Bài viết trình bày về qui trình phân lập thành phần hóa học của lá cây Dó Bầu được hái ở tỉnh Bình Phước; quy trình thể hiện rõ từng giai đoạn của quá trình nghiên cứu từ xử lí lá tươi đến khi thành cao.
Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 52 Khảo sát sơ qui trình phân lập thành phần hóa học Dó Bầu (Aquilaria crassna Pierre) Ngô Thị Châu Khoa Dược, Đại Học Nguyễn Tất Thành ntchau@ntt.edu.vn Tóm tắt Bài báo trình bày qui trình phân lập thành phần hóa học Dó Bầu hái tỉnh Bình Phước Qui trình thể rõ giai đoạn trình nghiên cứu từ xử lí tươi đến thành cao Từ kg tươi sau phơi khô sấy thu 2,5 kg khơ, trích lần với metanol phương pháp đun hồn lưu, lần trích Tồn dịch trích đem quay áp suất thấp thu cao metanol Cao khô metanol trích với acetat etyl thu cao acetat etyl Từ cao acetat etyl thực sắc kí cột silicagel với nhiều hệ giải li thu phân đoạn từ C1- C5, sau sắc kí cột phân đoạn C2 với nhiều hệ dung li khác qua nhiều phân đoạn thu chất tinh khiết CC2 (5 mg) Kết thực nghiệm thu qui trình phân lập thành phần hóa học Dó Bầu qua giai đoạn Dựa vào số liệu phổ 1H, 13C NMR, phổ 2D-NMR HSQC, HMBC kết hợp với tài liệu, cấu trúc hợp chất đề nghị 7-O-metilapigenin 5-O-[β –D-xylopyranosyl-(1→6)- β-D-glucopyranoside] ® 2020 Journal of Science and Technology - NTTU Giới thiệu Cây Dó Bầu có tên khoa học Aquilaria crassna Pierre thuộc họ Trầm Hương (Thymelacaceae) Trên giới chi Aquiraria có khoảng 15 lồi, phân bố chủ yếu khu vực nhiệt đới từ Ấn Độ đến Đông Nam Á miền Nam Trung Quốc Ở nước ta có loài: A.crassna, A banaensis Phamh, A.baillonii Pierre.ex Lecomte A ruginosa Cây Dó Bầu mọc vùng núi hướng phía có gió biển nên ta thường gặp vùng phía Đơng Trường Sơn phía Tây, rừng rậm nhiệt đới Dó Bầu loại gỗ xanh, cao (15 - 30) m, đường kính thân khoảng (1 - 1,5) m, thân thẳng Lá đơn, mọc cách, có hình bầu dục, cuống dài (4 – 6) mm, kích thước (8 – 15) cm x (2,5 – 9) cm Đối với chi Aquilaria người ta tìm thấy lồi, lồi với trịn Dó Bầu, loại cịn lại nhọn gọi Dó me Cả hai loại cho chất lượng trầm Cây Dó Bầu có khả hình thành loại sản phẩm đặc biệt trầm hương kì nam có giá trị thương mại cao Những nghiên cứu trước cho biết khơng phải thân Dó Bầu có trầm kì nam Chỉ có số có bệnh chứa trầm phần lõi thân trình xảy sống [1] Các khối trầm thường tạo thành thân cành lớn, chúng Đại học Nguyễn Tất Thành Nhận 16.08.2019 Được duyệt 28.09.2020 Cơng bố 30.10.2020 Từ khóa Dó Bầu, cao từ Dó Bầu, thành phần hóa học Dó Bầu, qui trình phân lập thành phần hóa học Dó Bầu kết q trình chuyển hóa bệnh lí nơi bị bệnh, bị thương Có giả thuyết rằng, trước tiên bị nấm gây bệnh tại chỗ bị thương làm cho bị suy yếu, tiếp nấm thâm nhập vào tạo thành khối trầm Tinh dầu trầm có giá trị đặc biệt, dùng công nghệ chế biến hương liệu Mùi trầm vừa phảng phất mùi tinh dầu đinh hương, vừa có mùi thơm hoa hồng Các hóa mĩ phẩm có chứa tinh dầu ưa chuộng [2] Trong y học cổ truyển nước ta, trầm hương coi vị thuốc quí hiếm, có vị cay, tính ơn Được dùng để chữa bệnh đau ngực, đau bụng, nôn mửa, tiêu chảy, hen suyễn, lợi tiểu, giảm đau, trấn tỉnh, hạ sốt khó thở [3] Dăm gỗ trầm sử dụng vào nhiều mục đích khác nhau, đặc biệt chữa bệnh thấp khớp, bệnh đậu mùa, bệnh đau bụng dùng cho phụ nữ sau sinh [3] Nước sắc từ gỗ trầm có tác dụng kháng khuẩn, đặc biệt với loại khuẩn Mycobacterium tuberculosis Shigella flexneri [4,5] Cây Dó Bầu mà sản phẩm trầm hương kì nam có giá trị kinh tế cao đồng thời cịn có cơng dụng chữa bệnh tốt Thực nghiệm Sắc kí mỏng silicagel pha thường Merk, Kielselgel 60 F254, 250 μm Thuốc thử hình mỏng là: acid Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 53 H2SO4 đậm đặc Dung môi thực nghiệm dung môi chưng cất: acetat etyl (780C), eter dầu hỏa 600C - 900C, metanol 640C - 650C, cloroform 610C - 620C Các hóa chất sử dụng thuộc hãng Xilong Scientific, Trung Quốc 2.1 Xử lí mẫu Lá Dó Bầu tươi thu hái Lộc Ninh, tỉnh Bình Phước Sau phơi sấy khoảng 700C đến khối lượng khơng đổi Đem nghiền nhỏ dùng cho thực nghiệm 2.2 Tiến hành thực nghiệm Từ kg tươi sau phơi khô sấy thu 2,5 kg khơ, trích lần với metanol phương pháp đun hồn lưu, lần trích Tồn dịch trích đem quay áp suất thấp thu 100 g cao metanol Cao khơ metanol trích với acetat etyl thu 18 g cao acetat etyl Sơ đồ Qui trình thực nghiệm phân lập hợp chất CC2 Nội dung phương pháp nghiên cứu Biện luận Tham khảo tài liệu [5,6,7], nhiều dẫn xuất chromon phân lập từ trầm hương từ vùng Kalimanta Hợp chất chrome 2-(2-4’-methoxyphenyletyl) chromone phân lập Keiji Hashimoto Năm 2007 Nguyễn Thị Thùy Trang phân lập ba hợp chất Stigmast-4-en-3-on , acid 3,24-o,o-isopropiliden-24- hidroxioleanolic 5,7dihidroxi-3’,4’-dimetoxiflavon từ thân Dó Bầu Khảo sát cao dung môi etylacetat chưa nghiên cứu, cao dung mơi etyl acetat chọn để tiến hành khảo sát Từ cao etyl acetat thực sắc kí cột silicagel với hệ dung mơi eter dầu hỏa aetatetyl với độ phân cực tăng dần thu năm phân đoạn từ C1- C5, sau sắc kí cột phân đoạn C2 (2,30 g) với nhiều hệ dung li khác cloroform, metanol nước với tỉ lệ cloroform (9): (metanol (9,5): nước (0,5) (1)) qua nhiều phân đoạn thu chất tinh khiết CC2 (5 mg) Hợp chất CC2 phân lập dạng tinh thể màu vàng tan metanol Sắc kí mỏng cho vết hấp thu UV 254, hình H2SO4 đậm đặc cho vết trịn màu vàng Phổ 1H-NMR chất CC2 cho mũi cộng hưởng với diện nhóm -OCH3 gắn vòng benzen δ 3,902 ppm (3H, s, 7-OCH3); Ở vùng trường thấp 6-8 ppm xuất tín hiệu hai vịng benzen Vịng thứ mang nhóm vị trí 1, 2, 3, 5, hai proton cịn lại ghép meta với [δ 6,86 ppm (1H, d, J=2.0, H-6); 7,02 ppm (1H, d, J=2.0, H-8)] Vòng thứ hai mang nhóm vị trí 1, , bốn proton lại chia thành cặp đối xứng ghép orto với [δ 7,93 ppm (2H, d, J =2.0, H-2’, 6’); δ 6,92 ppm (2H, d, J=2, H-3’, 5’)] Một proton olefin δ 6,70 ppm (s, 1H, H-3), hai proton anomer hai đơn vị đường: -glucose δ 4,80 ppm (1H, d, J=7,5), đường - xylose δ 4,19 ppm (1H, d, J=7.5) Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 54 Phổ 13C –DEPT NMR chất CC2 cho mũi cộng hưởng ứng với diện 27 carbon có carbon thứ cấp, carbon -CH3, carbon -CH2, 16 carbon CH Ở vùng trường thấp có tín hiệu nhóm carbonyl liên hợp δ 177 ppm ( s, C-4); carbon hương phương liên kết với oxi δ 155-165 ppm Ở vùng từ δ 60- 80 ppm thấy xuất nhóm tính hiệu diện đơn vị đường glucose xylose tín hiệu carbon anomer đường glucose δ 103,5 ppm đường xylose δ 104,4 ppm Từ kiện cho thấy hợp chất CC2 flavonoid có khung apigenin mang nhóm metil đơn vị đường -glucose - xylose Phổ HMBC CC2 cho tín hiệu tương tác H-3 với C-2, C-4, C-10, C-1’ ; H-6 với C-5, C-7, C-8, C-10; H-8 với C-6, C-7, C-9, C-10; H-2’,6’ H-3’,5’ tương tác với C-4 Ngồi cịn có tương tác proton nhóm CH3O- C-7, proton anomer đường glucose H-1’’ C-5, proton anomer đường xylose C-6’’ Từ xác định tất tín hiệu carbon, proton cách liên kết khung apigenin phần đường Bảng Số liệu phổ DMSO Vị trí H 13 C-NMR CC2 dung môi δH (ppm) δC Tương quan HMBC 161,4 6,70 (s, 1H) 105,8 6,86 (d, 1H, J=2.0) 177,0 158,1 102,8 C-4, C-10, C1’, C-2 C-7, C-8, C-10, 10 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 7-OCH3 1’’ 2’’ 3’’ 4’’ 5’’ 6’’ 1’’’ 2’’’ 3’’’ 4’’’ 5’’’ 163,6 7,02 (d, 1H, J=2) 7,93 (d,1H, J= 2) 6,92 (d, H, J= 2) 6,92 (d, H, J= 2) 7,93(d, J= 2) 3,90 (s, 3H) 4,80 (1H, d, J=7,5) 2,97 3,11 (t, J= 9.0) 3,27 (t, J = 9.0) 3,30 m 3,65(dd, J= 11,0, J= 5,6) 4,19 (1H, d, J= 7,5) 3,56 (t, J = 9) 3,23 m 3,02 m 3,68 m 158,5 109,1 121,1 128,2 116,0 160,9 116,0 128,2 56,18 103,5 73,4 76,6 69,5 75,6 C-6, C-7, C-9, C-10 C-4’, C-6’ C-1’, C-5’ C-1’, C-3’ C-2’, C-4’ C-7 C-5 68,7 104,4 73,4 75,9 69,8 65,6 C-6’’ Từ phổ NMR chiều hai chiều, kết hợp với tài liệu đề nghị chất CC2 7-O-metilapigenin 5-O-glucopyranoside có cấu trúc sau: Hình Cấu trúc hóa học tương tác hóa học CC2 Đại học Nguyễn Tất Thành 96,5 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 55 Kết luận Như vậy, đề tài “Khảo sát sơ qui trình phân lập thành phần hóa học Dó Bầu” thu qui trình phân lập thành phần hóa học từ Dó Bầu Một hợp chất CC2 phân lập dạng tinh thể màu vàng tan metanol.Cấu trúc hợp chất CC2 xác định dựa vào số liệu phổ 1H, 13C NMR, phổ 2D-NMR HSQC, HMBC kết hợp với tài liệu cấu trúc đề nghị hợp chất 7-O-metilapigenin 5-O-glucopyranoside Đề tài tiếp tục tiến hành phân lập hợp chất tinh khiết từ phân đoạn khác thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ Quĩ phát triển Khoa học Công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành, mã số đề tài 2017.01.24/HĐ-KHCN Tài liệu tham khảo Đỗ Tất Lợi Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học Kĩ thuật Hà Nội, 556- 558 (1995) Quan Le Tran, Qui Kim Tran, Kyoji Kouda, Nhan Trung Nguyen, Yuikiko Maruyama, Ikuo Saika Shigetodhi Kadota, J Nat.Med 20, 162-169 (2003 ) Lã Đình Mỡi, Tài nguyên thực vật tinh dầu Việt Nam, NXB Nông nghiệp, Tập 1, 286-293 (2001) Jianghong Jang, Weiping Wang, Feng Luan, Xingguochen, Int J Biol.Macromo 37, 85-91 (2005) Yasuo Shimada, Takae Tominaga, Tenji Konishi and shiu Kiyosawa, Chem.Pharm Bull., 30, 3791-3795 (1982) Tsumotu Nakanishi, Etsuko Yamagata, Kaisuke Yoneda, Tsukasa Nagashima, Ichiro Kawasaki, Toshi Yoshida, Hideo Mori and Iwao Miura, Phytochemistry, 23, 2066-2067 (1984) Keiji Hashimoto, Sachiko Nakahara, Takehisa Inoue, Yoshio Sumida, Musuko Takahashi and Yoshiro Masada, Chem Pharm Bull., 33, 5088-5091 (1985) Nguyễn Thị Kim Phụng, Hoạt tính sinh học hợp chất hữu tự nhiên, Học phần cao học chuyên ngành Hóa hữu cơ, Đại học Khoa học Tự nhiên, 2000-2001 Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà Xuất Bản Y học, 1997 Procedure for Isolation of Chemical Composition from Do Bau Leaves (Aquilaria crassna Pierre leaves) Ngo Thi Chau Faculty of Pharmacy, Nguyen Tat Thanh University ntchau@ntt.edu.vn Abstract The paper presents the chemical compound isolation procedure from Do Bau leaves that were picked in Binh Duong province 2,5kg of dried leaves was collected from 7kg fresh leaves Next, the dried leaves were extracted three times with methanol via reflux method in two hour and then all extracted solution went through low pressure evaporation to get methanol gel This methanol gel was then extracted using ethyl acetate to get the ethyl acetate gel that was then studied using column chromatography (on silica gel) with different polarization solutions Finally, C1-C5 segments were obtained C2 segment was selected for study by column chromatography to get the compound CC2 The compound structure was determinized through analysis of their NMR-spectroscopic data with 1H, 13C NMR, 2D-NMR HSQC and HMBC The compound was named 7-O-metilapigenin 5-O-[β –D-xylopyranosyl-(1→6)- β-D-glucopyranoside] Keywords Do bau, Do bau leaf, chemical composition of Do Bau, chemical compound isolation procedure from Do Bau leaves Đại học Nguyễn Tất Thành ... trúc hóa học tương tác hóa học CC2 Đại học Nguyễn Tất Thành 96,5 Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 11 55 Kết luận Như vậy, đề tài ? ?Khảo sát sơ qui trình phân lập thành phần hóa học Dó Bầu? ?? thu qui. .. sát sơ qui trình phân lập thành phần hóa học Dó Bầu? ?? thu qui trình phân lập thành phần hóa học từ Dó Bầu Một hợp chất CC2 phân lập dạng tinh thể màu vàng tan metanol.Cấu trúc hợp chất CC2... tiến hành phân lập hợp chất tinh khiết từ phân đoạn khác thử hoạt tính sinh học hợp chất phân lập Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ Quĩ phát triển Khoa học Công nghệ - Đại học Nguyễn Tất Thành,