Luận án tiến sĩ dược học FULL (DL và DCT) nghiên cứu về thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học của cây hế mọ (psychotria prainii h lév )

LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận án cơng trình nghiên cứu khoa học riêng tơi hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Trọng Thông PGS.TS Lê Việt Dũng Các số liệu, kết trình bày luận án trung thực, khách quan chưa công bố cơng trình khác Tác giả luận án LỜI CẢM ƠN Trong q trình nghiên cứu hồn thành luận án này, nhận nhiều giúp đỡ q báu thầy giáo, nhà khoa học thuộc lĩnh lực đồng nghiệp, bạn bè gia đình Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Trọng Thơng PGS.TS Lê Việt Dũng, người thầy tận tình hướng dẫn, hết lịng bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo, Phòng Quản lý Khoa học Đào tạo - Viện Dược liệu; Đảng ủy, Ban Giám đốc Bệnh viện Y học cổ truyền tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới: - PGS.TS Đỗ Thị Hà - Viện Dược liệu - PGS.TS Phương Thiện Thương - Viện Dược liệu - ThS Nguyễn Quỳnh Nga - Viện Dược liệu - ThS Đậu Thùy Dương - Đại học Y Hà Nội Đã đóng góp ý kiến q báu cho thực luận án Cuối cùng, xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến người thân gia đình, bạn bè ủng hộ tạo điều kiện tốt cho q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu đó! MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 Chương 1: TỔNG QUAN 1.1 THỰC VẬT HỌC .3 1.1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật phân bố chi Psychotria L 1.1.2 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật phân bố Hế mọ 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Thành phần hóa học số loài thuộc chi Psychotria L .8 1.2.2 Thành phần hóa học Hế mọ 28 1.3 CÔNG DỤNG VÀ TÁC DỤNG SINH HỌC 28 1.3.1 Công dụng số loài thuộc chi Psychotria L theo y học cổ truyền 28 1.3.2 Tác dụng sinh học số loài thuộc chi Psychotria L 29 1.3.3 Công dụng số tác dụng sinh học Hế mọ 40 1.4 VIÊM 40 1.5 HỘI CHỨNG RUỘT KÍCH THÍCH 41 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 43 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 43 2.1.1 Nguyên liệu 43 2.1.2 Động vật thí nghiệm 43 2.1.3 Thuốc thử, hóa chất, dung mơi 43 2.1.4 Máy móc, thiết bị 44 2.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 45 2.2.1 Nghiên cứu thực địa 45 2.2.2 Nghiên cứu phịng thí nghiệm 45 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 45 2.3.1 Nghiên cứu thực vật học 45 2.3.2 Nghiên cứu hóa học 46 2.3.3 Nghiên cứu tác dụng sinh học 47 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu thống kê 56 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 57 3.1 THỰC VẬT HỌC .57 3.1.1 Thẩm định tên khoa học 57 3.1.2 Đặc điểm hình thái thực vật .57 3.1.3 Đặc điểm giải phẫu 60 3.1.4 Đặc điểm bột dược liệu lá, thân, rễ 62 3.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CÂY HẾ MỌ 64 3.2.1 Định tính nhóm chất hữu .64 3.2.2 Chiết xuất phân lập hợp chất 67 3.2.3 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập .70 3.3 TÁC DỤNG SINH HỌC 93 3.3.1 Tác dụng cao nước Hế mọ nhu động ruột 93 3.3.2 Tác dụng cao nước Hế mọ mơ hình gây hội chứng ruột kích thích động vật thực nghiệm 96 3.3.3 Tác dụng chống viêm chất phân lập từ phần mặt đất Hế mọ mô hình gây ức chế tạo thành NO 113 Chương 4: BÀN LUẬN 115 4.1 VỀ THỰC VẬT HỌC .115 4.2 VỀ HÓA HỌC 117 4.2.1 Kết định tính 117 4.2.2 Kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất .118 4.3 VỀ TÁC DỤNG SINH HỌC 123 4.3.1 Tác dụng chống viêm in vitro chất phân lập từ phần mặt đát Hế mọ mơ hình ức chế sản sinh NO tế bào RAW 264.7 123 4.3.2 Tác dụng cao nước Hế mọ hội chứng ruột kích thích .123 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .136 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ABTS 2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic Ac Aceton AChE Acetylcholinesterase ADN Acid deoxyribonucleic APG Angiosperm Phylogeny Group BChE Butyrylcholinesterase BuOH Butanol CC Column Chromatography (sắc ký cột) CMC Carboxymethyl cellulose COX Cyclooxygenase cs Cộng DCM Dichloromethan DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMEM Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium DMSO Dimethyl sulphoxide DOPAC 3,4-Dihydroxyphenylacetic acid DPPH 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl đnc Điểm nóng chảy ED50 Effective Dose 50% (liều có tác dụng 50%) ESI-MS Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (phổ khối lượng ion hóa phun mù điện tử) EtOAc Ethyl acetat EtOH Ethanol FBS Fetal bovine serum (huyết thai bò) Glc Glucose HCRKT Hội chứng ruột kích thích HIV HMBC acid) Human immunodeficiency virus (virut gây suy giảm miễn dịch người) Heteronuclear Multiple Bond Correlation (phổ tương tác dị hạt HSQC HPLC nhân qua nhiều liên kết) Heteronuclear Single Quantum Coherence (phổ tương tác dị hạt HSV Herpes simplex virus (virut Herpes) IC50 Inhibitory concentration 50% (nồng độ ức chế 50%) IR Infrared (phổ hồng ngoại) LPS Lipopolysaccharide MAO Monoamine oxidase mARN Messenger Acid Ribonucleic (ARN thông tin) MCF-7 nhân qua liên kết) High-performance liquid chromatography (sắc ký lỏng hiệu cao) Michigan Cancer Foundation-7 (human breast adenocarcinoma cell line/tế bào ung thư vú) Me Methyl (CH3) n-Hx n-hexan NMDA receptor N-methyl-D-aspartate receptor NMR Nuclear Magnetic Resonance (phổ cộng hưởng từ hạt nhân) NO Nitric oxyde P Psychotria POP Prolyl oligopeptidase SD Standard Deviation (độ lệch chuẩn) STT Số thứ tự TLC Thin Layer Chromatography (sắc ký lớp mỏng) TLTK Tài liệu tham khảo TNF-α Tumor necrosis factor-alpha (yếu tố hoại tử khối u-α) TT Thuốc thử UV Ultra-violet (phổ tử ngoại) DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Các hợp chất pyrrolidinoindolin chi Psychotria Bảng 1.2 Các hợp chất polypyrrolindinoindolin chi Psychotria 10 Bảng 1.3 Các hợp chất β-carbolin có khung B1 chi Psychotria 10 Bảng 1.4 Các hợp chất β-carbolin có khung B2 chi Psychotria 11 Bảng 1.5 Các hợp chất β-carbolin có cấu tạo theo khung B3 chi Psychotria 13 Bảng 1.6 Các hợp chất β-carbolin khác chi Psychotria 14 Bảng 1.7 Các indol alcaloid khác chi Psychotria 15 Bảng 1.8 Các hợp chất quinolin isoquinolin có khung emetin chi Psychotria Bảng 1.9 Các hợp chất quinolin isoquinolin khác chi Psychotria 16 17 10 Bảng 1.10 Các hợp chất monoterpen chi Psychotria 18 11 Bảng 1.11 Các sesquiterpen chi Psychotria 19 12 Bảng 1.12 Các triterpenoid chi Psychotria 21 13 Bảng 1.13 Các steroid chi Psychotria 22 14 Bảng 1.14 Các saponin chi Psychotria 23 15 Bảng 1.15 Các quinon chi Psychotria 24 16 Bảng 1.16 Các coumarin chi Psychotria 25 17 Bảng 1.17 Các flavonoid loài thuộc chi Psychotria 26 18 Bảng 1.18 Các hợp chất phenolic từ loài P yunnanensis 27 19 Bảng 1.19 Cơng dụng lồi thuộc chi Psychotria 28 20 Bảng 1.20 Một số tác dụng loài thuộc chi Psychotria 37 21 22 Bảng 2.1 Bảng tóm tắt mơ hình nghiên cứu tác dụng phục hồi cao Hế mọ chuột có HCRKT dầu mù tạt Bảng 2.2 Bảng tóm tắt mơ hình nghiên cứu tác dụng bảo vệ cao Hế mọ chuột gây HCRKT dầu mù tạt 51 53 23 Bảng 2.3 Các số đại thể đại tràng 54 24 Bảng 2.4 Chỉ số vi thể đại tràng 54 25 Bảng 3.1 Kết định tính nhóm chất phản ứng hóa học 65 26 Bảng 3.2 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 27 Bảng 3.3 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 28 Bảng 3.4 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 29 Bảng 3.5 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 30 Bảng 3.6 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 31 Bảng 3.7 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 32 Bảng 3.8 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 33 Bảng 3.9 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 34 Bảng 3.10 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 35 Bảng 3.11 Dữ kiện phổ H-NMR C-NMR hợp chất 10 36 37 38 39 40 13 70 13 78 13 79 13 81 13 82 13 84 13 86 13 88 13 90 13 92 Bảng 3.12 Ảnh hưởng cao nước Hế mọ độ di động than hoạt lòng ruột Bảng 3.13 Ảnh hưởng thuốc đến hấp thu nước từ lòng ruột vào máu Bảng 3.14 Ảnh hưởng thuốc đến hấp thu điện giải từ lòng ruột vào máu Bảng 3.15 Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu lên cân nặng chuột Bảng 3.16 Ảnh hưởng thuốc độ di động than hoạt lòng ruột thời điểm 20 phút sau chuột uống than hoạt 93 94 95 96 97 41 Bảng 3.17 Ảnh hưởng thuốc số đại thể 98 42 Bảng 1.18 Ảnh hưởng thuốc điểm số đại thể 99 43 Bảng 3.19 Ảnh hưởng thuốc số vi thể 100 44 Bảng 3.20 Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu lên cân nặng chuột 105 45 Bảng 3.21 Ảnh hưởng thuốc độ di động than hoạt lòng ruột thời điểm 20 phút sau chuột uống than hoạt 106 46 Bảng 3.22 Ảnh hưởng thuốc số đại thể 107 47 Bảng 3.23 Ảnh hưởng thuốc điểm số đại thể 108 48 49 Bảng 3.24 Ảnh hưởng thuốc số vi thể Bảng 3.25 Kết thử tác dụng ức chế giải phóng NO chất phân lập từ phần mặt đất Hế mọ 109 114 50 Bảng 4.1 Các chất phân lập từ Hế mọ 118 51 Bảng 4.2 Tác dụng chống viêm ruột flavonoid 130 DANH MỤC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ STT Tên hình vẽ, sơ đồ Trang Hình 1.1 Cây Hế mọ Hình 1.2 Khung polypyrrolindinoindolin Hình 1.3 Khung emetin 15 Hình 1.4 Cơng thức cấu tạo hai hợp chất diterpenoid phân lập từ P spectabilis Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu tác dụng phục hồi cao Hế mọ chuột có HCRKT dầu mù tạt Hình 2.2 Sơ đồ nghiên cứu tác dụng bảo vệ cao Hế mọ chuột gây HCRKT dầu mù tạt 19 50 52 Hình 3.1 Một số đặc điểm hình thái Hế mọ 59 Hình 3.2 Cấu tạo giải phẫu Hế mọ 60 Hình 3.3 Cấu tạo giải phẫu thân Hế mọ 61 10 Hình 3.4 Cấu tạo giải phẫu rễ Hế mọ 61 11 Hình 3.5 Đặc điểm bột dược liệu Hế mọ 62 12 Hình 3.6 Đặc điểm bột dược liệu thân Hế mọ 63 13 Hình 3.7 Đặc điểm bột dược liệu rễ Hế mọ 64 14 Hình 3.8 Kết định tính alcaloid phần mặt đất Hế mọ sắc ký lớp mỏng 15 Hình 3.9 Cấu trúc hợp chất 16 Hình 3.10 Phổ H-NMR hợp chất 17 66 71 71 Hình 3.11 Phổ C-NMR hợp chất 13 72 18 Hình 3.12 Phổ DEPT hợp chất 73 19 Hình 3.13 Phổ HMBC hợp chất 74 20 Hình 3.14 Các liên kết HMBC chọn lọc hợp chất 74 21 Hình 3.15 Phổ NOESY hợp chất 75 22 Hình 3.16 Phổ ESI-MS hợp chất 76 23 Hình 3.17 Phổ HR-ESI-MS hợp chất 76 PHỤ LỤC 13: PHỔ CỦA HỢP CHẤT PPW32.1 Cấu trúc hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.1 Phổ H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 13 Phụ lục 13.2 Phổ C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.3 Phổ DEPT hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.4 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.6 Phổ ROESY (500/500 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.7 Phổ ESI-MS hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.1 Phổ H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 13 Phụ lục 13.2 Phổ C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.3 Phổ DEPT hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.4 Phổ HMBC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.5 Phổ HSQC (500/125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.6 Phổ ROESY (500/500 MHz, CD3OD) hợp chất PPW32.1 Phụ lục 13.7 Phổ ESI-MS hợp chất PPW32.1 PHỤ LỤC 14: PHỔ CỦA HỢP CHẤT PPW33.6 Cấu trúc hợp chất PPW33.6 Phụ lục 14.1 Phổ H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất PPW33.6 13 Phụ lục 14.2 Phổ C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW33.6 Phụ lục 14.3 Phổ DEPT hợp chất PPW33.6 Phụ lục 14.4 Phổ ESI-MS hợp chất PPW33.6 Phụ lục 14.1 Phổ H-NMR (500 MHz, CD3OD) hợp chất PPW33.6 13 Phụ lục 14.2 Phổ C-NMR (125 MHz, CD3OD) hợp chất PPW33.6 Phụ lục 14.3 Phổ DEPT hợp chất PPW33.6 Phụ lục 14.4 Phổ ESI-MS hợp chất PPW33.6 ... R6 H OH Rha(1→6)Glc H H OH P rubra H OH O-Rha O-Rha(1→6)Glc O-Rha(1→6)Glc OH OH O-Rha(1→6)Glc H H H H H H H H Rha(1→6)Glc H H H H Glc H H H OH OH OH H H H OH H H H H H H H Me OH H H H H H H H. .. thiết phải có nghiên cứu tồn diện nhiều khía cạnh, từ đặc điểm thực vật đến thành phần hoá h? ??c tác dụng sinh h? ??c Vì vậy, nghiên cứu sinh thực đề tài ? ?Nghiên cứu thực vật, thành phần h? ?a h? ??c số. .. điểm thực vật phân bố H? ?? mọ 1.2 THÀNH PHẦN H? ?A H? ??C 1.2.1 Thành phần h? ?a h? ??c số loài thuộc chi Psychotria L .8 1.2.2 Thành phần h? ?a h? ??c H? ?? mọ 28 1.3 CÔNG DỤNG VÀ TÁC DỤNG