Bài giảng vector plasmit

Chuyên đề 4: Chuyên đề 4: Các hệ thống vector plasmid Các hệ thống vector plasmid dùng trong công nghệ gen dùng trong công nghệ gen Nhóm báo cáo: 1.Bùi Thị Vân Anh 2. Phan Thị Dinh 3. Trương Cao Dũng 4.Nguyễn Thị Thu Dung 5. Nguyễn Thị Hằng GỒM: Phần I: Vector Phần II: Plasmid Phần III: Các vector plasmid Phần IV: Các vector lai plasmid Vector Vector • Khái niệm: Vector là phân tử DNA thường có dạng vòng, kép được sử dụng để tạo phân tử DNA tái tổ hợp • Đặc điểm của vector  Kích thước nhỏ  Có điểm khởi đầu sao chép  Dấu chuẩn chọn lọc  Điểm RE  Có khả năng xâm nhập vào tế bào vật chủ Phần II: Plasmid Phần II: Plasmid 2.1. Khái niệm Plasmid là những phân tử ADN ngắn (2-5kb), dạng mạch vòng kép nằm ngoài NST, tồn tại trong tế bào VK, nhỏ so với NST của TBVC. 2.2. Phân loại.  Dựa vào khả năng tiếp hợp  Dựa vào số lượng bản sao 2.3. Đặc điểm của plasmid:  Có điểm khởi đầu sao chép Ori  Có điểm cắt của RE  Không ảnh hưởng đến sự sinh trưởng, phát triển và sinh sản của tbvc  Mang các gen kháng KS  Có ở vi khuẩn và một số nấm men  Có kích thước nhỏ, tái bản độc lập, có dấu chuẩn chọn lọc được sử dụng cho vector tách dòng Phần III: Các vector plasmid Phần III: Các vector plasmid 3.1. Khái niệm vector plasmid • Vector plasmid thường được sửa đổi từ các plasmid tự nhiên tạo nên các vector có các đặc điểm mong muốn • Cách đặt tên vector plasmid: chữ p - viết tắt của từ plasmid, chữ tiếp theo viết hoa chỉ tên người thiết kế vector và các con số chỉ chủng hoặc phép thí nghiệm tạo ra ( pBR 322 ) 3.2. Phân loại  Các vector plasmid tách dòng  Các vector plasmid biểu hiện A - Các loại vector thường dùng trong tách dòng. • Khái niệm: là các phân tử DNA có kích thước nhỏ cho phép cài các đoạn DNA cần thiết, có khả năng tái bản không phụ thuộc vào sự phân chia của tb, tồn tại trong tbvc qua nhiều thế hệ không gây biến đổi bộ gen của tbvc. • Đặc điểm Có nhiều điểm cắt đặc hiệu duy nhất cho các RE khác nhau, mang các gen tín hiệu. Phân loại vector tách dòng Phân loại vector tách dòng • Vector plasmid thế hệ 1: ColE1 và RSF1030, pSC101… • Vector thế hệ 2: pBR322 . • Vector thế hệ 3: pUC 18, 19,pGem3… • Vector thế hệ thứ 4: pCR2.1, pJET1.2 Vector plasmid thế hệ I Vector plasmid thế hệ I • Có số lượng bản sao 20-40 • Không tiếp hợp Vector thế hệ I Vector thế hệ I • Số lượng bản sao 10-20 • Không tiếp hợp [...]... Pr lai • Phân loại:  Vector biểu hiện ở Prokaryot  Vector biểu hiện ở Eukaryot Vector biểu hiện Prokaryota Promoter: thường sử dụng các promoter mạnh của thực khuẩn thể (T3, T7…) và của vi khuẩn (Lac, Trp…) Eukaryota Promoter: thường dùng promoter mạnh của virut (CMV, SV40) và của nấm men (PGK, GAL…) Hệ thống vector pET biểu hiện ở E.coli Hệ thống vector biểu hiện ở Nấm men or Vector biểu hiện gen... AmpR  Đoạn polylinker  2 promotor đặc trưng cho ARN polymerase (SP6 ; T7)  Ưu điểm: phiên mã ADN nhiều ARN Vector tách dòng thế hệ IV • Ưu điểm: Dễ sử dụng • Nhược điểm: chỉ chèn được những đoạn DNA có kích thước nhỏ B - Vector plasmid biểu hiện gen • Khái niệm: Vector biểu hiện là những vector tách dòng mang các promoter mạnh, cho phép biểu hiện đồng thời cả gen chỉ thi và gen tách dòng tạo nên... E.coli Hệ thống vector biểu hiện ở Nấm men or Vector biểu hiện gen ở thực vật IV - Các vector là lai plasmid • Cosmid KN: Là vector lai nhân tạo từ một plasmid với các trình tự Cos của phage lamda Đặc điểm: kích thước 5kb, có thể cài 35-47kb, có vùng giới hạn có thể cài DNA lạ và 1gen Ampr pJB8, SuperCos Phagemid KN: Là vector lai một số gen của plasmid (gen chỉ thị, đoạn Ori, …) và một phần gen của phage.. .Vector thế hệ II • Kích thước nhỏ: 4363 bp • Có 2 gen kháng kháng sinh • Trình tự Origin • Một số RE thuộc gen KKS pAT153 bỏ đi một đoạn DNA - tái bản nhanh hơn Vector tách dòng thế hệ III pUC (18,19): Kích thước khoảng 2kb  Gen KKS  Gen mã hóa beta-galactosidase (gen lacZ)  Vùng . Hằng GỒM: Phần I: Vector Phần II: Plasmid Phần III: Các vector plasmid Phần IV: Các vector lai plasmid Vector Vector • Khái niệm: Vector là phân tử DNA. lọc được sử dụng cho vector tách dòng Phần III: Các vector plasmid Phần III: Các vector plasmid 3.1. Khái niệm vector plasmid • Vector plasmid thường