Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học và phân lập một số dịch chiết trong thân và rễ cây ngò ôm (limnophila chinensis)

TR Đ IăH CăĐÀăN NG NGăĐ IăăH CăS ăPH M - NGUY NăTH CHăTH O NGHIểNăC UăCHI TăTỄCH VÀ XỄCăĐ NHă THÀNHăPH NăHịAăH C VÀăPHÂNăL Pă M TăS ăD CHăCHI TăTRONG THÂNăVÀăR CÂY NGỊ ƠM LU NăVĔNăTH CăSĨă HịAăH C ĐƠăN ng ậ Nĕmă2019 TR Đ IăH CăĐÀăN NG NGăĐ IăăH CăS ăPH M - NGUY NăTH CHăTH O NGHIểNăC UăCHI TăTỄCH VÀ XỄCăĐ NHă THÀNHăPH NăHịAăH C VÀăPHÂNăL Pă M TăS ăD CHăCHI TăTRONG THÂNăVÀăR CÂY NGỊ ƠM ChunăngƠnh:ăHịAăH UăC Mƣăs :ă84 40 11 LU NăVĔNăTH CăSĨ HịAăH C Ng iăh ngăd năkhoaăh c: GS.TS ĐÀOăHỐNGăC NG ĐƠăN ngăậ Nĕmă2019 M CăL C M ăĐ U 1.M C ĐÍCH NGHIÊN C U Đ I T NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U PH NG PHÁP NGHIÊN C U 4.C U TRÚC C A KHịA LU N CH NGă1 T NGăQUAN 1.1 Gi i thiệu họ mƣ đề 1.2 Chi Limnonhila 1.2.1 Ngổ trơu (Enhydra fluctuansLour) 1.2.2 Ngị ơm (Limnophila aromatica) 1.3 Tổng quan cơy Ngị ơm 1.3.1 Khái quát cơy ngị ơm 1.3.2 Hình thái thực v t c a cơy Ngị ơm 1.3.3 Đặc điểm bột d c liệu 1.3.4 Phơn b , thu hái vƠ chế biến 1.4 ThƠnh phần hóa học cơy Ngị ơm 1.4.1 S l c h p ch t steroid 1.4.2 S l c h p ch t flavonoid 1.4.3 S l c h p ch t terpen 1.5 Các bƠi thu c kinh nghiệm sử d ng ngị ơm 11 1.6 Tình hình nghiên c u n c vƠ gi i cơy ngị ơm 12 1.6.1 Tình hình nghiên c u n c 12 1.6.2 Tình hình nghiên c u gi i 12 CH NGă2 NGUYểNăLI U VÀăPH NGăPHỄPăNGHIểNăC U 14 2.1 Nguyên liệu, hóa ch t vƠ d ng c 14 2.1.1 Nguyên liệu 14 2.1.2 Hóa ch t 14 2.1.3 D ng c 15 2.1.4 Các lo i máy móc, thiết b 15 2.2 Nghiên c u thực nghiệm 15 2.2.1 S đồ nghiên c u thực nghiệm 15 2.3 Chiết tách vƠ xác đ nh thƠnh phần hóa học d ch chiết cơy ngị ơm 16 2.3.1.Đo phổ GC-MS 16 2.3.2 Phơn l p vƠ xác đ nh công th c c u t o ch t s ch 16 2.3.3 Xác đ nh c u trúc c a h p ch t B1 20 CH NGă3 K TăQU ăVÀăTH OăLU N 21 3.1 Kết qu kh i l ng cao chiết 21 3.1.1 Kết qu kh i l ng cao chiết 21 3.1.2 Kết qu kh i l ng cao chiết chiết n i tiếp v i dung môi 21 3.2 ThƠnh phần đ nh danh h p ch t hữu c d ch chiết 24 3.2.1.ThƠnh phần hóa học d ch chiết n-hexane 24 3.2.2.ThƠnh phần hóa học d ch chiết diethyl ether 25 3.2.3.ThƠnh phần hóa học d ch chiết dichloromethane 26 3.2.4.ThƠnh phần hóa học d ch chiết cloroform 27 3.2.5.ThƠnh phần hóa học d ch chiết ethyl acetate 28 3.2.6.ThƠnh phần hóa học d ch chiết ethanol 29 3.2.7.ThƠnh phần hóa học d ch chiết buthanol 30 3.2.8.Nh n xét chung thƠnh phần hóa học đ c đ nh danh cơy ngị ơm 31 3.3 Phơn l p ch t s ch 34 3.4 Xác đ nh c u trúc c a ch t s ch B1 34 3.4.1 Phổ cộng h ng từ h t nhơn 1H ậ NMR c a B1 (TDH 70) 34 3.4.2 Phổ cộng h ng từ h t nhơn 13C - NMR c a h p ch t TDH 70 35 K TăLU NăVÀăKI NăNGH 38 TÀIăLI UăTHAMăKH O QUY TăĐ NHăGIAOăĐ TÀI LU NăVĔNă(B n sao) DANHăM CăCH ăVI TăT TăTRONGăLU NăVĔN  TLC  GclH4  CC  ESI-MS  NMR  1HNMR  13CNMR : Thin Layer Chromatography (sắc kí l p m ng) : Glucozo : Column Chromatography (sắc kí cột) : Electronspray ionization mass spectroscopy (Phổ kh i l ng ion hóa phun mù điện tử) : Nuclear Magnetic Resonance Spectrum (Phổ cộng h ng từ h t nhơn) : Proton Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng h ng từ proton) : Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance (Phổ cộng h ng từ Cacbon-13) DANHăM CăCỄCăB NG S ăhi uă b ng 1.1 2.1 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 3.6 3.7 3.8 3.9 3.10 Tênăb ng Trang Ho t tính sinh học c a c u tử rau Ngị ơm Danh m c hóa ch t Kh i l ng cao thu đ c sau cô quay d ch chiết Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết n-hexane từ cơy ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết điethyl ete từ cơy ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết dichloromethane từ cơy ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết cloroform từ cơy ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết ethyl acetate từ cơy ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết ethanol từ ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết buthanol từ ngị ơm Ho t tính c u tử đ nh danh đ c từ d ch chiết rau Ngị ơm S liệu cộng h ng từ h t nhơn 1H ậ NMR c a h p ch t TDH 70 11 15 21 24 25 27 28 29 30 31 31 35 37 - Các nguyên tử cacbon c a vòng C lƠ C5’ vƠ C6’ có độ d ch chuyển hố học  = 116,9 ppm,  = 120,8 ppm Phổ DEPT c a h p ch t TDH 70 - Phổ DEPT c a h p ch t TDH 70 có tín hiệu nhóm CH, khơng có tín hiệu nhóm CH2 ch ng t có nhóm CH, khơng có nhóm CH3, khơng có nhóm CH2 Theo [16] đƣ đ a b ng s liệu cộng h ng từ h t nhơn 13C ậ NMR (100 MHz, DMSO-d6) c a Quercetin (C15H10O7) b ng 4.4: B ngă4.4:ăS ăli uăc ngăh ngătừăh tănhơnă13C - NMRăc aăh păch tă TDHă70ăvƠăch tăđƣăcôngăb S cacbon 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 13CậNMR(:ppm) TDH 70 Ch t đƣ công b (dung môi CDCl3) (dung môi DMSO-d6) 147,4 146,8 136,2 135.7 176,2 175,6 161,3 160.6 99,7 98,2 165,6 165,8 94,6 93,5 158,3 156,2 103,6 103,0 122,8 122,0 116,4 115.2 146,5 145,0 148,4 147,5 116,9 115,5 120,9 120.1 Nhóm cacbon C C C=O C CH C CH C C C CH C C CH CH Từ s liệu phổ 1H ậ NMR 13C ậ NMR c a h p ch t TDH 70 so v i phổ đƣ đ c công bô xác đ nh c u t o c a h p ch t B lƠ: Quercetin (C15H10O7) có cơng th c c u t o lƠ: 5' 6' HO OH 4' C O 1' 10 OH 3' 2' A OH O Quercetin (C15H10O7) OH 38 K TăLU NăVÀăKI NăNGH  K t lu n Qua trình nghiên c u đề tƠi “Nghiên c u chiết tách, xác đ nh thƠnh phần hóa học s d ch chiết thơn vƠ rễ Ngị ơm (Limnophila aromatic)”, đƣ thu đ c kết qu nh sau: Bằng ph ng pháp GCậMS đƣ đ nh danh đ c 79 c u tử có d ch chiết ngị ôm Trong đó, có s c u tử chiếm thƠnh phần l n nh : Stigmasterol, β-Sitosterol, Campesterol, 2-methoxyl-4-vinylphenol, D- Limonene coumaran Một s c u tử chiếm thƠnh phần l n có nhiều ng d ng thực tế thuộc nhóm ch t chính: nhóm Phytosterol gồm có Stigmasterol, β-Sitosterol Campesterol, axit palmitic Bằng ph ng pháp phơn l p sắc kỦ cột đƣ tách đ c h p ch t B1 từ d ch chiết hexane v i kh i l ng 10mg Bằng cách phơn tích phổ cộng h ng từ h t nhơn vƠ hai chiều đƣ xác đ nh đ c c u trúc c a h p ch t B1 Quercetin (C15H10O7)  Ki năngh Do th i gian nghiên c u có h n, thông qua kết qu c a đề tài, mong mu n đề tƠi đ c phát triển rộng h n s v n đề nh sau: ậ Cây ngị ơm có ch a s ch t có ng d ng y học nh : β- Sitosterol, Campesterol v i hƠm l ng t ng đ i cao Vì v y, cần nghiên c u tách, lƠm giƠu c u tử nƠy ph ng pháp khác để đ t hiệu qu t t nh t nhằm đáp ng nhu cầu s ng ậ Nghiên c u ho t tính kháng khuẩn, kháng oxy hóa đ i v i s d ch chiết c a ngị ơm nhằm tăng giá tr sử d ng c a cơy d c liệu nƠy 39 TÀIăLI UăTHAMăKH O TƠiăli uăTi ngăVi t [1] BƠi gi ng d c liệu, t p (1998), Tr ng Đ i học d c Tp HCM vƠ Đ i học D c khoa HƠ Nội [2] Nguyễn Xuơn Dũng, ĐƠo Hữu Vinh vƠ cộng (1985), Các phương pháp sắc ký, NhƠ xu t b n khoa học kỹ thu t [3] Đỗ T t L i (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học Trung tâm liệu thực vật Việt Nam (2008), Phân biệt hình thái tác dụng dược Rau ngổ Rau om [4] Đỗ T t L i (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y học, HƠ Nội [5] Ph m Th Lan H ng (2007), Bài giảng môn vi sinh thực phẩm - Chương [6] T p chí “d c học” (1985,4.8-10) [7]Trang 569, Từ điển Cơy thu c Việt Nam (bộ m i), t p 2, NhƠ xu t b n Y học, 2012 TƠiăli uăn căngoƠi [8] Arunya Sribusarakum (năm 2004), Nuntavan Bunyapraphatsara et at; Ho t động ch ng oxy hóa c a ngị ơm Merr., Thái T p chí Phytopharmacy Vol^tr [9] Bui ML, Grayer RJ, Veitch NC, Kite GC, Tran H, NguyenK (2004),Uncommon 8oxygenated flavonoids from Limnophila aromática (Scrophulariaceae), Biochem Systemat Ecol [10] Biology and Pharmacy Bulletin (2007,p.4) [11] Chemistry & Biodiversity (2001,p.8) [12] Do OD, Angkawijaya AE, Tran-Nguyen PL, Huynh LH, Soetaredjo F E, Ismadji S, Ju YH (2014),Effect of extraction solvent on total phenol content, total flavonoids content, and antioxidant activity of Limnophila'womatic, Journal of Food and Drug Analysis [13] Inouye, H., Saito, S., Taguchi, H and Endo, T 1969 Zwei neue iridoidglucoside aus gardenia jasminoides: gardenosid und geniposid Tetrahedron Letters, 28, 2347-2350 [14] International Journal of Pharmacology (1991,p.29) [15] J Koyama, I Morita, K Tagahara, M Ogata, T Mukainaka, H Tokuda, H Nishino 2001 Inhibitory effects of anthraquinones and bianthraquinones on Epstein-Barr virus activation Cancer lett., 170, 15-18 [16] Jae Hyeok Lee, Chung Hwan Ku, Sung Hoon Kim, Hee Wook Park and Dae Keun Kim (2003) Phytocchemical constituents from Diodia teres” Arch Pham Res 27(1) pp 40-43 [17] Journal of Medicinal Food (2009,p.12) 40 [18] M Miyagoshi, S Amagaya, and Y Ogihara 1987 The structural transformation of gardenoside and its related iridoid compounds by acid and ậglucosidase Planta medica, 462-464 [19] Kapadia, G J., Shukla, Y N., Bose, A K., Fujiwara, H and Lloyd, H A 1979 Revised structure of paederoside, a novel monoterpene S- methyl thiocarbonate Tetrahedron Letters 22, 1937-1938 [20] Pakistan Journal of Biological Sciences (2012,p.15) [21] Sribusarakum A, Bunyapraphatsárà N,VajraguptaO,Watanabe H (2004), Antioxidant activity of Limnophila aromática Merr., Thai J Phytopharm [22] Thai Journal of Phytopharmacy (2014,p.11) ... học cơy Ngị ơm cịn ch a đầy đ , cơng trình nghiên c u loƠi cơy nƠy cịn Do v y, đề xu t chọn đề tƠi thực hiện: ? ?Nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học phân lập chất số dịch chiết thân. .. 3.2.3.ThƠnh phần hóa học d ch chiết dichloromethane 26 3.2.4.ThƠnh phần hóa học d ch chiết cloroform 27 3.2.5.ThƠnh phần hóa học d ch chiết ethyl acetate 28 3.2.6.ThƠnh phần hóa học d ch chiết. .. đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết ethyl acetate từ cơy ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết ethanol từ ngị ơm Kết qu đ nh danh thƠnh phần hóa học d ch chiết buthanol từ