Phân lập và tuyển chọn một số chủng vi khuẩn chuyển hóa nitơ ứng dụng sản xuất chế phẩm vi sinh dùng xử lý chất thải chăn nuôi

Phân lập và tuyển chọn một số chủng vi khuẩn chuyển hóa nitơ ứng dụng sản xuất chế phẩm vi sinh dùng xử lý chất thải chăn nuôi Phân lập và tuyển chọn một số chủng vi khuẩn chuyển hóa nitơ ứng dụng sản xuất chế phẩm vi sinh dùng xử lý chất thải chăn nuôi luận văn tốt nghiệp thạc sĩ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CHUYỂN HÓA NITƠ, ỨNG DỤNG SẢN XUẤT CHẾ PHẨM VI SINH DÙNG XỬ LÝ CHẤT THẢI CHĂN NUÔI Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS PHẠM HUỲNH NINH Sinh viên thực MSSV: 1151110352 : LÊ ANH THY Lớp: 11DSH04 TP Hồ Chí Minh, năm 2015 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi tên: Lê Anh Thy Sinh ngày 16 tháng 09 năm 1993 Sinh viên lớp: 11DSH04 - Công Nghệ Sinh Học - Trường ĐH Kỹ Công Nghệ TP Hồ Chí Minh Tơi xin cam đoan: Đề tài “PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CHUYỂN HÓA NITƠ, ỨNG DỤNG SẢN XUẤT CHẾ PHẨM VI SINH XỬ LÝ CHẤT THẢI CHĂN NUÔI” Tiến sĩ Phạm Huỳnh Ninh hướng dẫn đề tài riêng Các số liệu, kết luận văn tốt nghiệp trung thực chưa công bố cơng trình luận văn trước Những thơng tin tham khảo khóa luận trích dẫn cụ thể nguồn sử dụng Tất nội dung đồ án nội dung đề tài yêu cầu giáo viên hướng dẫn Nếu có sai sót tơi xin chịu trách nhiệm trước hội đồng Người viết ký tên Lê Anh Thy Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cám ơn chân thành tri ân sâu sắc Thầy, Cô trường Đại học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, đặc biệt Thầy, Cô khoa Công Nghệ Sinh Học- Thực Phẩm- Môi Trường tạo điều kiện thuận lợi cho em có hội làm đồ án tốt nghiệp Để hoàn thành báo cáo tốt nghiệp thời gian qua, Phân viện, nơi tơi có điều kiện tiếp xúc với thực tế, trao dồi kinh nghiệm sống, kinh nghiệm làm việc cho thân, tất điều nhờ hướng dẫn tận tình với quan tâm bảo giúp đỡ nhiệt tình Ban lãnh đạo, chú, anh chị Phịng thí nghiệm phân tích chăn ni, Phân viện chăn nuôi Nam Bộ Ở trường nhận giúp đỡ dìu dắt q Thầy Cơ Bộ mơn Thầy Cô mang đến cho hành trang để bước vào sống Qua đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành, lòng biết ơn sâu sắc đến TS Phạm Huỳnh Ninh- Phó Bộ mơn dinh dưỡng thức ăn chăn ni chị Lê Hồng Bảo Vi, người trực tiếp hướng dẫn tơi hồn thành báo cáo Kính mong nhận ý kiến đóng góp quý Thầy Cô Chân thành cảm ơn Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC BẢNG vi GIỚI THIỆU CHƯƠNG 1.TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Chu trình nitơ 1.2 Quá trình nitrate hóa .7 1.3 Vi khuẩn Nitrosomonas 10 1.3.1 Lịch sử phát 10 1.3.2 Phân loại 10 1.3.3 Đặc điểm hình thái 11 1.3.4 Cấu trúc tế bào .12 1.4 Vi khuẩn Nitrobacter 12 1.4.1 Phân loại 12 1.4.2 Đặc điểm hình thái 12 1.5 Ứng dụng vi khuẩn nitrate hóa 13 1.5.1 Trong thủy sản .13 1.5.2 Trong chăn nuôi .14 CHƯƠNG 2.VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP 17 2.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 17 2.2 Nguồn vi sinh vật 17 2.3 Nội dung nghiên cứu 17 2.4 Vật liệu thí nghiệm .17 i Đồ án tốt nghiệp 2.4.1 Đối tượng thí nghiệm .17 2.4.2 Trang thiết bị thí nghệm 17 2.4.3 Hóa chất mơi trường thí nghiệm .18 2.5 Phương pháp 21 2.5.1 Cách lấy mẫu 21 2.5.2 Phương pháp phân lập 22 2.5.3 Phương pháp định danh 22 2.5.4 Phương pháp đo độ đục (OD) 23 2.5.5 Phương pháp xác định hàm lượng nitrite (phương pháp Griess llosvay hay Diazonium) [3] 24 2.5.6 Phương pháp xác định hàm lượng nitrate (phương pháp Salycilate)[3] 26 2.5.7 Định lượng vi sinh vật phương pháp đếm số khuẩn lạc môi trường đặc 28 2.5.8 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển vi khuẩn chuyển hóa nitơ .29 2.5.9 Lên men sản xuất chế phẩm vi sinh dùng xử lý chất thải chăn ni quy mơ phịng thí nghiệm 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Kết lấy mẫu 32 3.2 Kết phân lập, định danh 32 3.2.1 Phân lập vi khuẩn Nitrosomonas 32 3.2.2 Phân lập vi khuẩn Nitrobacter .33 3.2.3 Định danh .35 ii Đồ án tốt nghiệp 3.3 Kết định lượng nitrite, nitrate 38 3.3.1 Hàm lượng NO2– sinh chủng vi khuẩn Nitrosomonas 38 3.3.2 Hàm lượng NO3– sinh chủng vi khuẩn Nitrobacter .40 3.4 Kết khảo sát đặc tính .41 3.4.1 Kết khảo sát ảnh hưởng pH 41 3.4.2 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ muối 44 3.4.3 Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 47 3.4.4 Kết khảo sát động học trình lên men .49 3.2.4 Kết khảo sát ảnh hưởng nồng độ chất 51 3.5 Kết trình lên men sản xuất chế phẩm vi sinh dùng xử lý chất thải chăn ni quy mơ phịng thí nghiệm 54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 56 4.1 Kết luận 56 4.2 Đề nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC iii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH Hình 1 Vi khuẩn Nitrosomonas europea quan sát kính hiển vi quan học (a) (b) kính hiển vi điện tử 11 Hình Vi khẩn Nitrosomonas 11 Hình Tế bào vi khuẩn Nitrobacter winogradski quan sát kính hiển vi quang học (a) (b) kính hiển vi điện tử .13 Hình 2.1 Nơi lấy mẫu 21 Hình 3.1 Hình ảnh khuẩn lạc chủng vi khuẩn Nitrosomonas phân lập từ nước thải chuồng heo nái (nuôi con)(a-chủng S14), nước thải từ chuồng gà giống (b-chủng S18), từ phân gà giống (gà mái đẻ) (c-chủng S16) từ chế phẩm Balasa No1 (d-chủng Sba) .33 Hình 3.2 Hình ảnh khuẩn lạc chủng vi khuẩn Nitrobacter phân lập từ nước thải heo sau cai sữa (a-chủng B8) từ bùn đất đường ống từ chuồng heo thịt (b-chủng B15), nước đường ống từ chuồng thải (c-chủng B6) từ nước thải chuồng heo sinh sản (d-chủng B10) .34 Hình 3.3 Kết kiểm tra sinh hóa khả khử amonium vi khuẩn nitrite hóa 35 Hình 3.4 Tế bào Nitrosomonas sau nhuộm Gram (vật kính 100X) .36 Hình 3.5 Kết kiểm tra sinh hóa khả khử NO2– thành NO3– vi khuẩn nitrate hóa 37 Hình 3.6 Tế bào Nitrobacter sau nhuộm Gram (vật kính 100X) 38 Hình 3.7 Biểu đồ cột thể hàm lượng NO2– (mg/l) sinh chủng vi khuẩn Nitrosomonas 39 Hình 3.8 Biểu đồ cột thể hàm lượng NO3– (mg/l) sinh chủng vi khuẩn Nitrobacter 40 iv Đồ án tốt nghiệp Hình 3.9 Biểu đồ cột kết khảo sát pH thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 42 Hình 3.10 Biểu đồ cột kết khảo sát pH thích hợp cho chủng Nitrobacter B6.43 Hình 3.11 Biểu đồ cột kết khảo sát nồng độ muối thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 44 Hình 3.12 Biểu đồ cột kết khảo sát nồng độ muối thích hợp cho chủng Nitrobacter B6 46 Hình 3.13 Biểu đồ cột kết khảo sát nhiệt độ thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 .47 Hình 3.14 Biểu đồ cột kết khảo sát nhiệt độ thích hợp cho chủng Nitrobacter B6 .48 Hình 3.15 Biểu đổ khảo sát động học trình lên men chủng Nitrosomonas S18 .49 Hình 3.16 Biểu đổ khảo sát động học trình lên men chủng Nitrobacter B6 50 Hình 3.17 Biểu đồ khảo sát nồng độ chất thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 .51 Hình 3.18 Biểu đồ khảo sát nồng độ chất thích hợp cho chủng Nitrobacter B6 53 Hình 3.19 Chế phẩm sau sấy khô chủng Nitrosomonas S18 54 Hình 3.20 Chế phẩm sau sấy khơ chủng Nitrobacter B6 .55 v Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Đặc điểm số vi khuẩn điển hình thuộc nhóm nitrite hóa Bảng 1.2 Đặc điểm số vi khuẩn điển hình thuộc nhóm vi khuẩn nitrate hóa (Bergey, 1994) Bảng 2.1 Các bước thiết lập mẫu chuẩn để phân tích nitrite phương pháp Griess llovay, Diazonium .25 Bảng 2.2 Các bước thiết lập mẫu chuẩn để phân tích nitrate phương pháp Salycilate .27 Bảng 3.1 Các mẫu lấy Phân viện Chăn nuôi Nam Bộ 32 Bảng 3.2 Kết hàm lượng NO2– chủng vi khuẩn Nitrosomonas 38 Bảng 3.3 Kết hàm lượng NO3– (mg/l) chủng vi khuẩn Nitrobacter 40 Bảng 3.4 Kết khảo sát pH thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 41 Bảng 3.5 Kết khảo sát pH thích hợp cho chủng Nitrobacter B6 42 Bảng 3.6 Kết khảo sát nồng độ muối thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 .44 Bảng 3.7 Kết khảo sát nồng độ muối thích hợp cho chủng Nitrobacter B6 45 Bảng 3.8 Kết khảo sát nhiệt độ thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 47 Bảng 3.9 Kết khảo sát nhiệt độ thích hợp cho chủng Nitrobacter B6 48 Bảng 3.10 Kết khảo sát nồng độ chất thích hợp cho chủng Nitrosomonas S18 .51 Bảng 3.11 Kết khảo sát nồng độ chất thích hợp cho chủng Nitrobacter B6 52 Bảng 3.12 Các yếu tố tối ưu cho chủng vi khuẩn nitrate hóa 54 Bảng 3.13 Kết kiểm tra mật độ tế bào trước sau cấy 55 vi Đồ án tốt nghiệp GIỚI THIỆU ❖ Đặt vấn đề Ngành chăn ni phát triển việc phịng chống ô nhiễm môi trường trở nên cần thiết Khơng có nguồn nước bị nhiễm mà mơi trường khơng khí bị nhiễm loại khí CO2, H2S, NH3, khí NH3 khí chủ yếu gây khó chịu, có mùi khai Nếu tiếp xúc với nồng độ amoniac 134-140 ppm trong khơng khí gây kích ứng nặng mũi, ngứa họng, rát ngực, cần phải rời khỏi khu vực tiếp xúc; nồng độ amoniac 10.000 ppm có triệu chứng bồn chồn, tím tái, khó thở dẫn đến tử vong[21] NH3 có hại cho sức khỏe vật ni người Một phương pháp kiểm sốt nhiễm khí chăn ni dùng đệm lót sinh học Đệm lót sinh học chăn ni giúp nơng dân bảo vệ tốt mơi trường, chăn ni khơng có mùi hôi thối, rút ngắn thời gian, hạn chế bệnh tật suất cao Hiện chế phẩm vi sinh dùng đệm lót thường nhằm mục đích loại bỏ, phân hủy nhanh hợp chất hữu chứa carbon, nitơ, lưu huỳnh Các vi khuẩn Bacillus, Lactobacillus, Nitrosomonas, Nitrobacter, Thiobacillus thường sử dụng để thúc đẩy q trình nitrate hóa, phân giải tinh bột, xellulose sulfur Các vi khuẩn thực q trình oxy hóa thành phần thành sản phẩm cuối nước CO2, chuyển hóa nitơ dạng hữu vơ thành dạng khí Q trình loại bỏ nitơ chất thải diễn chủ yếu q trình ammonia hóa, nitrate hóa phản nitrate hóa Q trình khống hóa nitơ chất hữu dẫn đến tích lũy NH4+, hình thành khí độc khơng có q trình nitrate hóa Nitrosomonas, để chuyển hóa NH4+ thành NO2– Tiếp đó, NO2– chuyển hóa thành NO3– nhờ Nitrobacter Nitrate (NO3–) vi sinh vật khác (nấm men, Lactobacillus) sử dụng nguồn dinh dưỡng hay chuyển thành nitơ phân tử phát tán vào không khí nhờ tác dụng vi khuẩn phản nitrate hóa, yếm khí Pseudomonas Hiện sản phẩm vi sinh Trang Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 4.1 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Qua trình thực đề tài dựa kết thu nhận được, rút kết luận sau : - Đã phân lập tuyển chọn chủng S18 (Nitrosomonas) chủng B6 (Nitrobacter) - Các yếu tố tối ưu ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển vi khuẩn chuyển hóa nitơ: + Chủng vi khuẩn S18 (Nitrosomonas) có nhiệt độ thích hợp cho ni cấy 30oC, pH = 8, nồng độ muối NaCl 2,5 g/l, nồng độ chất g/l (NH4)2SO4 thời gian lên men tối ưu thu sinh khối cho môi trường lỏng 48 + Chủng vi khuẩn B6 (Nitrobacter) có nhiệt độ thích hợp cho nuôi cấy 30oC, pH = 8, nồng độ muối NaCl 2,5 g/l, nồng độ chất g/l NaNO2 thời gian lên men tối ưu thu sinh khối cho môi trường lỏng 48 - Sau lên men sản xuất chế phẩm vi sinh dùng xử lý chất thải chăn nuôi quy mô phịng thí nghiệm, kiểm ta mật độ tế bào sống chủng Nitrosomonas 8,6 x 107 cfu/g chủng Nitrobacter 2,65 x 106 cfu/g nằm khoảng dự kiến ban đầu đặt (106-107 cfu/g) 4.2 Đề nghị - Hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh làm chất độn chuồng bổ sung vào phân gia súc, gia cầm, tiến hành thử nghiệm bổ sung chế phẩm vi sinh làm chất độn chuồng quy mô hộ gia đình trang trại - Tiến hành kiểm tra an toàn sinh học cho chế phẩm Trang 56 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Việt Nam Hoàng Phương Hà, Trần Văn Nhị, Phạm Việt Cường, Nguyễn Thị Kim Cúc (2008) Đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn Nitrat hóa phân lập từ nước lợ ni tơm Quảng Bình Hà Tĩnh, TC NN & PTNT, số 2/2008 ThS Phạm Minh Nhựt (2014) Giáo trình giảng thực hành Các phương pháp phân tích vi sinh, Trường Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh PGS.TS Trương Quốc Phú - PGS.TS Vũ Ngọc Út Phân tích chất lượng nước, Giáo trình quản lý chất lượng nước ni trồng thủy sản, Đại học Cần Thơ, 188-193 Nguyễn Ngọc Thanh Vân (2010) Khảo sát hệ vi sinh vật kiểm sốt NH3 ni tơm, Luận văn tốt nghiệp, Trường Đại học Cơng nghệ, Tp Hồ Chí Minh Tài liệu nước Aleem, M I H., and Alexander, M (1958) Cell-free nitrification by Nitrobacter, J Bacteriol, 76, 510-514 Engel, M S., and M Alexander (1958) Growth and autotrophic metabolism of Nitrosomonas europea, J Bacteriol, 217-222 Grundmann, G L., M Neyra and P Normand (2000) High-resolution phylogenetic analysis of NO2- oxidizing Nitrobacter species using the rrs-rrl IGS sequence and rrl genes, International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 50, 1893-1898 Head, I M., Hiorns, W D., Embley, T M., McCarthy, A J & Saunders, J R (1993) The phylogeny of autotrophic ammonia-oxidizing bacteria as determined by analysis of 16S ribosomal RNA gen sequences, J Gen Microbiol, 1147-1153 John, H.G., Hendricks Bergey, David (1994) Bergey's manual of determinative bacteriology, Lippincott Williams and Wilkins, USA 10 Lewis R F., and Pramer D (1958) Isolation of Nitrosomonas in pure culture, Department of Agricultural Microbiolgy, Rutgers, The State University of New Jersey, New Brunswick, New Jersey, 526-527 Trang 57 Đồ án tốt nghiệp 11 Meiklejohn, J (1950) The isolation of Nitrosomonas europaea in pure culture, J gen Microbiol, 4, 185 12 Meincke, M., Bock, E., Kastrau, D., and Kroneck, P M H (1992) Nitrite oxidoreductase from Nitrobacter hambur-gensis: Redox centers and their catalytic role, Arch Microbiol, 158, 127-131 13 Prosser, J I., Embley, T M (2002) Cultivation-based and molecular approaches to characterisation of terrestrial and aquatic nitrifiers, Antonie Van Leeuwenhoek, 165-79 14 Purkhold, U., Pommerening-Roser, A., Juretschko, S., Schmid, M C., Koops, H.-P & Wagner, M (2000) Phylogeny of all recognized species of ammonia oxidizers based on comparative 16S rRNA and amoA sequence analysis: implications for molecular diversity surveys, Appl Environ Microbiol, 66, 5368– 5382 15 Teske, A., Alm, E., Regan, J M., Toze, S., Rittmann, B E., and Stahl, D A (1994) Evolutionary relationship among ammonia-and nitrite-oxidizing bacteria, J Bacteriol., 6623-6630 16 Watson, S W., and M Mandel (1971) Comparison of the morphology and deoxyribonucleic acid composition of 27 strains of nitrifymg bacteria, J Bacteriol 107, 563-569 17 Woese, C R., Weisburg, W G., Paster, B J., Hahn, C M., Tanner, R S., Krieg, N R., Koops, H P., Harms, H & Stackebrandt, E (1984 b) The phylogeny of the purple bacteria : the beta- subdivision, Systematic and Applied Microbiology, 327336 Tài liệu internet 18 Chất lượng không khí – Phương pháp xác định Đioxit nitơ đo quang với thuốc thử Griess, Tập đồn hóa chất Việt Nam, 8/2015, http://www.vinachem.com.vn/TIEU_CHUAN/TCN/104-97.htm 19 Nguyễn Lân Dũng Nhuộm Gram (phương pháp Hucker cải tiến), 8/2015, http://voer.edu.vn/c/nhuom-gram-phuong-phap-hucker-caitien/9b2ffb8d/a037c843# Trang 58 Đồ án tốt nghiệp 20 Nguyễn Lân Dũng Tuần hoàn sinh địa hoá học nguyên tố, 8/2015, http://voer.edu.vn/m/tuan-hoan-sinh-dia-hoa-hoc-cac-nguyen-to/a18d87c4 21 Bác sĩ Lê Nguyễn Khánh Duy Khí amoniac gây độc cho thể nào, 7/2015, http://suckhoe.vnexpress.net/tin-tuc/tu-van/khi-amoniac-gay-doc-cho-cothe-nhu-the-nao-3225068.html 22 Lê Thành Hưng Pha chế hóa chất, Đại học Cơng nghệ Đồng Nai, 7/2015, http://www.academia.edu/7764421/SO_TAY_PHA_CHE_HOA_CHAT 23 TS Trần Văn Thăng Cách làm đệm lót sinh học, Bộ mơn Chăn ni động vật Khoa Chăn nuôi Thú y, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, 8/2015, http://maynhanong.com/cach-lam-dem-lot-sinh-hoc 24 UV-Việt Nam Ứng dụng vi khuẩn nitrate hóa ni trồng thủy sản, 8/2015, http://uv-vietnam.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId=1017 Trang 59 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Phụ lục bảng Bảng thể động học trình lên men chủng vi khuẩn S18 (Nitrosomonas) B6 (Nitrobacter) Thời gian (giờ) Mật độ tế bào (CFU/ml.104) Chủng S18 Chủng B6 0,82 2,8 0,88 1,55 3,77 1,88 4,33 3,17 5,1 4,4 5,23 6,7 7,7 7,73 8,5 8,55 11,73 9,97 15 12,23 19,57 16,3 31,67 15,87 30,5 12,4 25,33 10,57 16,5 8,83 12,3 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 Trang Đồ án tốt nghiệp 68 6,73 11,1 4,87 8,83 72 Phụ lục hình Tủ sấy Tủ cấy Tủ ủ Nồi hấp Trang Đồ án tốt nghiệp Máy lắc Máy Vortex Các mẫu vi khuẩn Nitrosomonas trình định lượng nitrite Trang Đồ án tốt nghiệp Các mẫu vi khuẩn Nitrobacter trình định lượng nitrate Đồ thị đường chuẩn hàm lượng nitrite 0.8 y = 1.2926x + 0.0672 R² = 0.9516 OD at 530 ηm 0.7 0.6 0.5 0.4 OD 0.3 Linear (OD) 0.2 0.1 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 Nồng độ mẫu chuẩn (mg/l) Đồ thị phương trình đường chuẩn cho chủng vi khuẩn Nitrosomonas Trang Đồ án tốt nghiệp OD 410 ηm Đồ thị đường chuẩn hàm lượng nitrate 1.8 1.6 1.4 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 y = 0.1345x + 0.2135 R² = 0.9012 OD Linear (OD) 10 12 Nồng độ mẫu chuẩn (mg/l) Đồ thị phương trình đường chuẩn cho chủng vi khuẩn Nitrobacter S18 (Nitrosomonas) B6 (Nitrobacter) Mật độ tế bào sống sau 48 động học trình lên men chủng vi khuẩn chuyển hóa nitơ Trang Đồ án tốt nghiệp Phụ lục xử lý số liệu Xác định hàm lượng NO3- chủng Nitrobacter Summary Statistics for HAMLUONG NO3– CHUNGB Count Average Standard Coeff of deviation variation B10 23.1353 3.7354 16.1459% B15 26.803 9.126 34.0484% B6 43.312 5.62 12.9756% B8 24.0767 4.99231 20.735% Total 12 29.3318 10.0501 34.2636% Minimum Maximum Range Stnd skewness 18.848 20.632 36.999 20.483 18.848 25.688 37.286 47.77 29.777 47.77 -1.159 1.16782 -0.935855 1.10364 1.19054 ANOVA Table for HAMLUONGNO3 by CHUNGB Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 803.56 267.853 6.97 Within groups 307.489 38.4362 Total (Corr.) 1111.05 11 6.84 16.654 10.771 9.294 28.922 P-Value 0.0127 Multiple Range Tests for HAMLUONGNO3 by CHUNGB Method: 95.0 percent LSD CHUNGB Count Mean B10 23.1353 B8 24.0767 B15 26.803 B6 43.312 Homogeneous Groups X X X X Xác định hàm lượng NO2– chủng Nitrosomonas Summary Statistics for HLNO2– CHUNGS Count Average Standard deviation S14 0.289 0.0420357 S16 0.2532 0.0247734 S18 0.390967 0.0671245 Sba 0.312133 0.0544927 Total 12 0.311325 0.0676709 Coeff of variation 14.5452% 9.78411% 17.1689% 17.4581% 21.7364% Minimum Maximum Range Stnd skewness 0.255 0.336 0.081 0.889944 0.2296 0.279 0.0494 0.280347 0.316 0.4455 0.1295 -0.878867 0.2784 0.375 0.0966 1.21493 0.2296 0.4455 0.2159 1.29976 ANOVA Table for HLNO2 by CHUNGS Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 0.0306611 0.0102204 4.15 Within groups 0.0197118 0.00246397 Total (Corr.) 0.0503729 11 Multiple Range Tests for HLNO2 by CHUNGS Trang P-Value 0.0478 Đồ án tốt nghiệp Method: 95.0 percent LSD CHUNGS Count Mean S16 S14 Sba S18 3 3 0.2532 0.289 0.312133 0.390967 Homogeneous Groups X X XX X KHẢO SÁT GIÁ TRỊ pH TỐI ƯU CHO CHỦNG S18 Summary Statistics for GIATRIS18 PH Count Average Standard deviation PH6 5.28E6 960000 PH7 9.24E6 600000 PH8 1.03867E7 475955 PH9 7.E6 541110 Total 12 7.97667E6 2.14247E6 Coeff of variation 18.1818% 6.49351% 4.58237% 7.73014% 26.8592% ANOVA Table for GIATRIS18 by PH Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 4.689E13 1.563E13 Within groups 3.60187E12 4.50233E11 Total (Corr.) 5.04919E13 11 Minimum Maximum Range 4.32E6 8.64E6 9.96E6 6.48E6 4.32E6 6.24E6 9.84E6 1.09E7 7.56E6 1.09E7 F-Ratio 34.72 1.92E6 1.2E6 940000 1.08E6 6.58E6 Stnd skewness 0.0 0.0 0.560196 0.233933 -0.378309 P-Value 0.0001 Multiple Range Tests for GIATRIS18 by PH Method: 95.0 percent LSD PH Count Mean PH6 PH9 PH7 PH8 3 3 5.28E6 7.E6 9.24E6 1.03867E7 Homogeneous Groups X X X X KHẢO SÁT GIÁ TRỊ pH TỐI ƯU CHO CHỦNG SB6 Summary Statistics for GIATRIB6 PH Count Average Standard deviation PH6 7.56667E6 2.47243E6 PH7 8.68E6 1.43164E6 PH8 1.31333E7 2.15019E6 PH9 1.11733E7 1.739E6 Total 12 1.01383E7 2.82785E6 Coeff of variation Minimum Maximum Range Stnd skewness 32.6753% 16.4936% 16.372% 15.5639% 27.8927% 1.01E7 9.84E6 1.55E7 1.31E7 1.55E7 4.94E6 2.76E6 4.2E6 3.38E6 1.034E7 0.16259 -0.885573 0.740699 0.801927 0.163629 ANOVA Table for GIATRIB6 by PH Trang 5.16E6 7.08E6 1.13E7 9.72E6 5.16E6 Đồ án tốt nghiệp Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 5.63444E13 3.162E13 8.79644E13 Df 11 Mean Square F-Ratio 1.87815E13 4.75 3.9525E12 P-Value 0.0347 Multiple Range Tests for GIATRIB6 by PH Method: 95.0 percent LSD PH Count Mean PH6 PH7 PH9 PH8 3 3 7.56667E6 8.68E6 1.11733E7 1.31333E7 Homogeneous Groups X X XX X KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ MUỐI CHO CHỦNG S18 Summary Statistics for NONGDOS18 NONGDONaCl Count Average Standard deviation 9.44E6 385746 0.5 1.05667E7 378594 Coeff of Minimum Maximum Range variation 4.08629% 9.E6 9.72E6 720000 3.58291% 1.03E7 1.1E7 700000 1.5 2.5 Total 5.61348% 18.0529% 18.0005% 13.5951% 17.4098% 48.2459% 3 3 21 1.48333E7 1.96E7 2.49333E7 3.76E7 2.49667E7 2.02771E7 832666 3.53836E6 4.48813E6 5.11175E6 4.34665E6 9.78288E6 1.39E7 1.64E7 2.2E7 3.23E7 2.17E7 9.E6 ANOVA Table for NONGDOS18 by NONGDONACL Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 1.75675E15 2.92792E14 26.05 Within groups 1.57344E14 14 1.12389E13 Total (Corr.) 1.9141E15 20 Multiple Range Tests for NONGDOS18 by NONGDONACL Method: 95.0 percent LSD NONGDONACL Count Mean 0.5 1.5 2.5 9.44E6 1.05667E7 1.48333E7 1.96E7 2.49333E7 2.49667E7 3.76E7 3 3 3 Homogeneous Groups X X XX XX X X X KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ MUỐI CHO CHỦNG B6 Trang 1.55E7 2.34E7 3.01E7 4.25E7 2.99E7 4.25E7 P-Value 0.0000 1.6E6 7.E6 8.1E6 1.02E7 8.2E6 3.35E7 Đồ án tốt nghiệp Summary Statistics for NONGDOB6 NONGDONACL Count Average 0.5 1.5 2.5 Total 3 3 3 21 9.24667E6 1.09467E7 1.39667E7 1.68333E7 1.93667E7 3.85E7 2.05667E7 1.84895E7 Standard deviation 797580 1.00426E6 1.13725E6 1.76163E6 1.32035E6 4.76235E6 7.27278E6 9.69484E6 Coeff of variation 8.62559% 9.1741% 8.14259% 10.4651% 6.81766% 12.3697% 35.362% 52.4342% ANOVA Table for NONGDOB6 by NONGDONACL Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 1.71308E15 2.85514E14 23.98 Within groups 1.66716E14 14 1.19083E13 Total (Corr.) 1.8798E15 20 Minimum Maximum Range 8.52E6 9.84E6 1.27E7 1.52E7 1.82E7 3.31E7 1.55E7 8.52E6 1.01E7 1.18E7 1.49E7 1.87E7 2.08E7 4.21E7 2.89E7 4.21E7 1.58E6 1.96E6 2.2E6 3.5E6 2.6E6 9.E6 1.34E7 3.358E7 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for NONGDOB6 by NONGDONACL Method: 95.0 percent LSD NONGDONACL Count Mean 0.5 1.5 2.5 9.24667E6 1.09467E7 1.39667E7 1.68333E7 1.93667E7 2.05667E7 3.85E7 3 3 3 Homogeneous Groups X XX XXX XXX XX X X KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ CƠ CHẤT CHO CHỦNG S18 Summary Statistics for CFUS18 %COCHATS18 Count Average 0.5 10 Total 3 3 15 646667 1.47333E6 116667 1.17333E6 383333 758667 Standard deviation 46285.3 37859.4 3511.88 110151 16502.5 519397 Coeff of variation Minimum Maximum Range 7.15753% 2.56964% 3.01019% 9.3879% 4.30501% 68.4618% 617000 1.43E6 113000 1.1E6 367000 113000 700000 1.5E6 120000 1.3E6 400000 1.5E6 ANOVA Table for CFUS18 by %COCHATS18 Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 3.74484E12 9.3621E11 292.68 Within groups 3.19873E10 10 3.19873E9 Total (Corr.) 3.77683E12 14 Multiple Range Tests for CFUS18 by %COCHATS18 Method: 95.0 percent LSD Trang P-Value 0.0000 83000.0 70000.0 7000.0 200000 33000.0 1.387E6 Đồ án tốt nghiệp %COCHATS18 Count Mean 10 0.5 3 3 116667 383333 646667 1.17333E6 1.47333E6 Homogeneous Groups X X X X X KHẢO SÁT NỒNG ĐỘ CƠ CHẤT CHO CHỦNG B6 Summary Statistics for MATDOB6 %COCHATB6 Count Average Standard deviation 0.2 344333 25006.7 0.5 562333 59214.3 658000 70448.6 3 434333 15044.4 352333 20404.2 Total 15 470267 131966 Coeff of variation 7.26234% 10.5301% 10.7065% 3.46379% 5.79118% 28.062% ANOVA Table for MATDOB6 by %COCHATB6 Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 2.24336E11 5.60841E10 Within groups 1.94747E10 10 1.94747E9 Total (Corr.) 2.43811E11 14 Minimum Maximum Range 327000 520000 580000 420000 330000 327000 373000 630000 717000 450000 370000 717000 F-Ratio 28.80 46000.0 110000 137000 30000.0 40000.0 390000 Stnd skewness 1.1459 1.11216 -0.795759 0.279793 -0.689685 1.01032 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for MATDOB6 by %COCHATB6 Method: 95.0 percent LSD %COCHATB6 Count Mean 0.2 0.5 3 3 344333 352333 434333 562333 658000 Homogeneous Groups X X X X X KHẢO SÁT NHIỆT ĐỘ CHO CHỦNG S18 Summary Statistics for S18 NHIETDO Count Average 30 35 40 Total 3 Standard deviation 1.24667E6 35118.8 703333 51791.2 370000 34770.7 773333 384889 Coeff of variation 2.81702% 7.36368% 9.39748% 49.7701% Minimum Maximum Range 1.21E6 670000 347000 347000 1.28E6 763000 410000 1.28E6 70000.0 93000.0 63000.0 933000 ANOVA Table for S18 by NHIETDO Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1.17487E12 5.87433E11 343.89 0.0000 Trang 10 Stnd skewness -0.299299 1.19962 1.18384 0.413972 Đồ án tốt nghiệp Within groups Total (Corr.) 1.02493E10 1.18512E12 1.70822E9 Multiple Range Tests for S18 by NHIETDO Method: 95.0 percent LSD NHIETDO Count Mean 40 35 30 3 Homogeneous Groups X X X 370000 703333 1.24667E6 KHẢO SÁT NHIỆT ĐỘ CHO CHỦNG B6 Summary Statistics for B6 NHIETDO Count Average 30 35 40 Total 3 82000.0 68566.7 31100.0 60555.6 Standard deviation 2165.64 4366.16 2029.78 22996.6 ANOVA Table for B6 by NHIETDO Source Sum of Squares Df Between groups 4.17502E9 Within groups 5.57467E7 Total (Corr.) 4.23076E9 Coeff of variation 2.64103% 6.36776% 6.52662% 37.9761% 40 35 30 3 31100.0 68566.7 82000.0 Maximum Range Stnd skewness 79700.0 64000.0 29300.0 29300.0 84000.0 72700.0 33300.0 84000.0 4300.0 8700.0 4000.0 54700.0 -0.432332 -0.312695 0.602708 -0.724672 Mean Square F-Ratio 2.08751E9 224.68 9.29111E6 Multiple Range Tests for B6 by NHIETDO Method: 95.0 percent LSD NHIETDO Count Mean Minimum Homogeneous Groups X X X Trang 11 P-Value 0.0000 ... hợp chất hữu cơ, đặc biệt vi khuẩn chuyển hóa nitơ Từ nhận định trên, thực đề tài “PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN CHUYỂN HÓA NITƠ, ỨNG DỤNG SẢN XUẤT CHẾ PHẨM VI SINH DÙNG XỬ LÝ CHẤT... tiêu đề tài phân lập chủng vi khuẩn có khả chuyển hóa nitơ cao, sử dụng cho đệm lót sinh học chăn ni heo, gà Dựa vào khả nitrite hóa, tơi định chọn chủng vi khuẩn S18 số chủng vi khuẩn Nitrosomonas... trưởng chủng vi khuẩn vừa phân lập (môi trường, nhiệt độ, pH, thời gian nuôi cấy) Lên men, sản xuất chế phẩm vi sinh dùng xử lý chất thải chăn ni quy mơ phịng thí nghiệm ❖ Mục đích ý nghĩa Phân lập