Xây dựng và thẩm định quy trình định lượng đồng thời omeprazole, lansoprazole, pantoprazole và rabeprazole trong huyết tương bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC DAD)

NGUYỄN LÊ VÂN HÀ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYỄN LÊ VÂN HÀ QUẢN LÝ VÀ CUNG ỨNG THUỐC XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI OMEPRAZOLE, PANTOPRAZOLE, RABEPRAZOLE VÀ LANSOPRAZOLE TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC – DAD) KHÓA 2013 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC TPHCM – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYỄN LÊ VÂN HÀ XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI OMEPRAZOLE, PANTOPRAZOLE, RABEPRAZOLE VÀ LANSOPRAZOLE TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC – DAD) Chuyên ngành: Quản lý cung ứng thuốc KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC Hướng dẫn khoa học: DS Dương Đình Chung TPHCM – Năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Chữ ký SV SV Nguyễn Lê Vân Hà LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, trước tiên xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến DS Dương Đình Chung, người thầy tận tình hướng dẫn truyền đạt cho tơi kiến thức quý báu, động viên tạo điều kiện thuận lợi nhất, giúp bước đầu làm quen với cơng tác nghiên cứu khoa học hồn thành tốt khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô anh chị mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm thầy cô khoa Dược – trường Đại học Nguyễn Tất Thành tận tình truyền dạy cho tơi kiến thức quý báu giúp đỡ suốt thời gian học tập làm khóa luận trường Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến thầy cô, cán trường Đại học Nguyễn Tất Thành, người trang bị cho nhiều kiến thức suốt q trình học tập để tơi có thành ngày hôm Tôi xin chân thành cảm ơn! MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU .2 1.1 TỔNG QUAN VỀ NHÓM PPIs 1.1.1 Lịch sử phát minh nhóm thuốc ức chế bơm proton 1.1.2 Công thức hóa học tính chất 1.1.3 Cơ chế tác dụng 1.1.4 Dược động học 1.1.5 Dược lực học 1.1.6 Tác dụng không mong muốn 1.1.7 Chỉ định 1.1.8 Chống định 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ ĐỊNH LƯỢNG OPZ, LPZ, PPZ VÀ RPZ TRONG DỊCH SINH HỌC 1.2.1 Trên giới .5 1.2.2 Trong nước .7 1.3 TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO .8 1.3.1 Cơ sở lý thuyết 1.3.2 Nguyên tắc cấu tạo hệ thống HPLC 1.3.3 Một số thơng số q trình sắc ký 1.3.4 Cơ sở lý thuyết việc lựa chọn điều kiện sắc ký 11 1.3.5 Một số phương pháp tính tốn kết định lượng HPLC 13 1.4 THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH TRONG DỊCH SINH HỌC 14 1.4.1 Khái niệm .14 1.4.2 Các tiêu thẩm định 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU .18 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu .18 2.1.2 Hóa chất, dung mơi .18 i 2.1.3 Chất đối chiếu, vật liệu nghiên cứu 18 2.1.4 Dụng cụ, máy móc, thiết bị 18 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.2.1 Các dung dịch thử nghiệm 19 2.2.2 Nội dung nghiên cứu 20 2.3 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ KẾT QUẢ 26 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .28 3.1 XÂY DỰNG ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ .28 3.1.1 Kết khảo sát bước sóng phát 28 3.1.2 Kết khảo sát pha động 29 3.1.3 Lựa chọn nội chuẩn 34 3.2 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ MẪU 36 3.3 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH PHÂN TÍCH ĐÃ CHỌN 39 3.3.1 Tính tương thích hệ thống 39 3.3.2 Thẩm định tính đặc hiệu 42 3.3.3 Thẩm định độ tuyến tính .45 3.3.4 Giới hạn định lượng .48 3.3.5 Thẩm định độ đúng, độ lặp lại 49 3.3.6 Hiệu suất chiết 54 3.3.7 Độ ổn định 54 3.4 BÀN LUẬN 62 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 67 4.1 KẾT LUẬN 67 4.2 KIẾN NGHỊ 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Ký hiệu Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt ACN Acetonitril Acetonitril AUC Area Under Curve Diện tích đường cong Nồng độ đỉnh Cmax CTCT Công thức cấu tạo CTPT Công thức phân tử CV Coefficient of Variation Hệ số biến thiên DĐVN Dược điển Việt Nam EMA European Medicine Agency FDA Food and Drug Administration HQC High Quality Control Sample HPLC High Performance Liquid IS Cơ quan quản lý thực phẩm thuốc Hoa Kỳ Mẫu kiểm tra nồng độ cao Sắc ký lỏng hiệu cao Chromatography Huyết tương HT IDM Cơ quan quản lý thuốc Châu Âu Indomethacin Indomethacin Internal Standand Chất nội chuẩn Khối lượng phân tử KLPT Lower Limit Of Quantification Giới hạn định lượng LPZ Lansoprazole Lansoprazol LQC Lower Quality Control Sample Mẫu kiểm tra nồng độ thấp Methanol Methanol Mobile phase Pha động MQC Middle Quality Control Sample Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình OPZ Omeprazole Omeprazol Photodiod array Dãy diod quang LLOQ MeOH MP PDA/ DAD iii PPIs Proton Pump Inhibitors Ức chế bơm proton PPZ Pantoprazole Pantoprazol RPZ Rabeprazole Rabeprazol RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối Standard Chất chuẩn Standard deviation Độ lệch chuẩn S SD SKD Sinh khả dụng SKĐ Sắc ký đồ S/N Signal/Noise SW Standard Working Dung dịch chuẩn làm việc TB Trung bình TĐSH TEA USP UV-Vis Tương đương sinh học Triethylamine Triethylamin The United States Dược điển Mỹ Pharmacopoeia Ultraviolet - Visible Tử ngoại - khả kiến iv DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 2.1 Sơ đồ nội dung nghiên cứu .20 Hình 3.1 Phổ UV OPZ, LPZ, PPZ, PPZ 29 Hình 3.2 SKĐ khảo sát pha động MeOH – đệm phosphat mM, pH (40 : 60) 30 Hình 3.3 SKĐ khảo sát pha động MeOH – đệm phosphat mM, pH (75 : 25) 30 Hình 3.4 SKĐ khảo sát pha động ACN – đệm phosphat mM, pH (40 : 60) .31 Hình 3.5 SKĐ khảo sát pha động ACN – đệm phosphat mM, pH (25 : 75) .31 Hình 3.6 SKĐ khảo sát pha động ACN – đệm natri acetat mM, pH 7,6 (25 : 75) 32 Hình 3.7 SKĐ khảo sát pha động ACN – nước 0,3 % TEA, pH 7,2 (55 : 45) 33 Hình 3.8 SKĐ khảo sát pha động MeOH – ACN – nước 0,3 % TEA, 33 Hình 3.9 SKĐ: a chất nội chuẩn domperidone PPIs; b chất nội chuẩn metronidazole PPIs c chất nội chuẩn indomethacin PPIs 35 Hình 3.10 SKĐ: a huyết tương trắng; b Mẫu huyết tương xử lý phương pháp gây tủa protein với MeOH; c Mẫu huyết tương xử lý phương pháp gây tủa protein với MeOH thêm dung dịch kiềm hóa KOH, d Mẫu huyết tương xử lý phương pháp chiết phân bố lỏng - lỏng e Mẫu chuẩn, nội chuẩn pha pha động (hệ pha động số 7) 38 Hình 3.11 SKĐ: a mẫu huyết tương trắng; b mẫu thử giả lập; c mẫu huyết tương chứa mẫu thử thêm chuẩn; d mẫu pha động 43 Hình 3.12 Phổ hấp thu UV: a IS; b PPZ; c OPZ; d RPZ ; e LPZ; Độ tinh khiết pic: f IS; g PPZ; h OPZ; i RPZ ; j LPZ 44 Hình 3.13 Đường biểu diễn tương quan tỷ lệ diện tích S/IS tỷ lệ nồng độ PPZ .45 Hình 3.14 Đường biểu diễn tương quan tỷ lệ diện tích S/IS tỷ lệ nồng độ OPZ .46 Hình 3.15 Đường biểu diễn tương quan tỷ lệ diện tích S/IS tỷ lệ nồng độ RPZ .47 Hình 3.16 Đường biểu diễn tương quan tỷ lệ diện tích S/IS tỷ lệ nồng độ LPZ .48 v DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Công thức hóa học tính chất PPIs Bảng 1.2 Tóm tắt nghiên cứu định lượng OPZ, LPZ, PPZ RPZ dịch sinh học công bố Thế giới Bảng 2.1 Các chất chuẩn dùng nghiên cứu 18 Bảng 2.2 Thiết bị dùng nghiên cứu 18 Bảng 2.3 Cách chuẩn bị mẫu đối chiếu 23 Bảng 3.1 Kết phân tích ANOVA phương pháp xử lý mẫu 39 Bảng 3.2 Bảng kết phân tích tính tương thích hệ thống 41 Bảng 3.3 Kết thẩm định độ tuyến tính PPZ 45 Bảng 3.4 Kết thẩm định độ tuyến tính OPZ .46 Bảng 3.5 Kết thẩm định độ tuyến tính RPZ .47 Bảng 3.6 Kết thẩm định độ tuyến tính LPZ .48 Bảng 3.7 Kết thẩm định độ đúng, độ xác ngày khác ngày (3 ngày) 49 Bảng 3.8 Kết thẩm định độ xác (độ lặp lại) ngày khác ngày 50 Bảng 3.9 Số liệu Summary Statistics (Độ đúng) 51 Bảng 3.10 Kết hiệu suất chiết PPZ OPZ .52 Bảng 3.11 Kết hiệu suất chiết RPZ LPZ .53 Bảng 3.12 Kết thẩm định độ ổn định dung dịch chuẩn gốc PPIs IS 55 Bảng 3.13 Kết nghiên cứu độ ổn định PPZ huyết tương 57 Bảng 3.14 Kết nghiên cứu độ ổn định OPZ huyết tương 58 Bảng 3.15 Kết nghiên cứu độ ổn định RPZ huyết tương 59 Bảng 3.16 Kết nghiên cứu độ ổn định LPZ huyết tương 60 Bảng 3.17 Kết phân tích thống kê nghiên cứu độ ổn định mẫu huyết tương 61 vi ... tương đương sinh học (TĐSH), tiến hành thực đề tài: ? ?Xây dựng thẩm định quy trình định lượng đồng thời Omeprazole, Lansoprazole, Pantoprazole Rabeprazole huyết tương phương pháp sắc ký lỏng hiệu. .. VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH NGUYỄN LÊ VÂN HÀ XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI OMEPRAZOLE, PANTOPRAZOLE, RABEPRAZOLE VÀ LANSOPRAZOLE TRONG HUYẾT TƯƠNG BẰNG PHƯƠNG... quy trình định lượng đồng thời OPZ, LPZ, PPZ RPZ huyết tương phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò dãy diod quang Quy trình thẩm định, đáp ứng đầy đủ yêu cầu quy trình định lượng thuốc dịch