Kh¸i niÖm: M«i truêng pha chÕ tinh dÞch lµ mét hçn dÞch ho¸ häc do con ngêi tæng hîp lªn trong ®ã cã c¸c chÊt cã t¸c dông nu«i sèng tinh trïng trong ®iÒu kiÖn ngoµi c¬ thÓ.. b..[r]
(1)Trường ĐHNNI hà Nội
Khoa c.n.t.y
Bộ môn ngoại sản
============
Bài giảng
Môn học sinh sản gia súc
(Học phần kỹ thuật sinh sản)
TS NGUYÔN V¡N THANH
(2)Kü thuËt sinh s¶n A KỸ THUẬT THỤ TINH NHÂN TẠO
I Khái niệm: TTNT kỹ thuật mà người tiến hành lấy tinh
dịch từ đực dùng dụng cụ chuyên dụng bơm tinh dịch vào đường sinh dục động dục Đây biện pháp cải tạo giống nhanh nhất, tốt nhất, tiên tiến nhằm tạo đàn có sản lượng cao nhất, phẩm chất tốt
II Lỵi Ých kinh tÕ, kü tht cđa công tác thụ tinh nhân tạo 2.1. Với công tác giống:
+ Tạo điều kiện thuận lợi cho viƯc trun gièng, lai t¹o gièng
+ Giảm nhẹ chi phí việc nhập nội đực giống tốt nhập tinh dịch đực giống tốt để cải tạo đàn giống địa phương + Nâng cao hiệu sinh sản đực giống lợn tăng lên 30-50 lần, bị tăng lên hàng trăm lần
+ Thành lập ngân hàng tinh dịch, nhằm bảo quản lâu dài tinh dịch để trao đổi, vận chuyển dễ dàng tạo điều kiện mở rộng không gian việc cải tạo giống cách nhanh chóng
+ Do tinh dịch đực giống nhanh chóng ứng dụng tồn diện rộng nhanh chóng đánh giá phẩm chất đực giống
2.2. HiƯu qu¶ kinh tÕ
+ Giảm thấp số lượng đực giống cần ni từ tiết kiệm thức ăn chuồng trại công lao động vv làm tăng suất lao động hạ giá thành sản phẩm
+ Nâng cao phẩm chất đời sau cách nhanh góp phần làm tăng nhanh sản phẩm cho xã hội
+ Do tinh dịch dùng thụ tinh nhân tạo kiểm tra cách chặt chẽ đảm bảo tỷ lệ sinh sản n cỏi
2.3. Về công tác thú y
(3)sinh trùng thông qua đường sinh dôc vÝ dô nh Brucellosis, leptospirosis, Vibrriois, Trichomonosis
III Những hạn chế kỹ thuật thụ tinh nhân t¹o
- Do làm giảm số lượng đực giống từ làm thu nhỏ, đơn điệu hố di truyền biến dị đời sau
- Những thiếm khuyết đực giống di truyền thú y nhanh chóng lan rộng thực tiễn sản xuất Do việc chọn lọc đực giống quy trình chăm sóc ni dưỡng quản lý khai thác sử dụng đực giống cần phải làm nghiêm túc chặt chẽ
- Trang thiết bị vốn ban đầu đòi hỏi cao tốn - Là dao lưỡi công tác thú y
IV Kü thuËt lấy tinh:
4.1. Các yêu cầu ca vic ly tinh:
+ Lấy toàn tinh dịch với phẩm chất tốt khiÕt nhÊt
+ Phương pháp lấy tinh phải an tồn cho người vật
+ Trang bị khơng phức tạp, kỹ thuật phải đơn giản dễ áp dụng thực tiễn sản xuất
4.2. Khái quát phương pháp lấy tinh
+ Phương pháp hải miên + Phương pháp âm đạo + Phương pháp dùng túi
+ Phương pháp giới(massage) + Phương pháp dùng điện
+ Phương pháp dùng âm đạo giả (AĐG) phương pháp áp dụng rộng rãi giới
4 Lấy tinh âm đạo giả
(4)vỏ ngồi có van để đổ nước bơm vào có đai để cố định ruột âm đạo, ngồi cịn có phễu hứng tinh lọ đựng tinh dịch Tuỳ theo loài gia súc mà người ta chế tạo AĐG cho có kích thước phù hợp
Loµi gia sóc
Vỏ AĐG Ruột AĐG
Dài
(cm)
Đường kính trong (cm)
Dài
(cm)
Đường kính trong (cm)
Bò 40 6-7 60-70 6-7
Lỵn néi 20-25 5 30-35 4-5
(5)b Yêu cầu kỹ thuật
+ Nhiệt độ thích hợp để kích thích đực giống, thường cao thân nhiệt 0.50C phụ thuộc vào cá thể mùa vụ, thực tế thường sử dụng nước nóng để điều chỉnh nhiệt độ
+ Phải có áp lực thích hợp (dùng biện pháp bơm khơng khí thơng qua van có phần vỏ âm đạo )
+ Phải có độ trơn thích hợp (dùng vazelin hay dầu thực vật để làm trơn lòng âm đạo)
+ Phải tuyệt đối vô trùng, không gây bệnh cho đực giống sinh sản (dùng biện pháp xông hay dùng nước sôi)
c. Các bước tiến hành để lấy tinh âm đạo giả
(6)của âm đạo giả đực xuất tinh, sau vài lần đực quen khơng cần dùng
- Phương pháp bắt chước: dùng đực giống huấn luyện thành thục biểu diễn thao tác cho đực cần huấn luyện xem “bắt chước đàn anh “ thao tác lại qua nhiều lần đực cần huấn luyện thành thạo Cả hai phương pháp cần ý: ổn định người, thời gian địa điểm huấn luyện, nên huấn luyện vào lúc trời mát, yên tĩnh người huấn luyện cần ơn hồ, kiên trì khéo léo
- Ti hn lun: tËp tõ lóc cßn non sau míi thµnh thơc vỊ tÝnh cha qua giao phối với nào, vật hăng dễ huấn luyện cụ thể Lợn tập từ lúc 6-7 tháng khoảng năm cho vào sản xuất; trâu 24-30 tháng; bò 18-24 tháng dê cừu 6-9 tháng, ngựa 25-30 tháng
+ Làm giá nhảy:
- Giá nhảy lợn làm gỗ, xi măng
- Giỏ nhy ca trõu bũ làm sắt hay gỗ chắn dùng bị đực thiến hay bị huấn luyện làm giá nhảy
+ Chế độ lấy tinh thích hợp: Chế độ lấy tinh thích hợp bảo vệ sức khoẻ kéo dài thời gian sử dụng đực giống, chế độ lấy tinh phụ thuộc vào lồi giống mùa vụ
- Bị 3-4 ngày lần; lợn ngoại - ngày lần, lợn nội 4- ngày lần, gia cầm lần / tuần, ngựa mùa động dịch tháng 4- tháng 10 ngày lấy lần nghỉ chủ nhật, dê cừu mùa sinh sản lấy 4-6 lần ngày
4.4 Các nhân tố ảnh hưởng tới số lượng chất lượng tinh dịch của đực giống
a Dinh dưỡng: đòi hỏi phải đầy đủ, cân đặc biệt ý chất protein, nguyên tố vi lượng I, Zn, thiếu chất lượng tinh dịch bị kém; khoáng đa lượng Ca, P thiếu phản xạ nhảy ; vitamin vitaminn A, E thiếu dẫn đến thối hóa chai cứng niêm mạc ống sinh tinh, teo dịch hoàn
(7)+ Thường xuyên phải quan sát tình trạng ăn uống lại, nhịp thở, phân nước tiểu đực giống
+ Cần ý công tác vệ sinh tắm trải cho đực giống đặc biệt ý khâu vệ sinh cho dịch hoàn nguyên vẹn da dịch hồn da dịch hồn đóng vai trị quan trọng việc điều tiết nhiệt độ cho dịch hoàn, nhiệt độ dịch hoàn thường thấp nhiệt độ thể - 4oC
C Vận động: đóng vai trị quan trọng chăn ni đực giống, vận động giúp cho vật không béo, thể đực giống cường tráng, ngực nở bụng thon, chế độ vận động: áp dụng hình thức vận động
# Vận động tự do: có sân chơi ý sân # Vn ng cng bc
- Lợn nội chạy + 1.5-2.km/lần tuần lần - Lợn ngoại chạy + 2-2.5km/lần tuần lần
- Trâu, bò nhanh + lång 10 -15 km mét lÇn tuÇn lần - Ngựa kiệu + phi 50 -60 km mét lÇn tuÇn -3 lÇn
d Quản lý: cần nhốt riêng mối đục giống chuồng, cho chơi hay vận động phải nơi tránh chúng đánh, cắn lẫn e. Giống tuổi, cá thể tuổi mùa vụ :
+ Giống: giống khác số lượng chất lượng tinh dịch khác
+ Cá thể: lồi giống số lượng chất lượng cá thể khác việc theo dõi chọn lựa đực giống khâu quan trọng chăn ni gia súc sính sản
+ Tuổi: tuổi thành niên số lượng chất lượng tinh dịch tốt sau số lượng tinh dịch cao chất lượng tinh dịch dần cần sử dụng đực giống thi gian nht nh
- Lợn nội không năm; lợn ngoại năm; bò 12 năm
(8)sinh sản theo mùa vào mùa xuân, mùa thu mùa đông tinh dịch tốt mùa hè, gia súc nuôi vùng núi cao tinh dịch vùng đồng
f Kỹ thuật khai thác tinh dịch: khéo léo, thái độ ơn hồ kỹ thục người khai thác tinh dịch chế độ khai thác thích hợp khai thác nhiều tinh dịch chất lượng tốt
V KiÓm tra tinh dÞch gia sóc
5 Mục đích:
- Đánh giá sức sản xuất đực giống tiêu giám định đời sau đánh giá phẩm chất đàn đực giống
- Đánh giá chế độ chăm sóc ni dưỡng quản lý khai thác sử dụng đực giống
- Đánh giá sức khoẻ đực giống
- Qua đánh giá phẩm chất tinh dịch đưa chế độ chăm sóc ni dưỡng quản lý khai thác sử dụng đực giống cách hợp lý Khi kiểm tra tinh dich có trường hợp sau
+ Tinh dịch phải bỏ tìm nguyên nhân + Tinh dịch bình thường đưa vào sản xuất
+ Tinh dịch có phẩm chất tốt đưa vào bảo tồn dạng lỏng, dạng tươi
+ Từ tiêu VAC định số lượng liều tinh n = VAC/ N n số liều tinh; A hoạt lực, C số lượng tinh trùng 1ml tinh dịch N số lượng tinh trùng cần thiết cho liều tinh
5.2 Yêu cầu: Nghiêm túc, xác trung thực, dụng cụ, thiết bị kiểm tra có chất lượng tốt, vô trùng
5.3 Néi dung kiÓm tra
5 3.1 Các tiêu kiểm tra thường xuyên
1 Lượng tinh (V, ml) số lượng tinh dịch thu qua lần khai thác tinh dịch Để kiểm tra tiêu V dùng cốc đong, ống đong, bình đong có khắc độ để xác định, cần ý với lợn tinh dịch có nhiều keo phèn phải lọc keo phèn trước kiểm tra V
(9)+ Tinh dịch lợn mầu nước cháo, trắng sữa + Tinh dịch bò mầu trắng sữa, vàng ngà + Tinh dịch trâu mầu trắng sữa
+ Tinh dịch dê, cừu mầu trắng sữa, ghi + Tinh dịch gia cầm mầu ghi, ghi xám
Khi tinh dịch có mầu bất thuờng: đỏ, nâu lẫn máu đường sinh dục bị sây sát, xuất huyết, tinh dịch bị phân lớp bị lẫn nước ta loại bỏ
3 Độ vẩn: tinh dịch bao gồm thành phần hữu tinh trùng, hạt hữu treo lơ lửng tinh thanh, tinh trùng vận động ta tác động lực nhỏ vào cột tinh dịch tinh trùng tác động vào hạt hữu làm chuyển động tạo độ vẩn tinh dịch Tuỳ theo độ vẩn nhiều mà người ta có kí hiệu khác nhau: Vẩn nhiều +++++; vẩn mây nhiều ++++; vẩn mây trung bình +++; vẩn mây ++; vẩn mây + thực tế lợn nội dùng tinh dịch đạt từ ++; lợn ngoại +++ trở lên
4 Mùi: mùi tinh dịch thường mùi tanh, gây có mùi khác thường mùi thối, khai ta loại bỏ tinh dịch
5. Độ PH: dùng giấy quỳ hay máy đo PH để xác định PH tinh dịch lồi gia súc tinh dịch có độ PH khác nhau, PH thay đổi ngưỡng phải loại bỏ tinh dịch: Lợn TB 7.5 (7.3 -7.9); ngựa TB 7.3 ( 6.2-7.8); chó TB 6.3 ( 5.9-6.9) bị TB 6.8 ( 6.4-7.8); dê cừu 7.4 (6.9-8.3) gà TB 7,6 (6,8-8,1)
6. Hoạt lực (A): tỷ lệ % tinh trùng vận động tiến thẳng A tiêu quan trọng định chất lượng tinh dịch, dùng kính hiển vi quan sát tinh dịch với độ phóng đại 150-300 lần quan sát tinh trùng vận động 90% tinh trùng vận động tiến thẳng A=0.9 tuơng tự 50% tinh trùng vận động tiến thẳng A=0.5 A càng cao tinh dịch tốt dùng A từ 0.6 trở lên
(10)thì mật độ trung bình Chỉ tiêu d cho ta biết klhái niệm ban đầu số lượng tinh trùng có tinh dịch
5.3.2 Các tiêu kiểm tra định kỳ:
1 Nồng độ (C): C số lượng tinh trùng tính triệu tỷ có ml tinh dịch: lợn thường tháng kiểm tra lần, trâu bò 2-3 tuần kiểm tra lần có nhiều phương pháp kiểm tra
+ Phương pháp so mầu: người ta định sẵn thang mầu tương ứng với số lượng tinh trùng có đơn vị tính
+ Phương pháp dùng ống Spernio dencimettre (ống karras) ống thuỷ tinh miệng vng (1x1cm) sâu 15 cm có chia vạch từ 0-100) Dùng 10ml tinh dịch pha với dung dịch pha loãng NaCl 0,9% theo tỷ lệ 1ml tinh dịch + ml dịch pha rót vào ống karras đến vạch 100, đặt mảnh giấy trắng phía sau ống Karras Nhìn vào ống Karras ta thấy độ đục tăng dần từ lên làm mờ dần chữ số vào vạch thành ống Ta đọc chữ số hàng chục cuối đọc vạch cịn nhìn rõ sau tra bảng ta có nồng độ tinh trùng Phương pháp thường dùng kiểm tra C lợn Thí dụ ta nhìn thấy số hàng chục cuối cịn nhìn rõ vạch tiếp theo: 75 ta tra bảng có C = 195x 106/ml
+ Phương pháp điện tử: dùng máy đếm tự động
+ Phương pháp đếm buồng đếm hồng, bạch cầu
Hiện thực tế Trạm trại người ta thường dùng phương pháp đếm trực tiếp buồng đếm hồng cầu bạch cầu
Phương pháp kiểm tra C buồng đếm hồng bạch cầu
Gia súc ống hút Vạch hút Độ pha loÃng
Số TB cần đếm Cơng thức tính Tinh dịch Dịch pha Trâu, bị Hồng
cÇu
1 101 100 C=
n.5.106
Dê, cừu gia cầm
Hång cÇu
0,5 101 200 C= n.107 Lợn,
ngựa, chó
Bạch cầu
(11)# n số lượng tinh trùng đếm trung bình, góc 1ơ buồng đếm Mỗi trung bình có 16 ta đếm 80 ô con, chiều rộng ô là1/20mm chiều sâu 1/10mm thể tích đếm 1/20 x1/20x1/10 X 80 = 1/50mm3
Trong1/50mm3 tinh dịch pha loãng K lần ta đếm n tinh trùng
vËy 1mm3 tinh nguyªn ta cã C=nxkx50
vµ 1ml tinh
nguyên ta có C = nxkx50x1000 Khi thay K theo độ pha lỗng ta có cơng thức tính C cho loài gia súc
2 Sức kháng (R): sức chụi đựng tinh trùng với điều kiện ngoại cảnh bất lợi, thực tế người ta dùng NaCL 3% để thử sức kháng tinh trùng có phương pháp đánh giá sức kháng
+ Phương pháp lọ: dùng để kiểm tra R tinh dịch lợn nội: hút 10ml NaCL 3% vào lọ hút tiếp 0.02 ml tinh dịch vào dùng đũa thuỷ tinh khuấy nhẹ lấy giọt lên xem kính hiển vi với độ phóng đại 150-300 lần, thấy tinh trùng vận động cho tiếp NaCL 3% vào đến ngừng vận động thơi: R = V/v V số lượng NaCL 3%, v số lượng tinh dịch (0.02)
+ Phương pháp lọ: dùng để kiểm tra R tinh dịch lợn ngoại: hút 0.5ml dung dịch lọ vào lọ 2, hút tiếp 0.5ml NaCl 3% dùng đũa thuỷ tinh khuấy nhẹ lấy giọt lên xem kính hiển vi với độ phóng đại 150-300 lần, thấy tinh trùng ngừng vận động R= 1/0,001 = 1000 tinh trùng vận động cho tiếp 0.5ml NaCl 3% vào đến ngừng vận động thơi R =1000(1 + n) trrong n số lần cho thêm 0.5 ml NaCl 1%
(12)3 Tỷ lệ kỳ hình (K): tỷ lệ % tinh trùng có hình thái khác thường tổng số tinh trùng đếm kỳ hình đầu hay kỳ hình tinh trùng khơng có khả thụ thai Để kiểm tra tiêu người ta dùng phương pháp nhuộm tiêu bản: chọn 01 phiến kính khơ dùng đũa thuỷ tinh nhỏ 01 giọt tinh dịch lên phiến kính dùng phiến kính khác để nghiêng góc 30o kéo tay phết tinh dịch, sau để tự khô đem nhuộm Eosin, Fursin hay xanhmethylen vịng 5-7 phút, rửa xem kính với độ phóng đại 400-600 lần, đếm số lượng tinh trùng:
K% = n/N x 100 K% tỷ lệ kỳ hình, n số lượng tinh trùng kỳ hình cịn N tổng số tinh trùng đếm N 300
4 Yêu câu kỹ thuật tinh dịch
+ Yêu câu kỹ thuật tinh dịch theo tiêu chuẩn Liên Xô cũ
Gia sóc
V(min) ml
C(min) 106/ml
VC(min) 106/ml
A(min) R(min) K(max)
Cõu 1 2000 2 0.8 5000 14
Bß 3 800 2 0.6 3000 18
Lỵn 150 100 1.5 0.6 500 30
Ngùa 40 100 4 0.6 500 30
+ Yêu câu kỹ thuật tinh dịch theo tiêu chun Vit Nam
Chỉ tiêu Đơn vị Lợn
ngoại
Lợn nội Trâu bò
Lng tinh ó lc
ml 100 50
Màu sắc trắng
sữa
trắng sữa trắng, vàng ngà
Mïi tanh tanh tanh
Mật độ từ TB trở
lªn
tõ TB trë lªn
tõ TB trở lên
(13)Độ nhiÔm khuÈn
103/ml
VI Kü thuËt pha chế, bảo tồn vận chuyển tinh dịch
6.1 Kü thuËt pha chÕ tinh dÞch
6.1.1 Mục đích ý nghĩa việc pha chế tinh dịch
- Qua pha chế tăng dung lượng tinh dịch từ nâng cao sức sinh sn ca c ging
- Kéo dài đc thời gian sống tinh trùng điều kiện thể
- Nâng cao hiệu kinh tế chăn nuôi nói chung TTNT nói riêng
- Có thể khai thác hiệu kinh tế đực giống tốt
- Rút ngắn thời gian cải tạo giống phạm vi rộng để nhanh chóng đẩy mạnh suất chăn nuôi đại gia súc
6.1.2 Môi trường pha chế tinh dịch
a Khái niệm: Môi truờng pha chế tinh dịch hỗn dịch hoá học người tổng hợp lên có chất có tác dụng ni sống tinh trùng điều kiện ngồi thể
b Nguyên tắc cấu tạo môi trường
Môi trường phải đảm bảo điều kiện sống định hình tinh trùng cụ thể hoá nguyên tắc sau
1 áp lực thẩm thấu môi truờng phải tương đương với áp lực thẩm thấu tinh dịch
+ Mơi trường phải đẳng trương đảm bảo cho tinh trùng định hình khơng bị teo chương lên
(14)2 Môi trường phải có lượng đệm: bảo tồn sống tinh trùng bảo tồn trình TĐC tinh trùng nghĩa phải giữ vững độ PH thích hợp muốn cần phải có lượng đệm thực tiễn người ta dùng muối kim loại Natri xitrat (Na3C6H5 O7) hay
Kali tartrat (KNaC4 H4)
Thí dụ mơi trường Na3C6 H5 O7 3Na+ + C6 H5 O7 3-
trình Glycoz tinh trùng thải H+ từ 3H+ + C
6 H5 O7 3- C6 H8 O7 Axit Citric C6 H8 O7 axit hữu
yu, khơng phân ly đảm bảo cho tinh trùng TĐC mà H+ không tăng nghĩa PH đươc ổn định
3 Tû lÖ chất điện giải không điện giải phải thích hợp
Trong môi trường chất điện giải phân li thành Cation Anion chúng có tác động xấu tới màng tế bào Các chất không điện giải tồn bên cạnh chất điện giải có tác dụng ngăn ngừa tác động xấu vào màng tinh trùng thực tế người ta dung đường Glucoze, Lactoze, maltoze
4 Tho¶ m·n tÝnh thùc tế tính kỹ thuật: nghĩa nguyên liệu phải dễ kiếm giá phải
c Các chất cấu tạo môi trường
1 Đường: có tác dụng cung cấp nguyên liệu cho trình trao đổi chất tinh trùng tác dụng giải độc cho tinh trùng đồng thời đảm bảo tỷ lệ thích hợp chất điện giải khơng điện giải
Muối đệm: có tác dụng ổn định P thẩm thấu thực tiễn thường dùng muối kim loại Natri xitrat (Na3C6H5O7) hay Kali
tartrat (KNaC4 H4)
3 Hoạt chất rửa môi trường: xuất chất điện giải mơi trường phân li gây nhiễm mơi trường dó cần phải có chất làm mơi trường thực tế người ta dùng Trilon B, nhờ vào kết cấu phân tử hình cua, Trilon B gắn với ion Ca++, Mg++, Fe++, Fe+++ tạo muối phức vô
hoạt không ảnh hưởng tới tinh trùng
ChÊt chèng l¹nh:
(15)+ Glyerin: riệu đa nguyên tử với độ nhẹ có tác dụng chống lạnh
Chất kháng sinh: có tác dụng diệt khuẩn Trong thực tế thường dùng Sulffamid với liều 3mg/ml với tinh dịch bò 2mg/ml cho tinh dịch lợn dùng hỗn hợp Strreptomycin penicillin hay Tetracyclin
Các chất khác: người ta bổ sung thêm chất dịch tiết động thực vật nước dừa, sữa, mật ong vitamin nhằm kéo dài thời gian sống tinh trùng Ngoài người ta bổ sung số chất có hoạt tính sinh học cao Prostaglan din F2α
d Một số môi trường pha chế tinh dịch thường dùng
+ Trong thực tiễn có nhiều loại môi trường môi trường Glucoza - Xitrat - trứng, môi trường liên xô cũ, môi trường T1l
Công thức môi trường Glucoza - Xitrat – trứng cho các loài gia súc
Thành phần Cho tinh dịch
Bò Cõu Ngùa Tr©u
Nước cất lần (ml) 100 100 100 60
Glucoz y häc khan hc Glucoz (g)
3,0 0,8 7,0 2,2
3,3 0,9 7,5
Natri Xitrat 1,4 2,8 0,5
Lòng đỏ trứng (g) 20 20 0,8 40
Công thức số môi trường liên xơ cũ
ChÊt liƯu §V GXT-2 GXTTR-2 GXTS-8
Nước cất lần ml 1000 1000 1000
Glucoz y häc khan
g 60 60 40
TrilonB g 1,85 2,44 2,6
Natribicarbonat g 0,60 0,80 0,5
Natri xitrat g 1,78 1,78 3,8
Amon sulphat g - - 1,8
Tetrracyclin mg 50-100 50-100 50-100
(16)khi bảo tồn to -120, bổ xung thêm lòng đỏ trứng cịn giữ to 18 -220 mơi trường khơng dùng lịng đỏ trứng
Cơng thức mơi trường T1l3 GXTr
ChÊt liƯu §V T1l3 GXTr
Nước cất lần ml 1000 1000
Glucoz y häc khan
g 46,6 30
Natri xitrat g 3,2 2,0
Trilon B g 1,5 -
Natribicarbonat g 0,5 -
Tetrracyclin g 0,05 0,05
Lòng đỏ trứng ml 50 50
Ghi chú: bảo tồn to -130 bổ xung thêm lịng đỏ trứng 6.2 Kỹ thuật pha chế tinh dịch
6.2.1.Yêu cầu việc pha loÃng tinh dịch:
+ Nhiệt độ môi trường tổng hợp phải tương đương với nhiệt độ môi trường tinh dịch Muốn ta dùng biện pháp cân nhiệt độ chậu thuỷ tinh đựng nước ấm nhiệt độ 35 -360C 5-7
phót
+ Cơ giới: khơng chịu tác động xấu rung động sóc lắc
+ Đều: mơi truờng tổng hợp phải hồ vào tinh dịch, tức phải đổ môi trường vào tinh dịch, đổ tinh dịch cần ý đổ từ từ để tinh dịch chảy theo thành ống
+ HiƯu qu¶ kinh tÕ kü tht cao, pha lo·ng víi tû lƯ thÝch hỵp 6.2.2 Béi sè pha lo·ng
(17)giống Bội số pha loãng phụ thuộc vào nhiều yếu tố: giống tuổi, phẩm chất tinh dịch ,phương thức sử dụng
+ Với bò: dạng tươi tuỳ theo nồng độ tinh trùng (C) pha lỗng từ 5-50 lần tổng số tinh trùng liều phối phải 20 x106 có nghĩa số lượng liều tinh = VAC/ 20 x106 V tổng số ml tinh dịch môi trường
+ lợn chủ yếu dùng dạng tươi bội số pha loãng tuỳ thuộc vào A C với lợn nội pha 1/1 - 1/3 cho nồng độ tinh trùng 1ml tinh dịch sau pha có từ 20 -30 x 106 liều tinh 30ml Lợn ngọai pha 1/3 - 1/10 cho nồng độ tinh trùng 1ml tinh dịch sau pha từ 30 -40 x 106 Liều phối cho lợn nái nội phải đảm bảo có 1x109 tinh trùng, lợn lai phải đạt 1.5 x 109 tinh trùng, lợn nái ngoại phải đạt 3.0 x 109 tinh trùng,
6.3 Bảo tồn tinh dịch: hiện có phương thức bảo tn tinh dch l
+ Bảo tồn dạng lỏng: tinh trùng lợn 6-10o C bò -14 tới -20 o C, cõu
-10o C
+ Bảo tồn dạng đông lạnh: sử dụng cho tinh dịch bò với nhiệt độ Ni tơ lỏng với nhiệt độ -79 tới - 193 o C có dạng: dạng viên, dạng Ampoul dạng cọng
6.4 Vận chuyển tinh dịch: tinh dịch pha chế xong vận chuyển xa hay gần phụ thuộc vào yêu cầu sản xuất viị trí, địa điểm Khi vận chuyển cần phải đảm bảo yêu cầu sau
+ Nhiệt độ phải ổn định
+ Tránh tác động học + Tránh nhầm lẫn, đổ vỡ
VII Kü thuËt dÉn tinh
(18)cái động dục điều kiện thích hợp Đây khâu cuối công tác thụ tinh nhân tạo định hiệu q trình thụ tinh nhân tạo
7 Phương pháp xác định thời gian dẫn tinh:
a Phương pháp lâm sàng: dựa vào biểu lâm sàng cục CQSD toàn thân gia súc để định thời gian dẫn tinh
+ Toàn thân: thời gian đầu vật tăng cường hoạt động, sau giảm dần Đây giai đoạn vật mê, mê biểu trạng thái chịu đực mà giai đoạn khác khơng có thích gần đực giống gặp đực giống đứng trạng thái chịu đực
+ Cục bộ: âm hộ xung huyết tăng sinh lúc đầu mầu đỏ tươi (ở lợn) sau giảm dần chuyển sang mầu tái thâm, dịch nhờn từ âm đạo chảy lúc đầu lỗng mầu trắng sau đặc mầu vàng ngà
b Phương pháp sinh vật: dùng đực thí tình để phát động dục giai đoạn chụi đực
c Phương pháp thời gian: sở đúc rút kinh nghiệm người ta rút thời gian thích hợp để phối tinh cho lồi gia súc lợn nội phối vào cuối ngày thứ đầu ngày thư cịn lợn nái ngoại phối vào cuối ngày thứ đầu ngày thứ , bò cuối ngày đầu ngày 2, kể từ bắt đầu động dục, chó ngày thứ 11-12 giai đoạn động dục, ngựa trước ngừng động dục ngày
d phương pháp sờ khám buồng trứng qua trực tràng: phát nang trứng chín rõ lên bề mặt buồng trứng để định thời gian dẫn tinh
e Các phương pháp khác:
+ Phương pháp dùng máy phát động dục: người ta dùng Oestrogen mette (đo độ dẫn điện âm đạo động dục)
+ Phương pháp kết tinh cành dương sỉ niêm dịch cổ tử cung: chụi đực nồng độ Na++, K+ tăng cao chúng làm kết tinh Protein niêm dịch cổ tử cung dùng kính hiển vi quan sát kết tinh theo hình giáng cành dương sỉ niêm dịch cổ tử cung
(19)7.3 Kỹ thuật dẫn tinh cho loài gia sóc:
+ Trâu bị: Bị biểu động dục rõ trâu trâu động dục ngầm Trâu thường biểu đêm lúc yên tĩnh, - 11 dịch chảy (soi đèn phát được) Thời gian động dục thường tập trung khoảng 18-36 giờ, biến động 12-48 Con vật chụi đực niêm dịch đặc hơn, dính kéo dài 20cm mà không đứt Thời gian phối thường vào cuối ngày đầu ngày 2, ứng dụng quy luật sáng, chiều nghĩa sáng quan sát thấy động dục chiều phối, chiều quan sát thấy động dục sáng hơm sau phối nên phối 02 lần sáng chiều Để tiến hành dẫn tinh cho trâu bò cần phải cố định trâu bò giá chắn dùng phương pháp trực tràng cổ tử cung: găng tay đưa qua trực tràng tìm cổ tử cung, nắm cổ tử cung, tay cầm dẫn tinh quản hay súng bắn tinh đưa qua âm đạo Kết hợp tay lắp cổ tử cung vào dẫn tinh quản hay súng bắn tinh (chú ý đưa chếch lên 15 – 200) a dn tinh
quản qua lớp gấp niêm mạc cổ tử cung (3 sật) bơm tinh dịch vào Chú ý không đưa dẫn tinh quản hay súng bắn tinh vào sâu > cm qua cỉ tư cung
+ Ngựa: động dục theo mùa: thường tháng đến tháng 10 Xác định thời gian dẫn tinh ngựa dựa vào tượng sau, thử đực chụi đực được, lâm sàng ngựa đái rắt, đuôi cong lên niêm dịch chảy dính, dài Ngồi vào thời gian động dục 5-6 ngày Để dẫn tinh cho ngựa cần người sau cố định an toàn, tay găng bôi trơn cầm dẫn tinh quản đưa vào âm đạo cắm sâu vào cổ tử cung giữ chặt, người khác bơm tinh vào, sau kết thúc từ từ rút tay dẫn tinh quản
+ Lợn: dễ thường dẫn tinh vào ngày thứ với lợn nái nội ngày thứ với lợn nái ngoại kể từ bắt đầu động dục (hoa tái, lợn mê) Chú ý sật
(20)của cừu âm thầm, khó phát Để xác định thời gian dẫn tinh ta dùng đực thí tình lần đầu chịu đực nhắc lại lần sau 8-10h Để dẫn tinh cho dê cừu phải cố giá cố định để đầu chúc xuống, dùng mỏ vịt nhỏ mở âm đạo, dùng seringe cắm vào cổ tử cung bơm tinh dịch vào Với dê cừu hiệu thấp, 30 - 40%, cao đạt 60%
B KỸ THUẬT CẤY TRUYỀN HỢP TỬ
I NHỮNG VẤN ĐỀ CHUNG
1.I Khái niệm: Cấy truyền hợp tử (TE Transplantation of Embryo) hay gọi di thực phôi, cấy ghép hợp tử, cấy chuyển phôi kỹ thuật mà người tiến hành đem hợp tử (do thụ tinh Invivo hay Invitrro) bố mẹ cấy truyền vào vào khác giống động dục thời gian thích hợp dụng cụ chun dụng thích hợp Đây nói kỹ thuật cơng nghệ sinh học trình độ cao giúp cho cơng tác cải tạo giống cách nhanh , hiệu
1.2 Lợi ích công nghệ cấy truyền hợp tử
+ Nâng cao sức sinh sản cao sản đặc biệt động vật đơn thai
ví dụ bị cao sản tự nhiên đời (15 -16năm) cho 10 bê có bê Nếu sử dụng TE bò cao sản lần khai thác trung bình 10E (8-20) năm khai thác khoảng 50E chắn thu 15-20 bê năm thu số bê 2-3 đời bị sinh sản tự nhiên
(21)tÝnh ưu việt bố mẹ nh÷ng cai kÐm vÉn cã thĨ sinh q tư
+ Rút ngắn thời gian gây dựng đàn sản xuất cao sản nghĩa rút ngắn thời gian cải tạo giống
Ví dụ để cải tạo dàn bị sữa ấn Độ phải 200năm, ứng dụng TE thời gian 16-20 năm
+ Gi¶m tíi mức tối đa tổn thất, chi phí trình nhập nội giống gia súc cao sản
+ Đặt cở sở cho công nghệ đỉnh cao chia cắt phôi, xác định giới tính, kỹ thuật cấy chuyển gen
I.3 Vài nét phát triển, tương lai cụng ngh TE
a Điểm khởi dầu
Thí nghiệm cơng nghệ phải kể đến thí nghiệm Walter Heape 1890 Tuy nhiên sau nhiều lý tơn giáo, nhân văn lĩnh vực không tiếp tc m rng v phỏt trin
b Giai đoạn xây dựng sở
T nhng nm 20 kỷ 20 mà hiểu biết sinh lý sinh sản rõ ràng dặc biệt khám phá mối quan hệ vùng đồi tuyến yên (Hypothalamus – Hypofisis) lĩnh vực sinh sản người ta tập trung nghiên cứu thành mà Walter Heape đưa Đến năm 1960 vấn đề nghiên cứu phát triển mạnh mẽ động vật thí nghiệm chuột thỏ gia súc bị dê cừu trí người, vào năm 1960 Thibanlt nhà khoa học Pháp thành công thụ tinh Invitro trứng thỏ sau 1966 ơng người nghiên cứu thành cơng ni trứng bị Invitro tới tế bào từ nhà khoa học bắt đầu tập trung nghiên cứu với lĩnh vực
(22)+ Gây động dục đồng loạt, đồng pha (Lauderdah 1972 ; Roche 1975 đặc biệt việc nghiên cứu thành công lĩnh vực làm chủ vòng động dục của Roche
+ Đơng lạnh hợp tử bị (Whitingham 1972) nghiên cứu khác vận chuyển hợp tử, dụng cụ thụ cấy kỹ thuật cấy không mổ đặc bieet đến năm 1978 cậu bé louis Braww – cậu bé ống nghiẹm đời báo hiệu thành công lớn công nghệ TE
Ngày công nghệ TE ứng dụng cách sâu rộng nước phát triển Mỹ, Anh, Phắp, Đức coi công cụ kỹ thuật hữu hiệu lĩnh vực sinh sản
ở Việt Nam công nghệ TE Bùi Xuân Nguyên cộng nghiên cứu thành công Ba Vì Hà Tây năm 1981 từ năm 1986-1990 công việc tập thể cán khoa học Trung tâm nghiên cứu Đà Lạt, ĐHNNI, Viện Chăn nuôi Quốc gia, Học viện quân y đẩy mạnh nghiên cứu kết dã có nhiều bị cao sản tạo từ công nghệ TE xây dựng quy trình cơng nghệ TE ổn định bị
II C¥ Së KHOA HäCcđa kü tht cÊy trun hỵp tư
(23)nguyên sinh chất tế bào, phần khác nhờ vào dịch tiết tử cung (sữa tử cung) Sau hợp tử bước sang giai đoạn chúng làm tổ niêm mạc tử cung hình thành thai phát triển thành phôi thai bào thai
2.2 Mét sè kÕt luËn chung
- Trứng sau thụ tinh sống phát triển độc lập nhờ vào dinh dưỡng dự trữ bn thõn
- Cần thiết phải thu hợp tử giai đoạn 5-8 ngày tuổi
- Có thể cấy hợp tử vào tử cung khác với điều kiện trạng thái niêm mạc tử cung thích hợp với yêu cầu phát triển hợp tử
IIi C¸c néi dung chđ u cđa kü tht cÊy trun hợp tử
3.1 Donors (các cho)
Đó cao sản, đẹp, có sức sống cao, có sức khoẻ tốt có nghĩa đạt yêu cầu mong muốn cần phát triển phát triển Những phối tinh với đực cao sản, đẹp, khoẻ có tiềm di truyền đặc điểm tốt cao chúng chăm sóc ni dưỡng quản lý khai thác sử dụng quy trình kỹ thuật
3.2 Receptors (c¸c nhËn)
Các nhận phải có khả sinh sản tốt, khoẻ mạnh khơng bệnh tật ngoại hình khơng đẹp sức sản xuất khơng cao Chúng phải có tầm vóc lớn để mang thai dễ đẻ chúng chăm sóc ni dưỡng quản lý khai thác sử dụng quy trình kỹ thuật
3.3 Super ovulation ( g©y rơng trøng nhiỊu ë cho)
(24)cái tốt người ta chủ động gây động dục cho cho làm cho rụng trứng với số lượng gấp nhiều lần bình thường Ví dụ bị người ta cho rụng lần tới 10-25 trứng Để gây siêu nỗn chủ động người ta dùng cơng thức sau
(25)Sơ đồ gây rụng trứng nhiều lặp lại sớm
Ngµy
0 5 10, 11, 12, 13 14 21 35
Chọn bò
Đ Đặt CIDR
Tiªm Estradiol
Đặt CIDR
Tiêm FSH Phèi gièng
- Tiêm PGF2 - Thu phôi, phân loại phôi
- Rót CIDR - Tiªm PGF2
- Thơt giưa
NghØ 14 ngµy
CIDR ( Controlled Internal Drug Release) dụng cụ có hình chữ T, chứa 1,9g Progesteron
(26)(27)3.4 Thu trứng: Người ta dùng dụng cụ chuyên dụng và thích hợp để thu trứng
3.5 KiÓm tra trøng:
Đặt dịch thu nhiệt độ 37oC gạn loại bỏ dịch thụt rửa
khơng có trứng sau san dần phần cịn lại vào đĩa có chia dùng kính hiển vi soi để tìm kiểm tra hình thái trứng trứng đạt yêu cầu trứng có vỏ dày, sáng, Nhân có tế bào sau kiểm tra hút dồn trứng vào đĩa có mơi trường ni giũ trứng Sau cấy trứng tươi cho nhận nên cấy vào thời gian sớm tốt cấy 6h sau thu trứng cần bảo quản phơi dùng kỹ thuật đông lạnh phôi
3.6 Gây động dục đồng pha cho nhận
Để đạt kết sinh sản nhận cần phải gây động dục đồng loạt đồng pha với cho kỹ thuật cấy trứng tươi Nghĩa trứng cấy vào phải tươi thời điểm cấy lúc trạng thái tử cung sau động dục sử dụng công thức sau
(28)
ngµy Pg Động dục không AI
Ngày Đặt vòng Tháo vòng cấy tai Tháo tai
Pg 11-12 ngày Pg( trước Donor 12 -18h) Ngày Động dục không AI
3.7 Kü tht cÊy hỵp tư:
Kỹ thuật cấy truyền hợp tử bao gồm bước sau: + Cố định nhận vào giá cố định, vệ sinh moi hết phân trực tràng
+ Kiểm tra tử cung, kiểm tra buồng trứng xác định tuổi của thể vàng tương ứng với tuổi trứng
+ Nạp trứng vào pistolet( trứng đông lạnh phải giải đông, kiểm tra hình thái trứng, hoạt lực trứng)
+ Đưa pistolet qua cổ tử cung khéo léo dưa đầu pistolet vào 1/3 -1/2 sừng tử cung có trứng rụng bơm hợp tử vào sau nhẹ nhàng rút pistolet
+ Chó ý:
- Dụng cụ phải vô trùng
- Thao tác phải khéo léo, nhẹ nhàng, x¸c,
nhanh 3-5
- Con nhận phải chăm sóc tốt, ý bổ sung