Xây dựng quy trình điều chế cao dâm dương hoắc (extractum herba epimedii) và cao bách bệnh (extractum radix eurycomae longifoliae) bằng phương pháp sấy phun

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN DÂN PHÚC XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐIỀU CHẾ CAO DÂM DƯƠNG HOẮC (Extractum Herba Epimedii) VÀ CAO BÁCH BỆNH (Extractum Radix Eurycomae longifoliae) BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẤY PHUN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – Năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN DÂN PHÚC XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐIỀU CHẾ CAO DÂM DƯƠNG HOẮC (Extractum Herba Epimedii) VÀ CAO BÁCH BỆNH (Extractum Radix Eurycomae longifoliae) BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẤY PHUN NGÀNH: Công nghệ dược phẩm & bào chế thuốc MÃ SỐ: 8720202 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN ĐỨC HẠNH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – Năm 2020 MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ix MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .2 1.1 TỔNG QUAN VỀ BÁCH BỆNH 1.1.1 Mô tả thực vật 1.1.2 Phân bố sinh thái .3 1.1.3 Thành phần hóa học .3 1.1.4 Tác dụng dược lý 1.1.5 Công dụng cách dùng 1.1.6 Tổng quan eurycomanon 1.2 TỔNG QUAN VỀ DÂM DƯƠNG HOẮC 1.2.1 Phân bố sinh thái .6 1.2.2 Thành phần hóa học .6 1.2.3 Tác dụng dược lý 1.2.4 Công dụng cách dùng 1.2.5 Tổng quan epimedin C 10 1.2.6 Tổng quan icariin 10 1.3 CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU 11 1.3.1 Đại cương chiết xuất dược liệu .11 1.3.2 Phương pháp chiết xuất dược liệu .12 1.3.3 Nghiên cứu mối liên quan nhân tối ưu hóa quy trình chiết xuất dược liệu 13 1.3.4 Tổng quan nghiên cứu chiết xuất dược liệu BB dược liệu DDH .14 1.4 ĐIỀU CHẾ CAO KHÔ BẰNG KỸ THUẬT SẤY PHUN 15 1.4.1 Các giai đoạn trình sấy phun 15 i 1.4.2 Thông số ảnh hưởng trình sấy phun 16 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .17 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.1.1 Nguyên liệu chất đối chiếu 17 2.1.2 Dung mơi, hóa chất 17 2.1.3 Dụng cụ, trang thiết bị .17 2.1.4 Phần mềm 17 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.2.1 Kiểm nghiệm dược liệu BB dược liệu DDH .18 2.2.2 Xây dựng thẩm định quy trình định lượng chất điểm dịch chiết BB dịch chiết DDH 18 2.2.3 Xây dựng quy trình chiết xuất dược liệu BB dược liệu DDH 23 2.2.4 Điều chế cao khô sấy phun BB cao khô sấy phun DDH 28 2.2.5 Xây dựng TCCS cao khô sấy phun BB cao khô sấy phun DDH 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ 31 3.1 KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU 31 3.1.1 Kiểm nghiệm dược liệu Bách bệnh 31 3.1.2 Kiểm nghiệm dược liệu Dâm dương hoắc 31 3.2 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG CÁC CHẤT ĐIỂM CHỈ TRONG DỊCH CHIẾT BB VÀ DỊCH CHIẾT DDH 32 3.2.1 Xây dựng quy trình định lượng eurycomanon dịch chiết BB phương pháp HPLC 32 3.2.2 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời epimedin C icariin dịch chiết DDH phương pháp HPLC 40 3.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH CHIẾT XUẤT DƯỢC LIỆU BB VÀ DƯỢC LIỆU DDH 49 3.3.1 Sơ khảo sát xây dựng quy trình chiết xuất dược liệu BB .49 i 3.3.2 Nghiên cứu liên quan nhân tối ưu hóa quy trình chiết xuất dược liệu BB .50 3.3.3 Sơ khảo sát xây dựng quy trình chiết xuất dược liệu DDH 54 3.3.4 Nghiên cứu liên quan nhân tối ưu hóa quy trình chiết xuất dược liệu DDH 56 3.4 ĐIỀU CHẾ CAO KHÔ SẤY PHUN BB VÀ CAO KHÔ SẤY PHUN DDH 62 3.4.1 Điều chế cao khô sấy phun BB 62 3.4.2 Điều chế cao khô sấy phun DDH .65 3.5 QUY TRÌNH ĐIỀU CHẾ CAO KHƠ SẤY PHUN BB VÀ CAO KHƠ SẤY PHUN DDH 67 3.5.1 Quy trình điều chế cao khô sấy phun BB 67 3.5.2 Quy trình điều chế cao khô sấy phun DDH .71 3.6 XÂY DỰNG TCCS CAO KHÔ BB VÀ CAO KHÔ SẤY PHUN DDH 74 3.6.1 Xây dựng TCCS cao khô sấy phun BB .74 3.6.2 Xây dựng TCCS cao khô sấy phun DDH 78 CHƯƠNG BÀN LUẬN 83 CHƯƠNG KẾT LUẬN 87 CHƯƠNG KIẾN NGHỊ 87 TÀI LIỆU THAM KHẢO 88 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Từ viết tắt Từ nguyên ACN Acetonitril As Asymmetrical factor BB Bách bệnh BVTV Bảo vệ thực vật CFU Colony forming unit Dd Dung dịch DDA Detector diod array DDH Dâm dương hoắc DĐVN Dược điển Việt Nam 10 HPLC High Performance Liquid Tiếng Việt Hệ số bất đối xứng Đơn vị hình thành khuẩn lạc Đầu dị qt chồng phổ Sắc kí lỏng hiệu cao Chromatography 11 ICH International Conference Hội nghị quốc tế hài hịa on Harmonization hóa thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người 12 kl/kl Khối lượng/khối lượng 13 KC Kiểm chứng 14 LDo 15 LOD Limit of detection Giới hạn phát 16 LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng 17 Rs Resolution Độ phân giải 18 RSD Relative standard Độ lệch chuẩn tương đối deviation 19 SKLM Sắc ký lớp mỏng 20 TB Trung bình 21 TCCS Tiêu chuẩn sở 22 TN Thí nghiệm 23 tR Retention time 24 tt/kl Thể tích/khối lượng 25 UV Ultra violet Thời gian lưu Tử ngoại i DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Phân bố thành phần hóa học dược liệu BB .3 Bảng 1.2 Cấu trúc 15 flavonoid DDH Bảng 2.1 Các chất đối chiếu sử dụng .17 Bảng 2.2 Các trang thiết bị, dụng cụ sử dụng 17 Bảng 2.3 Điều kiện HPLC định lượng eurycomanon dịch chiết BB .19 Bảng 2.4 Chương trình pha động khảo sát định lượng eurycomanon dịch chiết BB 19 Bảng 2.5 Nồng độ eurycomanon chuẩn khảo sát tính tuyến tính 20 Bảng 2.6 Yêu cầu độ phục hồi chấp nhận nồng độ khác .21 Bảng 2.7 Điều kiện HPLC định lượng đồng thời epimedin C icariin dịch chiết DDH .22 Bảng 2.8 Chương trình pha động định lượng đồng thời icariin epimedin C dịch chiết DDH 22 Bảng 2.9 Nồng độ epimedin C chuẩn icariin khảo sát tính tuyến tính 23 Bảng 2.10 Ý nghĩa mức biến khảo sát điều kiện chiết xuất dược liệu BB 25 Bảng 2.11 Ý nghĩa mức biến khảo sát điều kiện chiết xuất dược liệu DDH 27 Bảng 3.1 Kết kiểm nghiệm dược liệu BB 31 Bảng 3.2 Kết kiểm nghiệm dược liệu DDH 32 Bảng 3.3 Chương trình pha động định lượng eurycomanon dịch chiết BB 34 Bảng 3.4 Tính tương thích hệ thống phương pháp HPLC định lượng eurycomanon dịch chiết BB 35 Bảng 3.5 Tính tuyến tính phương pháp định lượng eurycomanon dịch chiết BB 37 Bảng 3.6 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính phương pháp HPLC định lượng eurycomanon dịch chiết BB 38 Bảng 3.7 Độ lặp lại phương pháp định lượng eurycomanon dịch chiết BB 39 Bảng 3.8 Độ phương pháp định lượng eurycomanon dịch chiết BB 39 Bảng 3.9 Chương trình pha động định lượng đồng thời epimedin C icariin dịch chiết DDH 42 Bảng 3.10 Tính tương thích hệ thống phương pháp HPLC định lượng epimedin C icariin dịch chiết DDH 43 i Bảng 3.11 Tính tuyến tính phương pháp định lượng epimedin C icariin dịch chiết DDH 46 Bảng 3.12 Kết xử lý thống kê khảo sát tính tuyến tính phương pháp HPLC định lượng epimedin C icariin dịch chiết DDH 46 Bảng 3.13 Độ lặp lại phương pháp định lượng epimedin C icariin dịch chiết DDH .47 Bảng 3.14 Độ phương pháp định lượng epimedin C icariin dịch chiết DDH (số liệu epimedin C) 48 Bảng 3.15 Độ phương pháp định lượng epimedin C icariin dịch chiết DDH (số liệu icariin) 48 Bảng 3.16 Sơ khảo sát ảnh hưởng nồng độ ethanol lên hiệu suất chiết cao BB hiệu suất chiết eurycomanon (to= 95oC, số lần chiết 3) 49 Bảng 3.17 Ảnh hưởng số lần chiết lên hiệu suất chiết cao BB hiệu suất chiết eurycomanon (to= 95oC, dung môi chiết nước) 49 Bảng 3.18 Kết thực nghiệm xác định hiệu suất chiết eurycomanon (biến Y1, n=3) 50 Bảng 3.19 Kết thực nghiệm xác định hiệu suất chiết cao BB (biến Y2, n=3) 50 Bảng 3.20 Kết 10 thực nghiệm chiết xuất dược liệu BB (n=3) .51 Bảng 3.21 Tương quan hồi quy phương pháp tối ưu hóa điều kiện chiết xuất dược liệu BB 51 Bảng 3.22 Điều kiện chiết xuất dược liệu BB tối ưu giá trị dự đoán biến Y 54 Bảng 3.23 So sánh kết dự đoán thực nghiệm kiểm chứng điều kiện chiết xuất dược liệu BB (n=3) 54 Bảng 3.24 Sơ khảo sát ảnh hưởng dung môi chiết lên hiệu suất chiết cao DDH hiệu suất chiết epimedin C icariin (n=3) 55 Bảng 3.25 Kết thực nghiệm xác định hiệu suất chiết epimedin C (biến Y3, n=3) 56 Bảng 3.26 Kết thực nghiệm xác định hiệu suất chiết icariin (biến Y4, n=3) 57 Bảng 3.27 Kết thực nghiệm xác định hiệu suất chiết cao DDH (biến Y5, n=3)57 Bảng 3.28 Kết 10 thực nghiệm chiết xuất dược liệu DDH (n=3) .58 Bảng 3.29 Tương quan hồi quy phương pháp tối ưu hóa điều kiện chiết xuất dược liệu DDH .58 Bảng 3.30 Điều kiện chiết xuất dược liệu DDH tối ưu giá trị dự đoán biến Y 62 Bảng 3.31 So sánh kết dự đoán thực nghiệm kiểm chứng (n=3) 62 ii Bảng 3.32 Độ ẩm lô cao khô sấy phun BB 74 Bảng 3.33 Độ tro tồn phần lơ cao khơ sấy phun BB 75 Bảng 3.34 Tro không tan acid lô cao sấy phun BB .75 Bảng 3.35 Giới hạn kim loại nặng lô cao khô sấy phun BB 75 Bảng 3.36 Giới hạn nhiễm khuẩn lô cao khô sấy phun BB 76 Bảng 3.37 Dư lượng hóa chất BVTV lô cao khô sấy phun BB 76 Bảng 3.38 Hàm lượng eurycomanon lô cao khô sấy phun BB 77 Bảng 3.39 TCCS cao khô sấy phun BB 78 Bảng 3.40 Độ ẩm lô cao khô sấy phun DDH 79 Bảng 3.41 Độ tro toàn phần lô cao khô sấy phun DDH 79 Bảng 3.42 Tro không tan acid lô cao khô sấy phun DDH 80 Bảng 3.43 Giới hạn kim loại nặng lô cao khô sấy phun DDH 80 Bảng 3.44 Dư lượng hóa chất BVTV lơ cao khơ sấy phun DDH 80 Bảng 3.45 Giới hạn nhiễm khuẩn lô cao khô sấy phun DDH .81 Bảng 3.46 Hàm lượng epimedin C icariin lô cao khô sấy phun DDH 82 Bảng 3.47 TCCS cao khô sấy phun DDH 82 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 90 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 and their commercial products", Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 13 (5), pp 801-807 Kuo, Ping-Chung Shi, Li-Shian Damu, Amooru G Su, et al (2003), "Cytotoxic and Antimalarial β-Carboline Alkaloids from the Roots of Eurycoma longifolia", Journal of Natural Products, 66 (10), pp 13241327 Lahrita, Lucy, Kato, Eisuke, et al (2015), "Uncovering potential of Indonesian medicinal plants on glucose uptake enhancement and lipid suppression in 3T3-L1 adipocytes", Journal of Ethnopharmacology, 168 pp 229-236 Lieberman, Herbert A, Lachman, Leon Schwartz, et al (1980), "Pharmaceutical dosage forms: Tablets", pp 229-1002 Low, B S.Choi, S B.Abdul Wahab, H.Das, et al (2013), "Eurycomanone, the major quassinoid in Eurycoma longifolia root extract increases spermatogenesis by inhibiting the activity of phosphodiesterase and aromatase in steroidogenesis", J Ethnopharmacol, 149 (1), pp 201-207 Ma, H.He, X.Yang, Y.Li, et al (2011), "The genus Epimedium: an ethnopharmacological and phytochemical review", J Ethnopharmacol, 134 (3), pp 519-541 Mohamad, M Ali, MW Ahmad (2010), "Modelling for extraction of major phytochemical components from Eurycoma longifolia", Journal of Applied Sciences, 10 (21), pp 2572-2577 Mohamad, Mardawani Ali, mohamad wijayanuddin Ripin, Adnan Ahmad, et al (2013), "Effect of Extraction Process Parameters on the Yield of Bioactive Compounds from the Roots of Eurycoma Longifolia", 60 pp 51-57 Mohamad M, Ali M, Ahmad A (2010), "Modelling for extraction of major phytochemical components from Eurycoma longifolia", Journal of Applied Sciences, 10 (21), pp 2572-2577 Norhidayah, Aini Vejayan, Jaya Yusoff, Mashitah Mohamed (2015), "Detection and quantification of eurycomanone levels in Tongkat Ali herbal products", Journal of Applied Sciences, 15 (7), pp 999 Onwulata, Charles (2005), Encapsulated and powdered foods, CRC Press, pp 477 Reheman, Ayinuer Gao, Ze-yu Tursun, Xirali Pu, et al (2019), "Optimization of extraction technology of majun mupakhi ela and its effect on hydrocortisone-induced kidney Yang Deficiency in Mice", Scientific Reports, (1), pp 4628 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 91 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 Rehman, U Shaheed Choe, Kevin Yoo, H Hye (2016), "Review on a traditional herbal medicine, Eurycoma longifolia Jack (Tongkat Ali): its traditional uses, chemistry, evidence-based pharmacology and toxicology", Molecules, 21 (3), pp 1-31 Rozita, Osman Norashikin, Saim Mardiana, Saaid Nor Nasriah, et al (2016), "An experimental design method for the extraction of eurycomanone from Tongkat Ali (Eurycoma longifolia) roots using pressurized liquid extraction (PLE)", Malaysian Journal of Analytical Sciences, 20 (2), pp 342-350 Standard M J (2011), Phytopharmaceutical aspects of freeze dried water extract from Tongkat Ali Roots - Specification, Jabatan Standard Malaysia, pp 12 Tambi, M I.Imran, M K.Henkel, R R (2012), "Standardised watersoluble extract of Eurycoma longifolia, Tongkat ali, as testosterone booster for managing men with late-onset hypogonadism?", Andrologia, pp 226-230 Urano, Takuya Tohda, Chihiro (2010), "Icariin improves memory impairment in Alzheimer's disease model mice (5xFAD) and attenuates amyloid β-induced neurite atrophy", Phytotherapy Research, 24 (11), pp 1658-1663 Wang, Na Fu, Qiang Xi, Zhixia Che, et al (2013), "Solubility of icariin in a binary solvent system of ethanol and water", Journal of Solution Chemistry, pp 1839-1843 Wang, Na Fu, Qiang Yang, Guangde (2012), "Determination of the solubility, dissolution enthalpy and entropy of icariin in water, ethanol, and methanol", Fluid Phase Equilibria, pp 41-43 Wang, Yongping Dong, Huimin Zhu, Meng Ou, et al (2010), "Icariin exterts negative effects on human gastric cancer cell invasion and migration by vasodilator-stimulated phosphoprotein via Rac1 pathway", European Journal of Pharmacology, 635 (1), pp 40-48 Woo, Meng Wai Bhandari, Bhesh (2013), "Spray drying for food powder production", Handbook of Food Powders, pp 29-56 Xu, Shunjun Yu, Jiejing Yang, Liu Zhu, et al (2016), "Comparative Pharmacokinetics and Bioavailability of Epimedin C in Rat after Intramuscular Administration of Epimedin C, a Combination of Four Flavonoid Glycosides and Purified Herba Epimedii Extract", pp 1-9 Yuhai, He Sulaiman, Ahmad Ziad Bin (2015), "Optimization of eurycomanone yield using response surface methodology by water extraction", pp 1-20 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 92 50 51 52 53 54 55 56 57 58 Zhai, Yuan-Kun Guo, Xin Pan, Ya-Lei Niu, et al (2013), "A systematic review of the efficacy and pharmacological profile of Herba Epimedii in osteoporosis therapy", Pharmazie, pp 713-722 Zhang, D W.Cheng, Y.Wang, N L.Zhang, et al (2008), "Effects of total flavonoids and flavonol glycosides from Epimedium koreanum Nakai on the proliferation and differentiation of primary osteoblasts", Phytomedicine, 15 (1-2), pp 55-61 Zhang, Dawei Zhang, Jinchao Fong, Chichun Yao X Y, et al (2012), "Herba epimedii flavonoids suppress osteoclastic differentiation and bone resorption by inducing G2/M arrest and apoptosis", Biochimie, 94 (12), pp 2514-2522 Zhang, Hua-Feng Yang, Tian-Shun Li, Zuo-Zhou Wang, et al (2008), "Simultaneous extraction of epimedin A, B, C and icariin from Herba Epimedii by ultrasonic technique", Ultrasonics Sonochemistry, pp 376385 Zhang, Hua-Feng Yang, Xiao-Hua Zhao, Li-Dong Wang, et al (2009), "Ultrasonic-assisted extraction of epimedin C from fresh leaves of Epimedium and extraction mechanism", Innovative Food Science & Emerging Technologies, pp 54-60 ZHAO, Yong ZHANG, Ling CUI, Zheng-Yan LI, et al (1996), "Effects of icariin on the proliferation and differentiation of HL-60 cells [J]", Chinese Journal of Oncology, pp 53-55 ICH Harmonised Tripartite Guideline (1996), Q2B Validation of Analytical Procedures: Methodology, U.S Department of Health and Human Services Food and Drug Administration, pp 2-14 Zhang H-F, Yang T-S, Li Z-Z, Wang Y (2008), "Simultaneous extraction of epimedin A, B, C and icariin from Herba Epimedii by ultrasonic technique", Ultrasonics sonochemistry, 15 pp 376-385 Zhang H-F, Yang X-H, Zhao L-D, Wang Y (2009), "Ultrasonic-assisted extraction of epimedin C from fresh leaves of Epimedium and extraction mechanism", Innovative Food Science & Emerging Technologies INNOV FOOD SCI EMERG TECHNOL, 10 pp 54-60 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - PHỤ LỤC Phụ lục Kiểm nghiệm BB tiêu PL-2 Phụ lục Quy trình định lượng eurycomanon cao khô BB .PL-4 Phụ lục Kết kiểm nghiệm dược liệu Dâm dương hoắc PL-5 Phụ lục Quy trình định lượng đồng thời epimedin C icariin cao khô DDH .PL-6 Phụ lục Tiêu chuẩn sở cao khô Bách bệnh PL-7 Phụ lục Tiêu chuẩn sở cao khô Dâm dương hoắc PL-10 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - Phụ lục Kiểm nghiệm BB tiêu Các tiêu kiểm nghiệm dược liệu BB Soi bột Mảnh bần Mô cứng Mạch điểm Hạt tinh bột riêng lẻ, Chất tiết Mạch mạng Tinh thể mơ cứng Bó sợi ghép đôi, ghép ba Tinh thể canxi oxalat Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - Định tính Kết định tính dược liệu Bách bệnh (1) C: dung dịch dược liệu đối chiếu T: dung dịch dược liệu thử (1) TT Vanilin 1% - acid sulfuric 10% ethanol (2) TT Dragendorff Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn (2) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - Phụ lục Quy trình định lượng eurycomanon cao khơ BB Quy trình định lượng eurycomanon cao khơ BB - Chuẩn bị mẫu thử: Cân xác khoảng 50 mg cao khơ BB vào bình định mức 25 ml Thêm 20 ml methanol, siêu âm 10 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm - Điều kiện sắc ký: Hệ thống sắc ký: Hệ thống Shimadzu LC-2030C 3D plus Detector: DAD Cột: C18 Shim-pack GIST, 250 x 4,6 mm, µm Nhiệt độ cột: 30 0C Thể tích tiêm: µl Tốc độ dịng: ml/phút Phát hiện: Bước sóng 245 nm Chương trình pha động định lượng eurycomanon cao chiết BB Thời gian (phút) 20 20,01 35 35,01 45 dd acid H3PO4 0,1 % Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 91,5 91,5 40 40 91,5 91,5 Acetonitril 100 % 8,5 8,5 60 60 8,5 8,5 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - Phụ lục Kết quả kiểm nghiệm dược liệu Dâm dương hoắc Mô tả (a) Lá dài từ 9-23 cm, rộng 1,8cm (b) Lá kép xẻ ba (c) Gốc xẻ lệch, mép có cưa nhỏ d) Phiến hình mác, nhẵn khơng lơng Định tính Kết định tính dược liệu DDH C: dung dịch chuẩn Dâm dương hoắc T: dung dịch thử Dâm dương hoắc Cepi: dung dịch chuẩn epimedin C Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - Phụ lục Quy trình định lượng đồng thời epimedin C icariin cao khơ DDH Quy trình định lượng đồng thời epimedin C icariin cao khô Dâm dương hoắc phương pháp HPLC:  Chuẩn bị mẫu thử: Cân xác khoảng 25 mg cao chiết Dâm dương hoắc vào bình định mức 25 ml Thêm 20 ml methanol, siêu âm 10 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm  Điều kiện sắc ký: Hệ thống sắc ký: Hệ thống Shimadzu LC-2030C 3D plus Detector: DAD Cột: C18 Shim-pack GIST, 250 x 4,6 mm, µm Nhiệt độ cột: 30 0C Thể tích tiêm: 10 µl Tốc độ dịng: ml/phút Phát hiện: Bước sóng 245 nm Chương trình pha động định lượng đồng thời epimedin C icariin cao chiết Dâm dương hoắc Thời gian (phút) 20 20,01 40 40,01 55 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn H2 O 72 72 40 40 72 72 Acetonitril 100 % 28 28 60 60 28 28 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - Phụ lục Tiêu chuẩn sở cao khô Bách bệnh TIÊU CHUẨN NGUYÊN LIỆU SỞ Y TẾ… CÔNG TY… CAO KHÔ BÁCH BỆNH Bộ phận: Trang: Tiêu chuẩn: TCCS Mã số: Có hiệu lực từ: Ban hành theo định số… ngày … tháng … năm … A TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG Cảm quan: Bột mịn, đồng nhất, màu nâu, mùi dược liệu đặc trưng Độ ẩm: Không 5% Độ tro tồn phần: Khơng q 16% Tro khơng tan acid: Không 1,4% Giới hạn nhiễm khuẩn - Tổng số vi sinh vật hiếu khí: Khơng 104 cfu/ml - Tổng số nấm men – mốc: Không 102 cfu/ml - Escherichia coli, Staphylococcus aureus: Không có ml - Salmonella: Khơng có 10 ml - Tổng số vi khuẩn gram âm dung nạp mật: Không 102 cfu/ml Giới hạn kim loại nặng: Không phát kim loại Pb, Hg (LOD = 0,001 mg/kg) As (LOD = 0,005 mg/kg) Dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật: Khơng phát thuốc bảo vệ thực vật họ clor, phospho, cúc, carbamat (LOQ = 0,01 mg/kg) Định tính Sắc ký đồ SKLM cao khơ Bách bệnh có vết màu giá trị Rf với vết tương ứng với chuẩn eurycomanon Định lượng Hàm lượng eurycomanon không 1,1% g cao khơ BB B QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Cảm quan Kiểm tra cảm quan (thể chất, màu sắc, mùi ), cao khô sấy phun NT phải đạt yêu cầu nêu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - Độ ẩm: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.6, trang PL-203 Độ tro toàn phần: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.8, trang PL-204 Tro không tan acid: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.7, trang PL-203 Giới hạn nhiễm khuẩn: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 13.6, trang PL- 300 Giới hạn kim loại nặng: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.4.11, trang PL-200 Dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 12.17, trang PL-280 Định tính Thực theo phương pháp định tính sắc ký lớp mỏng Bản mỏng: Silica gel 60 F254 – Merck Dung môi khai triển: CH3Cl– MeOH (9 : 1) Dung dịch thử: Cân khoảng mg cao khô Mật nhân methanol 100 % bình định mức 10 ml, siêu âm 10 phút Dung dịch đối chiếu: Hòa tan mg chuẩn eurycomanon methanol 100 % bình định mức 10 ml để dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 𝜇𝑙 dung dịch thử dung dịch đối chiếu Phát hiện: Quan sát đèn UV 254 nm phun dung dịch H2SO4 10%/EtOH, sấy mỏng 105oC đến màu, quan sát ánh sáng thường Yêu cầu: Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết màu giá trị Rf với vết chuẩn sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Định lượng Mẫu thử: Cân xác khoảng 50 mg cao khơ BB vào bình định mức 25 ml Thêm 15 ml methanol, siêu âm 10 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm Mẫu chuẩn: Cân xác khoảng 0,3 mg chuẩn eurycomanon vào bình định mức 10 ml Thêm ml methanol, siêu âm 10 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm Hàm lượng (mg) eurycomanon 1,000 g cao khơ tính tốn: Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - X= 𝑆𝑡 ×𝑎 × 𝑐 ×25 ×1000 𝑆𝑐 ×𝑏×(1−ℎ) Trong đó: X : hàm lượng (mg) eurycomanon 1,000 g cao chiết St: Diện tích đỉnh mẫu thử Sc: Diện tích đỉnh mẫu chuẩn a: Nồng độ mẫu chuẩn (mg/ml) c: Hàm lượng chất chuẩn b: Khối lượng cân (mg) h: Độ ẩm cao Điều kiện sắc ký: Hệ thống sắc ký: Hệ thống Shimadzu LC-2030C 3D plus Detector: DAD Cột: C18 Shim-pack GIST, 250 x 4,6 mm, µm Nhiệt độ cột: 30 0C Thể tích tiêm: µl Tốc độ dịng: ml/phút Phát hiện: Bước sóng 245 nm Pha động: Bao gồm H3PO4 0,1 % (A) acetonitril (B) với chương trình rửa giải gradient sau: 0-20: 8,5 % B; 20,01-35: 60 % B; 35,01-45: 8,5 % B C ĐÓNG GÓI – GHI NHÃN – BẢO QUẢN Đóng gói: đóng gói bao bì kín Ghi nhãn: Nhãn rõ ràng, qui chế Bảo quản: Nơi khơ ráo, thống mát, tránh ánh nắng ., ngày tháng năm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 10 Phụ lục Tiêu chuẩn sở cao khô Dâm dương hoắc TIÊU CHUẨN NGUYÊN LIỆU SỞ Y TẾ… CÔNG TY… CAO KHÔ DÂM DƯƠNG HOẮC Bộ phận: Trang: Tiêu chuẩn: TCCS Mã số: Có hiệu lực từ: A TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG Cảm quan: Bột mịn, đồng nhất, màu nâu, mùi dược liệu đặc trưng, hút ẩm Độ ẩm: Khơng q % Độ tro tồn phần: Không 16 % Tro không tan acid: Không 1,5 % Giới hạn nhiễm khuẩn: - Tổng số vi sinh vật hiếu khí: Khơng q 104 cfu/ml - Tổng số nấm men – mốc: Không q 102 cfu/ml - Escherichia coli, Staphylococcus aureus: Khơng có ml - Salmonella: Khơng có 10 ml Tổng số vi khuẩn gram âm dung nạp mật: Không 102 cfu/ml Giới hạn kim loại nặng: Không phát kim loại Pb, Hg (LOD = 0,001 mg/kg) As (LOD = 0,005 mg/kg) Dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật: Không phát thuốc bảo vệ thực vật họ clor, phospho, cúc, carbamat (LOQ = 0,01 mg/kg) Định tính Sắc ký đồ SKLM cao khơ Dâm dương hoắc có vết màu giá trị Rf với vết tương ứng với chuẩn epimedin C icariin Định lượng Hàm lượng epimedin C icariin khơng 25 2,5 mg g cao khô Dâm dương hoắc B QUY TRÌNH THỬ NGHIỆM Cảm quan: Kiểm tra cảm quan (thể chất, màu sắc, mùi ), cao khô sấy phun NT phải đạt yêu cầu nêu Độ ẩm: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.6, trang PL-203 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 11 Độ tro toàn phần: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.8, trang PL-204 Tro không tan acid: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.7, trang PL-203 Giới hạn nhiễm khuẩn: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 13.6, trang PL- 300 Giới hạn kim loại nặng: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 9.4.11, trang PL-200 Dư lượng hóa chất bảo vệ thực vật: Tiến hành theo DĐVN V, phụ lục 12.17, trang PL-280 Định tính Thực theo phương pháp định tính sắc ký lớp mỏng Bản mỏng: Silica gel 60 F254 – Merck Dung môi khai triển: EA – H2O – HCOOH (8:1:1) Dung dịch thử: Cân khoảng mg cao khơ Dâm dương hoắc methanol 100 % bình định mức 10 ml, siêu âm 10 phút, lọc qua màng lọc 0,22 μm Dung dịch đối chiếu: Hòa tan mg chuẩn epimedin C icariin methanol 100 % bình định mức 10 ml để dung dịch có nồng độ 0,1 mg/ml Tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 𝜇𝑙 dung dịch thử dung dịch đối chiếu Phát hiện: Quan sát đèn UV 254 nm phun dung dịch H2SO4 10%/EtOH, sấy mỏng 105oC đến màu, quan sát ánh sáng thường Yêu cầu: Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải có hai vết màu giá trị Rf với hai vết chuẩn sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Định lượng Mẫu thử: Cân xác khoảng 25 mg cao khơ DDH vào bình định mức 25 ml Thêm 20 ml methanol, siêu âm 10 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm Mẫu chuẩn: Cân xác khoảng 3,0 mg epimedin C 0,3 mg icariin vào bình định mức 10 ml Thêm ml methanol, siêu âm 10 phút, để nguội đến nhiệt độ phòng, bổ sung methanol đến vạch, lắc dung dịch chuẩn A Hút xác 1,000 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL - 12 ml dung dịch chuẩn A vào bình định mức 10 ml, thêm methanol đến vạch, lắc đều, lọc qua màng lọc 0,22 μm Hàm lượng (mg) epimedin C icariin 1,000 g cao khơ tính tốn: X= 𝑆𝑡 ×𝑎 × 𝑐 ×25 ×1000 𝑆𝑐 ×𝑏×(1−ℎ) Trong đó: X : hàm lượng (mg) epimedin C/icariin 1,000 g cao chiết St: Diện tích đỉnh mẫu thử Sc: Diện tích đỉnh mẫu chuẩn a: Nồng độ mẫu chuẩn (mg/ml) c: Hàm lượng chất chuẩn b: Khối lượng cân (mg) h: Độ ẩm cao Điều kiện sắc ký Hệ thống sắc ký: Hệ thống Shimadzu LC-2030C 3D plus Detector: DAD Cột: C18 Shim-pack GIST, 250 x 4,6 mm, µm Nhiệt độ cột: 30 0C Thể tích tiêm: 10 µl Tốc độ dịng: ml/phút Phát hiện: Bước sóng 270 nm Pha động: Bao gồm nước (A) acetonitril (B) với chương trình rửa giải gradient sau: 0-20: 28 % B; 20,01-40: 60 % B; 40,01-55: 28 % B C ĐĨNG GĨI – GHI NHÃN – BẢO QUẢN Đóng gói: đóng gói bao bì kín Ghi nhãn: Nhãn rõ ràng, qui chế Bảo quản: Nơi khô ráo, thoáng mát, tránh ánh nắng ., ngày tháng năm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... Điều chế cao khô sấy phun BB 62 3.4.2 Điều chế cao khô sấy phun DDH .65 3.5 QUY TRÌNH ĐIỀU CHẾ CAO KHÔ SẤY PHUN BB VÀ CAO KHÔ SẤY PHUN DDH 67 3.5.1 Quy trình điều chế cao khô sấy. .. quy trình điều chế cao Dâm dương hoắc (Extractum Herba Epimedii) cao Bách bệnh (Extractum Radix Eurycomae longifoliae) phương pháp sấy phun? ?? thực với mục tiêu cụ thể sau: Xây dựng quy trình điều. .. sấy phun BB 67 3.5.2 Quy trình điều chế cao khơ sấy phun DDH .71 3.6 XÂY DỰNG TCCS CAO KHÔ BB VÀ CAO KHÔ SẤY PHUN DDH 74 3.6.1 Xây dựng TCCS cao khô sấy phun BB .74 3.6.2 Xây dựng