Luận án tiến sĩ dược học FULL (DL và DCT) nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hoá học và một số tác dụng sinh học của loài chloranthus japonicus sieb ở việt nam

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận án cơng trình nghiên cứu riêng tơi, hướng dẫn GS.TS Phạm Thanh Kỳ PGS.TS Lê Việt Dũng Các kết trình bày luận án trung thực chưa công bố cơng trình khác HàNội, ngày tháng Nghiên cứu sinh năm 2018 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian nỗ lực để hồn thành luận án, lúc tơi xin phép bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến thầy giáo, chun gia, nhà khoa học hướng dẫn, giúp đỡ thời gian qua Trước tiên, tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới Nhà Giáo Nhân Dân GS.TS Phạm Thanh Kỳ - người thầy trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình thực Luận án Tôi xin cảm ơn PGS.TS Lê Việt Dũng, TS Phạm Thị Nguyệt Hằng, PGS.TS Phương Thiện Thương – Viện Dược liệu giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành Luậnán Tơi xin cảm ơn BGĐ Bệnh viện YHCT TW tạo điều kiện cho tơi học tập hồn thành luận án Cuối xin bày tỏ ng biết ơn sâu sắc tới cha mẹ kính yêu, người thân gia đình, bạn bè đồng nghiệp ln bên cạnh động viên giúp đỡ sống nghiệp Xin chân thành cảm ơn! HàNội, ngày tháng Tác giả năm 2018 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ALT Alanin amino transferase AST Aspartat amino transferase BuOH Butanol BV Bảo vệ Hx n-hexan 13 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân cacbon 13 C- NMR Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy H -NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy DC Dịch chiết Dl Dược liệu DMSO Dimethylsulfoxide DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer ESI-MS Electrospray Ionisation-Mass Spectrometry EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence HPLC Hight pressure Liquid Chrom atography (sắc ký lỏng hiệu cao) IR Phổ hồng ngoại Infrared Spectroscopy KH Khoa học Me Nhóm metyl MS Phổ khối lượng (Mass Spectroscopy) MDA Malondialdehyd NC Nghiên cứu PĐ Phân đoạn PAR Paracetamol SN Sói nhật SKC Sắc ký cột Column Chromatography SKLM Sắc ký lớp mỏng CTPT Công thức phân tử TD Tác dụng TLC Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) TLTK Tài liệu tham khảo TPCN Thực phẩm chức TT Thuốc thử (ppm) Độ dịch chuyển hóa học (parts per milion) s singlet d doublet d double of doublet d triplet t multiplet m Thể trọng chuột ttc Trên mặt đất TMĐ Viện dược liệu VDL Đại học dược Hà Nội HNIP Viện sinh thái tài nguyên sinh vật NH Đại học khoa học tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội DANH MỤC CÁC BẢNG TT Số bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Các eudesmane sesquiterpen phân lập từ loài chi Chloranthus Bảng 1.2 Các lindenan sesquiterpen phân lập từ loài chi Chloranthus 13 Bảng 1.3 Các sesquiterpen khác phân lập từ loài chi Chloranthus 17 Bảng 1.4 Các diterpenoid phân lập từ loài chi Chloranthus 19 Bảng 1.5 Các triterpenoid phân lập từ loài chi Chloranthus 23 Bảng 1.6 Các flavonoid phân lập từ loài chi Chloranthus 24 Bảng 1.7 Các coumarin phân lập từ loài chi Chloranthus 24 Bảng 1.8 Các acid hữu phân lập từ loài chi Chloranthus 24 Bảng 1.9 Các lignan phân lập từ loài chi Chloranthus 25 10 Bảng 1.10 Các sterol khác phân lập từ loài chi Chloranthus 25 11 Bảng 1.11 Các chất khác phân lập từ loài chi Chloranthus 25 12 Bảng 1.12 Các eudesmane sesquiterpen phân lập từ loài C japonicus 26 13 Bảng 1.13 Các lindenan sesquiterpen phân lập từ loài C japonicus 27 14 Bảng 1.14 Các sesquiterpen khác phân lập từ loài C japonicus 29 15 Bảng 1.15 Các coumarin phân lập từ loài C japonicus 30 16 Bảng 1.16 Các acid hữu phân lập từ loài C japonicus 30 17 Bảng 1.17 Các lignan phân lập từ loài C japonicus 30 18 Bảng 1.18 Các sterol phân lập từ loài C japonicus 31 19 Bảng 1.19 Các chất khác phân lập từ C japonicus 31 20 Bảng 3.1 Kết định tính hợp chất hữu Sói nhật 58 21 Bảng 3.2 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 1-2 62 22 Bảng 3.3 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 64 23 Bảng 3.4 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 65 24 Bảng 3.5 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz)chất số 67 25 Bảng 3.6 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 72 26 Bảng 3.7 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 73 27 Bảng 3.8 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 75 28 Bảng 3.9 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 10 77 29 Bảng 3.10 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 11 79 30 Bảng 3.11 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 12 83 31 Bảng 3.12 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 13 85 32 Bảng 3.13 Số liệu phổ 1H (500 MHz) 13C-NMR (125 MHz) chất số 14 86 33 Bảng 3.14 Tỷ lệ chuột chết lô chuột uống SN 88 34 Bảng 3.15 Tác dụng chống viêm SN (phần TMĐ) mơ hình gây phù chân chuột carrageenin 89 35 Bảng 3.16 Tác dụng chống viêm SN (phần rễ) mơ hình gây phù chân chuột carrageenin 89 36 Bảng 3.17 Ảnh hưởng SN đến thể tích dịch rỉ viêm 90 (phần TMĐ) 37 Bảng 3.18 Ảnh hưởng SN đến thể tích dịch rỉ viêm (phần rễ) 90 38 Bảng 3.19 Ảnh hưởng SN đến số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm (phần TMĐ) 90 39 Bảng 3.20 Ảnh hưởng SN đến số lượng bạch cầu dịch rỉ viêm (phần rễ) 91 40 Bảng 3.21 Ảnh hưởng SN đến hàm lượng protein dịch rỉ viêm (phần TMĐ) 91 41 Bảng 3.22 Ảnh hưởng SN đến hàm lượng protein dịch rỉ viêm (phần rễ) 91 42 Bảng 3.23 Tác dụng cao SN lên trọng lượng u hạt (phần TMĐ) 92 43 Bảng 3.24 Tác dụng cao SN lên trọng lượng u hạt (phần rễ) 92 44 Bảng 3.25 Ảnh hưởng cao SN (phần TMĐ) lên hoạt độ ALT huyết chuột bị gây độc paracetamol 93 45 Bảng 3.26 Ảnh hưởng cao SN (phần TMĐ) lên hoạt độ AST huyết chuột bị gây độc paracetamol 93 46 Bảng 3.27 Ảnh hưởng cao SN (phần TMĐ) lên hàm lượng MDA dịch đồng thể gan 93 47 Bảng 3.28 Ảnh hưởng cao SN (phần rễ) lên hoạt độ ALT huyết chuột bị gây tổn thương gan cấp paracetamol 94 48 Bảng 3.29 Ảnh hưởng cao SN (phần rễ) lên hoạt độ AST huyết chuột bị gây tổn thương gan cấp paracetamol 94 49 Bảng 3.30 Ảnh hưởng cao SN(phần rễ) lên hàm lượng MDA dịch đồng thể gan 95 50 Bảng 3.31 Hoạt tính ức chế enzym protease HIV-1 hợp chất SN2 96 51 Bảng 4.1 Vị trí phân loại chi Chloranthus Sw theo hệ thống phân loại 97 DANH MỤC HÌNH STT Số hình Tên hình Trang Hình 1.1 Một số dạng Hình 1.2 Vị trí cụm hoa Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 39 Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất phân lập chất phần mặt đất cấy Sói nhật 42 Hình 2.3 Sơ đồ chiết xuất phân lập chất từ rễ Sói nhật 44 Hình 3.1 (1) Tiêu Sói nhật thu hái Lâm Đồng (6/2012), (2) Tiêu Sói nhật thu hái Vĩnh Phúc (27/4/2012) lưu Viện Dược liệu 50 Hình 3.2 Cây Sói nhật Đà lạt - Lâm Đồng (7/01/2012) 51 Hình 3.3 Cây Sói nhật mọc rải rác tán rừng thơng kim 51 Hình 3.4 Đặc điểm hình thái quan sinh trưởng Sói nhật 52 10 Hình 3.5 Đặc điểm hình thái quan sinh sản Sói nhật 53 11 Hình 3.6 Đặc điểm vi phẫu rễ Sói nhật 54 12 Hình 3.7 Đặc điểm vi phẫu thân Sói nhật 55 13 Hình 3.8 Đặc điểm vi phẫu Sói nhật 55 14 Hình 3.9 Đặc điểm bột phần mặt đất Sói nhật 56 15 Hình 3.10 Đặc điểm bột rễ Sói nhật 57 16 Hình 3.11 Cơng thức cấu tạo chất số 60 17 Hình 3.12 Phổ 1H –NMR chất số 60 18 Hình 3.13 Phổ 13C-NMR chất số 61 19 Hình 3.14 Phổ DEPT chất số 61 20 Hình 3.15 Cơng thức cấu tạo chất số 62 21 Hình 3.16 Cơng thức cấu tạo chất số 64 22 Hình 3.17 Cấu trúc hóa học chất số 66 23 Hình 3.18 Cấu trúc hóa học chất số 68 24 Hình 3.19 Cấu trúc hóa học chất số 69 25 Hình 3.20 Phổ (+) MS chất số 69 26 Hình 3.21 Phổ 1H –NMR chất số 70 27 Hình 3.22 Phổ 13C-NMR chất số 70 28 Hình 3.23 Phổ DEPT chất số 71 29 Hình 3.24 Cấu trúc hóa học chất số 72 30 Hình 3.25 Cấu trúc hóa học chất số 74 31 Hình 3.26 Cấu trúc hóa học chất số 76 32 Hình 3.27 Cấu trúc hóa học chất số 10 78 33 Hình 3.28 Cấu trúc hóa học chất số 11 80 34 Hình 3.29 Phổ 13C-NMR chất số 11 81 35 Hình 3.30 Phổ DEPT chất số 11 81 36 Hình 3.31 Phổ HMBC chất số 11 82 37 Hình 3.32 Phổ HSQC chất số 11 82 38 Hình 3.33 Cấu trúc hóa học chất số 12 84 39 Hình 3.34 Phổ HSQC chất số 12 84 40 Hình 3.35 Cấu trúc hóa học chất số 13 86 41 Hình 3.36 Cấu trúc hóa học chất số 14 87 42 Hình 3.37 Đồ thị tương quan liều dùng SN với tỉ lệ chuột chết theo đường uống 88 43 Hình 3.38 Đồ thị thể hoạt tính ức chế SN2 protease HIV-1 96 44 Hình 4.1 Cấu trúc hóa học 14 hợp chất phân lập từ Sói nhật 101 45 Hình 4.2 Hoạt tính ức chế SN2 (A) acid maslinic (B) protease HIV-1 113 Phổ HMBC Phổ HSQC Phụ lục C12: Phổ hợp chất 12 (SNR13 = SN13): (Calycanthoside) - Phổ ESI-MS, - - 13 - DEPT H-NMR, C-NMR, Công thức: 12 OH O O 5' HO HO 3' O O O 1' OH 11 O Phổ ESI+MS 10 Phổ ESI+MS2 Phổ 1H - NMR Phổ 1H - NMR Phổ 1H - NMR Phổ 13C - NMR Phổ 13C - NMR Phổ DEPT Phụ lục C13: Phổ hợp chất 13 (SNR14 = SN14): (Shizukanolide F) - Phổ ESI-MS, - - 13 - DEPT H-NMR, C-NMR, Công thức: Phổ ESI-MS Phổ 1H -NMR Phổ 1H -NMR Phổ 13C -NMR Phổ 13C -NMR Phổ 13C -NMR Phổ DEPT Phổ DEPT Phụ lục C14: Phổ hợp chất 14 (SNR15 = SN15): (Isofraxidin) - Phổ ESI-MS, - - 13 - DEPT H-NMR, C-NMR, Công thức: O HO O O 10 O Phổ ESI+MS Phổ 1H - NMR Phổ 1H - NMR Phổ 13C - NMR Phổ 13C - NMR Phổ DEPT Phổ DEPT ... làm sáng tỏ kinh nghiệm dân gian, tạo sở khoa học khai thác nguồn dược liệu nước, luận án thực với tên: ? ?Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hoá học số tác dụng sinh học loài Chloranthus japonicus. .. nhiều nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Sói nhật (Chloranthus japonicus Sieb. ), nhiên Việt Nam nghiên cứu Sói nhật cịn Để tìm hiểu thành phần hố học Sói nhật mọc Việt Nam góp phần. .. trúc đặc trưng thành phần hóa học chi Chloranthus Sw 1.3 TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CHI CHLORANTHUS SW 1.3.1 Tác dụng sinh học loài chi Chloran thus Sw Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu tác dụng sinh