LUẬN văn THẠC sĩ SINH học (FULL) đánh giá hiệu quả của kỹ thuật PCR phát hiện trực tiếp mycobacterium tuberculosis trong mẫu bệnh phẩm

LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Đắc Trung – Phòng Xét nghiệm Vi sinh vật Sinh học phân tử - Bộ môn Vi sinh – Trường Đại học Y Dược Thái Ngun, tận tình hướng dẫn, bảo tơi q trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô, kĩ thuật viên nhân viên Bộ môn Vi sinh – Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên tạo điều kiện máy móc sở vật chất giúp tơi hồn thành đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc, Phòng Kế hoạch Tổng hợp, bác sỹ, kĩ thuật viên Bệnh viện Lao Bệnh phổi Thái Nguyên cung cấp mẫu bệnh phẩm, hỗ trợ giúp đỡ tơi hồn thành số thí nghiệm q trình nghiên cứu Cùng với lịng biết ơn sâu sắc tơi xin gửi tới tồn thể thầy cô giáo Khoa Sinh – KTNN, Khoa Sau Đại học – Trường Đại học Sư phạm Thái Ngun giúp đỡ tơi q trình học tập hoàn thành đề tài nghiên cứu Cảm ơn bạn bè, đồng nghiệp, người thân gia đình động viên giúp đỡ nhiều Tôi xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, tháng năm Học Viên LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn tồn trung thực chưa có cơng bố cơng trình khác Học Viên i MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa Lời cảm ơn Lời cam đoan Mục lục i Danh mục kí hiệu, chữ viết tắt iii Danh mục bảng iv Danh mục hình vẽ v MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh lao 1.2 Tình hình bệnh lao giới Việt Nam 1.3 Đặc điểm bệnh lao đặc điểm vi khuẩn lao 1.4 Các phương pháp chẩn đoán vi khuẩn lao bệnh lao 16 1.4.1 Kỹ thuật soi kính trực tiếp 16 1.4.2 Kỹ thuật nuôi cấy 17 1.4.3 Kỹ thuật PCR 17 1.4.4 Kỹ thuật RFLP 17 1.4.5 Phương pháp ELISA 17 1.4.6 Miễn dịch tế bào 18 1.4.7 Miễn dịch dịch thể 18 1.5 Phương pháp PCR ứng dụng y học 19 1.5.1 19 Nguyên lý kỹ thuật PCR 1.5.2 Thành phần phản ứng 19 1.5.3 Các ứng dụng kỹ thuật PCR y học 20 1.5.4 Sự đa dạng quy trình kỹ thuật trình tự nucleotide đặc hiệu sử dụng để phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis 22 ii CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2 Dụng cụ thiết bị xét nghiệm 23 2.3 Hóa chất xét nghiệm 23 2.4 Quy trình nghiên cứu 24 2.5 Phương pháp kĩ thuật nghiên cứu 25 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Kết phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis mẫu bệnh phẩm 33 3.1.1 Kết phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis bệnh phẩm đờm 33 3.1.2 Kết phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis bệnh phẩm dịch màng phổi 35 3.2 Hiệu kỹ thuật PCR việc phát nhanh vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis 3.2.1 Hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis đờm 3.2.2 Hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis dịch màng phổi 37 38 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Viết đầy đủ AFB Acid Fast Bacilli AIDS Acquired Immuno Deficiency Syndrome BK Bacille de Kock Bp Base pair CTCLQG Chương trình chống lao quốc gia DRPQ Dịch rửa phế quản EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic Acid ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay GTDBDT Giá trị dự báo dương tính GTDBAT Giá trị dự báo âm tính HIV Human Immunodeficiency Virus IgG Immuno globin G IS6110 Insert Sequence 6110 PCR Polymerase Chain Reaction Se Sensitivity (độ nhạy) Sp Specificity (độ đặc hiệu) TCYTTG Tổ chức Y tế giới WHO World Health Organization DANH MỤC BẢNG SỐ LIỆU Trang Bảng 1.1 Ước tính bệnh nhân lao mắc năm 2002 theo khu vực Bảng 1.2 Số liệu ước tính bệnh lao nước ta hàng năm Bảng 2.1 Phân loại kết nhuộm soi 27 Bảng 2.2 Phân loại kết nuôi cấy 28 Bảng 2.3 Các thành phần phản ứng PCR 30 Bảng 3.1 Kết nhuộm soi phát vi khuẩn AFB đờm 33 Bảng 3.2 Kết nuôi cấy phát vi khuẩn Mycobacterium tubercuolosis đờm 33 Bảng 3.3 Kết PCR phát vi khuẩn Mycobacterium tubercuolosis đờm 34 Bảng 3.4 Kết nhuộm soi phát vi khuẩn AFB dịch màng phổi 35 Bảng 3.5 Kết nuôi cấy phát vi khuẩn Mycobacterium tubercuolosis dịch màng phổi 35 Bảng 3.6 Kết PCR phát vi khuẩn Mycobacterium tubercuolosis dịch màng phổi 36 Bảng 3.7 Hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis đờm nhuộm soi so với nuôi cấy 38 Bảng 3.8 Hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis đờm PCR so với nuôi cấy 39 Bảng 3.9 Hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis dịch màng phổi nhuộm soi so với nuôi cấy 40 Bảng 3.10 Hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis dịch màng phổi PCR so với nuôi cấy 41 Bảng 3.11 So sánh hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis đờm phương pháp nhuộm soi PCR 42 Bảng 3.12 So sánh hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis dịch màng phổi phương pháp nhuộm soi PCR 43 DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1 Vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis soi kính hiển vi 14 Hình 1.2 Khuẩn lạc vi khuẩn lao mơi trường ni cấy 15 Hình 1.3 Cấu trúc thành vi khuẩn lao 15 Hình 2.1 Quy trình nghiên cứu 24 Hình 2.2 Sơ đồ chu trình nhiệt phản ứng PCR 30 Hình 3.1 So sánh kết phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis đờm phương pháp 34 Hình 3.2 So sánh kết phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis dịch màng phổi phương pháp 36 Hình 3.3 So sánh hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis đờm phương pháp nhuộm soi PCR 42 Hình 3.4 So sánh hiệu phát vi khuẩn lao Mycobacterium tubercuolosis dịch màng phổi phương pháp nhuộm soi PCR 43 Hình 3.5 Hình ảnh soi kính hiển vi quang học trực khuẩn lao AFB nhuộm phương pháp Ziehl-Neelsen 44 Hình 3.6 Đặc điểm phát triển vi khuẩn lao mơi trường ni cấy Ogawa 45 Hình 3.7 Điện di đồ DNA gel agarose 1,0% 45 MỞ ĐẦU Lao bệnh nhiễm khuẩn phổ biến người, số người mắc lao cộng đồng ngày tăng Theo Tổ chức Y tế giới, năm 1994 có khoảng 1/3 dân số giới bị nhiễm lao Mỗi năm có 30 triệu người nhiễm lao, giây có thêm người nhiễm lao Bệnh lao bệnh gây tử vong hàng đầu người lớn, năm có triệu người chết lao, đến năm 2020 có thêm tỷ người nhiễm lao có khoảng 70 triệu người chết lao mà chủ yếu lao phổi Bệnh lao chủ yếu phát triển nước nghèo, nước phát triển, khoảng 95% số bệnh nhân lao 98% số người chết lao nước có thu nhập vừa thấp [8, 9, 10, 43] Ở nước phát triển, bệnh lao tồn cộng đồng nhiều yếu tố: bùng nổ đại dịch HIV/AIDS, tăng dân số khơng kìm hãm được, phân cực, phân hóa giàu nghèo, hoạt động chưa hiệu chương trình phịng chống lao quốc gia Việt Nam đứng thứ 12 số 22 nước có số bệnh nhân lao cao tồn cầu (WHO, 2008) Trong khu vưc Tây-Thái Bình Dương, Việt Nam đứng thứ sau Trung Quốc Philippinnes số lượng bệnh nhân lao lưu hành bệnh nhân lao xuất thêm hàng năm Để làm giảm tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ tử vong bệnh lao, biện pháp mà Tổ chức Y tế giới ưu tiên hàng đầu đẩy mạnh việc phát sớm trường hợp mắc lao, điều trị kịp thời để loại bỏ nguồn lây, hạn chế tối đa lây nhiễm cộng đồng Bệnh lao bệnh nhiễm khuẩn, tác nhân gây bệnh trực khuẩn Mycobacterium tuberculosis Phát chẩn đoán lao quan trọng chủ yếu dựa vào việc phát trực khuẩn lao thể chất xuất tiết người bị bệnh lao Tìm thấy trực khuẩn lao coi “tiêu chuẩn vàng” việc chẩn đốn bệnh lao Hiện có số phương pháp giúp chẩn đoán xác định hỗ trợ chẩn đoán xác định vi khuẩn Mycobacterium tuberculosis gây bệnh lao như: nhuộm soi trực tiếp, nuôi cấy phân lập, tiêm truyền động vật cảm nhiễm, test tuberculin, ELISA,… [13, 23] Ở Việt Nam, hầu hết bệnh viện, việc chẩn đoán bệnh lao chủ yếu dựa vào phương pháp nhuộm soi bệnh phẩm tìm vi khuẩn lao AFB Một số bệnh viện chuyên khoa lao bệnh phổi, thường tuyến trung ương có điều kiện thực thêm phương pháp ni cấy phân lập Tuy nhiên phương pháp ưu điểm số hạn chế: Phương pháp nhuộm soi trực tiếp, đơn giản, dễ thực hiện, hiệu thấp, độ nhạy không cao, ngưỡng phát u cầu ≥10 vi khuẩn/ml Cịn phương pháp ni cấy, phân lập có độ đặc hiệu cao lại cho kết chậm sau 4-8 tuần Do đó, việc có thêm phương pháp phát nhanh vi khuẩn lao, với độ nhạy độ đặc hiệu cao đáp ứng yêu cầu thực tế, khắc phục số hạn chế tồn phương pháp chẩn đoán vi khuẩn lao thường dùng PCR phản ứng tổng hợp DNA ống nghiệm, cho phép khuếch đại đoạn DNA đích lên hàng triệu thời gian ngắn PCR ứng dụng rộng rãi y sinh học, đặc biệt chẩn đoán nguyên nhân số bệnh nhiễm trùng truyền nhiễm, nhiều nghiên cứu cho thấy kỹ thuật có độ nhạy độ đặc hiệu cao chẩn đoán Ứng dụng phát triển kỹ thuật PCR giúp chẩn đốn nhanh xác vi khuẩn gây bệnh lao giải yêu cầu cấp bách công tác phát điều trị bệnh lao, góp phần khống chế đẩy lùi dần bệnh lao cộng đồng Từ yêu cầu thực tế chúng tơi tiến hành đề tài: “Đánh giá hiệu kỹ thuật PCR phát trực tiếp Mycobacterium tuberculosis mẫu bệnh phẩm” Mục tiêu nghiên cứu: Phát nhanh vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis mẫu bệnh phẩm thu nhận từ bệnh nhân nghi mắc lao phổi tràn dịch màng phổi lao kỹ thuật PCR Đánh giá hiệu kỹ thuật PCR việc phát nhanh vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh lao Lao bệnh ghi nhận sớm lịch sử y học Bệnh lao phát hiên trước Công nguyên Ấn Độ, Ai Cập, Hy Lạp nước vùng Trung Á Thời kỳ bệnh lao xếp lẫn với số bệnh khác, đặc biệt bệnh phổi Trong thời gian dài, người ta quan niệm bệnh không chữa bệnh di truyền [2, 3, 4] Năm 1882, Robert Kock tìm nguyên nhân gây bệnh lao trực khuẩn lao, ông giải thưởng Nobel y học năm 1905 sau trực khuẩn lao mang tên nhà bác học R.Koch (trực khuẩn BK-Bacille de Koch) [16, 27, 28] Từ đầu kỷ XX, xuất nhiều cơng trình dị ứng phịng bệnh lao Năm 1907, Von Pirquet áp dụng phản ứng da để xác định tình trạng nhiễm lao Năm 1908, Mantoux dùng tuberculin tiêm da để phát dị ứng lao (nay gọi phản ứng Mantoux) Cũng năm 1908, Calmette Guérin bắt đầu nghiên cứu tìm vacxin BCG (Bacille Calmette Guérin) sử dụng phòng bệnh lao người [14] Thời kỳ đầu, điều trị lao gặp nhiều khó khăn, số phương pháp áp dụng điều trị dinh dưỡng, bơm màng phổi, màng bụng, phẫu thuật thành ngực hay cắt bỏ tổn thương Tiếp sau đó, thuốc điều trị lao Rimifon, Streptomycine, Rifampicin, Pyrazinamid, tìm Hội nghị chống lao quốc tế lần thứ 23 Mexico (1975) nêu 12 loại thuốc đặc hiệu điều trị bệnh lao Những thành tựu y học đạt mở thời kỳ phịng chống tiêu diệt bệnh lao quy mơ tồn cầu 1.2 Tình hình bệnh lao giới Việt Nam 1.2.1 Tình hình bệnh lao giới Hiện nay, giới có khoảng 2,2 tỷ người nhiễm lao (chiếm 1/3 dân số giới) Theo số liệu công bố Tổ chức Y tế giới (WHO, 2004), ước tính năm 2003 có thêm khoảng triệu người mắc lao triệu người Hình 3.6 Đặc điểm phát triển vi khuẩn lao môi trường nuôi cấy Ogawa IS6110 (249bp) Hình 3.7 Điện di đồ DNA gel agarose 1,0% 1: Mẫu chứng dương 2: Mẫu chứng âm 5: Mẫu bệnh phẩm âm tính 3; 7: Mẫu bệnh phẩm dương tính (IS6110) 4: Marker bậc thang 100 bp KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Kết phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis mẫu bệnh phẩm Mẫu bệnh phẩm đờm 67 bệnh nhân nghi mắc lao phổi xét nghiệm: - Phương pháp nhuộm soi: 46,27% dương tính - Phương pháp ni cấy: 73,13% dương tính - Phương pháp PCR: 70,15% dương tính Mẫu bệnh phẩm dịch màng phổi 34 bệnh nhân tràn dịch màng phổi nghi lao xét nghiệm: - Phương pháp nhuộm soi: 5,88% dương tính - Phương pháp ni cấy: 26,47%dương tính - Phương pháp PCR: 23,53%dương tính Hiệu phương pháp phát vi khuẩn lao M tuberculosis mẫu bệnh phẩm Phương pháp nhuộm soi trực tiếp: + Mẫu bệnh phẩm đờm: - Độ nhạy = 53,06% - Độ đặc hiệu = 72,22 % - Giá trị tiên đốn dương tính = 83,87% - Giá trị dự đốn âm tính = 36,11% + Mẫu bệnh phẩm dịch màng phổi: - Độ nhạy = 11,11% - Độ đặc hiệu = 96,00 % - Giá trị tiên đốn dương tính = 50,00% - Giá trị dự đốn âm tính = 75,00% Phương pháp PCR: + Mẫu bệnh phẩm đờm: - Độ nhạy = 95,92% - Độ đặc hiệu = 100 % - Giá trị tiên đoán dương tính = 100% - Giá trị dự đốn âm tính = 90,00% + Mẫu bệnh phẩm dịch màng phổi - Độ nhạy = 88,89% - Độ đặc hiệu = 100 % - Giá trị tiên đốn dương tính = 100% - Giá trị dự đốn âm tính = 96,15% - Kỹ thuật PCR có khả phát vi khuẩn M tuberculosis có đờm dịch màng phổi cao xác so với kỹ thuật nhuộm soi trực tiếp, đặc biệt trường hợp lao phổi AFB âm tính (khơng phát vi khuẩn AFB đờm nhuộm soi) - Trong nghiên cứu này, độ nhạy kỹ thuật PCR phát vi khuẩn lao M tuberculosis chưa thể với phương pháp nuôi cấy kỹ thuật đặc biệt có ưu thời gian cho kết xét nghiệm; với kỹ thuật PCR, sau 12 cho kết chẩn đốn phương pháp ni cấy cần thời gian 4- tuần có kết Kiến nghị Tiến hành nghiên cứu số lượng mẫu lớn với nhiều loại bệnh phẩm để đánh giá hiệu tồn diện kỹ thuật PCR chẩn đoán bệnh lao Đầu tư, xây dựng phòng xét nghiệm PCR đào tạo nhân lực thực kỹ thuật cho bệnh viện chuyên khoa lao tuyến tỉnh nhằm góp phần nâng cao hiệu cơng tác chẩn đốn điều trị bệnh lao cộng đồng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Đặng Đức Anh (2002), PCR chẩn đoán bệnh la, Báo cáo tổng kết đề tài cấp bộ, Hà Nội Lã Duy Anh (2009), Xác định đột biến gen KATG liên quan đến tính kháng thuốc isoniazid số chủng vi khuẩn lao Việt Nam, Luận văn Thạc sỹ sinh học, Đại học sư phạm Thái Nguyên Bộ Môn Lao - Trường Đại học Y Hà Nội(2006), Bệnh học lao, Nhà xuất Y học, Hà Nội Bộ môn Lao Trường Đại học Y Hà Nội (2002), Bệnh học Lao Nhà xuất Y học Hà Nội Bộ Y tế, Chương trình chống lao quốc gia (2009), Hướng dẫn quản lý bệnh lao NXB Y học Bộ Y tế, Viện vệ sinh dịch tễ Trung ương(2008), Kĩ thuật Spoligotyping cho vi khuẩn lao, Hà Nội Lê Huy Chính (2003), "Vi sinh vật", Nhà xuất Y học, Hà Nội Chương trình chống lao quốc gia (2003) Hội thảo Lao/HIV, Hà nội 2-3/1/2003 Chương trình chống lao Quốc gia (2007), Báo cáo tổng kết Chương trình Chống lao Quốc gia năm 2006 phương hướng hoạt động năm 2007 10 Chương trình Chống lao Quốc gia (2004), "Báo cáo tổng kết Chương trình Chống lao Quốc gia kỳ giai đoạn 2001 - 2005 phương hướng hoạt động giai đoạn 2004 - 2005", Hà Nội 11 Lâm Kim Cương (2008), Ứng dung phương pháp PCR đê tìm vi trùng lao, http://www.yduocngaynay.com 12 Bùi Thị Việt Hà(2010), Bước đầu ứng dụng kĩ thuật PCR chẩn đoán nhanh lao phổi Thái Nguyên, Luận văn tốt nghiệp Đại học, Thái Nguyên 13 Hoàng Minh (2002), Các phương pháp phát hiện, chẩn đoán Lao phổi, lao kê, lao màng não, Nhà xuất Y học, Hà Nội 14 Hoàng Minh (2000), Những điều cần biết bệnh lao, Nhà xuất Y học, Hà Nội 15 Hoàng Minh (1998), Bệnh lao nhiễm HIV/AIDS, Nhà xuất Y học, Hà Nội 16 Hoàng Minh (1994), Bài giảng sau đại học lao bệnh phổi, Nhà xuất Y học, 17 Hoàng Minh (2001), ”Một số kỹ thuật sinh học phân tử hoá sinh vi sinh chẩn đốn bệnh lao” Tạp chí Thơng tin y dược, số 12, tháng 12 năm 2001 18 Chu Hoàng Mậu(2005), Cơ sở phương pháp sinh học phân tử, Nhà xuất Đại học Sư phạm 19 Nguyễn Thị Diễm Hồng, Lê Đăng Hà, “Áp dụng kĩ thuật ELISA, PCR để chẩn đoán lao màng não người lớn” Luận văn tốt nghiệp thạc sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội 20 Lê Văn Hoành (1994), “Lao màng não”, Bệnh học lao bệnh phổi, Nhà xuất Y học, Hà Nội 21 Lê Thị Oanh (1998), “Xét nghiệm đờm tìm vi khuẩn lao”, Thực tập Vi sinh y học, Nhà xuất Y học, Hà Nội 22 Hoàng Long Phát(2008), Lâm sàng bệnh lao phổi, Nhà xuất Y học, Hà Nội 23 Lê Văn Phủng (2001), ”Một số ứng dụng PCR vi sinh vật” Tạp chí Y học thực hành 2001 24 Hồ Nam Phương(2002), Nhận xét giá trị số kĩ thuật chẩn đoán lao lao màng bụng, Luận văn tốt nghiệp bác sỹ nội trú bệnh viện, Trường Đại học Y Hà Nội 25 Phịng thí nghiệm Mycobacteria, Viện vệ sinh dịch tễ Trung ương (2008), Nuôi cấy vi khuẩn lao, Thường quy vi sinh chuẩn cho lao, Hà Nội 26 Hồng Long Phát (2006), Tìm hiểu bệnh lao, Nhà xuất Y học, Hà Nội 27 Phạm Khắc Quảng(1994), ” Đại cương bệnh lao”, Bệnh học lao bệnh phổi(1), Nhà xuất Y học, Hà nội 28 Trần Văn Sáng (2002), Bệnh học Lao, "Vi khuẩn Lao", Nhà xuất Y học, Hà Nội 29 Quyền Đình Thi, Nơng Văn Hải(2005), Cơng nghệ Sinh học, Nhà xuất Khoa học tự nhiên công nghệ, Hà nội 30.Mai Văn Tuấn(2011), Ứng dụng kĩ thuật PCR y học, Khoa Vi SinhBVTW Huế 31 Nguyễn Xuân Triều (2006) ”Chẩn đoán lao” , Bài giảng lao bệnh phổi sau đại học, Học viện quân y 32 Viện lao bệnh phổi (1999), Bài giảng Lao Bệnh phổi Nhà xuất Y học Hà Nội 33 Viện lao bệnh phổi (1999) Hướng dẫn thực Chương trình chống lao quốc gia Viện lao - Bệnh phổi, Hà Nội 34 Phạm Hùng Vân, Các kĩ thuật chẩn đoán sinh học phân tử phát tác nhân gây nhiễm trùng, Bài giảng Vi sinh, www.nk-biotek.com.vn , ngày 15/06/2011 35 Pḥạm Hùng Vân (2007), Các quy trình kỹ thuật sinh học phân tử thường sử dụng chẩn đoán nghiên cứu y sinh http://www.nkbiotek.com.vn Tiếng Anh 36.Banavaliker J.N., Bobby Bhalotra, Sharma D.C., Manoj K Goel (1998), “Identification of Mycobacterium tuberculosis by polymerase chain reaction in clinical specimens”, Ind J Tub, 45 15 37.BarunMathema, NataliaE.Kurepina, PabloJ.Bifani, And BarryN.Kreiswirth, Molecular Epidemiology MICROBIOLOGY of Tuberculosis:CurrentInsights, CLINICAL REVIEWS,Oct.2006,pp.658–685 38.Jame M Musser (1995), Antimicrobial agent resistance in Mycobacteria: Molecular Genetic Insights, Clinical Microbiology Reviews, Vol 8, No 4, p.496-514 39 Kolk A H.J., A R J Schuitema, S Kuijper(1992), Detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples by using PCR and a non radioactive detection system, J Clin Microbio 40.Sang – Nae Cho (2007), Current Issues on Molecular and Immunological Diagnosis of Tuberculosis, Yonsei University College of Medicine, Seoul, Korea 41 Sritharan V., and R H Barker, “ A simple method for diagnosising Mycobacterium tuberculosis infection in clinical sample using PCR”, Mol Cell Probes 42 Thierry D.A Brisson- Noel (1990), ” Characterization of a Mycobacterium tuberculosis insertion sequence, IS 6110, and its application in diagnosis”, J Clin Microbio 28(12), pp: 2668 – 2673 43 WHO (2007), Global Tuberculosis Control Surveillance, Planning, Financing, WHO report 44 WHO Report (2010), Global Tuberculosis Control, WHO Report 45 WHO Report (2009), Global Tuberculosis Control, WHO Report 46 WHO (2007), Fact sheet N 104 Revised March 2007, Tuberculosis, http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs104/en/ PHỤ LỤC DANH SÁCH 101 BỆNH NHÂN NGHI MẮC LAO PHỔI VÀ TRÀN DỊCH MÀNG PHỔI NGHI DO LAO ĐƯỢC XÉT NGHIỆM VÀ CHẨN ĐOÁN TẠI BỆNH VIỆN LAO VÀ BỆNH PHỔI THÁI NGUYÊN, VÀ BỘ MÔN VI SINH, TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÁI NGUYÊN Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Va 56' Y TE THAI NGUYEN :)i, eeNH v1eN LAO & eeNH PHOI CQNG HOA xA HQI CHO NGH A VUT NAM E>oc l ap - TU' - Hanh phllc ; :::; a , ::::::i DANH sAct-t aeNH NHAN KHAM VA E>IEU TRI LAO PHOI \:)-< s § (}q ::::::i) - ("';) -; I ·e ;:::; ·a ("';) e \"';)) ;::::: ;:::; ("';) sI ("';) Tuai STT· Ho ten benh nhan Nam Nii' Nghi nghiep Elia chi PHA.M VAN T 41 NOng dan xa E>onq Barn Huven Elonq Hy eo auoc H 35 COng nhan Xa LU'ana San Thai Nguyen xa Ha ThU'Q'ng NGUYtN VAN V 38 Nang dan Huven E>i TCr xa EJU'C V 53 NOng dan Carn Gia Thai Nauyen 11 LE VAN L 42 Nang dan Xa Truna Chinh Huven LU'ang Tai 12 TRAN VAN H 26 Nang dan Xa Tan Linh Huy(m Eli Tll 13 TO VAN D 75 HU'u trr Carn Gia Thai Nguyen 14 £>0 QUOC T Gia Sanq Thai Nguyen 25 Loi khac Thai Nguye·n 15 NGUYN THI H 35 Nang dan · HU'ana SO'n 16 BAN PHUC L Gia Xa HQ'P Tien Huven EJonq Hv 17 DLJONG Vlt=T C 31 Cang nhan Xa ThU'Q'nQ E>inh Huven Phu Binh Xa Phl,IC Linh 18 LE MNH S 31 Nang dan Huven EJi TCP 19 TRAN DLJC TH 39 NOng dan PhU'ang Pho co Thi xa S6ng Cang Thai Nguyen 20 TA QUOC PH 21 Sinh vien Quano Truno Xa Phl,IC Linh 21 MAI QUANG V 56 Nang dan Huven Di TCP 22 NGUYtN TRQNG T 48 Nang dan xa eong Barn Huven E>ong Hy Thai Nguyen 23 NGUYN THU H 25 NOng dan Hoana Van Thv 24 NGUYEN VAN KH 19 NOng dan Xa DU'ang Thanh Huven PhU BJnh 25 NGUYEN VAN L 50 Sinh vh n xa Linh San Huvn E>ong Hv 26 TRAN MV H 22 Sinh viAn Gia Sana Thai NauvAn 54 Hl1u trr TAn Thinh Thai NauvAn 27 NGUYEN E>INH H Ngay vao Vien 09/06/2010 09:00 14/06/2010 14:30 14/06/2010 15:00 16/06/2010 10:40 22/06/2010 09:00 22/06/2010 14:45 30/06/2010 18:00 01/07/2010 09:00 02/07/2010 10:15 09/07/2010 15:00 12/07/2010 09:00 12/07/2010 15:45 13/07/2010 09:00 14/07/2010 09:45 15/07/2010 09:00 15/07/2010 16:20 20/07/2010 09:00 23/07/2010 15:30 26/07/2010 11:00 28/07/2010 15:30 30/07/2010 08:00 03/08/2010 10:00 06/08/2010 14.:50 10/08/2010 15:30 16/08/2010 09:30 20/08/2010 15:15 24/08/2010 09:00 s6 IU'U 10001709 10001730 10001713 10001570 10001569 10001556 100,01640 10001651 10001838 10002323 10002231 10002383 10002397 10002395 10002405 10002393 10002493 10002181 10001988 10002234 10002631 10002664 10002153 10002632 10002634 10002750 10002636 Chan doan KKB Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao ph_oi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao ph6i Lao phoi Lao ph6i Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Lao phoi Ma so bnh nhan MTB60 MTB61 MTB62 MTB63 MTB64 MTB65 MTB66 MTB67 MTB68 MTB69 MTB70 , MTB71 MTB72 MTB73 MTB74 MTB75 MT876 MTB77 MTB78 MTB79 MTB80 MTB81 MTB82 MTB83 MTB84 MTB85 MTB86 &, ;:s 2' ()-< ;;::: ""'; ) ("') - ;:;;;; ;;::: I ·e ;:s ·a ("') e (1:)) ;:::: ;:s 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 I S' (1:) 56 57 58 59 60 61 62 63 64 Dll;M QUANG H HOANG VAN H NGUYE:N TRONG H LU'ONG THAI C LUAN B HOANG VAN TH TRAN TRONG TH HOANG E)INH B NGUYE:N VAN TH NGUYEN HO'U TH TRAN THE PH HOANG VAN TH NGUYEN VAN A LE VAN D NGUYEN THANH B VO TH! B HOANG NGOC TH TRAN TH! H E)INH VAN D TRll;U NHO TH TRAN SY H NGUYEN NGOC CH NGO VAN TH PHAM XUAN B TR!NH VAN T LU'O'NG VAN L E)AO VAN V NGUYEN VIET TH PHAM GIA PH LU'ONG VAN TH £)0 QUANG H TRAN TRI H NGUYEN KHANH H NGUYEN THI T E>O E>U'C T E>ANG E>INH H TRAN DUY X auoc 31 30 33 56 21 34 41 31 23 28 75 45 31 49 37 53 32 44 57 30 47 50 43 34 79 22 29 50 37 24 44 24 33 56 Nong dan Nong dan NOng dan NOng dan Sinh vien NOng dan Nang dan Nang dan Sinh vien Loi khac Nang dan NOng dtm Nang dan Loc;1ikhac Loc;li khac 83 NOng.dan NOng dan 21 Sinh vien NOng dan Nang dan Hllu tri NOng dan NOng dan NOng dan NOng dan Nong dan Nong dan Sinh vien Nong dan Nong dan Loc;1i khac NOng dan NOng dan 35 NOng dan NOng dan Loikhac N(mg dan Cam Gia Thai Nguyen Xa Ha ThU'c;mg Huyen E)c;li TCP Quang Vinh Thai Nguyen Xa Ylm Lang Huyen E)c;li Tll Phan Blnh Phung Thai Nguyen Xa Ky Phu Huyen f>c;li Tll Xa La Hien Huyen Vo Nhai Xa ThllQ'ng E)inh Huyen Phu Binh TrU'ng VU'ang Thai Nguyen Xa Hung San Huyen f)i Tll' Xa Thanh Ninh Huven Phu Blnb xa Dao xa Huven Phu Binh Thi tran E)Gti Tll Huyen f)c;1i Tll Xa Nam Hoa Huyen E>ong Hy Cam Gia Thai Nguyen xa Ban E>Gtt Huyen Phu Blnh Xa Bao CU'ang Huven Dinh H6a xa Me0 Vc;1c Huyen Meo Vc;1c Xa Nam Hoa Huyen Dong Hy Xa Lien Minh Huven Vo Nhai Phan Dinh Phung Thai Nguyen Xa Phuc Tan Huyen Pho Yen Xa Vinh San Thi xa Song Cong Xa OU'ang Thanh Huven Phu Binh Tan Thjnh Thai Nguyen Xa E>¢ng E>c;it Huyen Phu LU'ang Xa Tan E>lJ'c Huyen Phu Blnh Thi tran Quan Chu Huym E)c;1i Tll Trung Thanh Thai Nguyen Xa Hllang San Huyen Phu Binh Trung Thanh Thai Nguyen Xa An Khanh Huyen E>iTll Bao Ly Huyen Phu Binh Kh6ng xac djnh Huyen Bac·san Thi trAn Di;ii Tll' Huy(!n Di;ii Tll' Xa San Ciim Huyn Phu Lllang XA E>ac San Huyn Ph6 YAn xa 24/08/2010 09:15 24/08/2010 10:30 24/08/2010 14:30 24/08/2010 15:00 25/08/2010 09:30 30/08/2010 14:30 16/09/2010 16:00 20/09/2010 16:15 21/09/2010 15:00 28/09/2010 16:00 01/10/2010 10:30 06/10/2010 10:-00 06/10/2010 15:15 08/10/2010 09:00 08/10/2010 10:10 11/10/2010 10:30 11/10/2010 10:45 14/10/2010 10:00 20/10/2010 10:45 28/10/2010 14:00 03/11/2010 10:30 03/11/2010 11:00 04/11/2010 15:30 08/11/2010 ·11:00 16/11/2010 14:30 19/11/2010 10:20 20/12/2010 14:00 29/12/2010 10:00 05/01/2011 09:30 05/01/2011 14:30 06/01/2011 08:30 13/01/2011 09:30 24/01/201 10:58 28/01/2011 10:42 30/01/2011 10:42 01/02/2011 15:00 09/0212011 15:42 10002762 Lao phoi MTB87 10002293 Lao phoi MTB88 10002322 Lao phoi MTB89 10002401 Lao phoi MTB90 10002969 Lao phoi MTB91 10002765 Lao phoi MTB92 10002764 Lao phoi MTB93 10002760 MTB94 Lao phoi 10002641 Lao phoi MTB95 10002640 Lao phoi MTB96 10003456 Lao phoi MTB97 Lao phoi · 10003454 MTB98 10003458 Lao phoi MTB99 10003744 · Lao phoi MTB100 10002913 Lao phoi MTB101 10003525 Lao phoi MTB102 10003321· MTB103 Lao phoi 10003453 Lao phoi MTB104 10003569 Lao phoi MTB105 10003220 Lao phoi MTB106 10003694 Lao phoi MTB107 10003689 Lao phoi MTB108 10003246 Lao phoi MTB109 · MTB110 10003692 Lao phoi 10003687 Lao phoi MTB111 10003594 Lao phoi MTB112 10003727 Lao phoi MTB113 10003730 Lao phoi MTB114 Lao phoi MTB115 11000004 11000303 Lao phoi MTB116 11000293 Lao phoi MTB117 11000316 Lao phoi MTB118 11000283 Lao phoi MTB119 11010654 Lao phoi MTB120 11000180 Lao phoi MTB121 11000179 Lao phoi MTB122 Lao phOi MTB123 11000517 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ' ;::s a , SO' y Tt: THAI NGUYi=N - l:::i BENH VIEN LAO & BENH s PHOI i:::: ;:::;:: \Jq CONG HOA xA HOI CHO NGHTA v1eT NAM floe l ap - TU' ; Hanh phuc DANH SACH eeNH NH.AN KHAM VA fllEU TRI LAO NGOAI PHOI l:::i) Tuai STTHQ ten bnh nhanNam NCr Nghe nghip -68 E>OAN E>INH E> i:::: HOANG VAN M 53 I TRAN VAN TH 48 ·e LY THI H ;::s- 62 BUI BA QU ·a HOANG THI KH (") ·? VO XUAN TH 73 TRAN E>U'C L e 40 f)AO KIM CH 62 10 NGUYEN THI L ;:::;:: 11 Dll;P f)U'C TH 28 12 NGUYEN VAN T 76 13 LA VAN TH 25 14 TRAN VAN H 46 15 fJAO HAI Y 16 PHAN HOANG H 22 17 TRINH THI CH ;::s- 18 LE ANH V 37 19 HOANG THI H 20 DU'ONG £>U'C TH 38 21 I THI TH 25 22 E>AO BA H 23 f)0 VAN H 38 s 49 24 PHUNG THAI D 25 NGUYEN XUAN D 43 (';:) 26 NGUYEN DU'C B 29 27 NGUYEN TIEN CH 43 28 LY VAN NGH 23 (") (;;;; (';:)) I 31 78 36 23 65 22 50 38 Chan doanMa so E>ia chi vao vi(mSo IU'U trCrKBBbnh Huyn Bong Hy Ngay01/06/2010 09:00 10000605 nMm Lao mang phoi Hlfu tri Xa H6a Thm;mg Huy(m Phu LU'O'ng 12/06/2010 09:00 10000679 Lao mang phoi Nang dan Xa Ttlc Tranh Thai Nguyen Nang dan Xa Phuc Xuan 11/06/2010 08:00 10001407 Lao mang phoi Huy(m E>ong Hy Nang dan Xa Minh Lp 18/06/2010 08:00 10001472 Lao mang phoi Thai Nguyen 18/06/2010 16:00 10001476 Lao mang phoi Gia Quang Trung Huy(m Pho Yen Nang dfm Xa Tan HU'O'ng 29/06/2010 08:00 10001511 Lao mang phoi HU'U tri 21/06/2010 09:00 10001535 Lao mang phoi Thi tran Quan Chu Huyen E>r;1i TCP , Thai Nguyen Lor;1i khac 03/08/2010 09:00 10001559 Lao mang phoi Trung Thanh Nang dan Huyen PhU LU'O'ng 09/08/2010 09:00 10001577 Lao mang phoi Xa Ttic Tranh Thai Nguyen Nang dan xa Trch LtrO'ng 03/07/2010 09:00 10001594 Lao mang phoi Huyn f)ong Hy Nang dan 27/06/2010 08:00 10001618 Lao mang phoi Xa Minh Lp Nang dan Xa Nga My Huyen PhU Binh 30/08/2010 09:00 10001632 Lao mang phoi Cang nhan Xa La Hien Ht.iyen Vo Nhai 20/07/2010 09:00 10001654 Lao mang phoi Thai Nguyen HU'u tri Xa Tich LU'ang 01/09/2010 09:00 10001663 Lao mang phoi Lor;1i khac Tan Long Thai Nguyen 14/07/2010 08:00 10001668 Lao mang phoi Tan Long Thai Nguyen Lor;1i khac 03/07/2010 08:00 10001697 Lao mang phoi Nang dan Xa HU'O'ng San Huyen Phu Blnh 20/07/2010 08:00 10001802 Lao mang phoi Thai Nguyen Hanh chrnh Quan Trieu 09/07/2010 08:00 10001828 Lao mang phoi Cong nhan Khang xac djnh Thi xa Song Cong 28/07/2010 08:00 10001941 Lao mang phoi Nang dan xa £>ong Thinh 02/08/2010 08:00 10001977 Lao mang phoi Huyen E>inh H6a Tan Long Thai Nguyen Hlfu tri 09/08/2010 09:00 10002015 Lao mang phoi Lor;1i khac Xa Linh SO'n Huyen £>ong Hy 07/09/2010 08:00 10002316 Lao mang phoi Nang dan Xa Phuc Thum Huyen Pho Yen 20/09/2010 09:00 10002492 Lao mang phoi Ojch Vl) Thi tran Chua Hang Huven £>ong Hy 24/09/2010 08:00 10002585 Lao mang phoi Cong nhan Thinh E>an Thai Nguyen 28/09/2010 16:30 10002608 Lao mang phoi Nang dan xa £>ongVien 29/09/2010 08:00 10002610 Lao mang phoi Huyen ChQ' E>on Thai Nguyen Gia Tan Thjnh 29/10/2010 09:00 10002645 Lao mang phoi Nang dan - xa La Bang 29/11/2010 09:00 10002650 Lao mang phoi Huyen f)i TCP TB25 TB26 TB27 TB28 TB29 1830 TB31 TB32 TB33 TB34 TB35 TB36 TB37 TB38 TB39 TB40 TB41 TB42 T843 TB44 TB45 TB46 TB47 TB48 TB49 TB50 TB51 TB52 ;::,s:::: c:;- s ::::::; s::::,, 08/11/201O 09:00 I ·10002655 10/11/2010 09:001 10002657 23/10/2010 09:001 10002676 13/1212010 1000268809:00 1000269409:00 07/12/2010 08/10/201O I 10002706 08:00 23 10 IHtru trr 49 INOna dm 92 Gia 36 IC6na nhan - Thai Nguyen, thang nam 2011 B'nh vi n Lao va B9nh phOi Thai Nguyen ebo tr1p6'ng_ph0ng; ho,ch t6ng hQ'p , _ ("':i ; v1t I n ··: ;; : -'; m'ffli' ·e \ • ·a lH.\, i·· · ;; PHO : · ' ·\ N! ' '-' p : , , TC ;::, ("':i e > :;::,- -s TB53 TB54 TB55 TB56 TB57 TB58 L_ !_ ' r:_r.:· ·- -·i· 1 < L t7"" BS: $e i&-J, n£!1 s ... tài: ? ?Đánh giá hiệu kỹ thuật PCR phát trực tiếp Mycobacterium tuberculosis mẫu bệnh phẩm? ?? Mục tiêu nghiên cứu: Phát nhanh vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis mẫu bệnh phẩm thu nhận từ bệnh. .. bệnh phẩm đờm 33 3.1.2 Kết phát vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis bệnh phẩm dịch màng phổi 35 3.2 Hiệu kỹ thuật PCR việc phát nhanh vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis 3.2.1 Hiệu phát. .. lao kỹ thuật PCR Đánh giá hiệu kỹ thuật PCR việc phát nhanh vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh lao Lao bệnh ghi nhận sớm lịch sử y học