Ngày nay, với sự phát triển của khoa học kỹ thuật, một kỹ thuật mới có thể thay thế được kỹ thuật gây rụng trứng nhiều là kỹ thuật thụ tinh ống nghiệm. Trên thế giới. TTON đã được nghiên cứu từ những năm đầu thế kỷ và con thỏ đầu tiên ra đời bằng kỹ thuật này vào năm 1959, ... Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật siêu âm thu tế bào trứng từ bò sông để tạo phối trong ống nghiệm...
NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SIÊU ÂM THU TẾ BÀO TRỨNG TỪ BỊ SỐNG ĐỂ TẠO PHƠI TRONG ỐNG NGHIỆM Nguyễn Văn Lý , Lưu Công Khánh, Nguyễn Thị Thoa, Phan Lê Sơn, Chu Thị Yến, Nguyễn Thị Kim Anh Vũ Ngọc Hiệu Bộ môn cấy truyền phôi Abstract The experiment was conducted on dairy cross-breed cows with 64 Ovum Pick-up sessions Among 359 observed follicles with diameter ≤8mm, 255 oocytes were aspirated with the average of 3.98 oocytes per ovary and the oocytes classified as grade A, B, C were 36.08±2.04; 24.31±24.31 and 13.33±2.12%, respectively There was significant difference between oocytes graded as A, B and C (P250kg, có chu kỳ sinh lý sinh sản bình thường không mắc bệnh đường sinh dục PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Những bò tốt chọn lựa mặt di truyền sử dụng máy siêu âm khám qua trực tràng để xác định khả cho tế bào trứng, từ tiến hành thu tế bào trứng Hút tế bào trứng thực tuần lần Quá trình hút tế bào trứng tiến hành sau: Cho bò vào giá cố định, lấy hết phân ra, rửa sạch, sát khuẩn âm hộ khu vực xung quanh Chuẩn bị hệ thống máy siêu âm, nối đầu dò âm đạo vào máy siêu âm Nối kim hút tế bào trứng (kim 16G dài 55 cm), đặt máy tạo áp suất 120 mmHg, tương đương tốc độ dòng chảy 25 ml/phút Chuẩn bị môi trường hút tế bào trứng (mDPBS Sigma) có bổ sung 50 iu/ml heparin 5% huyết bê kháng sinh (100.000iu pennicilin/ml + 100µl streptomycin/ml) trì nhiệt độ 370C máy ổn nhiệt Nhẹ nhàng cho đầu dị siêu âm có gắn hệ thống dẫn kim vào âm đạo, cho tay qua trực tràng xác định vị trí buồng trứng, vị trí nang trứng đưa buồng trứng phía đầu quét đầu dò, quan sát nang trứng hình máy siêu âm, đếm số nang trứng có mặt buồng trứng, Trước hút dịch nang trứng, hút dung dịch hút trứng để làm trơn hệ thống kim ống dẫn Sau chọc hút - nang trứng, rút kim ra, hút dung dịch thu tế bào trứng để tế bào trứng chảy vào ống falcon, tiến hành hút lặp lại đến khơng cịn nhìn thấy nang trứng buồng trứng chuyển qua buồng trứng đối diện Dịch hút thu vào ống ly tâm 50ml trì nhiệt độ 370C máy ổn nhiệt Sau hút xong buồng trứng, đưa phịng thí nghiệm, lọc cốc lọc Emcon có đường kính lỗ lọc 20µm, khoảng 10ml dung dịch cịn lại chuyển vào đĩa petri vơ trùng có đường kính 90mm để soi tìm tế bào trứng kính hiển vi soi Tế bào trứng thu được đánh giá phân loại theo phương pháp Wright Lindner (1989) Sau đánh giá phân loại, tế bào trứng nuôi thành thục mơi trường TCM199 có bổ sung 5% huyết bê sinh 24 giờ, chúng chuyển qua môi trường thụ tinh BO với mật độ tinh trùng 6,25x106/ml Sau trình thụ tinh, hợp tử tách tế bào cumulus chuyển sang ni mơi trường ni CR1 có bổ sung axit amin, huyết bê sinh albumin huyết bị Sau ngày ni, phơi dâu, phơi nang có chất lượng tốt lựa chọn để cấy cho bò nhận động dục đồng pha Sau tháng, khám thai qua trực tràng để xác định tỷ lệ có chửa Số liệu xử lý theo phương pháp thống kê sinh học có sử dụng phần mềm Excel version 5.0 Minitab Release 12 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT QUẢ THU TẾ BÀO TRỨNG TỪ BỊ SỐNG Trong tổng số 64 lượt buồng trứng bị sống thu tế bào trứng phương pháp siêu âm, số nang trứng có đường kính ≤8mm quan sát 359 tổng số tế bào trứng thu 255, trung bình thu 3,98 tế bào trứng/buồng trứng Tỷ lệ thu tế bào trứng đạt 71,03% (bảng 1) Bảng 1: Thu tế bào trứng từ bò sống kỹ thuật siêu âm Chỉ tiêu Kết Số lượt buồng trứng thí nghiệm Số nang trứng có đường kính ≤ 8mm Số nang trứng trung bình/buồng trứng (Mean ± SE) Tổng số tế bào trứng thu Tế bào trứng thu được/buồng trứng (Mean ± SE) Tỷ lệ tế bào trứng thu (%) (Mean± SE) 64 359 5,61 ± 2,03 255 3,98 ± 3,21 71,03 ± 1,32 Số nang trứng trung bình/buồng trứng thí nghiệm thấp so với số nang trứng trung bình/buồng trứng báo cáo Rizos cs (2005) bò hậu bị bò sau đẻ (10,4 7,8 nang trứng/buồng trứng, tương ứng) Tuy nhiên, số tế bào trứng trung bình thu được/buồng trứng thí nghiệm chúng tơi khơng sai khác nhiều so với kết tác giả (3,98 so với 4,7 bò hậu bị 2,8 bò sau đẻ) Do vậy, tỷ lệ thu tế bào trứng cao so với tỷ lệ tác giả báo cáo (71,03% so với 45,4% bò hậu bị 36,0% bò sau đẻ) Tuy nhiên, kết thu thấp kết số tác giả khác báo cáo Số lượng nang trứng trung bình chọc hút số tế bào trứng trung bình thu lần siêu âm De Roover cs (2005) cao kết (11,9 nang trứng 5,6 tế bào trứng so với 5,61 nang trứng 3,98 tế bào trứng) Theo Reis cs (2002), từ 24 bò hậu bị, phương pháp siêu âm hút tế bào trứng lặp lại, tác giả tiến hành chọc hút lần tổng số 3234 nang trứng thu 1241 tế bào trứng (38,4% tương ứng) Trung bình thu 7,2 tế bào trứng/bò/lần siêu âm thứ 5,7 tế bào trứng/bò/lần siêu âm lặp lại Viana cs (2004) sử dụng quy trình siêu âm hút tế bào trứng từ bò Gir thấy số lượng tế bào trứng thu quy trình siêu âm 1lần/tuần 8,9 tế bào trứng (chọc hút 11,6 nang) lớn quy trình siêu âm 2lần/tuần 7,0 tế bào trứng (chọc hút 12,1 nang) điều tương ứng với tỷ lệ thu tế bào trứng quy trình thứ lớn quy trình thứ hai (74,3% so với 59,0%) Như vậy, quy trình siêu âm 1lần/tuần tỷ lệ thu tế bào trứng tác giả cao chúng tơi (74,3% so với 71,03%) cịn quy trình siêu âm thứ 2lần/tuần tỷ lệ thu tế bào trứng tác giả lại cho kết thấp (59,0% so với 71,03%) KẾT QUẢ PHÂN LOẠI TẾ BÀO TRỨNG THU ĐƯỢC TỪ BÒ SỐNG Sau thu được, tế bào trứng chọn lọc, phân loại theo phương pháp Loos cs (1989) Kết phân loại tế bào trứng trình bày bảng Bảng cho thấy có khác tỷ lệ tế bào trứng thu Chất lượng tế bào trứng loại A cao nhất, chiếm tỷ lệ 36,08% (92/255 tế bào trứng), tế bào trứng loại B D (24,31% 26,28% tương ứng); tỷ lệ tế bào trứng loại C thu thấp nhất, đạt 13,33% Như vậy, tế bào trứng đủ tiêu chuẩn nuôi cấy đạt 73,73% (188/255) Tỷ lệ tế bào trứng loại A B cao so với kết số tác giả khác báo cáo Tỷ lệ tế bào trứng loại A B (60,39%; 154/255) cao tỷ lệ tế bào trứng loại I II Viana cs (2004) sử dụng quy trình siêu âm tuần lần (29,0%) lần tuần (35%) Tuy nhiên, kết không sai khác nhiều so với kết Reis cs (2002) báo cáo Theo tác giả này, tỷ lệ tế bào trứng loại I II thu lần siêu âm tương ứng 54,9% 46,8% Bảng 2: Phân loại chất lượng tế bào trứng thu siêu âm Chất lượng tế bào trứng Loại A (%) Loại B (%) Loại C (%) Loại D (%) Chung abcd Tế bào trứng thu n (Mean ± SE) 92 36,08a ± 2,04 62 24,31b ± 1,93 34 13,33c ± 2,12 67 26,28d ± 1,68 255 100,0 Các chữ cột khác nhau, giá trị sai khác có ý nghĩa (P