Nghiên cứu đặc điểm vi khuẩn lactic sinh tổng hợp gamma aminobutyric acid và ứng dụng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI TRẦN THỊ NGOAN TRẦN THỊ NGOAN CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN LACTIC SINH TỔNG HỢP GAMMA-AMINOBUTYRIC ACID VÀ ỨNG DỤNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Ngành: Công nghệ thực phẩm KHOÁ 2012B Hà Nội – Năm 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - Trần Thị Ngoan ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN LACTIC SINH TỔNG HỢP GAMMA-AMINOBUTYRIC ACID VÀ ỨNG DỤNG Chuyên ngành : Công nghệ thực phẩm LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Ngành : Công nghệ thực phẩm NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS Nguyễn La Anh PGS TS Hồ Phú Hà Hà Nội – Năm 2014 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa học Thạc sĩ mình, tơi vơ biết ơn Tập thể ng nghệ Sinh học thầy cô giáo Viện Đại học ch Kh H N i ng nghệ Th c h - T ƣờng nhiệt tình truyền ạt kiến thức quý báu tạo iều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập Tơi xin gửi lời ơn sâu sắc tới TS Nguyễn La Anh – Chủ nhiệm b môn Công nghệ Sinh học Vi sinh, Viện Công nghiệp Th c ph m cô giáo PGS.TS Hồ Phú Hà – T ƣờng Đại học Bách Khoa Hà N i, ngƣời tận tình bả , hƣớng dẫn tơi suốt q trình nghiên cứu hoàn thành luận văn T i xin gửi lời ơn tới anh chị, cán b , nghiên cứu viên – B môn Công nghệ Sinh học Vi sinh, Viện Công nghiệp Th c ph giú ỡ tơi suốt q trình nghiên cứu ơn gi Cuối tơi xin chân thành ình, bạn bè v ồng nghiệ ng viên, khuyến khích tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Xin chân thành ơn! Hà Nội, ngày 25/8/2014 Trần Thị Ngoan i ỜI T i xin c M O N n, uận văn n y ết uả nghi n cứu v c c n i dung nghiên cứu ết uả t ình b y t ng uận văn t ung th c, việc củ t i, ng Nếu có vấn ề xảy ra, tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm Hà Nội, ngày 25 th ng nă T c giả uận văn Trần Thị Ngoan ii 2014 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i LỜI M ĐO N ii MỤC LỤC .iii DANH MỤC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii BẢNG CÁC CHỮ VIẾT TẮT ix LỜI MỞ ĐẦU PHẦN I TỔNG QUAN 1.1 Tổng u n vi hu n ctic 1.1.1 Lịch sử phát 1.1.2 Đặc điểm sinh lý sinh hoá 1.1.3 Một số yếu tố ảnh hưởng tới sinh trưởng vi khuẩn lactic 1.1.4 Lợi ích vi khuẩn lactic 1.2 Tổng u n bi tic 1.2.1 Định nghĩa 1.2.2 Cơ chế tác dụng vai trò probiotic 1.2.3 Tiêu chuẩn lựa chọn chủng probiotic 1.3 Tổng u n G - Aminobutyric Acid 11 1.3.1 Định nghĩa 11 1.3.2 Hình dạng cấu trúc GABA 11 1.3.3 Quá trình tổng hợp GABA não 12 1.3.4 Cơ chế hoạt động GABA 13 1.3.5 Chức GABA 13 iii 1.3.6 Các nguồn sinh tổng hợp GABA 14 1.3.7 Sinh tổng hợp GABA từ vi khuẩn 15 1.4 gạ 16 1.4.1 Giới thiệu cám gạo 16 1.4.2 Lên men vi khuẩn môi trường cám gạo 17 PHẦN MÔI TRƢỜNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN ỨU 19 2.1 M i t ƣờng 19 2.1.1 Môi trường MRS 19 2.1.2 Môi trường sinh tổng hợp GABA: Môi trường MRSS 19 2.1.3 Môi trường nutrient broth 20 2.2 hủng vi sinh vật 20 2.3 Phƣơng h nghi n cứu 21 2.3.1 Phương pháp xác định GABA TLC (Thin layer chrotomagraphy) 21 2.3.2 Phương pháp xác định hình thái tế bào soi kính hiển vi 22 2.3.3 Phương pháp nhuộm Gram 22 2.3.4 Phương pháp xác định kiểu hình lên men 22 2.3.5 Phương pháp xác định khả lên men phổ pH , nhiệt độ 22 2.3.6 Kiểm tra khả sử dụng đường 23 2.3.7 Phương pháp xác định tên lồi trình tự 16S rDNA 24 2.3.8 Phương pháp xác định khả sống môi trường dịch dày dịch ruột giả lập 24 2.3.9 Phương pháp xác định khả bám dính 25 2.3.10 Xác định phổ tương tác với số kháng sinh 26 2.3.11 Kiểm tra khả ức chế số chủng vi sinh vật gây bệnh 28 2.3.12 Phương pháp thu nhận dịch chiết cám gạo (Rice bran extract – RBE) 29 iv 2.3.13 Phương pháp lên men lỏng mơi trường MRSS RBE quy mơ phịng thí nghiệm 29 2.3.14 Xác định GABA phương pháp HPLC 29 PHẦN III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 L chọn chủng vi hu n ctic sinh tổng hợ G 3.2 Đặc iể hình th i, sinh ý, sinh h v 31 ịnh t n chủng N D 33 3.2.1 Đặc điểm hình thái 33 3.2.2 Các đặc điểm sinh lý chủng 33 3.2.3 Khả sử dụng nguồn đường 34 3.2.4 Định tên chủng NCDC3 35 3.3 Đ nh gi bi tic củ chủng N D 36 3.3.1 Khả sống sót dịch dày dịch ruột giả lập 36 3.3.2 Khả bám dính màng nhầy ruột 37 3.3.3 Phổ tương tác với số kháng sinh 39 3.3.4 Xác định khả ức chế số vi sinh vật gây bệnh 40 3.4 Ứng dụng chủng Lactobacillus plantarum N D t ng sản xuất th c h n en từ dịch chiết c gạ gi u G 41 3.4.1 Xác định thành phần MRSS thích hợp cho sinh tổng hợp GABA 41 3.4.2 Lựa chọn mơi trường cám gạo thích hợp cho q trình lên men 43 3.4.3 Ảnh hưởng Vitamin B6 đến khả sinh tổng hợp GABA 44 3.4.4 Xác định pH thích hợp cho q trình lên men 45 3.4.5 Xác định nhiệt độ thích hợp cho q trình lên men 46 3.4.6 Xác định nồng độ MSG thích hợp cho trình lên men 47 3.4.7 Xác định thời gian thích hợp cho q trình lên men 48 v 3.4.8 Sơ đồ quy trình lên men chủng NCDC3 mơi trường dịch cám gạo giàu GABA 50 3.4.9 Xác định GABA dịch lên men HPLC 52 PHẦN IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 vi D NH MỤ BẢNG BIỂU ảng 2.1 D nh s ch chủng vi hu n ctic nghi n cứu sinh G ảng 2.2 Phƣơng h 20 h ng sinh 27 ảng 3.1 Kết uả s ng ọc chủng vi hu n ctic sinh GABA 31 ảng 3.2 M t số ặc iể sinh ý củ chủng N D 34 ảng 3.3 Khả sử dụng c c nguồn ƣờng h c nh u củ chủng NCDC3 34 ảng 3.4 Kết uả t ình t gen 16S DN củ chủng N D 35 ảng 3.5 Khả sống sót t ng dịch d y v dịch u t giả ậ 37 ảng 3.6 Khả b dính t n ng nhầy u t củ chủng N D 38 ảng 3.7 Phổ tƣơng t c với t số h ng sinh củ chủng N D 39 ảng 3.8 Khả ức chế t số vi sinh vật gây bệnh củ chủng N D 40 ảng 3.9 Nồng MSG v G t ng dịch lên men 54 vii D NH MỤ HÌNH ẢNH Hình 1.1 ấu t úc hân tử củ G 11 Hình 1.2 12 n ƣờng tổng hợ G Hình 3.1 Hình ảnh TL chọn chủng sinh G 32 Hình 3.2 Hình th i chủng N D chụ ính hiển vi iện tử u ng học SEM 33 Hình 3.3 Hình ảnh b dính tế b N D 3t n ng nhầy u t in vit Hình 3.4 Hình ảnh hổ tƣơng t c chủng N D với t số 38 ại h ng sinh 40 Hình 3.5 Hình ảnh TL dịch n en t n Hình 3.6 Hình ảnh TL dịch n en t n c c Hình 3.7 Hình ảnh TL dịch n en hi bổ sung vit Hình 3.8 Hình ảnh TL dịch n en c c H h c nh u 46 Hình 3.9 Hình ảnh TL dịch n en c c nhiệt h c nh u 47 Hình 3.10 Hình ảnh TL dịch n en c c nồng MSG 48 Hình 3.11 Hình ảnh TL dịch n en c c thời gi n 49 Hình 3.12 Mật tế b chủng N D t n Hình 3.13 Sơ uy t ình n i t ƣờng MRSS s t 42 i t ƣờng c gạ 43 in 44 i t ƣờng MRSS R E 49 en chủng Lb plantarum N D từ dịch c gạ 51 Hình 3.14 Sắc ý củ G Hình 3.15 Sắc ý củ v MSG chu n 52 ẫu dịch n en 53 viii vậy, tiến hành khảo sát s ảnh hƣởng thời gi n n en ến hiệu suất q trình chuyển hóa hết từ MSG thành GABA chủng N D t n MRSS RBE Kéo dài thời gi n n i t ƣờng en ến 10 ngày lấy mẫu thời iểm khác Kết ƣợc thể hình 3.11 3.12 Hình 3.11 Hình ảnh TLC dịch lên men thời gian Hình 3.12 Mật tế bào chủng N D t n 49 i t ƣờng MRSS RBE Nhìn vào kết thời gian lên men chủng N D t n RBE cho thấy ng y ầu tiên mật i t ƣờng MRSS tế bào chủng N D ạt 3,65x109 CFU/ml, tế bào chủng giảm dần ến ngày thứ 7,5x108 FU/ mật ,s u ó tế bào ổn ịnh ngày thứ ến ngày 10 Ngày thứ 10 mật ật tế bào ƣợc x c ịnh 2,63x108 CFU/ml Kết ịnh tính GABA TLC cho thấy G i ến ngày thứ 3, s u ó th y ổi h ng thời iể n v MSG giảm ng ể D a vào kết l a chọn ngày thứ ể kết thúc lên men hợp lý Tại thời iể thành lớn v tăng ƣợng MSG nhỏ nhất, mật n y, ƣợng GABA tạo tế bào chủng NCDC3 n y h c 3.4.8 Sơ đồ quy trình lên men chủng NCDC3 môi trường dịch cám gạo giàu GABA Từ c c iều kiện n en ƣợc tối ƣu hó trên, quy trình lên men dịch trích ly cám gạo chủng Lb plantarum NCDC3 ứng dụng ể sản xuất th c ph m n en gi u G nhƣ s u: 50 gạ Thủy hân Enzy e hủng giống Lactobacillus plantarum NCDC3 Ly tâm 10.000 v/p 10 phút Dịch t ích y c H ạt hó t n i t ƣờng MRS ỏng, nuôi cấy 300C; 24h; pH 6,5 gạ M i t ƣờng MRSS R E 4,50Bx; pH 5,5 Ly tâm 10.000 v/p phút L n Sinh hối Dịch en nhiệt n en từ c 300C, thời gi n 72h gạ gi u G Hình 3.13 Sơ quy trình lên men chủng Lb plantarum NCDC3 từ dịch cám gạo Trên giới, n en ngũ cốc vi sinh vật, ặc biệt sử dụng vi khu n lactic ể trích ly họat chất sinh học ƣợc nghiên cứu tiến hành Sản ph m thu ƣợc q trình lên men bổ sung thêm nguyên liệu h c nhƣ củ, dịch chiết t ại mạch, sữ bị… vào ngun liệu ể 51 u tăng hƣơng vị; sản ph m tạo dạng lỏng, bổ sung vào sản ph m thƣc ph m nhƣ b t súp, bánh quy, bánh mỳ; sấy khơ tạo th c ph m chức gi u họat chất sinh học [55] Trong tƣơng i, sản ph m củ sản ph m trung gian, nhằm tạo th c ph ề tài ƣợc sử dụng gi u G tƣơng t nhƣ n u 3.4.9 Xác định GABA dịch lên men HPLC Để khẳng ịnh th xác GABA tạo thành, tiến hành phân tích GABA dịch lên men hƣơng h HPL ản thân GABA không hấp thụ ánh sang nhìn thấy hay huỳnh quang Chính vậy, ể hân tích ƣợc GABA HPLC cần phải chuyển GABA sang m t dẫn xuất có khả hấp thụ tốt UV vùng nh s ng thƣờng huỳnh quang mạnh ể bắt ƣợc sản ph m Mẫu ƣợc lọc qua màng lọc ích thƣớc 0,2µ , s u ó tạo dẫn xuất với O – phthalaldehyde (OPA) Mẫu ƣợc chạy qua c t HPLC C18 với h ệ ni cet te 20 M, nh ng: kênh A MeOH the chƣơng t ình g dient nồng Hợp chất huỳnh quang tạ th nh ƣợc phát ầu dị huỳnh quang với λ kích thích 350 n v λ h t xạ 450 nm Sau chạy sắc ký cho kết nhƣ sau: 600 550 500 450 GABA/15.530/10825852 MSG/4.566/9272053 mV 650 Detec tor A :Ex :350nm,Em:450nm MSG 400 GABA 350 300 250 200 150 100 50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 Hình 3.14 Sắc ý GABA MSG chu n 52 17.5 GABA/15.522/16722947 mV Detec tor A :Ex :350nm,Em:450nm 600 550 500 450 GABA 400 350 300 250 MSG 200 /4.575/605072 150 100 50 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 Hình 3.15 Sắc ý mẫu dịch lên men: Dịch n en t n i t ƣờng MRSS RBE chủng NCDC3 sau 72h, nhiệt 30 C; pH 5,5 Mẫu ƣợc xử lý pha lỗng 2500 lần phân tích HPLC Từ sắc ý mẫu chu n thu ƣợc cho thấy MSG có thời gi n ƣu phút GABA có thời gian ƣu 15,5 hút Ph 4,5 ng v xử lý mẫu nhƣ phần hƣơng h , s u hi tính t n ết MSG cịn sót lại dịch lên men 0,28g/ v G ƣợc tạo thành 6,49g/l Tỷ lệ % chuyển hóa từ MSG sang GABA xấp xỉ ạt 97,4% Nhƣ vậy, với tỷ lệ MSG 1% bổ sung v men dịch cám gạ chuyển hó i t ƣờng lên ƣợc gần nhƣ h n t n th nh G với nồng tạo thành 63mM So sánh với kết nghiên cứu t ƣớc ây, chủng Lb sakei B2-16 ƣợc phân lập từ kim chi Hàn Quốc n gạo sản xuất en t n i t ƣờng dịch cám ƣợc 660mM GABA bổ sung 12% MSG [42] Chủng Lb plantarum KLLEPT sản xuất G t n i t ƣờng cám gạ ạt 670mM bổ sung 12% MSG [3] Trong nghiên cứu này, tỷ lệ MSG dƣ ại dịch lên men 0,28g/l, tỷ lệ hoàn toàn phù hợp ch ngƣời tiêu dung, bổ sung vào sản ph m th c ph t ình b y h ch ƣợng n y c ng h ng bảng 3.9 53 ng ể Kết ƣợc Bảng 3.9 Nồng t ng dịch n en Môi trƣờng MSG (g/l) GABA (g/l) Tỷ lệ chuyển hóa (%) M i t ƣờng MRSS R E b n ầu 10 - M i t ƣờng MRSS RBE sau lên men 0,28 6,49 97,4 Kết uả n y ch h MSG v G tiế tục nghi n cứu v chức gi u G v có h ạt tính chức có vi hu n chuyển hó G synbiotic h ặc bổ sung v h t t iển c c sản h bi tic Ví dụ nhƣ th c h bi tic có sinh tổng hợ G in situ Sản h th c h củ nghi n cứu n y có tiề chế biến khác 54 th c v ch PHẦN IV KẾT UẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT UẬN Đ G chọn ƣợc chủng NCDC3 có chuyển hó MSG th nh c t n i t ƣờng MRSS Nghi n cứu ặc iể sinh ý, sinh hóa củ chủng N D 3: chủng có h t t iển tốt dải nhiệt sử dụng ƣợc c c 300 ến 370 v dải H ến H 9,6 hủng có ại ƣờng nhƣ ib se, fructose, arabinose, xylose g uc se X c ịnh t n chủng ọc t ình t 16s DN chủng Lactobacillus plantarum NCDC3 Khả s t tốt t ng FU/ t n i t ƣờng dịch d y s u 120 hút T ng h ng ật i t ƣờng dịch u t s u 240 hút ng ể 0,36 g(10) FU/ tế b ật giả tế b S u 60 hút 370 ật 1,32 thấy chủng N D nhạy henic , zith với ycin v bền với N D có ức chế ại g(10) củ chủng giả tế b b ng nhầy u t ạt 1,85% Phổ tƣơng t c chủng N D với 12 sinh ch h bi tic củ chủng N D 3: chủng có sống h dính ại h ng h ng sinh E yth ycin, h ng sinh ại hủng t số vi sinh vật gây bệnh nhƣ Samonella, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, E coli… Ứng dụng chủng Lb plantarum N D gạ ể tạ sản h sung nguồn gi u G G từ e t ne 0,625% v c tạ th nh en i t ƣờng dịch chiết cám M i t ƣờng dịch chiết c 6,49g/ gạ MRSS R E bổ nấm men 0,625%; MSG 1% Với c c iều iện lên men thích hợ H 5,5; nhiệt nồng n 300 , thời gi n n en 72h ch hi bổ sung 10g/ MSG KIẾN NGHỊ Nghi n cứu việc tăng h nồng G c ƣợng MSG t ng i t ƣờng ể chuyển hó tạ Tiế tục h n thiện uy t ình sản xuất th c h dạng h c nh u 55 n en gi u GABA TÀI IỆU TH M KHẢO Tiếng Việt Nguyễn L nh, Qu ch Thị Việt, Đặng Thu Hƣơng, T ần Thị Ng n (2013), Nghi n cứu b dính củ t số chủng vi hu n bi tic t n ng nhầy u t in vitro, Báo cáo khoa học - Hội nghị khoa học công nghệ sinh học toàn quốc 2013(2), pp 40-44 Kiều Hữu Ảnh (2010), Giáo trình Vi sinh vật học thực phẩm, NX Gi dục, pp 116-132 T ịnh Tất ƣờng (2012), Nghi n cứu in buty ic từ th c h n en dịch c ui t ình sản xuất cid Gamma- gạ Lactobacillus ể ứng dụng chức năng, Báo cáo tổng hợp kết đề tài cấp nhà nước KC10.TN/11-15 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạ Vi sinh vật học, NX Gi dục, pp 176-189, pp 224-230 Đặng Thu Hƣơng, T ần Thị Ng n, Nguyễn L yếu tố ảnh hƣởng ến u t ình nấ Văn Ty (1997), Giáo trình n en c gạ nh (2013), Nghi n cứu c c gi u y hen s en, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, 51 (5), pp 607-614 Nguyễn Văn Mùi (2001), Thực hành hóa sinh học, Nh xuất Đại học Quốc Gi H N i Hồ Sƣởng, Lƣơng Đức Ph thực phẩm, NX Gi (1996), Vi sinh vật bảo quản, chế biến Dục, pp 14, pp 41–44, pp 140–144, pp 185–288 Qu ch Thị Việt, Dƣơng Minh Khải, Đặng Thu Hƣơng, T ần Thị Ng n, Nguyễn L nh (2013), Nghi n cứu ặc iể Lactobacillus brevis N TH24 có chủng vi hu n sinh tổng hợ in buty ic cid v ứng dụng t ng sản xuất bi tic G MM - i – yogurt, Báo cáo khoa học - Hội nghị khoa học công nghệ sinh học toàn quốc 2013(2), pp 649-653 http://www.vietrade.gov.vn/go/4085-th-trng-go-th-gii-thang-11-nm-2013phn-1.html 56 Tiếng Anh 10 Ann C Smith, Marise A Hussey (2005), Gram Stain Protocols, American society for microbiology Microbel Library 11 Azrina A., Maznah I and Azizah A.H (2008), Extraction and Determination of Ozyzanol in Rice Bran of Mixed Herbarium UKMB; AZ 6807: MR 185, AZ 6808: MR 211, AZ 6809: MR 29, ASEAN Food Journal 15 (1), pp 8996 12 Bauer AW, Kirby WM, Sherris JC, Turck M (1966), Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method, Am J Clin Pathol, 45(4) 13 Castor J.G.B (1953), The B-complex vitamins of musts and wines as microbial growth factors, Appl Microbiol, (1), pp 97–102 14 David Collins M., Glenn R Gibson (1999), Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut, American Society for Clinical Nutrition, 69(5), pp 1052S-1057S 15 Di Cagno R., Mazzacane F., Rizzello C.G., Angelis M.D.E., Giuliani G., Meloni M., Servi B.D.E., Marco G (2010), Synthesis of γ-aminobutyric acid (GABA) by Lactobacillus plantarum DSM19463: functional grape must beverage and dermatological applications, Appl Microbiol Biotechnol, 86, pp 731–741 16 Famularo G., De Simone C., Pandey V., Sahu A.R., Minisola G (2005), Probiotic lactobacilli: an innovative tool to cerect the malabsorption syndrome of vegetarians, Med Hypotheses, 65(6):1132-5 17 FAO/WHO (2001), “Health and Nutritional Properties of Probiotics in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria”, Report of a Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotics in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, Argentina October 57 18 FAO/WHO (2002), Guidelines for the Evaluation of Probiotics in Food, Joint FAO/WHO Working Group Report on Drafting Guidelines for the Evaluation of Probiotics in Food London, Ontario, Canada, April 30 and May 19 Foester C.W., Foester H.F (1973), Glutamic acid decarboxylase in spores of Bacillus megaterium and its possible involvement in spore germination J Bacteriol, 114, pp 1090–1098 20 Fuller R (1989), Probiotics in man and animals, J Appl Bacteriol, 66, pp 65–78 21 George l Lookhart and Ben L Jones (1984), High Performance Liquid Chromatography Analysis of Amina Acids at the Picamole Level., Cereal Chem, 62(2), pp 97-102 22 Gilliand S.E., Staley T.E., Bush L.J (1984), Importance in bile tolerance of Lactobacillus acidophilus used as a dietery adjunct J Dairy Sci, 67(12), pp 3045-3051 23 Grases F., Simonet B.M., Vucenik I (2001), Absorption and excretion of orally administered inositol hexaphosphate (IP,-, or phytate) in humans, BioFactors, 15, pp 53-61 24 H ven , R., ten in , nd J H J Huis in’t Ve d (1992), Selection of strains for probiotic use, p 209-224 In: R Fuller (ed) Probiotics: The scientific basis, Chapman & Hall, New York 25 Hayakawa K., Kimura M., Kasaha K., Matsumoto K., Sansawa H., Yamori Y (2004), Effect f γ-aminobutyric acid-enriched dairy product on the blood pressure of spontaneously hypertensive and normotensive Wistar– Kyoto rats, Bri J Nutr, 92, pp 411–417 26 Hayakawa K., Maysayuki K., Yamori Y (2005), Role of the renal nerves in γ-aminobutyric acid-induced anti-hypertensive effect in spontaneously hypertensive rats European Journal of Pharmacology, 7;524(1-3):120-5 58 27 Hemavathy J., Prabhakar J.V (1987), Lipid Composition of Rice (Oryza sativa L.) Bran, J Am Oil chem Soc, 64, pp 1016-1019 28 Higuchi T., Hayashi H., Abe K (1997), Exchange of glutamate and gaminobutyrate in a Lactobacillus strain, J Bacteriol, 179, pp 3362–3364 29 Holzapfel W.H., Haberer P., Snel J., Schillinger., Huis In ’t Veld J.J.H (1998), Overview of gut flora and probiotic Int J Food Microbiol, 41(2), pp 85-101 30 Huang, J.; Mei, L.; Sheng, Q.; Yao, S.; Lin, D (2007), Purification and characterization of glutamate decarboxylase of lactobacillus brevis CGMCC 1306 isolated from fresh milk Chinese J Chem Eng, 15, pp 157-161, 31 Inoue K., Shirai T., Ochiai H., Kasao M., Hayakawa K., Kimura M., (2003), Sansawa H Blood-pressure-lowering effect of a novel fermented milk c nt ining γ-aminobutyric acid (GABA) in mild hypertensives, Eur J Clin Nutr, 57, pp 490–495 32 Izquierdo E., Marchioni E., Aoude-Werner D., Hasselmann C., Ennahar S (2009), Smearing of soft cheese with Enterococcus faecium WHE 81, a multi-bacteriocin producer, against Listeria monocytogenes, Food Microbiol, 26, pp 16–20 33 Jariwalla R.J (2001), Rice- bran products: Phytonutrient with potential applications in preventive and clinical medicine, Drugs Exptv Clin Res., 27(1), pp 17-26 34 Jeng K.C., Chen C.S., Fang Y.P., Hou R.C.W., Chen Y.S (2007), Effect of microbial fermentation on content of statin, GABA, and polyphenols in PuErh tea, J Agric Food Chem, 55, pp 8787–8792 35 Jin Z., Mendu S.K., Birnir B (2013), GABA is an effection immunomodulatory molecule, Amino Acids, 45(1), pp 87-94 36 Juliano R.O (1985), Rice: Chemistry and Technology 2nd ed American Association of Cereal Chemists St Paul, Minnesota 59 37 Kayahara H., Sugiura T (2001), Research on physiological function of GABA in recent years-improvement function of brain function and antihypertension, Japanese Journal of Food development, 36(6), pp 4-6 38 Kim J Y., Lee M Y., Ji G E., Lee Y S., Hwang K T (2009), Production f γ-aminobutyric acid in black raspberry juice during fermentation by Lactobacillus brevis GABA100, Int J Food Microbiol, 130, pp 12–16 39 Kim S H., Shin B.H., Kim Y.H., Nam S.W., Jeon S.J., (2007), Cloning and expression of a full-length glutamate decarboxylase gene from Lactobacillus brevis BH2, Biotechnol Bioprocess Eng, 12, pp 707-712 40 Kleinrok, Z, Matuszek, M, Jesipowicz, J, Matuszek, B, Opolski, A, Radzikowski, C (1998), GABA content and GAD activity in colon tumors taken from patients with colon cancer or from xenografted human colon cells growing as S C Tumors in a thymic nu/nu mice, Journal of Physiological Pharmacology, 49, pp 303-310 41 Komatsuzaki N., Shima J., Kawamotoa S., Momosed H., Kimurab T (2005), Production of g-aminobutyric acid (GABA) by Lactobacillus paracasei isolated from traditional fermented foods, Food Microbiol, 22, pp 497–504 42 Kook MC, Seo MJ, Cheigh CI, Pyun YR, Cho SC, Park H (2010), Enhanced production of gamma-aminobutyric acid using rice bran extracts by Lactobacillus sakei B2-16, J Microbiol Biotechnol, 20(4), pp 763-766 43 Kos, B., J Suskovic, J Goreta and S Matosic (2000), Effect of protectors on the viability of Lactobacillus acidophilus M92 in simulated gastrointestinal conditions, Food Technol Biotechnol., 38, pp 121-127 44 Kumar S., Punekar N.S., Satyanarayan V., Venkatesh K.V (2000), Metabolic fate of glutamate and evaluation of flux through the 4– aminobutyrate (GABA) shunt in Aspergillus niger, Biotechnol Bioeng, 67, pp 575–584 60 45 Li H., Cao Y (2010), Lactic acid bacterial cell factories for gamma aminobutyric acid, Amino Acids, 39, pp 1107–1116 46 Li H., Gao D., Cao Y., Xu H (2008), high γ-aminobutyric acid- producing Lactobacillus brevis isolated from Chinese traditional paocai, Ann Microbiol, 58(4), 649–653 47 Li H., Qiu T., Huang G., Cao Y (2010), Production of gamma-aminobutyric acid by Lactobacillus brevis NCL912 using fed-batch fermentation Microb Cell Fact, 9, pp 85 48 Lu X., Xie C., Gu Z (2008), Is ti n f γ-aminobutyric acid-producing bacteria and optimization of fermentative medium, Biochem Eng J, 41, pp 48–52 49 Maras B., Sweene G., Barra D., Bossa F., John R.A (1992), The amino acid sequence of glutamate decarboxylase from Escherichia coli, Eur J Biochem, 204, pp 93–98 50 Miraglia del Giudice M, De Luca MG (2004), The role of probiotics in the clinical management of food allergy and atopic dermatitis, J Clin Gastroenterol, 38 (6), pp 84-85 51 Orthoefer F.T and Nicolosi R.J (1993), Rice Bran Oil Composition and Characteristics, presented at the 84th American Oil Chemists' Society Annual Meeting, Anaheim, California, pp 25-29 52 Ouwehand A C., Salminen S and Isolauri E., (2002), Probiotic: an overview of beneficial effects, Antonie Van Leeuwenhoek, 82, pp 279- 289 53 Patterson J.A and Burkholder K.M (2003), Application of prebiotics and probiotics in poultry production, J Animal Science, 82, pp 627-631 54 Radhika Dhakal, Vivek K., Bajpai., Kwang-Hyun Baek (2012), Production fG (γ- aminobutylric acid ) by Microorganisms, Brazilian Journal of Microbiology, pp 1230-1241 ISSN 1517-8382 55 Reisaburo Ishigaki (1999), Fermented sesame having antioxidative properties, and food containing the same, US 5891492 A 61 56 Roberts K.A., Wright J.W and Harding J.W (1993), GABA and bicuculline-induced blood pressure changes in spontaneously hypertensive rats, J Cardiovasc Pharmacol, 21, pp 156-162 57 Robert M Kliegman, MD, Rodney E Willoughby, MD (2005), Prevention of Necrotizing Enterocolitis With Probiotics., Pediatrics, 115(1), pp 171172 58 Sadami OHTSUBO, Satoshi AsANO, Kazuhito SATO, and Isao MATSUMO (2000), Enzymatic Production of v-Aminobutyric Acid Using Rice (Oryza sativa) Germ, Food Sci Technol Res., 6(3), pp 208-21l 59 Sabine Kastner, Vincent Perreten, Helen Bleuler, Gabriel Hugenschmidt, Christophe Lacroix, Leo Meile (2006), Antibiotic susceptibility patterns and resistance genes of starter cultures and probiotic bacteria used in food, Systematic and Applied Microbiology, 29(2), pp 145–155 60 Saunders, R.M (1990), The properties of rice bran as o food stuff, Cereal Food World , 35, pp 632-635 61 Servili M., Rizzello C.G., Taticchi A., Esposto S., Urbani S., Mazzacane F., Di Maio I., Selvaggini R., Gobbetti M., Di Cagno R (2011), Functional milk beverage fortified with phenolic compounds extracted from olive vegetation water, and fermented with functional lactic acid bacteria, Int J Food Microbiol, 147(1), pp 45–52 62 Shelp.B.J., Bown.A.W., (1997), The Metabolism and functi ns f γ- Aminobutyric Acid, Plant Physiol, pp 1-5 63 Siragusa S., Angelis M.De., Cagno R.Di., Rizzello C.G., Coda R., Gobbetti M (2007), Synthesis f γ -aminobutyric acid by lactic acid bacteria isolated from a variety of Italian cheeses, Appl Environ Microbiol, pp 7283–7290 64 Ting Qiu, Haixing Li and Yusheng Cao (2010), Pre-staining thin layer chromatography method for amino acid detection, African Journal of Biotechnology, 9(50), pp 8679-8681 62 65 Tsai J.S., Lin Y.S., Pan B.S., Chen T.J (2006), Antihypertensive peptides and gamma-aminobutyric acid from prozyme facilitated lactic acid bacteria fermentation of soymilk, Process Biochem, 41, pp 1282–1288 66 Ueno, Y.; Hayakawa, K.; Takahashi, S.; Oda, K (1997), Purification and characterization of glutamate decarboxylase from Lactobacillus brevis IFO 12005, Biosci Biotech Biochem, 61, pp 1168-1171 67 Wang L., D.X Xu, Y.G Lv and H Zhang (2010), Purification and biochemical characterization of a novel glutamate decarboxylase from rice bran, Journal of the Science of Food and Agriculture, 90, pp 1027-1033 68 Wong C.G., Bottiglieri T., Snead O C (2003), G , γ-hydroxybutyric acid and neurological disease, Ann Neurol, 54, pp S3-S12 69 Wood B J B., Holzapfel W H (1995), The genera of Lactic acid bacteria The Lactic acid bacteria, 2, pp 9-15 70 Yang S.Y., Lu F.X., Lu Z.X., Bie X.M., Jiao Y., Sun L.J., Yu B (2008), Production of gamma-aminobutyric acid by Streptococcus salivarius subsp thermophilus Y2 under submerged fermentation, Amino Acids, 34, pp 473–478 71 Yokoyama, S.; Hiramatsu, J.; Hayakawa, K (2002), Production of yaminobutyric acid from alcohol distillery lees by Lactobacilus brevis IFO – 12005, J Biosci Bioeng, 93(1), pp 95-97 72 Zhang H., H Yao, F Chen and X Wang (2007), Purification and characterization of glutamate decarboxylase from rice germ, Food Chemistry, 101, pp 1670-1676 73 Zhou X., Pan Y., Wang Y., and Li W (2007), In vitro assessment of gastrointestinal viability of two photosynthetic bacteria, Rhodopseudomonas palustris and Rhodobacter sphaeroides, J Zhejiang Univ Sci B, 8(9), pp 686-692 63 ... tài: ? ?Nghiên cứu đặc điểm vi khuẩn lactic sinh tổng hợp Gammaaminobutyric acid ứng dụng? ?? Mục đích nội dung nghiên cứu tập trung vào vấn đề sau: - Tuyển chọn chủng vi khu n lactic sinh tổng hợp gamma- aminobutyric. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - Trần Thị Ngoan ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM VI KHUẨN LACTIC SINH TỔNG HỢP GAMMA- AMINOBUTYRIC ACID VÀ ỨNG DỤNG Chuyên... ƣợc nghiên cứu ứng dụng ể sản xuất th c ph m giàu G v dƣợc ph m tổng hợp GABA 14 1.3.7 Sinh tổng hợp GABA từ vi khuẩn Vi khu n ƣợc sử dụng ể tổng hợp GABA cách sử dụng Glutamic acid decarboxylase