Xây dựng mô hình gây ức chế mọc lông bằng cyclophosphamid

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC XÂY DỰNG MƠ HÌNH GÂY ỨC CHẾ MỌC LƠNG BẰNG CYCLOPHOSPHAMID Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: KHOA DƢỢC, ĐH Y DƢỢC TP HCM Chủ trì nhiệm vụ: PGS TS HUỲNH NGỌC TRINH Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ XÂY DỰNG MƠ HÌNH GÂY ỨC CHẾ MỌC LƠNG BẰNG CYCLOPHOSPHAMID (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày ) Cơ quan chủ quản Chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) (ký tên) Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT V DANH MỤC CÁC HÌNH VI DANH MỤC CÁC BẢNG VII ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CHU KỲ MỌC LƠNG (TĨC): 1.2 SỰ MẤT LƠNG (TĨC) DO HĨA TRỊ 1.3 MƠ HÌNH GÂY RỤNG LƠNG BẰNG CHẤT HĨA TRỊ (CHEMOTHERAPY-INDUCED ALOPECIA): 1.3.1 Các mơ hình gây rụng lơng: 1.3.2 Các phƣơng pháp đánh giá lông, mọc lông CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 2.1.1 Động vật thí nghiệm: 2.1.2 Hóa chất, thuốc đối chứng: 2.1.3 Dụng cụ thí nghiệm: 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: 2.2.1 Khảo sát tác dụng gây ức chế mọc lông cyclophosphamid 2.2.2 Khảo sát tác dụng kích thích mọc lơng minoxidil 2.2.3 Các tiêu đánh giá 10 2.2.4 Xử lý số liệu 15 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 16 3.1 TÁC DỤNG GÂY ỨC CHẾ MỌC LÔNG CỦA CYCLOPHOSPHAMID 16 3.1.1 THỂ TRẠNG CHUỘT 16 3.1.2 Đánh giá trình trạng mọc lơng đại thể chuột: 17 3.1.3 Số chân lông đại thể chuột: 18 3.2 TÁC DỤNG KÍCH THÍCH MỌC LÔNG CỦA MINOXIDIL 19 3.2.1 Thể trạng chuột: 19 3.2.2 Đánh giá trình trạng mọc lơng đại thể chuột: 20 3.2.3 Số chân lông đại thể chuột: 21 3.2.4 Đánh giá vi phẫu: 21 CHƢƠNG BÀN LUẬN: 23 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 25 KẾT LUẬN 25 ĐỀ NGHỊ 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt CP Cyclophosphamide DHT 5α-dihydrotestosteron FDA Food and Drug Aministration Cục quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ IP Intraperitoneal injection Tiêm phúc mạc IV Intravenous injection Tiêm tĩnh mạch SC Subcutaneous Tiêm da DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Chu kỳ phát triển sợi lơng (tóc) Hình 2.1 Chuột điểm 11 Hình 2.2 Chuột điểm 11 Hình 2.3 Chuột điểm 12 Hình 2.4 Chuột điểm 12 Hình 2.5 Chuột điểm 13 Hình 2.6 Vi phẫu nang lơng soi kính hiển vi vật kính 10x 14 Hình 3.1 Mức độ mọc lông chuột khảo sát tác dụng ức chế mọc lông cyclophosphamid theo liều 17 Hình 3.2 Mức độ mọc lông chuột khảo sát tác dụng kích thích mọc lơng Minoxidil 20 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1.Các thuốc gây rụng tóc mức độ gây rụng tóc Bàng 3.1 Tỷ lệ chuột sống sót trọng lượng chuột khảo sát liều cyclophosphamid 16 Bảng 3.2 Số chân lơng trung bình đại thể thử nghiệm liều cyclophosphamid 18 Bàng 3.3 Tỷ lệ chuột sống sót trọng lượng chuột khảo sát tác dụng kích thích mọc lơng minoxidil 19 Bảng 3.4 Số chân lông trung bình chuột khảo sát tác dụng minoxidil 21 Bảng 3.5 Đánh giá vi phẫu khảo sát tác dụng minoxidil 21 ĐẶT VẤN ĐỀ Mất tóc hai giới nam nữ gây ảnh hưởng lên hình ảnh thân, mối quan hệ xã hội, bạn bè gia đình Việc điều trị tóc đơi gặp nhiều khó khăn hiệu không đủ hay lựa chọn thuốc cịn giới hạn [33] Trong nhiều năm qua, có nhiều cơng trình nghiên cứu thực để hiểu rõ bệnh học, phương pháp điều trị bệnh lý tóc, chưa đạt hiệu khả quan Bên cạnh tóc nam giới nữ giới di truyền, hay tuổi tác, tóc tác dụng phụ thuốc dùng điều trị ung thư quan tâm lớn Các thuốc xạ trị, hóa trị bệnh ung thư gây tóc nghiêm trọng như: cyclophosphamid, methotrexat, etoposid… Hiện có minoxidil, finasterid dạng bôi FDA công nhận sử dụng cho nam nữ bị tóc [14] Tuy nhiên việc sử dụng thuốc cịn nhiều tác dụng khơng mong muốn phản ứng dị ứng thuốc chủ yếu da minoxidil, cịn finasterid gây ảnh hưởng đến hoạt động tình dục [35] Nhu cầu phát triển nguồn thuốc an toàn, hiệu hay phương pháp điều trị khác góp phần ngăn ngừa tình trạng rụng tóc, tóc bệnh nhân, bệnh nhân điều trị ung thư, hóa trị vấn đề cấp bách nay; từ xuất phát u cầu phát triển mơ hình dược lý thực nghiệm để đánh giá tác động ức chế rụng tóc chế phẩm khác Do đó, đề tài “Xây dựng mơ hình gây ức chế mọc lơng cyclophosphamid“ thực với nội dung sau: + Khảo sát tác dụng gây ức chế mọc lông cyclophosphamid + Khảo sát tác dụng kích thích mọc lông minoxidil CHƢƠNG - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CHU KỲ MỌC LƠNG (TĨC): Các sợi lông phát triển chu kỳ không đồng với người Mỗi sợi lông vào chu kỳ phát triển thời điểm khác Chu trình mọc lông xuyên suốt pha phát triển khác nhau: anagen, catagen telogen (Hình 1.1) Ở da đầu người trưởng thành, có khoảng 80 – 90% tóc pha anagen, 10 – 20% tóc pha telogen – 2% tóc pha catagen [7],[24] Tóc cũ Biểu bì Tuyến bã nhờn Cơ lơng Tóc Hành nang TB mầm Củ nang Trung bì (Pha tăng trưởng, 6-8 năm) Túi tóc tách từ TB mầm Túi Sự thối hóa nang thấp TB nhú (Pha thối hóa, 2-3 tuần) (Pha nghỉ, 1-3 tháng) Hình 1.1 Chu kỳ phát triển sợi lơng (tóc)[45] Pha anagen pha tăng trưởng, diễn nang lơng bắt đầu q trình mọc lông Pha kéo dài khác vùng khác nhau, da đầu, pha anagen kéo dài từ đến năm, nơi khác lông mày hay lông mi cần vài tháng để phát triển Đây pha có mặt phần nang thấp Để báo hiệu bắt đầu giai đoạn anagen, tín hiệu tế bào nhú gửi đến tế bào gốc biểu mơ chỗ phình to nang lơng Một tế bào gốc kích thích, phần nang thấp nang lơng phát triển xuống dưới, tạo thành hành nang lông xung quanh tế bào nhú Bây giờ, tế bào nhú báo hiệu tế bào gốc hành nang lông để sinh sôi nảy nở, phân tách phát triển lên trên, tạo thành sợi tóc Pha catagen cịn gọi giai đoạn chuyển tiếp thối hóa Nó ngắn ba pha kéo dài vài tuần Trong giai đoạn này, phân chia tế bào tế bào gốc chấm dứt phần nang thấp nang lơng bắt đầu thối hóa Cuối cùng, phần nang thấp nang lơng khơng cịn tồn tế bào nhú di chuyển lên để tiếp xúc với chỗ phình to lần Trong q trình này, túi lơng (tóc) (club- hair) hình thành với nút màu trắng, cứng cuối Cuối cùng, pha telogen, biết pha nghỉ Túi lơng (tóc), thực chất chết, giữ lại Trên da đầu, túi lơng (tóc) thường giữ lại khoảng 100 ngày Sau đó, sợi lơng (tóc) phóng thích rụng để pha anagen bắt đầu lại lần với sợi lơng (tóc) [24],[46] 1.2 SỰ MẤT LƠNG (TĨC) DO HĨA TRỊ Mất lơng (tóc) bị gây bệnh tật, thiếu hụt chất dinh dưỡng, tuổi tác cân hormon Bình thường ngày, khoảng 50 – 100 sợi lơng (tóc) bị [5],[22] Mất tóc bệnh lý số lượng tóc bị rụng lớn gây hậu tóc bị mỏng, thưa thớt hay tóc vùng hay nhiều vùng da đầu Mất tóc hóa trị thường bắt đầu khoảng – tuần sau chu kỳ hóa trị Tuy nhiên tình trạng hồi phục tự nhiên sau – tháng điều kiện bình thường Nhưng khoảng 65% trường hợp tóc mọc lại có màu xám và/hoặc thay đổi cấu trúc kết cấu tóc; bên cạnh đó, tỉ lệ tóc mọc lại giảm rõ rệt [53] Sự xuất mức độ nghiêm trọng tóc hóa trị phụ thuộc vào liều, thời điểm dùng thuốc tác nhân khác nhau, cyclophosphamid tác nhân gây rụng tóc mạnh thường sử dụng nghiên cứu động vật thí nghiệm (Bảng 1.1) CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Tác dụng gây ức chế mọc lông cyclophosphamid 3.1.1 Thể trạng chuột Tỉ lệ chuột sống sót trọng lượng chuột theo thời gian thử nghiệm trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Tỷ lệ chuột sống sót trọng lượng chuột khảo sát liều cyclophosphamid Tỉ lệ sống sót (%) Ngày Lô n Sinh lý 100 150 mg/kg 13 100 175 mg/kg 13 76,92 200 mg/kg 13 84,62 23,81 ± 2,28 23,47 ± 3,43 26,29 ± 3,47 27,36 ± 2,60 Trọng lượng (g) Ngày 29,25 ± 2,47 25,74 ± 4,50 25,49 ± 2,95(*) 24,25 ± 2,91(*) Ngày Ngày Ngày 15 23 28 31,97 34,43 35,71 ± 3,47 ± 4,96 ± 4,26 28,55 31,19 31,91 ± 4,39 ± 5,43 ± 6,43 28,39 31,06 34,27 ± 4,64 ± 6,97 ± 2,92 26,28 31,21 32,17 ± 3,55 ± 4,87 ± 6,38 (*) p 0,05 Tuy nhiên so với lơ tiêm cyclophosphamid cịn lại, lơ cyclophosphamid 175mg/kg khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô 150mg/kg 200mg/kg p = 0,049 p = 0,008 3.1.3 Số chân lông đại thể chuột: Số chân lơng chuột trung bình đại thể lô chuột thể bảng 3.2 Bảng 3.2 Số chân lơng trung bình đại thể thử nghiệm liều cyclophosphamid Lô Ngày n Số chân lông Sinh lý 150mg/kg 175mg/kg 200mg/kg 169,75 ± 18,83 Ngày 23 n Số chân lông 142,75 ± 25,76 13 165,69 ± 24,72 10 159,80 ± 33,63 11 156,55 ± 26,54 Vào cuối thử nghiệm, số lượng chân lông lô tiêm cyclophosphamid giảm dần từ liều 200 mg/kg đến liều 150 mg/kg khác biệt không mang ý nghĩa thống kê lô tiêm cyclophosphamid lô sinh lý (p > 0,05) Như liều cyclophosphamid khảo sát có tác động ức chế mọc lơng chuột Cyclophosphamid thể tác động ức chế mọc lông mạnh thời điểm ngày 7-8 kéo dài đến ngày 13; sau chuột phục hồi dần từ ngày thứ 15 cuối giai đoạn thử nghiệm Ngoài ra, thử nghiệm chuột đực cho kết tương tự (không thể báo cáo) Trong liều này, liều CYP 175mg/kg thể tác động ức chế mọc lông ổn định nhóm chuột đực chuột cái; ngồi lơ 200mg/kg thể tác động nhóm chuột đực, nhóm chuột khơng khác biệt với liều 150mg/kg Vì thế, chúng tơi chọn liều CYP 175mg/kg để thực khảo sát tác động kích thích mọc lơng minoxidil 3.2 Tác dụng kích thích mọc lơng minoxidil 3.2.1 Thể trạng chuột: Tỉ lệ chuột sống sót trọng lượng chuột theo thời gian thử nghiệm trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3 Tỷ lệ chuột sống sót trọng lượng lơ đánh giá đáp ứng với minoxidil Lơ n Tỉ lệ sống sót (%) Sinh lý 20 100 Bệnh 20 100 Minoxidil 20 100 Trọng lượng (g) Ngày 21,69 ± 1,96 23,38 ± 1,23 24,75 ± 1,46 Ngày 22,91 ± 1,42 20,17 ± 2,76 20,64 ± 2,22 Ngày 10 27,61 ± 1,53 25,30 ± 1,90 24,07 ± 3,13 Ngày 15 28,00 ± 1,55 26,23 ± 2,17 26,25 ± 4,97 Ngày 23 34,92 ± 1,28 31,49 ± 5,45 33,86 ± 8,13 Tất chuộtở lơ sống sót suốt thời gian thử nghiệm Ở ngày đầu thử nghiệm, tương tự lô bệnh, trọng lượng chuột lô minoxidil giảm so với ban đầu Tuy nhiên vào ngày sau, trọng lượng chuột lô minoxidil tăng cân nhanh khơng có khác biệt có ý nghĩa thống kê với lô sinh lý (p > 0,05) Qua quan sát, chuột lơ minoxidil kích động so với lơ bệnh; chuột ăn uống bình thường Chuột có giai đoạn rụng lơng thưa thớt so với chuột lơ bệnh Khi mọc lơng lại, chuột có kiểu mọc giống với lô bệnh, lông mọc lại từ đầu xuống đuôi từ vùng cạo lan vùng ngồi rìa 3.2.2 Đánh giá trình trạng mọc lông đại thể chuột: Điểm đánh giá tình trạng mọc lơng trung bình lơ chuột đại thể thể hình 3.2 Bệnh Sinh lý Đối chứng Minoxidil 3.5 Mức độ mọc lông 2.5 1.5 ** 0.5 0 -0.5 10 13 15 17 23 Ngày (**) p