Nghiên cứu định danh thành phần hoá học trong dịch chiết cloroform và ethanol của cây lá cẩm

Ọ TRƢỜN N N I HỌ SƢ P M  TRẦN THỊ LỢI NGHIÊN CỨU ỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT CLOROFORM VÀ ETHANOL CỦA CÂY LÁ CẨM KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HOÁ HỌC N N , NĂM 2019 Ọ TRƢỜN N N I HỌ SƢ P M  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT CLOROFORM VÀ ETHANOL CỦA CÂY LÁ CẨM Sinh viên thực : Trần Thị Lợi Lớp : 15CHD1 Ngƣời hƣớng dẫn : S.TS N N , NĂM 2019 ùng ƣờng ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HOÁ  NHIỆM VỤ KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Trần Thị Lợi Lớp: 15CHD1 Tên đề tài: “Nghiên cứu định danh thành phần hoá học dịch chiết Cloroform ethanol Cẩm” Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị Nguyên liệu: Cây Cẩm thu mua chợ Thiết , Quận 11 thành phố Hồ Chí Minh  Hố chất: Etanol (Trung Quốc), clorofom (Trung Quốc);  Dụng cụ, thiết bị: Bộ chiết soxhlet loại 500ml, tủ sấy, lò nung, phễu buncher, cân phân tích số, bếp cách thuỷ, bếp điện, cốc, giấy lọc, nghiệm, đũa thuỷ tinh, ống đong, pipet, dụng cụ thí nghiệm khác Nội dung nghiên cứu  Nghiên cứu thời gian chiết tối ưu số dung môi Cẩm;  Định danh thành phần hoá học Cẩm qua dịch chiết: Ethanol, Cloroform;  Xác định công thức cấu tạo hợp chất Anthocynin Giảng viên hướng dẫn: GS.TS Đào Hùng Cường Ngày giao đề tài: 06/2018 Ngày hoàn thành đề tài: 12/2018 Chủ nhiệm Khoa Giảng viên hướng dẫn PGS.TS Lê Tự Hải GS.TS Đào Hùng Cường Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày tháng năm 2019 Kết đánh giá: Ngày tháng Năm 2019 CHỦ TỊCH HỘ ỒNG i LỜ AM OAN Em xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng em Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực Tác giả luận văn Trần Thị Lợi ii LỜI CẢM ƠN Sau sáu tháng thực đề tài, em học nhiều điều bổ ích tích luỹ thêm cho thân nhiều kiến thức thực tiễn quý báu lĩnh vực mà en nghiên cứu Do đó, trang đầu luận văn cho em phép em xin bày tỏ lịng biết ơn mình: Em xin chân thành cảm ơn GS.TS Đào Hùng Cường giao đề tài tận tình hướng dẫn, giúp đỡ cho em suốt thời gian nghiên cứu hoàn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô giáo môn thầy cơng tác phịng thí nghiệm khoa Hóa trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian nghiên cứu thực khóa luận vừa qua Em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè ln bên cạnh giúp đỡ, động viên sống học tập Bước đầu làm quen với nghiên cứu khoa học nên luận văn khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp, bổ sung thầy để em thu nhận thêm nhiều kiến thức kinh nghiệm cho thân sau Cuối cùng, em xin chúc quý thầy cô sức khỏe, hạnh phúc thành công sống nghiệp giảng dạy Em xin chân thành cảm ơn! Đà Nẵng, ngày tháng 04 năm 2019 Sinh viên iii MỤC LỤC LỜ AM OAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii MỞ ẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Bố cục đề tài Ý nghĩa đề tài ƢƠN TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Cẩm 1.2 Tổng quan chất màu thực phẩm 1.2.1 Tầm quan trọng việc sử dụng chất màu chế biến thực phẩm 1.2.2 Vai trò chất màu thực phẩm 1.2.3 Phân loại chất màu thực phẩm 1.3 Tổng quan hợp chất màu anthocyanin 1.3.1 Cấu trúc anthocyanin 1.3.2 Sự phân bố anthocyanin tự nhiên 1.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến độ bền màu anthocyanin 12 1.3.4 Hoạt tính sinh học anthocyanin 16 1.3.5 Ứng dụng anthocyanin chế biến thực phẩm 19 1.4 Tổng quan phương pháp chiết 21 1.4.1 Các khái niệm trình chiết 21 1.4.2 Các yếu tố ảnh hưởng tới trình chiết 22 1.4.3 Các phương pháp chiết 23 ƢƠN P ƢƠN P ÁP V Ố TƢỢNG NGHIÊN CỨU 25 2.1 Nguyên liệu, dụng cụ, hóa chất 25 2.1.1 Nguyên liệu 25 2.1.2 Hóa chất, dụng cụ thiết bị nghiên cứu 25 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 iv 2.2.1 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 25 2.2.2 Phương pháp phân tích định danh thành phần hóa học dịch chiết 26 2.3 Các nghiên cứu thực nghiệm 32 2.3.1 Sơ đồ thực nghiệm 32 2.3.3 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết từ Cẩm 35 ƢƠN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Kết xác định thông số vật lý 36 3.1.1 Độ ẩm mẫu nguyên liệu 36 3.1.2 Xác định hàm lượng tro 36 3.1.3 Xác định hàm lượng kim loại nặng 37 3.2 Kết nghiên cứu thu dịch chiết dung môi clorofom 37 3.2.1 Dịch chiết clorofom Cẩm 37 3.2.2 Định danh thành phần hóa học có dịch chiết clorofom Cẩm GC-MS 38 3.3 Kết nghiên cứu thu dịch chiết dung môi etanol 40 3.3.1 Dịch chiết etanol Cẩm 40 3.3.2 Định danh thành phần hóa học dịch chiết etanol từ Cẩm GC - MS 40 3.3.3 Định danh chất màu dịch chiết etanol Cẩm HPLC LC-MS 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 v DANH MỤC BẢNG Số hiệu Tên bảng Trang 1.1 Liều sử dụng cho phép chất màu hữu tổng hợp 1.2 Một số chất màu tự nhiên thông dụng 1.3 Cấu trúc số anthocyanin phổ biến rau 1.4 Hàm lượng anthocyanin số nguyên liệu 10 1.5 Các anthocyanin số nguyên liệu 11 3.1 Kết xác định độ ẩm mẫu nguyên liệu Cẩm 36 3.2 Kết xác định hàm lượng tro mẫu nguyên liệu Cẩm 36 3.3 Hàm lượng kim loại Cẩm 37 3.4 Ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng cao chiết thu 37 3.5 3.6 3.7 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết clroform Cẩm Ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng cao chiết thu Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết ethanol Cẩm 38 40 41 vi DANH MỤC HÌNH Số hiệu Tên hình Trang 1.1 Cấu trúc gốc aglycon anthocyanin 1.2 Một số anthocyanin dạng 3-glucoside 1.3 Một số nguyên liệu giàu anthocyanin 10 1.4 Ảnh hưởng pH đến cấu trúc anthocyanin 13 1.5 Sơ đồ phân giải anthocyanin pH cao 13 2.1 Quy trình thực nghiệm 32 2.2 Cây Cẩm tươi mẫu khô sau xử lý 33 3.1 Sắc ký đồ GC – MS dịch chiết cloroform từ Cẩm 38 3.2 Sắc ký đồ GC – MS dịch chiết ethanol từ Cẩm 41 3.3 Sắc ký đồ dịch chiết ethanol Cẩm 44 3.4 3.5 3.6 3.7 Phổ khối lượng dịch chiết ethanol từ cẩm, phút thứ 10,748 hệ LC - MS Phổ khối lượng dịch chiết ethanol từ cẩm, phút thứ 12,818 hệ LC - MS Phổ khối lượng dịch chiết ethanol từ cẩm, phút thứ 13,936 hệ LC - MS Công thức cấu tạo phân tử cyanidin – 3-rutinoside 44 45 45 46 34 Trong đó: G1: khối lượng mẫu trước sấy (g) G2: khối lượng mẫu sau sấy (g) G: khối lượng mẫu (g) b Xác định hàm lượng tro - Tro toàn phần: Là khối lượng rắn lại sau nung cháy hoàn toàn mẫu thử điều kiện định - Dụng cụ: cốc sứ đựng mẫu, lị nung, bình hút ẩm, cân phân tích, bếp điện - Cách tiến hành Để xác định hàm lượng tro Cẩm ta lấy vào cốc sứ, cốc đựng khoảng gam bột nguyên liệu (kí hiệu mẫu ghi chén sứ) đem than hóa sơ bếp điện Sau đó, cho cốc sứ có chứa mẫu vào lò nung nung nhiệt độ 400- 5000C (nếu nhiệt độ cao số kim loại bị bay hơi) Sau thời gian tro hoá khoảng giờ, ta thấy nguyên liệu bột Cẩm bị tro hố hồn tồn Lúc tro dạng bột, màu xám trắng Cho cốc vào bình hút ẩm cốc nguội hẳn cân cốc cân phân tích ghi giá trị khối lượng Tiếp tục cho cốc vào lò nung, nung 30 phút, lấy thực lại trình đến khối lượng lần cân liên tiếp khơng đổi sai số ± 0.001g dừng lại Hàm lượng tro Cẩm tính theo cơng thức: %H = m2-m1 100% mo Trong đó: mo: khối lượng mẫu (g) m1: khối lượng chén sứ mẫu trước nung (g) m2: khối lượng chén sứ mẫu sau tro hóa (g) %H: hàm lượng tro mẫu c Xác định hàm lượng số kim loại nặng Lấy 1gam mẫu bột Cẩm phân hủy lị vi sóng với dung dịch axit HNO3 đặc, sau q trình phân hủy hịa tan định mức đến 100 ml nước deion Lấy dung dịch định mức đem xác định hàm lượng số kim loại nặng Pb, As, Cr, Hg phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) Trung tâm Kiểm nghiệm An toàn vệ sinh Thực phẩm khu vực miền Trung - Viện 35 Pasteur Nha Trang Cơng thức tính hàm lượng kim loại nặng mẫu ban đầu sau: C (mg/kg) = C(mg/l) V (ml) mo Trong đó: mo: khối lượng mẫu Cẩm trước tro hóa (g) V: thể tích bình định mức (ml) 2.3.3 Chiết tách xác định thành phần hóa học dịch chiết từ Cẩm Cho m (g) nguyên liệu bột Cẩm vào V (ml) C2H5OH vào bình cầu đáy trịn, lắp sinh hàn hồi lưu đun nóng nhiệt độ toC với thời gian t (phút) Để nguội hỗn hợp dịch chiết đến nhiệt độ phòng thu dịch chiết vải lọc, sau lọc dịch chiết qua giấy lọc thu dịch chiết Để xác định hàm lượng chất màu lấy mẫu dịch chiết đo UV- VIS bước sóng 664nm 36 ƢƠN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết xác định thông số vật lý 3.1.1 ộ ẩm mẫu nguyên liệu Bằng phương pháp trọng lượng, độ ẩm mẫu nguyên liệu Cẩm xác định tổng hợp Bảng 3.1 Bảng 3.1 Kết xác định độ ẩm mẫu nguyên liệu Cẩm STT G (g) G1 (g) G2 (g) %H2O 3.150 32.850 32.524 10.357 3.373 34.767 34.419 10.319 3.608 31.402 31.032 10.247 Độ ẩm trung bình (%) 10.308 Kết Bảng 3.1 cho thấy độ ẩm trung bình bột mẫu nguyên liệu Cẩm 10.3082 % Với độ ẩm nằm khoảng tiêu chuẩn bảo quản mẫu nguyên liệu dược liệu 10 – 14% Do nguyên liệu bảo quản thời gian dài nguyên liệu sử dụng chiết tách có tính ổn định 3.1.2 Xác định hàm lƣợng tro Bằng phương pháp định lượng, hàm lượng tro nguyên liệu xác định trình bày Bảng 3.2 Bảng 3.2 Kết xác định hàm lượng tro mẫu nguyên liệu Cẩm STT mo (g) m1 (g) m2 (g) %Htro 5.018 35.502 35.990 9.725 5.027 36.280 36.763 9.608 5.021 34.760 35.252 9.799 Hàm lượng tro trung bình (%) 9.711 Kết Bảng 3.2 cho thấy hàm lượng tro bột mẫu nguyên liệu Cẩm 9.711 % hàm lượng trung bình mẫu thực vật (15- 20 %) Với hàm lượng dự báo hàm lượng kim loại nặng có Cẩm khơng lớn 37 3.1.3 Xác định hàm lƣợng kim loại nặng Hàm lượng số kim loại nặng Cẩm xác định phương pháp AAS Kết thể Bảng 3.3 Bảng 3.3 Hàm lượng kim loại Cẩm Hàm STT Kim loại Phƣơng pháp thử Kết Kết lƣợng (AAS) (μg/l) (mg/kg) cho phép (mg/kg) Pb TCVN 8126:2009 0.502 As AOAC 986.15 KPH Cr TCVN 8126:2009 0.422 Hg TCVN 7993:2009 KPH ≤ 2.00 0.05 KPH ≤ 1.00 (LOD = 0.021) ≤ 2.00 0.04 KPH ≤ 0.05 (LOD = 0.013) Bảng 3.3 thấy thành phần kim loại nặng Pb, As, Cr, Hg có Cẩm tương đối thấp Đây số quan trọng để đánh giá việc sử dụng Cẩm làm dược liệu an tồn Vì ta nhận thấy sử dụng Cẩm hàm lượng kim loại nặng khơng ảnh hưởng đến sức khoẻ người 3.2 Kết nghiên cứu thu dịch chiết dung môi clorofom 3.2.1 Dịch chiết clorofom Cẩm Điều kiện tiến hành: 10 gam bột Cẩm, thể tích dung mơi 200ml clorofom; ta tiến hành khảo sát thời gian chiết 2, 4, 6, Tiến hành chiết soxhlet bếp cách thủy nhiệt độ khoảng 62-72oC Sau đó, tiến hành dung mơi để thu cao chiết đem cao chiết thu cân Kết trình bày Bảng 3.4 Bảng 3.4 Ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng cao chiết thu Thời gian chiết (giờ) Khối lượng cao chiết (g) 0.35 0.40 0.42 0.42 Qua Bảng 3.4 ta thấy, thời gian chiết từ đến khối lượng cao 38 chiết thu có tăng theo thời gian từ đến khối lượng cao chiết khơng tăng Điều giải thích tăng thời gian chiết chất Cẩm khơng hịa tan thêm Vậy thời gian chiết tốt dung môi clorofom 3.2.2 ịnh danh thành phần hóa học có dịch chiết clorofom Cẩm GC-MS Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết clorofom từ Cẩm thể Hình 3.1 kết định danh thành phần hóa học dịch chiết clorofom thể Bảng 3.5 Hình 3.1 Sắc ký đồ GC – MS dịch chiết clorofom từ Cẩm Bảng 3.5 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết clorofom Cẩm Thời Diện tích gian peak lƣu (%) 9.380 1.071 2,5-dimethoxythiophenol 12.645 0.538 Acetic acid, 2-(2,2,6-trimethy-7-oxa-bicyclo[4.1.0]- STT Tên gọi 39 STT Thời Diện tích gian peak lƣu (%) Tên gọi hept-1-yl)-propenyl ester 2-cyclohexen-1-one, 4-hydroxy-3,5,5-trimethyl-4- 12.761 0.577 13.280 3.066 2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl- 14.776 0.685 Hexadecanoic acid, ethyl ester 15.891 2.699 Phytol 17.572 2.049 7-Methyl-Z-tetradecen-1-ol acetate 18.012 0.631 4,8,12,16-Tetramethylheptadecan-4-olide 18.410 4.450 Teracosane 10 19.214 7.163 Heneicosane 11 19.490 48.90 Di-n-octyl phthalate 12 19.984 8.205 Pentacosane 13 20.730 6.978 Octacosane 14 21.452 4.440 Heptacosane 15 21.563 2.728 Squalene 16 22.188 2.552 1-Monolinoleoylglyxerol trimethylsilyl ether 17 25.633 0.763 Campesterol 18 25.957 1.178 Stigmasterol 19 26.815 1.330 γ-Sitosterol (3-oxo-1-butenyl) Bảng 3.5 cho ta thấy phương pháp GC – MS định danh 19 cấu tử dịch chiết clorofom từ Cẩm Thành phần hóa học dịch chiết clorofom chủ yếu cấu tử có độ phân cực yếu đến không phân cực, bao gồm hidrocacbon dài 21C 27C Các cấu tử có hàm lượng cao như: Di-n-octyl phthalate (48.9 %) thích hợp để làm mỹ phẩm, đồ chơi trẻ em khơng độc hại [12], Pentacosane (8,20 %), Heneicosane ( 7.163 %) 40 Theo số nhóm nghiên cứu Heptacosane hợp chất quan trọng giúp ngăn chặn phát triển tế bào ung thư, giảm nguy sơ vữa động mạch Squalene giúp làm sạch, lọc giải độc máu, giúp ngăn chặn xơ cứng mạch máu lắng đọng mảng bám cholesterol Stigmasterol γ-Sitosterol l thuộc nhóm sterol điều trị bệnh tim, cholesterol cao sử dụng tăng cường hệ thống miễn dịch ngăn ngừa ung thư, bệnh cảm cúm 3.3 Kết nghiên cứu thu dịch chiết dung môi etanol 3.3.1 Dịch chiết etanol Cẩm Điều kiện tiến hành: 10 gam bột Cẩm, thể tích dung môi 200 ml etanol; thời gian chiết: 2, 4, 6, Tiến hành chiết soxhlet bếp cách thủy nhiệt độ từ khoảng 80oC- 90oC Sau đó, tiến hành dung mơi để thu cao chiết đem cao chiết thu cân Khối lượng cao chiết trình bày Bảng 3.6 Bảng 3.6 Ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng cao chiết thu Thời gian chiết (phút) Khối lượng cao chiết (g) 0.15 0.17 0.20 0.20 Bảng 3.6 ta thấy, thời gian chiết từ đến phút khối lượng chất thu tăng theo thời gian, sau khối lượng cao chiết đạt lớn Điều giải thích tăng thời gian chiết chất Cẩm khơng hịa tan thêm Vậy tơi chọn thời gian chiết tốt dung môi etanol 3.3.2 ịnh danh thành phần hóa học dịch chiết etanol từ Cẩm GC - MS Sắc ký đồ GC-MS dịch chiết etanol từ Cẩm thể Hình 3.2 kết định danh thành phần hóa học dịch chiết etanol tổng hợp Bảng 3.7 41 Hình 3.2 Sắc kí đồ GC – MS dịch chiết etanol từ Cẩm Bảng 3.7 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết etanol Cẩm STT Thời Diện tích Tên gọi gian lƣu peak (%) Dithiocarbamate,S-methyl-,N-(2-methyl-3- 8.449 0.550 9.365 7.257 2,5-Dimethoxythiophenol 9.646 1.522 Phen, 2,4-bis(1,1-dimethylethyl)- 10.038 0.780 3,5-Dimethoxy-4-hydroxybenzyl alcohol 10.101 0.802 2(4H)-Benzofuranone,5,6,7,7A-tetrahydro- oxobutyl)- 42 STT Thời Diện tích Tên gọi gian lƣu peak (%) 2-Tertbutyl cyclohexyl 10.305 1.355 10.595 0.840 2-Hexadecanol 10.673 0.907 Geranyl isovalerate 11.215 1.245 10 11.675 1.637 11 12.630 1.715 12 12.751 5.262 13 12.828 0.867 Tetradecane,2,6,10-trimethyl- 14 13.260 3.780 2-Pentadecanone, 6,10,14-trimethyl- 15 14.756 2.877 Hexadecanoic acid, ethyl ester 16 15.875 25.000 Phytol 17 16.684 0.975 1-Heptatriacotanol 18 16.786 1.417 E,E,Z-1,3,12-Nonadecatriene-5,14-diol 19 17.552 1.315 17-Pentatriacontene 20 17.988 1.235 4,8,12,16-Tetramethylheptadecan-4-olide propylphosphonofluoridate 2-Cyclohexen-1-one, 4-(3-hydroxy-1butenyl)-3,5,5-trimethyl1-{2-[3-(2-Acetyloxiran-2-yl)-1,1dimethylpropyl]cycloprop-2-enyl}ethanone Ppropiolic acid, 3-(1-hydroxy-2-isopropyl-5methlcyclohexyl)2-Cyclohexen-1-one, 4-hydroxy-3,5,5trimethyl-4-(3-oxo-1-butenyl)- 43 STT Thời Diện tích Tên gọi gian lƣu peak (%) 21 18.259 2.372 Ethanol, 2-(9_octadecenyloxy)-, (Z)- 22 18.385 1.130 Tetrapentacontane, 1,54-dibromo- 23 19.184 0.965 Heneicosane 24 19.446 16.100 Di-n-octyl phthalate 25 19.756 1.052 E-8-Methyl-9-tetradecen-1-ol acetate 26 19.954 0.862 Phen-1,4-diol, 2,3-dimethyl-5-trifluoromethyl- 27 20.701 0.767 Octacosane 28 21.418 0.442 Heptacosane 29 21.534 2.910 Squalene 30 22.149 0.360 1-Monolinoleoylglycerol trimethylsilyl ether 31 25.574 2.550 Campesterol 32 25.894 4.772 Stigmasterol 33 26.751 4.507 γ –Sitosterol Bảng 3.7 cho ta thấy phương pháp GC – MS định danh 33 cấu tử dịch chiết etanol từ Cẩm Thành phần hóa học dịch chiết etanol chủ yếu cấu tử có độ phân cực yếu đến không phân cực Các chất có hàm lượng cao như: Phytol (25 %), 2,5-Dimethoxythiophenol (7,257 %) Trong có số chất có hoạt tính sinh học cao như: Heneicosan có tác dụng kháng khuẩn, điều trị huyết áp cao 2- Hexadecanol dùng việc điều trị, kiểm sốt, phịng chống cải thiện bệnh hội chứng da tóc Squalene giúp làm sạch, lọc giải độc máu, giúp ngăn chặn xơ cứng mạch máu lắng đọng mảng bám cholesterol Stigmasterol γ-Sitosterol l thuộc nhóm sterol điều 44 trị bệnh tim, cholesterol cao sử dụng tăng cường hệ thống miễn dịch ngăn ngừa ung thư, bệnh cảm cúm 3.3.3 ịnh danh chất màu dịch chiết etanol Cẩm HPLC LC-MS Dịch chiết etanol từ Cẩm đo HPLC đầu dị DAD bước sóng 522 nm Kết Hình 3.3 cho thấy có peak ứng với thời gian lưu 10,748 (chiếm 18,779%); 12,976 ( chiếm 18,1388%); 13,716 ( chiếm 63,6833%) Hình 3.3 Sắc kí đồ dịch chiết etanol Cẩm Hình 3.4 Phổ khối lượng dịch chiết etanol từ Cẩm, phút thứ 10,748 hệ LC-MS 45 Tiến hành khảo sát hệ thống LC-MS với chế độ scan giá trị m/z từ 200 đến 1200 Trên hệ HPLC cho tín hiệu phút 10,748; 12,976; 13,726 cho tín hiệu tương ứng hệ LC-MS phút 10,498; 12,818; 13,936 Phổ khối lượng trình bày Hình 3.4, 3.5, 3.6 Hình 3.5 Phổ khối lượng dịch chiết etanol từ Cẩm phút thứ 12,818 hệ LC-MS Hình 3.6 Phổ khối lượng dịch chiết etanol từ Cẩm phút thứ 13,936 hệ LC-MS 46 Kết Hình 3.6 Phổ khối lượng dịch chiết etanol từ Cẩm, phút thứ 13,936 hệ LC-MS cho thấy có giá trị m/z = 594,7 ứng với hợp chất cyanidin - 3-rutinoside [11] Hình 3.7 Cơng thức cấu tạo cyanidin – 3-rutinoside Cyanidin – 3-rutinoside chất chống oxy hóa Polyphenol tự nhiên, giết chết có chọn lọc tế bào ung thư bạch cầu ung thư hoạch cách gây stress oxy hóa Điều trị cyanidin – 3-rutinoside ngày phổ biến với ưu điểm có sẵn rộng rãi chọn lọc chống lại khối u Nhận xét chung Bằng phương pháp GC-MS, số thành phần hóa học dịch chiết từ Cẩm xác định Tổng số cấu tử dịch chiết 85 cấu tử Cẩm clorofom có 19 cấu tử, etanol có 33 cấu tử Trong đó, dịch chiết etanol Cẩm nhiều cấu tử chứa 33 cấu tử Như vậy, điều kiện thực nghiệm phịng thí nghiệm dung mơi chiết chất khác chúng có độ phân cực khác Bằng phương pháp HPLC kết hợp LC-MS chứng tỏ có hợp chất màu anthocyanin dịch chiết: chất dịch chiết etanol hợp chất cyanidin - 3rutinoside [11] Cây Cẩm sử dụng chủ yếu làm phẩm màu thực phẩm sản xuất loại xôi, đông sương, chè, kẹo dẻo…do để thực theo hướng nghiên cứu ứng dụng sử dụng cồn thực phẩm làm dung môi chiết tách phẩm màu từ Cẩm 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu đây, đến kết luận sau: 1/ Bằng phương pháp sấy khô, phương pháp tro hóa mẫu xác định độ ẩm, hàm lượng tro: - Độ ẩm nguyên liệu Cẩm 10,308%; - Hàm lượng tro trung bình Cẩm 9,711%; - Hàm lượng kim loại nặng nằm giới hạn cho phép 2/ Đã xác định thời gian tốt cho trình chiết tách số hợp chất từ Cẩm với loại dung môi: dung môi clorofom (6 giờ), dung môi etanol (6 giờ) 3/ Bằng phương pháp GC-MS định danh số thành phần hóa học dịch chiết từ Cẩm với dịch chiết clorofom định danh 19 cấu tử dịch chiết etanol định danh 33 cấu tử 4/ Phương pháp HPLC, LC-MS cho thấy dịch chiết etanol có chứa cyanidin - 3-rutinoside cyanidin -3- malonyglucoside KIẾN NGHỊ 1/ Tiếp tục nghiên cứu, đề xuất phương pháp để thu nhận bột màu Cẩm với hàm lượng cao hơn; 2/ Cần nghiên cứu phương pháp tinh chế loại bỏ tạp chất sản phẩm cyanidin để tránh ảnh hưởng đến chất lượng thực phẩm tạo màu; 3/ Mở rộng nghiên cứu bột màu để ứng dụng nhiều sản phẩm có giá trị cao 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Hồng Minh Châu (2003), Cơ sở hóa học phân tích, Nhà xuất KHKT [2] Nguyễn Thị Dâu (2010), Nghiên cứu chiết xuất chất màu betacyanin từ vỏ long, Luận văn tốt nghiệp trường Đại học Nha Trang [3] Trần Kim Quy (1987), Kỹ thuật chất màu, Nhà xuất TP.HCM Tiếng Anh [4] Alison, D., Paul, C (2000), Colouring our foods in the last and next millennium, J Food Sci & Tech., 35, p.5-22 [5] Attia, Gamila Y., M E M Moussa and E R Sheashea (2013) Characterization of red pigments extracted from red beet (Beta Vulgaris, L.) and its potential uses as antioxidant and natural food colorants [6] Harivaindaran, K.V., Rebecca, O.P.S; Chandran, S (2008), Study of Optimal Temperature, pH and Stability of Dragon Fruit (Hylocereus polyrhizus) Peel for Use as Potential Natural Colorant, Pakistan J Bio Sci., 11 (18), 2259 – 2263 [7] Henriette M.C.A., André N.S., Arthur C.R.S., Kênya C.B M., Maria I R.A (2007), Betacyanin Stability During Processing and Storage of a Microencapsulated Red Beet Extract, American J Food Tech., Vol (4), 307-312 [8] Lim Tze Han (2004), Betacyanins from Hylocereus undatus as natural food colorants, Thesis of Master Science, National University of Singapore [9] Lima, E.C., Krug, F J., Arruda, M.A.Z (1998), Direct determination in sweet fruit-flavoured powder drinks by electrothermal atomic absorption spectrometry, J Spectrochimica Acta, Part B 53, p.601-611 [10] Tseng TH, Hsu JD, Lo MH, Chu CY, Chou FP, Huang CL and Wang CJ (1998), Inhibitory effect of Hibiscus protocatechuic acid on tumor promotion in mouse skin, Cancer Lett,126 (2), 199-207 [11] Fatima Lopes da Silva, Maria teresa Escribano-Bailon, Jose Joaquin perez Alonso, Julian C RivasGonZalo, Celestino Santos-Buelga(2007) Anthocyanin pigments in strabeerry LWT - Food Science and Technology Volume 40, Issue 2, March 2007, Pages 374-382 Trang web [12] https://de.wikipedia.org/wiki/Di-n-octylphthalat ngày tra cứu 21/2/2019 ... 3.7 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết clroform Cẩm Ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng cao chiết thu Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết ethanol Cẩm 38 40 41 vi DANH MỤC... danh thành phần hóa học Cẩm dung môi Clorofom Ethanol? ?? Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết tách Cẩm số dung môi hữu - Định danh, xác định thành phần hoá học hợp chất - Định. .. danh thành phần hóa học có dịch chiết clorofom Cẩm GC-MS 38 3.3 Kết nghiên cứu thu dịch chiết dung môi etanol 40 3.3.1 Dịch chiết etanol Cẩm 40 3.3.2 Định danh thành phần