G ên cứuđ ều chế cao định chuẩn từ âm đại hành (eleutherine subaphylla gagnep ,iridaceae)

YT Ƣ BÁO CÁO TỔNG KẾT Ề TÀI KHOA H C VÀ CÔNG NGHỆ CẤ Ề Ế RƢỜNG Ẩ (Eleutherine subaphylla Gagnep., Iridaceae) Mã số: ………………… Chủ nhiệm đề tài: TS TRẦ n p ố VŨ n – ăm 2018 BÁO CÁO TỔNG KẾT Ề TÀI KHOA H C VÀ CÔNG NGHỆ CẤ Ề RƢỜNG Ế Ẩ (Eleutherine subaphylla Gagnep., Iridaceae) Mã số: ………………… Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) TS Trần Anh Vũ n p ố n – ăm 2018 Á V Ề TÀI ThS LÊ THỊ HỒNG VÂN Đơn vị công tác: Bộ môn Dƣợc Liệu – Khoa Dƣợc – Đại học Y Dƣợc TP.HCM ThS LÊ THỊ LAN PHƢƠNG Đơn vị công tác: Bộ môn Dƣợc lý – Khoa Y Học Cổ Truyền – Đại học Y Dƣợc TP HCM MÃ ĐỨC NHẬT QUANG Sinh viên Khoa Dƣợc – Đại học Y Dƣợc TP HCM khóa 2013 - 2018 i DANH SÁCH Ơ V PH I H P Bộ môn Bào chế - Khoa Dƣợc – ĐH Y Dƣợc TP.HCM Bộ môn Dƣợc liệu - Khoa Dƣợc – ĐH Y Dƣợc TP.HCM Bộ môn Vi sinh - Khoa Dƣợc – ĐH Y Dƣợc TP.HCM Phịng thí nghiệm Y Dƣợc Cổ Truyền, Khoa Y Học Cổ Truyền – ĐH Y Dƣợc Tp.Hồ Chí Minh ii MỤC LỤC DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA ĐỀ TÀI i DANH SÁCH ĐƠN VỊ PHỐI HỢP ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ K HI U CHỮ VI T TẮT v DANH MỤC CÁC ẢNG vi DANH MỤC CÁC H NH viii THÔNG TIN K T QUẢ NGHIÊN CỨU Error! Bookmark not defined Đ T VẤN ĐỀ 10 CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LI U 11 1.1 DƢỢC LI U SÂM ĐẠI HÀNH 11 1.1.1 Giới thiệu chung 11 1.1.2 Công dụng – liều dùng 11 1.1.3 Thành phần hóa học 11 1.1.4 Các phƣơng pháp định lƣợng 12 1.1.5 Tác dụng sinh học 13 1.2 M T SỐ PHƢƠNG PHÁP THỬ TÁC DỤNG SINH HỌC 15 1.2.1 Phƣơng pháp xác định độc tính cấp 15 1.2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu tác dụng kháng viêm 15 1.2.3 Phƣơng pháp thử tác dụng kháng khuẩn 16 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 NGUYÊN LI U THI T Ị 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Dung mơi, hóa chất tá dƣợc 18 2.1.3 Trang thiết bị 18 2.1.4 Động vật th nghiệm 19 2.1.5 Nơi th c 19 2.1.6 Xử l số liệu 19 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.2.1 Xây d ng tiêu chuẩn sở cho nguyên liệu thân hành Sâm đại hành 20 2.2.2 Điều chế cao Sâm đại hành 25 2.2.3 Đánh giá độc tính cấp cao Sâm đại hành 28 2.2.4 Đánh giá tác dụng kháng viêm kháng khuẩn cao Sâm đại hành 29 2.2.5 Xây d ng tiêu chuẩn sở cao Sâm đại hành 31 CHƢƠNG K T QUẢ 33 3.1 Xây d ng tiêu chuẩn sở cho nguyên liệu thân hành Sâm đại hành 33 iii 3.1.1 Xây d ng phƣơng pháp định lƣợng đồng thời isoeleutherin, eleutherine eleutherol dƣợc liệu 33 3.1.2 Kiểm tra dƣợc liệu Sâm đại hành 47 3.1.3 Xây d ng tiêu chuẩn sở cho dƣợc liệu 51 3.2 Điều chế cao Sâm đại hành 52 3.2.1 Kết th m d dung môi chiết xuất 52 3.2.2 Tìm điều kiện phù hợp điều chế dịch chiết Sâm đại hành 52 3.2.3 Kết th m d điều kiện làm khô dịch chiết 54 3.2.4 Phƣơng pháp điều chế cao Sâm đại hành 54 3.3 Đánh giá độc tính cấp cao Sâm đại hành 55 3.4 Đánh giá tác dụng kháng viêm kháng khuẩn cao Sâm đại hành 56 3.4.1 Kết đánh giá kháng viêm cấp cao sâm đại hành 56 3.4.2 Kết đánh giá hoạt tính kháng khuẩn cao Sâm đại hành 57 3.5 Xây d ng tiêu chuẩn sở cho cao Sâm đại hành 59 3.5.1 Kết đánh giá chất lƣợng cao đ c Sâm đại hành 59 3.5.2 Xây d ng số ch tiêu cao đ c Sâm đại hành 60 CHƢƠNG K T LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 62 TÀI LI U THAM KHẢO 64 PHỤ LỤC iv Ụ Á Ữ Ệ Từ nguyên Dƣợc điển Việt Nam Tiêu chuẩn sở Sâm đại hành Sắc ký đồ Methanol Ethanol Dimethyl sulfoxide Infrared Ultraviolet Photodiode array Nuclear Magnetic Resonance LD50 Lethal dose 50% IC50 Inhibitory concentration 50% TI RSD OD MIC MBC Therapeutic index Relative Standard Deviation Optical density Minimum inhibitory concentration Minimum bactericidal concentration Methicillin-resistant Staphylococcus aureus ELISA Enzym-linked immunosorbent assay CFU Colony-forming unit Medium-Performance Liquid Chromatography High-performance liquid chromatography UltraPerformance Liquid Chromatography Limit of detection Limit of quantitation MPLC HPLC UPLC LOD LOQ Ắ g ĩa ếng Việt Dƣợc điển Việt Nam Tiêu chuẩn sở Sâm đại hành Sắc ký đồ Từ viết tắt DĐVN TCCS SĐH SKĐ MeOH EtOH DMSO IR UV PDA NMR MRSA ỮV Ế Hồng ngoại Tử ngoại Dãy quang điện Cộng hƣởng từ hạt nhân Liều làm chết 50 đối tƣợng th nghiệm Nồng độ ức chế 50 đối tƣợng th nghiệm Ch số điều trị Độ lệch chuẩn tƣơng đối Mật độ quang Nồng độ ức chế tối thiểu Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu Tụ cầu kháng methicillin Thử nghiệm miễn dịch gắn với enzym Đơn vị hình thành khuẩn lạc Sắc ký lỏng hiệu n ng trung bình Sắc ký lỏng hiệu n ng cao Sắc ký lỏng siêu hiệu n ng Giới hạn phát Giới hạn định lƣợng v Ụ Á ảng 2.1 Danh sách thiết bị dùng bào chế kiểm nghiệm .18 ảng 2.2 Nồng độ giai mẫu xây d ng đƣờng tuyến tính (mg/ml) .22 ảng 2.3 Phƣơng pháp dung môi chiết xuất 25 ảng 2.4 Các yếu tố thông số tối ƣu 26 ảng 2.5 Ma trận bố trí thí nghiệm 26 ảng 2.6 Các thử nghiệm tiến đến vùng gần dừng 27 ảng 3.1 Chƣơng trình chạy tiệm tiến đƣợc l a chọn 35 ảng 3.2 Diện t ch đ nh isoleutherine, eleutherin eleutherol SĐH chiết MeOH 45%, 70%, 100% (n=3) .37 ảng 3.3 Diện t ch đ nh isoleutherine, eleutherin, eleutherol SĐH chiết xuất 30 oC, 45 oC, 60 oC, 80 oC (n=3) 37 ảng 3.4 Diện t ch đ nh isoleutherine, eleutherin, eleutherol SĐH chiết xuất từ 10 – 40 phút (n=3) .38 ảng 3.5 Diện t ch đ nh isoleutherine, eleutherin, eleutherol SĐH chiết xuất từ 50, 100, 150, 200 mg 10 ml MeOH 70%(n=3) 39 ảng 3.6 Diện t ch đ nh isoleutherine, eleutherin, eleutherol SĐH qua lần chiết (n=3) 40 ảng 3.7 Kết khảo sát t nh tƣơng th ch hệ thống mẫu đối chiếu (n=6) 40 ảng 3.8 Kết khảo sát t nh tƣơng th ch hệ thống mẫu thử dƣợc liệu (n=6) 41 ảng 3.9 Kết khảo sát tính tuyến tính hoạt chất 42 ảng 3.10 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng 44 ảng 3.11 Độ l p lại isoeleutherin mẫu thử dƣợc liệu 45 ảng 3.12 Độ l p lại eleutherin mẫu thử dƣợc liệu 45 ảng 3.13 Độ l p lại eleutherol mẫu thử dƣợc liệu 45 ảng 3.14 T m tắt độ l p lại hàm lƣợng chất định lƣợng 45 ảng 3.15 Kết độ đ ng isoeleutherin mẫu thử dƣợc liệu 46 ảng 3.16 Kết độ đ ng eleutherin mẫu thử dƣợc liệu .46 ảng 3.17 Kết độ đ ng eleutherol mẫu thử dƣợc liệu .47 ảng 3.18 T m tắt t lệ hồi phục quy trình định lƣợng mẫu thử dƣợc liệu 47 ảng 3.19 Kết kiểm tra độ ẩm, tạp chất tro toàn phần dƣợc liệu .49 ảng 3.20 Kết định lƣợng dƣợc liệu .51 ảng 3.21 Tiêu chuẩn sở dƣợc liệu Sâm đại hành 51 ảng 3.22 Kết khảo sát tổng hàm lƣợng isoeleutherin eleutherin eleutherol theo phƣơng pháp dung môi chiết xuất .52 ảng 3.23 Các yếu tố khảo sát khoảng thay đổi 52 ảng 3.24 Ma trận bố trí thử nghiệm kết 52 ảng 3.25 Các th nghiệm mức .53 ảng 3.26 Kết tối ƣu theo phƣơng pháp ox-Wilson 53 vi ảng 3.27 Kết th m d thời gian làm khô tủ sấy 54 ảng 3.28 Kết thử nghiệm độc tính cấp cao chiết Sâm đại hành 55 ảng 3.29 Thể tích chân chuột sau tiêm carragenan: 56 ảng 3.30 Kết đánh giá MIC cao Sâm đại hành MRSA 58 ảng 3.31 Kết khối lƣợng làm khô cao 59 ảng 3.32 Kết định lƣợng cao đ c Sâm đại hành 60 ảng 3.33 Tiêu chuẩn sở cho cao đ c Sâm đại hành 61 vii Ụ Á Hình 3.1 Phổ UV chất chuẩn 33 Hình 3.2 SKĐ dung dịch h n hợp chuẩn bƣớc s ng khác 33 Hình 3.3 Các SKĐ khảo sát chƣơng trình tiện tiến 35 Hình 3.4 SKĐ khảo sát tốc độ d ng .36 Hình 3.5 SKĐ khảo sát nhiệt độ cột .36 Hình 3.6 Diện t ch đ nh isoleutherine eleutherin eleutherol SĐH chiết MeOH 45%, 70%, 100% .37 Hình 3.7 Sắc ký đồ SĐH chiết MeOH 45 70 100 .37 Hình 3.8 Diện t ch đ nh isoleutherine eleutherin eleutherol SĐH chiết xuất 30 - 80 oC (n=3) 38 Hình 3.9 SKĐ Sâm đại hành chiết 30 oC, 45 oC, 60 oC, 80 oC 38 Hình 3.10 Diện t ch đ nh isoleutherine eleutherin eleutherol SĐH chiết xuất từ 10 – 40 phút (n=3) .39 Hình 3.11 SKĐ Sâm đại hành chiết từ 10 - 40 ph t 39 Hình 3.12 Hiệu suất chiết isoleutherine eleutherin eleutherol SĐH chiết xuất tỷ lệ 50, 100, 150, 200 mg/10 ml dung mơi (n=3) .40 Hình 3.13 SKĐ Sâm đại hành chiết tỷ lệ dƣợc liệu khác 40 Hình 3.14 SKĐ Sâm đại hành lần chiết 40 Hình 3.15 SKĐ khảo sát độ đ c hiệu mẫu thử dƣợc liệu 41 Hình 3.16 Đƣờng biểu diễn phƣơng trình hồi quy isoeleutherin 42 Hình 3.17 Đƣờng biểu diễn phƣơng trình hồi quy eleutherin .42 Hình 3.18 Đƣờng biểu diễn phƣơng trình hồi quy eleutherol .43 Hình 3.19 Sắc ký đồ giới hạn phát trái giới hạn định lƣợng phải isoeleutherin 44 Hình 3.20 Sắc ký đồ giới hạn phát trái giới hạn định lƣợng phải eleutherin .44 Hình 3.21 Sắc ký đồ giới hạn phát trái giới hạn định lƣợng phải eleutherol .44 Hình 3.22 Lát cắt Sâm đại hành 48 Hình 3.23 Các cấu tử bột dƣợc liệu Sâm đại hành 49 Hình 3.24 Kết định t nh isoeleutherin eleutherin eleutherol dƣợc liệu phƣơng pháp SKLM .50 Hình 3.25 SĐK định t nh dƣợc liệu SĐH 50 Hình 3.26 Biểu đồ độ t ng thể tích chuột so với ban đầu (%) .57 Hình 3.27 Kết đáng giá khả n ng kháng khuẩn cao Sâm đại hành MRSA Streptococcus faecalis 58 viii Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh ƢƠ Ế KẾT LUẬ V Ề NGH Ậ Qua thời gian th c đề tài hoàn thành mục tiêu đề với kết cụ thể nhƣ sau: - Đã xây d ng thẩm định đƣợc phƣơng pháp định lƣợng đồng thời isoeleutherin, eleutherin eleutherol UPLC Đã kiểm tra nguyên liệu Sâm đại hành theo DĐVN xây d ng thêm tiêu chuẩn định tính – đinh lƣợng phƣơng pháp UPLC - Đã tìm đƣợc điều kiện phù hợp để điều chế cao đ c Sâm đại hành c hàm lƣợng hoạt chất (isoeleutherin, eleutherin eleutherol) cao từ bột Sâm đại hành Cao đƣợc điều chế phƣơng pháp chiết xuất ngấm kiệt với dung môi ethanol 70%, t lệ dịch chiết : dƣợc liệu 6:1, dịch chiết đƣợc cô sệt sấy khô tủ sấy 45 oC - Đánh giá đƣợc độc tính cấp cao Sâm đại hành - Đánh giá đƣợc hoạt tính kháng viêm kháng khuẩn (kháng MRSA với MIC = 2048 µg/ml) cao đ c Sâm đại hành - Đã xây d ng tiêu chuẩn sở để đánh giá chất lƣợng cho cao đ c Sâm đại hành đạt tiêu chuẩn làm thuốc - Ngoài cao Sâm đại hành đƣợc ứng dụng để điều chế kem Sâm đại hành từ đề tài nghiên cứu khác Kết cho thấy kem chứa cao Sâm đại hành hàm lƣợng 8% có tác dụng kháng viêm tƣơng đƣơng với clobetason 0,05% mơ hình gây viêm da chuột nhắt trắng dầu ba đậu 1% Ề Qua trình th c đề tài số hƣớng phát triển đƣợc đề nghị: - Nghiên cứu thêm số phƣơng pháp khác để điều chế cao đ c Sâm đại hành để c hàm lƣợng hoạt chất cao kinh tế Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 62 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh - Nghiên cứu số dạng bào chế từ cao đ c Sâm đại hành - Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn khác cao đ c Sâm đại hành - Thử nghiệm hoạt tính chống ung thƣ cao đ c Sâm đại hành Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 63 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh TÀI LIỆU THAM KH O [1] T Ieyama, M D P T Gunawan-Puteri and J Kawabata, "a-Glucosidase inhibitors from the bulb of Eleutherine americana.," Food Chem, no 128, pp 308-311, 2011 [2] B O T Ifesan and S P Voravuthikunchai, "Effect of Eleutherine americana Merr Extract on Enzymatic Activity and Enterotoxin Production of Staphylococcus aureus in Broth and Cooked Pork," Foodborne Pathog Dis, vol 6, pp 699-704, 2009 [3] B Ifesan, C Hamtasin, W Mahabusarakam and S Voravuthikunchai, "Assessment of Antistaphylococcal Activity of Partially Purified Fractions and Pure Compounds from Eleutherine americana," J Food Protect, no 72, pp 354359, 2009 [4] T Sirirak S P Voravuthikunchai “Eleutherine americana: A candidate for the control of Campylobacter species ” Poultry Science, số 90 pp 791-796, 2011 [5] J Xu, F Qiu, W Duan, G Qu, N Wang and X Yao, "New bioactive constituents from Eleutherine americana.," Front Chem China, vol 1, no 3, pp 320-323, 2006 [6] Tasia Amelia, Dina Pratiwi, Romsiah, H Daryono and Tjahjono, "In Silico Study of The Component of Eleutherine americana MERR on Human Estrogen Reseptor Alpha as Potential Anti-Breast Cancer.," 2014 [7] Xiaofan Li Takashi Ohtsuki Takashi Koyano et “New Wnt/b-Catenin Signaling Inhibitors Isolated from Eleutherine palmifolia ” Chem Asia J., tập pp 540-547, 2009 [8] Đ Tất Lợi “Những thuốc vị thuốc Việt Nam ” NX Y học, 2004, pp 145-146 [9] Trƣơng Thị Đẹp Liêu Hồ M Trang, Giáo trình phân loại thực vật Đại học Y Dƣợc TP.HCM, 2003, p 174 [10] Trần Đình Lý 1900 lồi có ích Vi t Nam, NXB Thế Giới, 1993, p 256 [11] Phạm Hoàng Hộ “Cây cỏ Việt Nam III ” Nhà xuất trẻ, 1999, pp 504505 [12] V V n Chi Từ đ ển thuốc Vi t Nam tập 1, NXB Y học, 2012, pp 1063-1064 [13] Nguyễn Tiến Bân, Cẩm nang tra cứu nhận bết họ thực vật hạt kín, NXB nơng nghiệp Hà Nội, 1997, p 71 [14] V V n Chi Từ đ ển thuốc Vi t Nam, NXB Y học, 1997, pp 1029, 1463 [15] Hội đồng dƣợc điển Việt Nam “Chuyên luận sâm đại hành ” Dượ đ ển Vi t Nam IV, NXB Y học, 2015 [16] Đ Huy Bích, Cây thuố đ ng vật làm thuốc Vi t Nam tập II, NXB Khoa học k thuật, 2006, pp 698-701 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 64 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh [17] Nguyễn V n Đàn Lê V n Hồng “Nghiên cứu hoạt chất rễ Sâm Đại Hành ” Tạ í dược học tập 6, 1973, p 14 [18] Nguyễn Thị Cẩm Châu “G p phần nghiên cứu thành phần hóa học sâm đại hành ” Khóa luận tốt nghi Dượ đại học Y Dược TP.HCM, 1995 [19] Nguyễn Minh Đức “Nghiên cứu tác dụng sinh học va thành phần hóa học dƣợc liệu có tác dụng hệ tiêu hóa gan mật ” H i nghị khoa học kỹ thuậ Dược, 1997, pp 15-20 [20] Huỳnh Thị Minh Thùy “Nghiên cứu hóa học Sâm đại hành ” Khóa luận tốt nghi Dượ đại họ Y Dược TP.HCM, 2005 [21] Lê Thị Hồng Vân “Nghiên cứu thành phần hóa học Sâm đại hành ” Khóa luận tốt nghi Dượ Đại họ Y dược TP.HCM, 2006 [22] S Paramapojna, M Ganzerab, W Gritsanapana and H Stuppnerb, "Analysis of naphthoquinone derivatives in the Asian medicinal plant Eleutherine americana by RP-HPLC and LC–MS," J Pharm Biomed, vol 47, pp 990-993, 2008 [23] L Xijing, W Nai-Li and L Li Rong-Xian, "Effect of Eleutherine Americana Extracts on Rats' Vascular Ring of Aorta ex Vivo," China Pharm, vol 18, pp 1376-1378, 2009 [24] H Delgado, J Herrera, T Sifuentes, J Ruíz, M Dávila and F Isern, "Plantas medicinales de la Amazonia peruana utilizadas porcuranderos y chamanes com fines anticonceptivos," Iquitos: Instituto Peruano de Seguridad Social/Instituto de Medicina Tradicional, 1997 [25] H Komura, K Mizukawa and H Minakata, "New anthraquinones from Eleutherine americana.," Chem Pharm Bull, no 31, pp 4206-4208, 1983 [26] S Sousa, J Farias, G Costa, O Carvalho Junior, L Silva, J Goncalves and M Prado, "Análise fitoquímica de folhas e caule de Eleutherine plicata Herb," XX Reunião Anual da Federaỗóo de Sociedades de Biologia Experimental-FeSBE, 2005 [27] R Baraỳna and J Rocha, "Avaliaỗóo fitoquớmica e farmacolúgica extrato aquoso de Eleutherine plicata," XVII Seminỏrio de Iniciaỗóo Cientớfica UFPA, 2006 [28] Liu Xi - jing, YAN Xi - quin, Li Ling WANG Nai - li “RP - HPLC simultaneous determination of isoeleutherine, eleutherine and eleutherol in Eleutherine americana Merr et Heyne ” Chin J pharm Anal, tập số 29 pp 735737, 2009 [29] B O T Ifesan, D Ibrahim and S P Voravuthikunchai, "Antimicrobial activity of crude ethanolic extract from Eleutherine americana.," J Food, Agric Environ, no 8, pp 1233-1236, 2010 [30] H Holmes, D Currie, J Maltman, R Silver, C Lough and G Lesky, "Evidence for mode of chemical action of 1,4-naphtoquinones in bacteriostasis.," Chemotherapy, no 9, pp 241-247, 1964 [31] I W Kusuma, E T Arung, E Rosamah, S Purwatiningsih, H Kuspradini, Syafrizal and et al, "Antidermatophyte and antimelanogenesis compound from Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 65 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Eleutherine americana grown in Indonesia," J Nat Med, no 64, pp 223-226, 2010 [32] S H Song, H Y Min, A R Han, J W Nam, E K Seo, W P Seoung and et al., "Suppression of inducible nitric oxide synthase by (-)-isoeleutherin from the bulbs of Eleutherine americana through the regulation of NF-ỴºB activity.," Int Immunopharmacol, no 9, pp 298-302, 2009 [33] P Tessele, F D Monache, N Quintão, G da Silva, L Rocha, G Lucena et al “A new naphthoquinone isolated from the bulbs of Cipura paludosa and pharmacological activity of two main constituents ” Planta Med, số 77, pp 10351043, 2011 [34] H Hara, N Maruyama, S Yamashita, Y Hayashi, K Lee, K Bastow, Chairul, R Marumoto and Y Imakura, "Elecanacin, a novel new naphthoquinon from the bulb of Eleutherine americana.," Chem Pharm Bull., no 45, pp 1714-1716, 1997 [35] Z Chen, H Huang, C Wang, Y Li, J Ding and S Ushio, "Honconin, a new naphthalene derivative fromHong-Cong, the rhizome of Eleutherine Americana Merr Heyne (Iridaceae).," Chem Pharm Bull., no 34, pp 2743-2746, 1986 [36] B Brasileiro, V Pizziolo, D Raslan, C Jamal and D Silveira, "Antimicrobial and cytotoxic activities screening of some Brazilian medicinal plants used in Governador Valadares district.," Braz J Pharm Sci., vol 2, no 42, pp 195-202, 2006 [37] M S Nascimento, J M S Vieira, L C S Malheiros, J O C S Júnior, L C S Rodrigues and W L R Barbosa, "Characterisation of isoeleutherine in aqueous extract of Eleutherine plicata Herb., iridaceae, active against entamoeba hystolitica/ entamoeba dispar in-vitro," Int J Pharm Sci Res., vol 3, no 4, pp 1096-1100, 2012 [38] F Amaral, M Ribeiro, J Barbosa-Filho, A Reis, F Nascimento and R Macêdo, "Plants and chemical constituents with giardicidal activity.," Rev Bras Farmacogn., no 16, pp 696-720, 2006 [39] Viện kiểm nghiệm thuốc TP.HCM, Hướng dẫn công vi c: th đ c tính cấp [40] Đ Trung Đàm ươ á đị đ c tính cấp thuốc, Hà Nội, NXB Y học, 1996, pp 7-24 [41] Viện dƣợc liệu - Bộ Y Tế, ươ ứu tác dụ dược lý từ thuốc thả dược, Hà Nội, NXB khoa học k thuật, 2006, pp 278-292 [42] N T Hằng N T T Tâm M H Phƣơng “Khả n ng bắt gốc t DPPH n ng l c khử Nam sâm bò Cần Giờ, TP Hồ Ch Minh ” tạp chí khoa học ĐHS HC tập 90 số 12 pp 112-122, 2016 [43] Laxmipriya Padhi Sujogya Kumar Panda “Antibacterial activity of Eleutherine bulbosa against multidrug-resistant ” Journal of Acute Medicine xx, pp 1-9, 2015 [44] L T T V Huỳnh V n H a Bào chế dược học tập Đại học Y dƣợc TP.HCM, 2014, pp 252-262 [45] N L Kitts D David “Antioxidant Property of Coffee Components: Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 66 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Assessment of Methods that Define Mechanisms of Action ” Molecules, số 19180-19208, pp 19180-19208, 2014 [46] S V Sirirak T, "Eleutherine americana: A candidate for the control of Campylobacter species," Poultry Science, vol 90, pp 791-796, 2011 [47] B Y Tế, Bào chế dược học, Hà Nội, NXB Y học, 2011, pp 241246 [48] M Ganzera I Nischang et al “Application of MEKC and monolithic CEC for the analysis of bioactive naphthoquinones in Eleutherine americana ” Electrophoresis, tập 30 số 21 pp 3757-63, 2009 [49] Ludwig Huber “Validation and qualification in analytical laboratories ” second edition, 2007, pp 144-146 [50] Nguyễn Kim Phi Phụng, ươ ô lập hợp chất hữ Đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh, 2007, pp 20-69 [51] Trần Hùng, G ì ươ ứ dược li u Đại học Y dƣợc TP.HCM, 2006, pp 124-126 [52] J.-Z Xu, F Qui, W.-J Duan, Qu, Ge-xia, N.-L Wang X.-S Yao “Studies on antifungal constituents isolated from Eleutherine americana ” Zhingguo Yaowu Hua Zazhi Bianjibu, tập số 15 pp 157-161, 2005 [53] F Qiu, J Xu, W Duan, Qu, Ge-Xia, N.-L Wang X.-S Yao “New consiituents from Eleutherine americana ” Gaodeng Jiaoyu Chubanshe, tập 11 số 26, pp 2057-2060, 2005 [54] P Molyneux “The use of the stable free radical diphenyl picryl hydrazyl DPPH for estimating antioxidant ” Songklanakarin J Sci Technol., tập số 26 pp 211219, 2004 [55] Tania Maria Almeida Alves Helmut Kloos Carlos Leomar “Eleutherinone anovel fungitoxic naphtoquinone from Eleutherine bulbos ” 2003 [56] Ngô V n Thu Bài giả dược li u tập Trƣờng đại học Dƣợc Hà Nội, 1998, pp 215-229,390 [57] Đ Trung Đàm ươ á đị đ c tính cấp thuốc, Hà Nội, Nhà xuất Y học, 1996, pp 7-24, 50-57 [58] Đ Trung Đàm “Đánh giá mơ hình gây phù th c nghiệm kaolin carragenin để nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp thuốc ” Tạ í dược li u, tập số pp 49-52, 1996 [59] Nguyễn Viết T u Nguyễn V n Đàn ươ ứu hóa học thuốc, Nhà xuất Y học, 1985, pp 235-240 [60] C Zhengxiong, H Huizhu, W Chengruui, L Yuhui, D Jianmi, U Sankawa, H Noguchi Y Iataka “Hongconin a new napthalene derivative from the zhizome of Eleutherine americana ” Heterocylces, số 22 pp 691-694, 1984 [61] M.S “Antioxidant determinations by the use of a stable free radical ” Nature, số 181 pp 1199-1200, 1958 [62] “General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine – WHO” Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 67 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh [63] Lorenzi H Matos F “Plantas medicinais no rasil: nativas e ex ticas ” Nova Odessa: Plantarum Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 68 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PHỤ LỤC Phụ lục Kết định t nh dƣợc liệu PL-2 Phụ lục Kết định lƣợng dƣợc liệu PL-4 Phụ lục Kết định tính cao PL-5 Phụ lục Kết định lƣợng cao PL-7 Phụ lục Kết kiểm ch tiêu an toàn PL-8 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-3 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Kết qu địn lƣợng dƣợc liệu Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-4 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Kết qu định tính cao Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PL-5 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... “ g ên cứu đ ều chế cao định chuẩn từ âm đại hành (Eleutherine subaphylla Gagnep. , Iridaceae)” đƣợc th c với nội dung: - Xây d ng tiêu chuẩn sở cho nguyên liệu thân hành Sâm đại hành - Điều chế. .. meloxicam mg/kg  Nhóm thử nghiệm 1: Uống cao Sâm đại hành 0,11 g/ kg  Nhóm thử nghiệm 2: Uống cao Sâm đại hành 0,22 g/ kg  Nhóm thử nghiệm 3: Uống cao Sâm đại hành 0,44 g/ kg Thể tích cho uống: 0,1... đại hành - Điều chế cao Sâm đại hành - Đánh giá độc tính cấp cao Sâm đại hành - Đánh giá tác dụng kháng viêm, kháng khuẩn cao Sâm đại hành - Xây d ng tiêu chuẩn sở cao Sâm đại hành 10 ƢƠ 1.1 1.1.1