Nghiên cứu sản xuất giống và trồng thử nghiệm nấm linh chi lim xanh (garnodema lucidum) trên môi trường nhân tạo tại thành phố đà nẵng

ỌC N N ỌC SƢ P M KHOA SINH KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Nghiên cứu sản xuất giống trồng thử nghiệm nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) môi trƣờng nhân tạo thành phố Nẵng Sinh viên thực : Nguyễn Thị Na Chuyên ngành : Cử nhân Sinh Môi Trƣờng Ngƣời hƣớng dẫn : TS ỗ Thu Nẵng, tháng 5/ 2013 LỜ CAM OAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Nguyễn Thị Na LỜ CẢM ƠN -  Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến cô giáo hướng dẫn TS Đỗ Thu Hà người vạch cho em ý tưởng, trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ em suốt q trình thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn Trường Đại Học Sư Phạm, khoa Sinh – Môi Trường, tổ sinh học thực nghiệm q thầy cơ, gia đình bạn bè động viên giúp đỡ em hoàn thành khóa luận Cuối em xin chúc quý thầy, cô dồi sức khỏe thành công nghiệp cao quý Một lần em xin chân thành cảm ơn! Tác giả Nguyễn Thị Na MỤC LỤC MỞ ẦU 1 TÍN CẤP T ẾT CỦA Ề T MỤC T ÊU N ÊN CỨU NỘ DUN ÊN CỨU Ý N N ĨA K OA C ƢƠN TỔN ỌC V T ỰC T ỄN CỦA Ề T QUAN T L ỆU 1.1 Khái quát nấm .4 1.1.1 ình thái học sợi nấm .5 1.1.2 ình thái học thể nấm 1.1.3 Biến dƣỡng nấm 1.1.4 Sự phát triển sợi nấm .7 1.1.5 Các giai đoạn phát triển sợi nấm [3],[13] .9 1.2 Nguyên liệu trồng nấm 10 1.3 iới thiệu nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) 12 1.3.1 ặc điểm hình thái nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) .12 1.3.2 Khả chữa bệnh nấm linh chi lim xanh 12 1.4 iới thiệu lim xanh Error! Bookmark not defined 1.4.1 Hình thái 13 1.4.2 Sinh thái 13 1.4.3 Phân bố 13 1.5 Quy trình nhân giống nấm[3] 14 1.6.Chu trình sống nấm Linh chi 15 1.7 Sơ lƣợc vị trí địa lý điều kiện tự nhiên huyện Tiên Phƣớc – tỉnh Quảng Nam 15 1.7.1 Vị trí địa lý, điều kiện tự nhiên: 15 1.7.2 Kinh tế - xã hội 15 C ƢƠN Ố TƢỢN 2.1 Ố TƢỢN 2.2 ỊA N V P ƢƠN P ÁP N ÊN CỨU 16 ÊN CỨU 16 ỂM V T Ờ AN N ÊN CỨU 16 2.2.1 ịa điểm thu mẫu thực địa 16 2.2.2 ịa điểm nghiên cứu thí nghiệm 16 2.2.3 Thời gian nghiên cứu 16 2.3 P ƢƠN P ÁP N ÊN CỨU 16 2.3.1 Phƣơng pháp phân lập giống từ thể nấm 16 2.3.2 Phƣơng pháp quan sát hệ sợi nấm 17 2.3.3 Phƣơng pháp quan sát bào tử nấm linh chi lim xanh(Garnodema lucidum) 17 2.3.4 Phƣơng pháp nhân giống cấp 17 2.3.5 Nghiên cứu sinh trƣởng sợi nấm môi trƣờng lỏng 18 2.3.6 Nghiên cứu đƣờng cong sinh trƣởng nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) 18 2.3.7 Phƣơng pháp nhân giống cấp 19 2.3.8 Phƣơng pháp nhân giống cấp 20 2.3.9 Phƣơng pháp trùng 20 2.3.10 Phƣơng pháp nuôi sợi bảo quản giống nấm .21 2.3.11 Phương pháp xử lý số liệu 22 C ƢƠN 3.1 ÌN KẾT QUẢ N T Á ÊN CỨU V B ỆN LUẬN 23 Ả P ẪU CỦA NẤM L N C L M XAN (GARNODEMA LUCIDUM) 23 3.1.1 ình thái thể nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) 23 3.1.2 ệ sợi nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) 24 3.1.3 Cấu trúc bào tử nấm linh chi lim xanh(Garnodema lucidum) 24 3.1.4 ịnh danh sơ nấm linh chi thu xã Tiên iệp-Tiên Phƣớc -Quảng Nam 25 3.2 P ÂN LẬP ỐN ỐN ỐC TỪ QUẢ T Ể NẤM V T O N UỒN CẤP TRÊN MÔ TRƢỜN N ÂN T O 25 3.2.1 Phân lập nguồn giống gốc từ thể nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) 25 3.2.2 Tạo nguồn giống cấp số môi trƣờng nhân tạo 26 3.3 NHÂN GIỐNG TRÊN MÔI TRƯỜNG CẤP II VÀ TRỒNG THỬ NGHIÊM 28 3.3.1 Nhân giống môi trƣờng cấp .28 3.3.2 Sinh trƣởng sợi nấm môi trƣờng PDA lỏng 31 3.3.3 ƣờng cong sinh trƣởng nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) .32 3.3.4 Nuôi sợi thành thể nấm môi trƣờng mạt cƣa 34 KẾT LUẬN V K ẾN N T Ị 40 L ỆU T AM K ẢO 41 P Ụ LỤC 43 DAN MỤC CÁC BẢN Số hiệu bảng Tên bảng Trang 1.1 Nồng độ số dạng muối khoáng cần cho nấm trồng 1.2 Hàm lượng chất có mùn cưa 10 1.3 Thành phần dinh dưỡng cám 11 2.1 Các môi trường nhân giống cấp I 17 2.2 Các môi trường nhân giống cấp II 19 3.1 Những tiêu chuẩn giống nấm gốc 25 3.2 Tốc độ sinh trưởng nấm linh chi lim xanh 26 (Ganoderma lucidum) môi trường thạch 3.3 Tốc độ lan hệ sợi nấm linh chi lim xanh 29 (Ganoderma lucidum) môi trường nhân giống theo thời gian 3.4 Khả tích lũy sinh khối hệ sợi nấm linh chi lim 31 xanh (Garnodema lucidum) môi trường lỏng PDA+10% dịch chiết cà rốt 3.5 Khối lượng sinh khối nấm linh chi lim xanh 33 (Ganoderma lucidum)thay đổi theo thời gian nuôi cấy môi trường lỏng PDA+10% dịch chiết cà rốt 3.6 Sự sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi lim xanh 36 (Ganoderma lucidum) môi trường mạt cưa cao su 3.7 Sự phát triển thể nấm linh chi lim xanh(Ganoderma lucidum) 38 DAN MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình Số trang hình 1.1 Quy trình nhân giống nấm 14 1.2 Chu trình phát triển nấm linh chi lim xanh 15 (Garnodema lucidum) 3.1 Hình thái thể nấm linh chi lim xanh (Garnodema 23 lucidum) 3.2 Hình thái sợi nấm linh chi lim xanh (Garnodema 24 lucidum) (vật kính x100) 3.3 Cấu trúc bào tử nấm linh chi lim xanh (Garnodema 24 lucidum)vật kính x100) 3.4 Hình ảnh hệ sợi nấm phân lập từ thể nấm linh 26 chi lim xanh (Ganoderma lucidum) 3.5 Ống giống nấm gốc 28 3.6 Ống giống nấm môi trường cấp I 28 3.7 Sự sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi lim xanh 30 (Garnodema lucidum)trên môi trường nhân giống 10 ngày 3.8 Sự sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi lim xanh 30 (Garnodema lucidum)trên môi trường nhân giống sau 10 ngày 3.9 Sinh khối sợi nấm linh chi lim xanh (Garnodema 32 lucidum) môi trường lỏng PDA+10% dịch chiết cà rốt sau 10 ngày 3.10 Phát triển hệ sợi nấm linh chi lim xanh (Garnodema 36 lucidum) từ môi trường cấp II sang giai đoạn 10 ngày nuôi 3.11 Phát triển hệ sợi nấm linh chi lim xanh(Garnodema 37 lucidum)từ 20 ngày sang giai đoạn 30 ngày ni 3.12 Mầm thể hình thành sau 45 ngày 37 3.13 Quả thể phát triển từ vết rạch 38 3.14 Giai đoạn phát triển thể nấm linh chi lim 39 xanh(Garnodema lucidum) 3.15 Quả thể thu sau tháng 39 3.16 Quả thể nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) 40 3.17 Kết thu sau đun sôi nấm linh chi lim xanh 41 (Garnodema lucidum) với tỏi 3.18 Kết thu sau chà hành lên mũ nấm linh 41 chi lim xanh (Garnodema lucidum) Biểu đồ 3.1 Sự sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi lim xanh 27 (Garnodema lucidum) môi trường nhân giống cấp I Biểu đồ 3.2 Tốc độ lan sâu hệ sợi nấm môi trường nhân 29 giống nấm linh chi lim xanh(Ganoderma lucidum) Biểu đồ 3.3 Khả tích lũy sinh khối hệ sợi môi trường 31 lỏng PDA+10% dịch chiết cà rốt Biểu đồ 3.4 Đường cong sinh trưởng nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) 33 MỞ ẦU TÍN CẤP T ẾT CỦA Ề T Cách hàng ngàn năm, nấm linh chi dùng để làm thuốc Các sách dược thảo nhiều triều đại Trung Quốc ghi nhận linh chi sử dụng làm thuốc từ lâu đời Sách “Thần nơng thảo” nói: “Linh chi thuốc kết tinh quý mây mưa núi cao, tinh ngũ hành ngày đêm mà khoe năm sắc nên giữ sức khoẻ cho bậc đế vương” Đến đời Minh (năm 1590) sách “Bản thảo cương mục” mô tả loại linh chi khái quát tác dụng trị liệu linh chi: linh chi có tính bình, khơng độc, có tác dụng làm tăng trí nhớ, dưỡng tim, bổ gan khí, an thần, chữa trị tức ngực Với hệ hơ hấp có tác dụng ích phổi, thơng mũi, chữa ho nghịch hơi, an thần, ích tỳ khí Nấm linh chi đời Minh coi loại thần dược: ăn nhiều lần thể nhẹ mà không già, sống lâu thần tiên Có nhiều loại nấm linh chi, song nấm linh chi mọc lim xanh đặc biệt có nhiều cơng dụng q Nấm linh chi lim xanh (tên khoa học Garnodema lucidum) dòng linh chi đặc hữu, mọc lim xanh rừng nguyên sinh vùng núi suối bùn xã Tiên Hiệp (Tiên Phước, Quảng Nam).Theo tạp chí y tế xuất Mỹ, nghiên cứu thực nghiệm lâm sàng, bác sĩ Kerry Martain cộng (2011) đạt hiệu khả quan sử dụng nấm lim xanh Tiên Phước làm thuốc chữa ung thư Và nhận thấy nấm lim chi lim xanh có dược tính cao vùng núi khác điều kiện địa lý khí hậu địa phương Kết thực nghiệm lâm sàng cho biết nấm linh chi lim xanh Tiên Phước giúp kiềm chế đáng kể tiến triển bệnh ung thư Đối với ung thư giai đoạn đầu, nấm linh chi lim xanh dùng để hỗ trợ, kết hợp với trình trị liệu Tây y việc chữa trị bệnh ung thư đa thể như: ung thư gan, ung thư phổi, ung thư vú, ung thư cổ tử cung vv… Đối với ung thư giai đoạn cuối, nấm linh chi lim xanh giúp ổn định nâng cao thể trạng bệnh nhân để kéo dài sống Bên cạnh đó, nấm lim chi linh xanh chữa chứng bệnh gan xơ gan, gan nhiễm mỡ, nhiễm độc gan rượu bia (ngộ độc ancol etylic trường diễn nhận số liệu Kết thu bảng sau: Bảng 3.5: Khối lượng sinh khối nấm linh chi lim xanh(Garnodema lucidum) thay đổi theo thời gian nuôi cấy môi trường lỏng PDA+10% dịch chiết cà rốt Thời gian (ngày) TN 12 15 18 21 ngày ngày ngày LẦN 0,102 0,141 0,301 0,388 0,473 0,481 0,502 LẦN 0,116 0,158 0,312 0,394 0,485 0,495 0,515 LẦN 0,139 0,16 0,314 0,406 0,503 0,518 0,531 0.119 0.153 0.309 0.396 0.487 0.498 0.516 12 (g/20ml) 0,9 0,8 Khối lượng sinh khối (g/20ml) TB 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 15 17 Đồ thị 3.4 Đường cong sinh trưởng nấm linh chi lim xanh( Ganoderma lucidum) 33 21 (ngày) Nhận xét Đường cong sinh trưởng yếu tố quan trọng q trình ni cấy sinh khối sợi nấm linh chi Dựa vào đồ thị ta biết xác khoảng thời gian sinh khối phát triển mạnh nhất, lúc sinh khối ổn định lúc sinh khối bắt đầu già Từ đường cong sinh trưởng nhận thấy.Trong ngày đầu, tơ nấm thích nghi với mơi trường, sinh khối tăng lên Sau thích nghi với mơi trường giai đoạn từ 6-12 ngày giai đoạn phát triển hệ sợi nấm, sinh khối phát triển nhanh.Từ ngày 12 đến ngày 15, sinh khối trạng thái cân không tăng nhanh Từ ngày 15 trở giai đoạn hệ sợi già cỗi nên sinh khối tăng chậm 3.3.4 Nuôi sợi thành thể nấm môi trƣờng mạt cƣa Linh chi loại phá gỗ nên việc tận dụng chất phế thải từ nông, lâm để trồng nấm dễ dàng có ích cho việc loại bỏ chất phế thải làm môi trường, bảo vệ sức khỏe người Trong mạt cưa nguồn ngun liệu có nguồn cacbon cao thích hợp cho việc trồng nấm Tuy nhiên, chất dinh dưỡng mạt cưa thấp Do để nâng cao hiệu suất nuôi trồng nấm rút ngắn thời gian ni trồng cần thiết phải trộn thêm nhiều chất bổ sung Sau xử lý xong, mùn cưa phối trộn với phụ gia bột nhẹ (CaCO3) 1,5% cám gạo cám bắp Sau tuyển chọn chai giống cấp II đạt tiêu chuẩn, tiến hành nhân giống sang môi trường cấp III, giá thể mạt cưa cao su nuôi sợi thành thể nấm Quá trình thực theo sơ đồ sau: 34 Chai giống cấp ạt chuẩn Mạt cƣa cao su gỗ tạp -Sàng bỏ dăm bào -Trộn nước vôi 0,25% 1-2 ngày -Ủ đống qua đêm -Thêm dinh dưỡng Cơ chất trồng nấm -Vào túi màng mỏng PP -Thanh trùng lần(cách ngày) 1210C 1giờ Cấy giống Bịch mạt cƣa khử trùng (môi trƣờng cấp ) -Nuôi ủ cho hệ sợi nấm 22-27 ngày đầy bịch Rạch bịch Bịch phơi(hệ sợi ăn kín bịch) -Tháo nút bơng, chuyển 30-45 ngày sang nhà lưới trì độ ẩm 85-95% -Nhiệt độ 26-350C -Ánh sáng tán xạ 700-800 lux Mầm thể nấm 45- 90 ngày Quả thể nấm 35 Quá trình phát triển thành thể nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum)chia làm giai đoạn: - Giai đoạn sinh trưởng hệ sợi - Giai đoạn phát triển thể 3.3.4.1 iai đoạn sinh trƣởng sợi nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) Để phát triển thành thể phải trải qua giai đoạn sinh trưởng hệ sợi bịch chất mùn cưa cao su Tốc độ sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi lim xanh(Ganoderma lucidum)sau trình theo dõi thể bảng sau: Bảng 3.6: Sự sinh trưởng hệ sợi nấm linh chi lim xanh(Ganoderma lucidum) môi trường mạt cưa cao su Thời gian (ngày) Tốc độ sinh trƣởng (%) 1-10 8-10 10-22 10-90 22- 27 100 Qua trình khảo sát nhận thấy pha ủ sợi kéo dài khoảng 22–27 ngày, hệ sợi bắt đầu bện kết, khoảng từ ngày 27 trở đi, hệ sợi bao phủ toàn bịch Tốc độ sinh trưởng hệ sợi môi trường mạt cưa không theo thời gian Từ 1-10 ngày tốc độ sinh trưởng chậm đạt 8-10%, đến giai đoạn 10-22 hệ sợi sinh trưởng mạnh gần ăn kín hết bịch tốc độ lan đạt gần 90% Về sau hệ sợi sinh trưởng chậm lại Hình 3.10: Phát triển hệ sợi nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum)từ môi trường cấp II sang giai đoạn 10 ngày ni 36 Hình 3.11: Phát triển hệ sợi nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum)từ 20 ngày sang giai đoạn 30 ngày nuôi 3.3.4.2 iai đoạn phát triển thể nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) Sau hệ sợi nấm phủ đầy bịch (giai đoạn sinh trưởng), chúng bắt đầu chuyển sang giai đoạn phát triển Trong giai đoạn mới, hệ sợi nấm đan vào bắt đầu kết mầm nấm Chúng nhận thấy, thời gian kết mầm môi trường mạt cưa vào khoảng40 – 45 ngày với đường kính mầm nấm khoảng 2-4cm Nhìn chung bịch mơi trường sau cấy giống vào xuất mầm thể Hình 3.12 Mầm thể hình thành sau 40 ngày Khi hệ sợi không bện kết đầu cổ bịch phôi, phải dùng dao tạo vết rạch đáy gốc bịch giúp cho mầm nấm xuất Vết rạch sâu miệng rạch hở thành bịch dẫn đến nhiễm mốc làm vị trí rạch bị khơ Trong q trình ni trồng, hầu hết mơi trường có tượng sợi nấm khơng bện kết đầu cổ bịch phơi Ngun nhân điều kiện ngoại cảnh chưa phù hợp cho sinh trưởng phát triển loài linh chi Như vậy, sau khoảng 37 – ngày tạo vết rạch bịch phôi xuất mầm nấm Kết hồn tồn tương đồng với quy trình trồng nấm linh chi khác thực Hình 3.13: Rạch chận bịch cho thể phát triển Tốc độ phát triển thể thay đổi theo thời gian, trình phát triển nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) xác định theo thay đổi đường kính độ dày thể Bảng 3.7: Sự phát triển thể nấm linh chi lim xanh(Ganoderma lucidum) Thời gian ƣờng kính thể(cm) ộ dày thể(cm) 20-40 2,5 0,9 40-70 6,2 1,5 70-90 8,7 2,3 Kết bảng 3.7 cho thấy, giai đoạn từ 20-70 ngày, tốc độ phát triển thể nấm linh chi lim xanh nhanh, đường kính thể đạt 6,2 cm độ dày thể đạt 0,5cm đến giai đoạn từ 70 – 90 ngày thay đổi khơng đáng kể, thể tăng đường kính, có thay đổi độ dày Màu sắc đậm dần theo thời gian Kết đường kính độ dày nấm linh chi lim xanh(Garnodema lucidum) trồng thử nghiệm so với loại nấm linh chi dược liệu thường dung làm thuốc khác 38 40 ngày 70 ngày 90 ngày Hình 3.14 Giai đoạn phát triển thể nấm Hình 3.15: Quả thể nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) thu sau tháng 39 KẾT LUẬN V K ẾN N Ị KẾT LUẬN Qua kết nghiên cứu rút số kết luận sau: Từ mẫu nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) tươi thu thập xã Tiên Hiệp huyện Tiên Phước tỉnh Quảng Nam, phân lập giống nấm gốc môi trường PDA phát triển tốt Nhân giống từ giống nấm gốc sang môi trường nhân giống cấp I Lựa chọn môi trường PDA +10% dịch chiết cà rốt môi trường nhân giống cấp I tốt nhất, nấm có hệ sợi phát triển nhanh mạnh với đường kính khuẩn lạc đạt 6,1 cm thời gian ngày Là môi trường giữ giống khởi đầu cho trình nhân giống Nhân giống từ giống cấp I đạt chuẩn sang môi trường nhân giống cấp II Đã lựa chọn MT2: thóc luộc +5 % cám bắp nấm có hệ sợi khỏe tốc độ hệ sợi lan nhanh môi trường nhân giống cấp II tốt Trên môi trường lỏng PDA +10% dịch chiết cà rốt hệ sợi nấm phát triển tốt, thu lượng sinh khối đạt 0,57 g 20 ngày Dựa vào đường cong sinh trưởng xác định thời điểm thu sinh khối tốt từ 12-15 ngày Đã nghiên cứu cấy truyền giống cấp II sang môi trường nhân giống cấp III nuôi sợi thành thể nấm giá thể mạt cưa cao su cho kết tốt Quả thể thu sau tháng với đường kính từ – 10 cm khơng có độc tố K ẾN N Ị Vì thời gian thực đề tài có hạn nên tơi chưa thể nghiên cứu đầy đủ nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) nên có số kiến nghị sau: Khảo sát sâu trồng trọt thành phần hóa học, tác dụng dược lý, lâm sàng Nhằm hồn thiện quy trình trồng ứng dụng ngành dược Khảo sát nhiệt độ, độ ẩm thích hợp sau hệ sợi lan đầy bịch để hoàn thiện quy trình ni trồng nấm linh chi lim xanh (Ganoderma lucidum) hóa giống phù hợp với điều kiện TP Đà Nẵng 40 T L ỆU T AM K ẢO *Tài liệu tiếng việt Nguyễn Lân Dũng, 2001 Công nghệ nuôi trồng nấm, tập Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống, 2003 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Hữu Đống Đinh Xuân Linh, 2000 Nấm ăn nấm dược liệu công dụng công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Hà nội Nguyễn Hữu Đống, Nguyễn Thị Sơn Zani Federico, 2002 Cơ sở khoa học công nghệ nuôi trồng Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Trần Hùng, 2004 Phương pháp nghiên cứu dược liệu Đại học Y Dược TP.HCM Nguyễn Đức Lượng, 2003 Vi sinh học công nghiệp, tập Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền Nuyễn Ánh Tuyết, 2003 Thí nghiệm cơng nghệ sinh học, tập 2, thí nghiệm vi sinh vật học Nhà xuất Đại học Quốc Gia TPHCM Trần Văn Mão, 2004 Nuôi trồng chế biến nấm ăn nấm làm thuốc chữa bệnh Nhà xuất Nông nghiệp, Hà nội Nguyễn Phước Nhuận, 2001 Giáo trình sinh hố học, phần Nhà xuất Đại học Quốc Gia TPHCM 10 Lê Xuân Thám, 1996 Nghiên cứu đặc điểm sinh học đặc điển hấp thu khoáng nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr).Karst Luận án phó tiến sỹ khoa học sinh học, Đại học Khoa Học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà nội, Việt nam 11 Lê Xuân Thám, 1996 Nấm Linh chi - dược liệu quí việt nam Nhà xuất mủi cà mau 12 Lê Xuân Thám, 2005 Nấm Linh chi vàng - nấm Hoàng chi Báo khoa học phổ thông, số 31 05 (1154) 13 Lê Duy Thắng, 2001 Kỹ thuật nuôi trồng nấm ăn, tập Nhà xuất Nông nghiệp 41 14 Arichi D.S and Hagashi D.T., 2003 Linh chi nguyên chất bệnh thời (Đoàn Sáng dịch) Nhà xuát Y học, Hà nội, Việt nam 15 Đỗ Thu Hà, Giáo trình trồng nấm trường ĐH Sư phạm Đà Nẵng 16 Đỗ Tất Lợi, Lê Duy Thắng, Trần Văn Luyến Nấm Linh chi – nuôi trồng sử dụng) Nhà xuất Nông nghiệp *Tài liệu tiếng anh 17 Yihuai Gao, Guoliang Chen, Jin Lan, He Gao and Shufeng Zhou, 2001 Extractoin of Ganoderma polysaccharides at relatively low temperature Froc Int Symposium Ganoderma Sci, Auckland 18 Yihuai Gao, Jin Lan and Zhifang Liu, Extraction and determination of Ganoderma polysaccharides Int Med Complement Med Vol 1, Supplement 1,0000 19 Steyaert R.L, 1972 Species of Ganoderma and related genera mainly of the boyor and leiden herbaria National de Beigique, Burxelle 20 Zhaoji – Ding, 1980 The Ganodermataceae in chine Berlin Shiffigart 21 Donk, MA, 1948, Ganodermataceae, Donk, Bull, Bot, Gdns, Buitenz, III, 1948, p.17-147 22 Ryvarden L.&I Johansen,1980, A preliminary polypore flora of East Africa Fungiflora – Oslo – Norway, p.63-97 23 Zhao J D, 1989, The Ganodermataceae in China J Cramer; Berlin – Stuttgart, 176 pp 42 P Ụ LỤC - Môi trường PDA (Potato glucose agar) Khoai tây: 200 (g) Glucose: 20 (g) Agar: 20 (g) Nước cất vừa đủ: 1000 (ml) - Môi trường PDA + 10% nước dừa già Khoai tây: 200 (g) Glucose: 20 (g) Agar: 20 (g) Nước dừa: 100 (ml) Nước cất vừa đủ: 1000 (ml) - Môi trường PDA + 10% dịch chiết cà rốt Khoai tây: 200 (g) Glucose: 20 (g) Agar: 20 (g) Cà rốt: 100 (ml) Nước cất vừa đủ: 1000 (ml) - Môi trường Czapek – Dox Saccharose: 30 (g) NaNO3: (g) KH2PO4: (g) MgSO4: 0,5 (g) KCl: 0,5 (g) FeSO4: 0,01 (g) Agar: 20 (g) Nước cất vừa đủ: 1000 (ml) Điều chỉnh môi trường pH = – 6,5 - Môi trường lỏng PDA + 10% dịch chiết cà rốt (Potato glucose) Khoai tây: 200 (g) Glucose: 20 (g) Cà rốt: 100 (ml) Nước cất vừa đủ: 1000 (ml) 43 P Ụ LỤC I Một số hình ảnh q trình thí nghiệm Ống nấm gốc mơi trường PDA Chai giống cấp II Bố trí thí nghiệm 44 45 46 47 ... ? ?Nghiên cứu sản xuất giống trồng thử nghiệm nấm linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) môi trƣờng nhân tạo thành phố Nẵng? ?? MỤC T ÊU N ÊN CỨU - Nghiên cứu sản xuất giống trồng thử nghiệm nấm linh. .. linh chi lim xanh (Garnodema lucidum) môi trường nhân tạo Thành phố Đà Nẵng NỘ DUN N ÊN CỨU - Phân lập giống từ thể nấm - Nghiên cứu lựa chọn môi trường giữ giống - Nghiên cứu lựa chọn môi trường. .. trưởng hệ sợi nấm linh chi lim xanh 27 (Garnodema lucidum) môi trường nhân giống cấp I Biểu đồ 3.2 Tốc độ lan sâu hệ sợi nấm môi trường nhân 29 giống nấm linh chi lim xanh( Ganoderma lucidum) Biểu