36 Luận văn tốt nghiệp Bảng 3: Số liệu từ phổ 1H-NMR và13C-NMR HB-A1 13 C-NMR Vị trí C Loại cacbon –CH2– 38,8 –CH2– 27,6 >CH– 79,1 >C< 39,0 >CH– 55,4 –CH2– 18,4 –CH2– 34,4 >C< 40,9 >CH– 50,6 10 >C< 37,3 11 –CH2– 21,0 12 –CH2– 25,3 13 >CH– 38,2 14 >C< 42,9 15 –CH2– 29,8 16 –CH2– 35,7 17 >C< 43,1 18 >CH– 48,4 19 >CH– 48,1 20 =C< 151,1 21 –CH2– 30,0 22 –CH2– 40,1 23 –CH3 28,1 24 –CH3 15,5 25 –CH3 16,2 26 –CH3 16,1 27 –CH3 14,7 28 –CH3 18,1 29 =CH2 109,4 30 –CH3 19,4 δ (ppm) SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 H-NMR δ (ppm) 3,18 (1H; dd; 5Hz; 11,5Hz) 2,37 (1H; m; 6Hz; 11Hz) 4,68 (1H; d; 2,5Hz) 4,56 (1H; dd; 1,0 Hz; 2,0 Hz) Trang 37 Luận văn tốt nghiệp Bảng 4: So sánh phổ chuẩn lupeol với HB-A1[9] 13 Vị trí C HB-A1 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 38,8 27,6 79,1 39,0 55,4 18,4 34,4 40,9 50,6 37,3 21,0 25,3 38,2 42,9 29,8 35,7 43,1 48,4 48,1 151,1 30,0 40,1 28,1 15,5 16,2 16,1 14,7 18,1 109,4 19,4 SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 C-NMR δ (ppm ) Lupeol 38,7 27,4 78,9 38,8 55,3 18,3 34,2 40,8 50,4 37,1 20,9 25,1 38,0 42,8 27,4 35,5 43,0 48,2 47,9 150,9 29,8 40,0 28,0 15,4 16,1 15,9 14,5 18,0 109,3 19,3 Trang 38 Luận văn tốt nghiệp CHƢƠNG 6: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 6.1 KẾT QUẢ Trong thời gian thực đề tài: “ Phân lập chất từ cao cloroform rau má sen Hyrocotyle bonariensis L thu hái Mỹ Tho”, thu đƣợc kết nhƣ sau: - Điều chế loại cao có độ phân cực khác từ cao alcol tổng (dung phƣơng pháp chiết rắn-lỏng) - Tiến hành khảo sát phân đoạn C2-2 - Cô lập đƣợc chất tinh khiết HB-A1 - Từ liệu phổ 1D NMR phổ chuẩn, đề nghị cấu trúc hợp chất HB-A1 lupeol - Lupeol theo tìm hiểu chúng tơi, hợp chất có tiềm điều trị ung thƣ, kháng viêm, kháng khuẩn[8] HO Lupeol 6.2 KIẾN NGHỊ Do thời gian thực đề tài có hạn, chúng lập xác định cấu trúc chất nhƣng chƣa thử hoạt tính sinh học Trong cao cloroform nhiều phân đoạn chƣa khảo sát, đề nghị nhƣ sau: - Tiếp tục khảo sát cao cloroform Hydrocotyle bonaniensis - Thử hoạt sinh học chất cô lập đƣợc SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 39 Luận văn tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chƣơng, Nguyễn Thƣợng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mau, Phạm Kim Mãn, Nguyễn Tập, Đoàn Thị Nhu, Trần Toàn, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Namtập II, NXB Khoa học Kỹ thuật, 2004 [2] Đỗ Tất Lợi, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, 2009 [3] Nguyễn Kim Phi Phụng, Phổ NMR sử dụng phân tích hữu cơ, Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, 2005 [4] Nguyễn Kim Phi Phụng, Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh, 2007 [5] Tơn Nữ Liên Hƣơng, Khảo sát nhóm hợp chất có hoạt tính sinh học rau má sen, chi Hydrocotyle, họ apiaceae, vài tỉnh đồng sông Cửu Long, Đại học Cần thơ, 2010 [6] Tơn Nữ Liên Hƣơng, Bài giảng Hóa học hợp chất thiên nhiên, Khoa Khoa Học Tự Nhiên, 2008 [7] Tôn Nữ Liên Hƣơng, Tìm hiểu thành phần hóa học chi Hydrocotyle, Seminar tiến sĩ 1, Đại Học Khoa Học Tự Nhiên, 2007 [8] Margareth B C Gallo, Miranda J Sarchine, Biological Activities of Lupeol, Global Science Books, 2009 [9] Shashi B Mahato and Asish P Kundu, 13 C NMR Spectra of Pentacyclic Triterpenoid-A Compilation and some Salient Features, Elsevier Sience Ltd, 1994, 37, 1517-1575 [10] http://dongyvietnam.net/forum/f29/cay-nhat-nguyet-1320/ [11] http://www.cesti.gov.vn/kh-cn-trong-n-c/nghi-n-c-u-thanh-ph-n-hoa-h-c-r-cay- xuan-hoa.html [12] http://www.giaoduc.edu.vn/news/hoat-dong-713/tra-hoan-ngoc-7-nga-hoat- chat-lupeol-duoc-lieu-qui-tu-re-cay-hoan-ngoc-7-nam-tuoi-tay-ninh-147399.aspx [13] http://www.khuyennongvn.gov.vn/k-ban-co-biet/nhung-bai-thuoc-tu-rau- ma/view SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 40 Luận văn tốt nghiệp [14] http://suckhoedoisong.vn/20101022024656p0c60/thuoc-nam-chua-benh-trong- mua-bao-lu.htm [15] http://vietbao.vn/suc-khoe/rau-ma-cay-rau-vi-thuoc/65093100/526 SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 41 Luận văn tốt nghiệp PHẦN PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phổ 1H-NMR hợp chât HB-A1 SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 42 Luận văn tốt nghiệp SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 43 Luận văn tốt nghiệp SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 44 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 2: Phổ 13C-NMR hợp chất HB-A1 SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 45 Luận văn tốt nghiệp SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 46 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 3: Phổ DEPT-NMR hợp chất Hb-A1 SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 47 Luận văn tốt nghiệp SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 48 Luận văn tốt nghiệp SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 49 Luận văn tốt nghiệp SVTH: Lê Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 50 ...  L? ?N VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC PHÂN L? ??P CHẤT TRONG CAO CLOROFORM CỦA RAU MÁ L? ? SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS L THU HÁI Ở MỸ THO Hướng dẫn khoa học: ThS Tôn Nƣ̃ Liên Hƣơng Sinh viên thực hiện: L? ?... Trang Luận văn tốt nghiệp 1.2 GIỚI THIỆU VỀ RAU MÁ L? ? SEN HYDROCOTYLE BONARIENSIS[ 2, 7] Hình 1: Cây Hydrocotyle bonariensis L 1.2.1 Danh pháp phân loại Tên khoa học: Hydrocotyle bonariensis L Tên... khơ) Hình 7: L? ? và thân rau má sen Hydrocotyle bonariensis Hình 8: L? ? và thân cắt nhỏ rau má sen SVTH: L? ? Hồng Sen – MSSV: 2072094 Trang 28 Luận văn tốt nghiệp 5.1.2 Điều chế cao tổng Bột đƣợc