LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC. KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY PHÈN ĐEN PHYLLANTHUS RETICULATUS POIR. THUỘC HỌ THẦU DẦU (Euphorbiaceae)

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP.HCM KHOA HÓA HỌC  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC Chuyên ngành Hóa Hữu KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA CÂY PHÈN ĐEN PHYLLANTHUS RETICULATUS POIR THUỘC HỌ THẦU DẦU (Euphorbiaceae) • GVHD: Nguyễn Thị Ánh Tuyết • SVTH : Lương Thị Thủy • LỚP : Hố 4C TP.Hồ Chí Minh, tháng năm 2013 LỜI CẢM ƠN Luận văn thực phịng thí nghiệm hợp chất tự nhiên- trường đại học sư phạm -số 280-An Dương Vương-Q.5-Tp.HCM, năm 2013 Với lòng trân trọng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành gửi lời cảm ơn tới: - Ban giám hiệu, ban lãnh đạo khoa Hóa - Tổ Hóa Hữu Cơ- Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh, tất quý thầy cô giáo trang bị cho em kiến thức tảng vững suốt thời gian học tập trường, niên khóa 2009-2013 - Ts Nguyễn Thị Ánh Tuyết - người tận tình hướng dẫn, động viên giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu thực khóa luận - Thầy Dương Thúc Huy, cô Lê Thị Thu Hương quan tâm,động viên,giảng dạy cho chúng em trình thực đề tài - Cảm ơn bạn: Phạm Thị Hoài, Trần Thị Kim Liên,Trần Thanh Vương, Liêu Diệp Hân, Nguyễn Thị Bé Thơ, Nguyễn Trần Hồng Phương, Phạm Thị Tiền, Bùi Đức Vượng Cuối cùng, cảm ơn gia đình giúp đỡ, động viên, tạo điều kiện từ vật chất đến tinh thần cho học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn  Qua trình thực đề tài giúp em rèn luyện kỹ tổng hợp kiến thức học phương diện ( học đôi với hành ) , luyện tính tự chủ tinh thần trách nhiệm công việc.Cảm nhận luận văn mang tính thiết thực-khoa học  Vì lần tiếp cận với luận văn nên tránh khỏi sai sót mong q thầy bạn góp ý để em có thêm kiến thức hoàn thành thật tốt luận văn Xin gửi lời chúc tốt đẹp tới tất người! Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2013 Sinh viên : Lương Thị Thủy ii MỤC LỤC MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH vii DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ vii LỜI MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CÂY PHÈN ĐEN [6] 1.1.1 Mô tả chung [6] 1.1.2 Vùng phân bố, thu hái [6] 1.2 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC TÍNH 1.2.1 Dược tính theo y học cổ truyền [4,6] 1.2.2 Các nghiên cứu dược tính số loài thuộc chi Phyllanthus 1.3 CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC 1.3.1 Phyllanthus acidus 1.3.2 Phyllanthus acuminatus 1.3.3 Phyllanthus amarus L 1.3.4 Phyllanthus discoides 1.3.5 Phyllanthus emblica L 1.3.6 Phyllanthus flexuosus 1.3.7 Phyllanthus fratermus 1.3.8 Phyllanthus myrtifolius 1.3.9 Phyllanthus niruroides 1.3.10 Phyllanthus niruri L 1.3.11 Phyllanthus oxyphyllus 1.3.12 Phyllanthus polyanthus 1.3.13 Phyllanthus sellowianus 1.3.14 Phyllanthus simplex 1.3.15 Phyllanthus tenellus iii 1.3.16 Phyllanthus urinaria 10 1.3.17 Phyllanthus watsonii 10 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 26 2.1 NGUYÊN LIỆU 27 2.1.1 Thu hái nguyên liệu 27 2.1.2 Xử lý mẫu nguyên liệu 27 2.2 HOÁ CHẤT VÀ THIẾT BỊ 27 2.2.1 Hoá chất 27 2.2.2 Thiết bị 27 2.3 PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 28 2.3.1 Phương pháp phân lập hợp chất 28 2.3.2 Phương pháp xác định cấu trúc hoá học hợp chất 28 2.4 ĐIỀU CHẾ CÁC LOẠI CAO 28 2.5 CÔ LẬP CÁC HỢP CHẤT HỮU CƠ TRONG CAO ETHYL ACETATE 29 2.5.1 Sắc kí cột silica gel cao ethyl acetate 29 2.5.2 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA.4 bảng 30 2.5.3 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA.4.3 bảng 30 2.5.4 Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA.4.4 bảng 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất T1 35 3.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất S1 37 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 43 4.1 KẾT LUẬN 44 4.2 ĐỀ XUẤT 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT s Singlet Mũi đơn d Doublet Mũi đôi t Triplet Mũi ba m Multiplet Mũi đa br s Broad singlet Mũi đơn rộng br d Broad doublet Mũi đôi rộng J Coupling constant Hằng số ghép cặp R P – 18 Reversed Phase C-18 Pha đảo C-18 ppm Par per million Một phần triệu Rf Retention factor δ Chemical shift Độ dịch chuyển hóa học Proton (1) Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt Resonance nhân proton (1) Carbon (13) Nuclear Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt Resonance nhân carbon (13) H-NMR 13 C-NMR DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer HSQC HMBC H-H COSY Heteronuclear Single Quantum Phổ tương tác dị nhân qua Coherence liên kết Heteronuclear Multiplet Bond Phổ tương tác dị nhân qua Coherence hai, ba liên kết H-H Correlation SpectroscopY Phổ tương quan proton- proton v DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU Ac Acetone CHCl , C Chloroform EA Ethylacetate ED Ether dầu hỏa MeOH, Me Methanol EtOH, Et Ethanol SKC Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng g Gam mg Miligam Hz Herzt MHz Mega Herzt vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Sắc kí cột silica gel cao ethyl acetate (EA) 30 Bảng Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA.4 bảng 30 Bảng Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA.4.3 bảng 31 Bảng Sắc kí cột silica gel phân đoạn EA.4.4 bảng 32 Bảng Số liệu phổ NMR T1 41 Bảng Số liệu phổ NMR S1 42 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Trái phèn đen Hình Cây Phèn đen Hình Tương quan HMBC T1 Hình Tương quan HMBC S1a Hình Tương quan HMBC S1b DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ Qui trình điều chế cao ether dầu hoả ethyl acetate (EA) 29 Sơ đồ Sơ đồ lập chất hữu có cao ethyl acetate Phèn đen 33 vii DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Phụ lục 1.1a Phổ 1H-NMR hợp chất T1 Phụ lục 1.1b Phổ 1H-NMR hợp chất T1 Phụ lục 1.1c Phổ 1H-NMR hợp chất T1 Phụ lục 1.2 Phổ 13C-NMR hợp chất T1 Phụ lục 1.3 Phổ DEPT hợp chất T1 Phụ lục 1.4 Phổ COSY hợp chất T1 Phụ lục 1.5a Phổ HSQC hợp chất T1 Phụ lục 1.5b Phổ HSQC hợp chất T1 Phụ lục 1.6a Phổ HMBC hợp chất T1 Phụ lục 1.6b Phổ HMBC hợp chất T1 Phụ lục 2.1a Phổ 1H-NMR hợp chất S1 Phụ lục 2.1b Phổ 1H-NMR hợp chất S1 Phụ lục 2.1c Phổ 1H-NMR hợp chất S1 Phụ lục 2.2a Phổ 13C-NMR hợp chất S1 Phụ lục 2.2b Phổ 13C-NMR hợp chất S1 Phụ lục 2.2c Phổ 13C-NMR hợp chất S1 Phụ lục 2.3 Phổ DEPT hợp chất S1 Phụ lục 2.4a Phổ COSY hợp chất S1 Phụ lục 2.4b Phổ COSY hợp chất S1 Phụ lục 2.5a Phổ HSQC hợp chất S1 Phụ lục 2.5b Phổ HSQC hợp chất S1 Phụ lục 2.5c Phổ HSQC hợp chất S1 Phụ lục 2.6a Phổ HMBC hợp chất S1 Phụ lục 2.6b Phổ HMBC hợp chất S1 Phụ lục 2.6c Phổ HMBC hợp chất S1 Phụ lục 2.6d Phổ HMBC hợp chất S1 viii LỜI MỞ ĐẦU Việt Nam vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, tạo điều kiện thuận lợi cho phát triển phong phú đa dạng loài thực vật Từ xa xưa số lượng lớn thực vật người sử dụng để làm thuốc chữa bệnh, chưa hiểu hết thành phần hóa học chúng Ngày có nhiều cơng trình nghiên cứu dược tính hóa học loài thực vật giới Việt Nam, khơng nhằm mục đích tìm hiểu hóa – thực vật mà cịn cố gắng để tìm kiếm hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học Từ kết hợp với ngành tổng hợp hữu cơ, sinh học, y học, dược học, để sản xuất loại thuốc chữa bệnh ngày nay, góp phần bảo vệ sức khỏe người Với mong muốn làm sáng tỏ kinh nghiệm sử dụng dân gian lồi thuộc chi Phyllanthus có nhiều hoạt tính sinh học, nên chúng tơi chọn Phèn đen( Phyllanthus reticulatus Poir) để làm đề tài nghiên cứu Cây Phyllanthus reticulatus Poir.chỉ nghiên cứu sơ thành phần hóa học nên chúng tơi định tiếp tục nghiên cứu theo hướng khảo sát thành phần hóa học CHƯƠNG TỔNG QUAN Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy tử đường carbon bao gồm carbon anomer δ C 103.8, carbon >CH-O(δ C 77.9, 75.4, 74.8, 71.9) nhóm –CH -O- δ C 64.9 Phổ HSQC cho thấy tương quan từ proton đến carbon qua nối giúp xác định gắn kết proton carbon tương ứng Hai proton olefin δ H 7.70 6.54 tương quan đến carbon δ C 146.6 119.6 Hai cặp proton ghép cặp ortho δ H 6.95 (2H, d, J=8.0 Hz) 6.66 (2H, d, J=8.0 Hz) tương quan đến carbon δ C 119.6 δ C 116.6 Tương quan HSQC thể từ proton anomer δ H 4.76 đến carbon δ C 103.8 Proton nhóm methylen mang oxygen δ H 4.57 4.54 tương quan với carbon δ C 64.0 (C6’) Từ liệu phồ nghiệm cho phép dự đốn T1 có cấu trúc gồm đơn vị vòng thơm, phân tử đường carbon, nối đôi CH=CH nhóm >C=O Tương quan HMBC từ proton olefin δ H 7.70 đến carbon δ C 135.5 (carbon tứ cấp); 129.7; 119.6 168.4 (>C=O, C6’) Proton olefin δ H 6.54 có tương quan HMBC đến carbon δ C 135.5 Như cấu trúc T1 có đơn vị cinnanoyl Proton anomer δ H 4.74 có tương quan HMBC đến carbon tứ cấp δ C 152.2; hai proton thơm ghép cặp ortho δ H 6.59 cho tương quan HMBC với carbon δ C 152.2 Hai proton thơm ghép cặp ortho lại δ H 6.66 (d, J= 8.0 Hz) có tương quan HMBC đến carbon δ C 152.2 Do phân tử đường gắn vào vịng thơm cịn lại C1 (δ C 152.2) Hai proton gắn carbon methylen mang oxygen (–CH -O, C6’) phân tử đường δ H 4.55 4.37 có tương quan HMBC đến carbon δ C 168.3 (>C=O, C9”), nên vị trí C6’ đường gắn vào cinnamonyl qua liên kết ester Việc phân tích liệu phổ nghiệm hợp chất T1 so sánh đối chiếu với liệu phổ nghiệm 6’- cinnamoylarbutin [53] cho thấy có tương đồng nên T1 đề nghị 6’-cinnamoylarbutin 36 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy H O 7'' 2'' 1'' 3'' 8'' O 6' H 6'' 4'' 9'' 5'' CH2 O 5' 4' 2' O 3' HO OH OH 1' OH Hình tương quan HMBC hợp Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất S1 3.2 Chất S1 (7.00 mg) thu từ phân đoạn EA.4.3.2 sơ đồ 2, có đặc điểm sau: - Hợp chất dạng bột màu trắng - Sắc ký lớp mỏng cho vết với R f = 0.7 hệ dung môi giải ly C: Me (9.5: 0.5), hình đèn UV phun thuốc thử H SO 30%, cho vết màu tím - Phổ 1H-NMR (CDCL ), (phụ lục 2.1a; 2.1b, 2.1c) δ H ppm 7.96 (1H, d, =CH-,J = 9.5Hz, ); 7.09 (1H, s); 6.96 (1H, d, J=1.5); 6.84 (1H, s); 6.81 (1H, d, J=8.0); 6.09 (2H, O-CH -O, ) - Phổ 13C kết hợp với DEPT - NMR ( CDCL ), (phụ lục 2.2, 2.2a, 2.2b, 2.3) δ C ppm 169.92 (>C=O); 152.26; 150.45 (=C-O-); 123.74; 110.83; 108.3; 106.54; 101.4 (=CH-); 101.02 (-O-CH -O ); 75.95; 72; 64.85(-CH-O); 56.2 (O-CH ); 21.24 (CH -C=O) Độ chuyển dịch hóa học carbon khác trình bày bảng - Phổ COSY, HSQC, HMBC, phụ lục 2.4a; 2.4b; 2.5a; 2.5b; 2.5c; 2.6, 2.6a  Biện luận cấu trúc Phổ 1H-NMR cho thấy hợp chất S1 có proton gắn vịng benzene cộng hưởng vùng δ H 6,09-7,97 Trong đó, proton cho tín hiệu cộng 37 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy hưởng dạng mũi đơn δ H 7,97 (1H, s) 7,95 (1H, s) 7,09 (2H, s) Phổ đồ cịn thể tín hiệu cộng hưởng hai vịng benzene mang nhóm 1,3.4 bao gồm proton δ H 6.96 (2H, d, J= 8.0 Hz), 6.81 (2H, d, J= 8.0 Hz) 6.83 (2H, s) Hai proton anomer cộng hưởng δ H 4,83 (1H, d, J=7,5 Hz) 4,78 (1H, d, J=7,5 Hz), proton gắn carbon mang oxygen cộng hưởng vùng δ H 5,42 -5,56 3,52- 5,14 Ngoài ra, phổ 1H-NMR cịn cho thấy proton methyl nhóm –OAc cộng hưởng δ H 2,24 Phổ C- NMR (CDCl , 125 MHz, phụ lục 2.2, 2.2a, 2.2b) hợp với kỹ 13 thuật DEPT (phụ lục 2.3) cho thấy mũi cộng hưởng gồm carbon carbonyl >C=O (δ C 169,9); carbon vòng benzene carbon methylendioxygen (δ C 101,4); carbon methylen mang oxygen (δ C 67,5), nhóm –OAc (δ C 21,2) phân tử đường Trong số carbon vịng benzen có carbon mang hydrogen [δ C 123,7 (C-6’); 110,8 (C-2’); 108,3 (C-5’); 106,5 (C-3); 101,0 (C-6)]; carbon mang oxygen [δ C 152,2 (C-5); 150,4 (C-4); 147,7 (C-3’, C-4’)]; carbon tứ cấp [δ C 136,9 (C-7’); 131,0 (C-1, C-8); 128,4 (C-1’); 127,2 (C-2)] Phần đường có hai phân tử đường gồm hai carbon anomer (δ C 105,7; 105,2); hai carbon methylen mang oxygen (δ C 66,6 64,8) với carbon >CH-O- (δ C 75,9; 72,6; 72,5; 70,5; 70,2; 67,2) Các tương quan phổ HSQC giúp xác định proton gắn carbon tương ứng Theo đó, bốn proton δ H 6,09 (2H, s) 6,04 (2H, s) cho tương quan HSQC đến carbon methylendioxygen δ C 101,4 Bốn proton 5,42 -5,56 cho tương quan đến carbon δ C 67,5 Hai proton gắn vòng benzene δ H 7,97(1H, s); 7,95 (1H, s) cho tương quan HSQC với carbon δ C 101,0 (C-6) hai proton 7,09 (2H, s) cho tương quan với carbon δ C 106,5 Kết hợp với tương quan HSQC lại proton gắn vịng benzene dự đốn hợp chất S1 có cấu trúc đối xứng hỗn hợp hai chất có cấu trúc tương đồng Phổ HMBC cho thấy tương quan từ hai cặp proton δ H 6,09 (2H, s) 6,04 (2H, s) đến carbon δ C 147,7; bốn proton δ H 6,83 (2H, s) 6,96 (2H, d, J=8,0 Hz) cho tương quan đến δ C 147,7 Ngoài ra, proton nhóm – 38 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy CH -O- δ H 5,42 -5,56 cho tương quan đến carbon δ C 169,9 (C-9’); 144,0 (C-7’) 131,1 (C-8’) Các tương quan proton thơm thể hình 4, Ngồi proton nhóm methoxy δ H 3.37 (6H, s), 4.02/4.03 (6H,s) tương quan HMBC đến carbon δ C 150.2 (C4) 152.2 (C5) Từ liệu trên, kết hợp so sánh với số liệu phổ dẫn xuất diphyllin cho thấy có tương hợp, nên đề nghị phần S1 hỗn hợp hai glycoside có phần aglycon giống diphyllin Mỗi cấu trúc hỗn hợp có phân tử đường arabinose hoăc xylose Tương quan HMBC từ proton anomer δ H 4,83 (1H, d, J=7,5 Hz, H1”a) tới carbon δ C 144,0 cho phép xác định hợp chất thứ (S1a) có phân tử đường gắn vào aglycon vị trí C-7 qua liên kết oside Proton anomer H-1’’a cho tương quan COSY với H-2’’a δ H 4,11 Các tương quan lại giúp xác định phân tử đường Proton H-3’’a δ H 4,91 (1H, dd) có số ghép J = 10.0/3.5 Hz cho thấy phân tử đường đường arabinose Hằng số ghép proton anomer 7,5 Hz nên đường arabinose có cấu hình α-L Do C-3’’a cộng hưởng vùng từ trường thấp so với C-3 đường arabinose, C-4’’a lại dịch chuyển vùng từ trường cao đồng thời H-3’’a cộng hưởng vùng từ trường thấp nên đề nghị vị trí C3”a phân tử đường arabinose có gắn nhóm OAc Tương quan HMBC từ proton anome δ H 4,78 (d, J=7,5Hz, H-1”b) phân tử đường lại đến carbon δ C 144,0 , cho phép xác định hợp chất thứ (S1b) có phân tử đường gắn vào aglycon vị trí C-7 Kết hợp liệu phổ HSQC, COSY, HMBC cho thấ phân tử đường hợp chất S1b α-L-arabinose (H-1’’b có J = 7,5Hz, H-4’’b cộng hưởng dạng mũi đơn rộng), phân tử đường arabinose có nhóm-OAc gắn vào vị trí C-4’’b (δ C 70, δ H 5,14) Do khơng có liệu phổ hợp chất giống với S1a S1b nên so sánh liệu phổ S1a S1b với hợp chất 4-O-α-L arabinopyranosyldiphyllin [54] nhận thấy có tương đồng, ngoại trừ cấu trúc hợp chất S1a S1b có thêm nhóm acetoxy gắn vào phân tử 39 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy đường nên đề nghị S1 hỗn hợp 4,5-dimethoxy-3’,4’methylenedioxy-7-O-(3”-O-acetyl arabinopyranosyl) 2,7’-cyclolign-7,7’-dien9,9’-lactone 4,5-dimethoxy-3’,4’-methylenedioxy-7-O-(4”-O-acetyl arabinopyranosyl)-2,7’-cyclolign-7,7’-dien-9,9’-lactone O O OH O H3C C C 4'' 4'' CH3 HO O 5'' 5'' 3'' 3'' O 2'' HO O 2'' HO 1'' 1'' O H3CO O 7' 1' H3CO O 8' 7' C 9' 1' O 2' 6' C 9' 8' H3CO O H3CO O 2' 6' 3' 5' 5' 3' 4' O 4' O O O Hình Tương quan HMBC Hình Tương quan HMBC hợp chất S1a hợp chất S1b 40 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy Bảng 5: Số liệu phổ NMR T1 Vị trí Hợp chất T1 (MEOD) Hợp chất so sánh [54] δ H (ppm) δ C (ppm) HMBC (J-Hz) δ C (ppm) 13 ( H C) 152.2 152.3 6.95, d (8.0) 119.9 3; 4; 118.6 6.66, d (8.0) 116.6 1; 116.6 153.9 153.9 6.66, d (8.0) 116.6 1; 116.6 6.95, d (8.0) 119.9 3; 4; 118.6 1' 4.75, d (7.0) 103,8 1; 2’; 3’ 103.6 2' 3.45, ma 74.8 1’; 3’ 74.9 3' 3.48, ma 77.9 1’; 2’; 4’ 77.9 4' 3.45,(8.0; 9.5) 71.9 3’; 5’; 6’ 71.8 5' 3.67, ddd 75.4 4’; 6’ 75.4 64.9 4’; 5’, 9” 64.9 (9.5; 6.5; 2.0) 6' 4.55, dd,(12.0; 2.0) 4.37,dd, (12.0; 6.5) 1'' 135.6 135.7 2'' 7.59, ma 129.3 3”; 4”; 6”; 7’’ 130.1 3'' 7.42, ma 130.2 1”; 5” 129.3 4'' 7.42, ma 131.3 2”; 6” 5'' a 130.2 1’’; 6’’; 3’’ 129.3 a 129.7 2”; 1’’ 130.1 7.42, m 131.6 6'' 7.59, m 7'' 7.70, d (15.0) 146.4 1”; 2’’; 6”; 8”;9” 146.6 8'' 6.54, d (15.0) 118.7 1”; 7’’; 9’’ 119.6 9'' 168.3 a: Tín hiệu bị chồng chập 41 168.4 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy Bảng 6: Số liệu phổ NMR S1 Vị trí Chất S1a Chất S1b Hợp chất so sánh (CDCl ) (CDCl ) (DMSO) [54] δ H (ppm) δ C (ppm) δ H (ppm) δ C (ppm) - 131.1 - 131.1 129.6 - 127.2 - 127.2 126.6 7.09, s 106.5 7.09, s 106.5 107.9 - 150.4 - 150.4 149.9 - 152.2 - 152.2 151.4 7.95, s 101.0 7.95, s 101.0 101.8 - 144.0 - 147.0 144.5 - 131.1 - 131.1 128.9 5.42- 5.56 67.5 5.42- 5.56 67.5 67.0 1’ - 128.4 - 128.4 128.2 2’ 6.83 110.8 6.83 110.8 110.7 3’ - 147.7 - 147.7 146.8 4’ - 147.7 - 147.7 146.9 5’ 6.96,d, (8.0) 108.3 6.96, d, (8.0) 108.3 104.8 6’ 6.81, d (8.0) 123.7 6.81, d (8.0) 123.7 123.5 7’ - 136.9 - 136.9 134.4 8’ - 119.5 - 119.5 118.6 169.9 - 169.9 169.0 101.4 6.09, s 101.4 9’ -OCH -O 6.09, s 6.04, s δ C (ppm) 6.04, s 4-OMe 3.7, s 56.4 3.7, s 5-OMe 4.03b, s 56.0 4.02b, s 1” 4.83, d (7.5) 105.7 4.78, d, (7.5) 105.2 105.4 2” 4.32, m 70.2 4.11, m 72,6 70.8 3” 4.91,dd (10.0/3.5) 75.9 4.09, m 72.5 72.2 4” 4.11,m 67.2 5.14, br s 70.5 67.2 5” 4.06; 3.55 66.6 3.54; 4.09 64.8 65.7 b: tín hiệu trao đổi lẫn 42 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 43 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy KẾT LUẬN 4.1 Việc khảo sát thành phần hóa học Phèn đen (Phyllanthus reticulatus Poir.) thu hái xã Bạch Đằng - Tân Uyên – Bình Dương thu kết sau: Từ phân đoạn EA.4.4.2 (sơ đồ 2) cao ethylacetatel, sử dụng phương pháp trích ly, chiết xuất, lập hợp chất với kí hiệu T1 Sử dụng phương pháp phân tích hóa lí đại NMR, kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo đề nghị cấu trúc T1 6’-O’-cinnamoylarbutin (Hình 6) Từ phân đoạn EA.4.3.2 (sơ đồ 2) cao ethylacetatel, sử dụng phương pháp trích ly, chiết xuất, lập hợp chất với kí hiệu S1 Sử dụng phương pháp phân tích hóa lí đại NMR, kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo đề nghị cấu trúc S1 hỗn hợp glycoside (S1a, S1b) O H 7'' 2'' 1'' 3'' 8'' O 6' H 6'' 4'' 9'' 5'' CH2 O 5' 4' 2' O 3' HO OH OH 1' OH 6’-O’-cinnamoylarbutin OH O H3C C 4'' O O 5'' 3'' O O 2'' C 4'' CH3 HO HO 5'' 1'' 3'' H3CO HO 8' 7' O H3CO C 9' 1' O O 2' 6' 1'' O H3CO O 2'' O H3CO 8' 7' C 9' 1' O 2' 6' 3' 5' 3' 4' 5' O 4' O O O 4,5-Dimethoxy-3’,4’-methylenedioxy-7O-(3”-O-acetyl arabinopyranosyl) 2,7’cyclolign-7,7’-dien-9,9’-lactone 44 4,5-Dimethoxy-3’,4’-methylenedioxy-7O-(4”-O-acetyl arabinopyranosyl) 2,7’cyclolign-7,7’-dien-9,9’-lactone Khóa luận tốt nghiệp 4.2 Lương Thị Thủy ĐỀ XUẤT Do hạn chế thời gian nên cịn nhiều phân đoạn chúng tơi chưa nghiên cứu Trong khóa luận này, chúng tơi tiến hành phân lập với cao hexane ethylacetate Ngồi ra, cịn cao khác nhiều phân đoạn cịn lại chúng tơi chưa khảo sát Vì vậy, thời gian tới tiếp tục nghiên cứu loại cao phân đoạn lại, đồng thời tiến hành thử hoạt tính sinh học loại cao hợp chất cô lập 45 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy TÀI LIỆU THAM KHẢO  TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Phan Văn Dân (2009), “Nghiên Cứu Thành Phần Hố Học Có Trong Cây Phèn Đen (PhyllanthusReticulatusPoir Euphorbiaceae)”, 12-13 35-40 [2] Nguyễn Văn Đậu, Lưu Hồng Ngọc, Nguyễn Đình Chung (2003), “Nghiên cứu hoạt chất sinhhọc từ chó đẻ than xanh (Phyllanthusniruri L Euphorbiaceae)”, Tạp chí Dược học số ,năm 43, 12-15 [3] Nguyễn Văn Đậu, Trần Thị Thu Hà (2007), “Nghiên cứu hóa thực vật chó đẻ cưa (Phyllanthusurinaria L Euphorbiaceae)” Tạp chí dược học số 369,năm 47, 15-18 [4] Lê Trần Đức (1997),“Cây thuốc Việt Nam”, NXB Nông nghiệp Hà Nội, 724-725 [5] Đỗ Tất Lợi (1997), “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, NXB Y học Hà Nội, 65-67 [6] Đỗ Tất Lợi (2000), “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, NXB Y học, 550-551 [7] Nguyễn Thượng Phong(2001), “Khảo sát công dụng làm thuốc số lồi Phyllanthus Việt Nam”,Tạp chí dược liệu số 6, 72-75 [8] Trần Đình Thắng, Bùi Quang Chính, HồngVăn Lựu, Nguyễn Xn Dũng (2007), “Phân lập xác định cấu trúc số hợp chất phenolic từ câychó đẻ cưa”, Tạp ch í Dược học số 371, năm 47, 14-17  TÀI LIỆU TIẾNG ANH [9] Babady-Bila (1996), “Niruroidine, a norsecurinine-type alkaloid from Phyllanthusniruroides”, Phytochemistry, 41(5), 1441-1443 [10] Calixto J B., Santos A R (1998), “A review of the plants of the genus Phyllanthus”, Pharmacology, Medicinal Research Reviews, 18, 4, 225-258 [11] Chang, C.-C., Lien, Y.-C, Liu, K.C.S.C., and Lee, S.-S.(2003), “Lignans from Phyllantusurinaria”,Phytochemistry 63, 7, 825-833 46 Khóa luận tốt nghiệp [12] Chen Lui Lương Thị Thủy (1999), “A new flavanone isolated from RhizomaSmilacisGlabrae and the structural requirements of its derivatives for preventing immunological hepatocyte damage”, Planta Med., 65, p.43-46 [13] El-Mekkawy (1995), “Inhibitory effects of Egyptian folk medicines on human immunodeficiency virus (HIV) reverse transcriptase” The Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 43, p.641-648 [14] E Omulokoli, B Khan, S.C Chhabra (1997), “Antiplasmodial activity of four Kenyan medicinal plants”, Journal of Ethnopharmacology, 56, p.133137 [15] Farah Naaz, SaleemJaved, M.Z Abdin (2007), “Hepatoprotective effect of ethanolic extract ofPhyllanthusamarusSchum etThonn”, Ethnopharmacology, 113(3), p.503-509 [16] Ghosal (1996), “Active constituents of EmblicaOfficinalis: part The chemistry and antioxidativeeffcts of two new hydrolysable tannins, emblicanin A and B”.Indian Journal of Chemistry 35B, 9, p.941-948 [17] Herbert Kolodziej (2005), “Tannins and related compounds induce nitric oxide synthase and cytokines gene expressions in Leishmania major”, Bioorganic, 13(23), p.6470-6476 [18] Hnatyszyn, (2002), “The hypoglycemic effect ofPhyllanthussellowianus fractions”, Phytomedicine, 9(6), p.556-559 [19] Joshi (1986), “Crystalline compounds of the roots of Phyllanthusniruri” Journal of the Indian Chemical society, 58,p.102-103 [20] Kumar Roy, H Dhir, A Sharma (1992), “Modification of metal-induced micronuclei formation in mouse bone marrow erythrocytes", Toxicology Letters, 62(1), p.9-17 [21] Kumaran, Karunakaran (2007), “In vitro antioxidant activities of methanol extracts of fivePhyllanthusspecies from India”, Food Science, 40(2), p.344-352 [22] L Yeap Foo (1995), “Amariinic acid and related ellagitannins from Phyllanthusamarus”, Phytochemistry, 39(1), 217-224 47 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy [23]Manske R H F (192525), “The Alkaloids chemistry and physiology”, Phytochemistry, 15, 428 [24] Matsunaga, Tanaka (1992), “26-Nor-D:A-friedooleananetriterpenes from Phyllanthuswatsonii”, Phytochemistry, 32(1), 165-170 [25] Peter J Houghton, Tibebe Z Woldemariam (1996), “ Two securinegatype alkaloids from Phyllanthusamarus”, Phytochemistry, 43(3), 715-717 [26] Pettit GR, Schaufelberger DE, Nieman RA, Dufresne C, Saenz-Renauld JA (1990), “Antineoplastic agents, 177 Isolation and structure of phyllanthostatin 6”, 53(6), 1406-1413 [27] Pettit GR, Cragg GM, (1984),“Antineoplastic Agents 104 Isolation and Structure of the Phyllanthus-AcuminatusEuphorbiaceae Glycosides”.Journal of Organic Chemistry,49, 4258-66 [28] Pettit GR, Cragg GM, Suffness M (1985), “Phyllanthostatin PhyllanthosideOrthoacid Rearrangement” Journal of Organic Chemistry,50, 5060-5063 [29] Rajasubramaniam, PardhaSaradhi (1997), “ Rapid multiplication of Phyllanthusfraternus: a plant with anti-hepatitis viral activity”, Industrial Crops and Products, 6(1), 35-40 [30] Rajkishor S Negi, Thawra M Fakhir (1998), “ An alkaloid from Phyllanthus simplex”, Phytochemistry, 27(9), 3027-3028 [31]Satyanarayana, Venkateswarlu (1991), “Isolation, structure and synthesis of new diarylbutanelignansfrom Phyllanthusniruri”, Tetrahedron, 47(42), 8931-8940 [32] Sengupta, Mukhopadhyay (1966), “Terpenoids and related compoundsVII :Triterpenoids of Phyllanthusacidusskeels”, Phytochemistry, 5(3), 531534 [33] S F Aripova (1983), “Tropane alkaloids of two species of plantsof the Phyllanthusdiscoides”, 16, 677 [34] Shakil, Pankaj (2008), “Nematicidalprenylatedflavanones Phyllanthusniruri”, Phytochemistry, 63(3), 759-764 48 from Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy [35] ShunyoMatsunaga, Reiko Tanaka, (1988), “Revised structure of trichadenic acid B”, Tetrahedron Letters, 29(37), 4751-4754 [36] Sutthivaiyakit, Nakorn N (2003), “ A new guaianesesquiterpene from the roots of Phyllanthusoxyphyllus”, Tetrahedron, 59(50), 9991-9995 [37] Tanaka, K Masuda and S Matsunaga (1993), “ Lup-20(29)-en-3β,15αdiol and ocotillol-II”, Phytochemistry, 32(2), 472-474 [38] Thales R Cipriani, Caroline G Mellinger (2008), “ Acidicheteroxylans from medicinal plants and their anti-ulcer activity”,CarbohydratePolymers, 74(2), 274-278 [39] Vuyelwa J N., Neil R C (2008), “ Triterpenoids from the African tree Phyllanthus polyanthus”, Phytochemistry Letters, 1(1), 11-17 [40] Wai-HaanHui, Man-Moon Li, Kam-Moon Wong (1976), “A new compound, 21α-hydroxyfriedel-4(23)-en-3-one and other triterpenoids from Phyllanthusreticulatus”, Phytochemistry, 5(15), 797-798 [41] Wanxing Wei, Yuanjiang Pan (2005), “Carboxylic acids from Phyllanthusurinaria”, Chemistry of Natural Compounds, 41(1), 17-20 [42] Xiaoli Liu, Chun Cui, M Zhao (5/2008), “Antioxidant activity of methanolic extract of emblica fruit”, Journal of Food, 21(3), 219-228 [43] Ying-Jun Zhang (2006) “A novel highly oxygenated norbisabolane from the roots of Phyllanthusemblica”, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Japan, 1-14 [44] Zhang L Z., Guo Y J (2000), “Studies on chemical constituents of PhyllanthusurinariaL.”, ZhongguoZhong Yao ZaZhi, 10(25), 615-617 [45] Zhang, Y J., Tanaka, T., and Iwamoto (2000), “Novel Norsesquiterpenoids from the roots of Phyllanthusemblica”,Journal of Natural Products, 63, 11, 1507-1511 [46] Zhang (2002), “Two new acylatedflavanone glycosides from the leaves and branches of Phyllanthusemblica”, Chem Pharm Bull., 50, 841 [47] Joshi KC, Singh P, Mehra A (1981), “Crystalline components of the roots of Phyllanthusreticulatus”, J IndChemSoc,58, 102–103 49 Khóa luận tốt nghiệp Lương Thị Thủy [48]The Health Bureau of Guangxi Province (1974), “Compilation of Medicinal Herbs in Guangxi”, II, Guangxi People Press, Nanning, p 1588 [49]Ming-Sheng Lana, Jian-Xiong Ma, Chang-Heng Tan, Song Wei, and DaYuan Zhu (2010),“Chemical Constituents of Phyllanthusreticulatus”, Helvetica ChimicaActa, 93, 2276 [50]Jian-Xiong Ma , Ming-Sheng Lan , Shi-Jin Qu, Jun-Jie Tan, HongFengLuo, Chang-Heng Tan & Da-Yuan Zhu (2012),“Arylnaphthalenelignan glycosides and other constituents from Phyllanthusreticulatus”, Journal of Asian Natural Products Research, 14, 1073-1077 [51]Kotaro Takahashi, Toshie Nakagawa (1966), “Studies on constituents of medicinal plants, the stereochemistry of paulowin and isopaulowin”, Chem Pharm Bull , 14(6), 641-647 [52]Robert S Ward (1997), “Lignan, neolignan and related compounds”, Nat Prod Rep , 14, 43-74 [53] Nobuyoshi Nakajima, Kohji Ishihara, Stingo Maysumura Hiroki Hamada, Kaoru Nakamura, Tsutomu Fruya (1997), “ Lipase-catalyzed Synthesis of Arbrtin cinnamate in organic solvent and application of transesterfication o stabilize plant pigments”, Biosci.Biotech.Biochem, 61 (11), 1926-1927 [54] Ya Zhao, Chunyan Ni, Yuting Zhang, Li Zhu (2012), “Synthesis and bioevaluation of diphyllin glycoside as novel Anti cancer Agents”, Arch Pharm Chem Life Sci, 345, 622-628 50