luận văn
Bộ giáo dục đào tạo Trờng đại học nông nghiÖp I Nguyễn thị phơng hiền Nghiên cứu ảnh hởng mùa vụ thu trứng đến kết nuôi thành thục trứng số loài vật nuôi Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành : Thú y M số : 60.62.50 Ngời hớng dẫn khoa học: TS Bùi Xuân Nguyên Hà Nội - 2007 LờI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực cha đợc sử dụng công bố công trình khác Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn đ đợc cám ơn thông tin trích dẫn luận văn đ đợc rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Thị Phơng Hiền i LờI CảM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới Tiến sĩ Bùi Xuân Nguyên, chủ nhiệm đề tài nhà nớc công nghệ phôi đ tận tình hớng dẫn, giúp đỡ điều kiện để luận văn hoàn thành Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành đến cô, chú, anh, chị em thuộc phòng C«ng nghƯ ph«i, ViƯn C«ng nghƯ sinh häc, ViƯn khoa học Công nghệ Việt Nam bạn bè đồng nghiệp, đặc biệt tới Tiến sĩ Nguyễn Thị Ước, Tiến sĩ Nguyễn Hữu Đức, Thạc sĩ Nguyễn Văn Hạnh, Thạc sĩ Nguyễn Việt Linh, Đặng Nguyễn Quang Thành, Nguyễn Thị Thuỳ Anh đ nhiệt tình giúp đỡ, góp ý cho trình thực thí nghiệm liên quan đến luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn đề tài hợp tác Việt - Pháp BIODIVA - VAST (hợp phần GT5) đề tài nghiên cứu m số 6.120.06 đ tạo điều kiện hỗ trợ để hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Bá Mùi, giảng viên môn sinh lý - sinh hóa động vật tập thể cán bộ, giáo viên khoa thú y trờng Đại học Nông nghiệp I đ tận tình bảo giúp đỡ hoàn thành luận văn Cuối xin bày tỏ lòng cảm ơn tới gia đình, anh em, bạn bè đ động viên, ủng hộ khích lệ suốt trình hoàn thành luận văn tốt nghiệp Xin trân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 19 tháng năm 2007 Học viên Nguyễn Thị Phơng Hiền ii MụC LụC Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục biểu đồ i ii iii v vi vii ĐặT VấN Đề 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 ý nghĩa đề tài TổNG QUAN CáC VấN Đề NGHIÊN CứU 2.1 Tình hình nghiên cứu phát triển công nghệ sinh sản nớc 4 2.1.1 Tình hình nghiên cứu phát triển công nghệ sinh sản giới 2.1.2 Tình hình nghiên cứu phát triển công nghệ sinh sản Việt Nam 2.2 Những nét chung trình sinh sản thành thục trứng gia súc 2.2.1 Cấu tạo buồng trứng 2.2.2 Quá trình sinh tế bào trứng 2.2.3 Cấu tạo tế bào trứng (tế bào non) 2.2.4 Sự thành thục tế bào trứng 2.3 Khai thác nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn ống nghiệm 2.3.1 Hiện trạng khai thác trứng trâu, bò, lợn 2.3.2 Phân loại chất lợng trứng 2.3.3 Nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn ống nghiệm - In vitro maturation (IVM) 2.3.4 Các yếu tố ảnh hởng đến kết khai thác nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn ống nghiệm ĐốI TƯợNG - NộI DUNG Và PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU 3.1 Đối tợng nghiên cứu 3.2 Nội dung nghiên cứu 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 7 10 11 13 17 17 20 21 26 30 30 30 31 3.3.1 Phơng pháp thu, bảo quản vận chuyển buồng trứng 31 3.3.2 Phân loại nang bề mặt buồng trứng 32 3.3.3 Phân loại trứng theo chất lợng 32 3.3.4 Phơng pháp nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn ống nghiệm 32 iii 3.3.5 Đ ánh giá giai đoạn phát triển nhân tế bào trứng 3.3.6 Phơng pháp xử lý số liệu KếT QUả Và THảO LUậN 4.1 Kết khảo sát khối lợng buồng trứng thu đợc trâu, bò, lợn hai mùa xuân, hè 4.1.1 Đối với buồng trứng trâu 4.1.2 Đối với buồng trứng bò 4.1.3 Đối với buồng trứng lợn 33 33 35 35 35 36 38 4.2 Kết khảo sát kích thớc buồng trứng thu đợc trâu, bò, lợn hai mùa xuân, hè 4.2.1 Đối với buồng trứng trâu 4.2.2 Đối với buồng trứng bò 4.2.3 Đối với lợn 39 39 41 42 4.3 Kết khảo sát số nang trứng bề mặt buồng trứng trâu, bò, lợn theo hai mùa xuân, hè 4.3.1 Đối với trâu 4.3.2 Đối với bò 4.3.3 Đối với lợn 43 43 44 45 4.4 Kết thu trứng từ buồng trứng trâu bò, lợn theo mùa 4.4.1 Đối với trâu 4.4.2 Đối với bò 4.4.3 Đối với lợn 48 49 50 51 4.5 Phân loại chất lợng trứng thu đợc từ buồng trứng trâu, bò, lợn theo hai mùa xuân, hè 4.5.1 Đối với trâu 4.5.2 Đối với bò 52 52 54 4.6 Kết nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn hai mùa xuân, hè 4.6.1 Đối với trâu 4.6.2 Đối với bò 4.6.3 Đối với lợn 57 58 59 61 KếT LUậN Và Đề NGHị 5.1 Kết luận 5.2 Đề nghị 65 65 66 TàI LIệU THAM KHảO 67 Phụ lục 72 iv DANH MụC CáC CHữ VIếT TắT CNSS Công nghệ sinh sản E Estradiol - 17 eCG Equine Chorionic Gonadotropin FSH Follicle Stimulating Hormone GnRH Gonadotropin Releasing Hormone hCG Human Chorionic Gonadotropin LH Luteinising Stimulating Hormone MPF Maturation Promoting factor (u tè thóc trøng thµnh thôc) OMI Oocyte Maturation Inhibitor (yÕu tè øc chÕ trøng thµnh thơc) P Progesteron PG, PGF Prostaglandin vcs Vµ céng 6v DANH MụC CáC BảNG Số BảNG TÊN BảNG TRANG Bảng 2.1 Đờng kính trứng trâu, bò, lợn 13 Bảng 2.2 Phân loại chất lợng trứng 20 Bảng 4.1 Kết khảo sát khối lợng buồng trứng trâu theo mùa xuân, hè 35 Bảng 4.2 Kết khảo sát khối lợng buồng trứng Bò theo mùa xuân, hè 37 Bảng 4.3 Kết khảo sát khối lợng buồng trứng lợn theo mùa xuân, hè 38 Bảng 4.4 Kết khảo sát kích thớc buồng trứng Trâu theo mùa 40 Bảng 4.5 Kết khảo sát kích thớc buồng trứng Bò theo mùa 41 Bảng 4.6 Kết khảo sát kích thớc buồng trứng Lợn theo mùa 42 Bảng 4.7 Kết khảo sát số nang trứng buồng trứng trâu theo mùa 43 Bảng 4.8 Kết khảo sát số nang trứng buồng trứng bò theo mùa 44 Bảng 4.9 Kết khảo sát số nang trứng buồng trứng lợn theo mïa 46 B¶ng 4.10 KÕt qu¶ thu trøng tõ buồng trứng trâu theo mùa 49 Bảng 4.11 Kết thu trứng từ buồng trứng bò theo mùa 50 Bảng 4.12 Kết thu trứng từ buồng trứng lợn theo mùa 51 Bảng 4.13 Phân loại chất lợng trứng trâu thu đợc theo mùa 53 Bảng 4.14 Phân loại chất lợng trứng bò thu đợc theo mùa 54 Bảng 4.15 Phân loại chất lợng trứng lợn thu đợc theo mùa 55 Bảng 4.16 Kết nuôi thành thục trứng trâu theo mùa 58 Bảng 4.17 Kết nuôi thành thục trứng bò theo mùa 60 Bảng 4.18 Kết nuôi thành thục trứng lợn theo mùa 61 vi DANH MụC CáC BIểU Đồ Số BIểU Đồ TÊN BIểU Đồ TRANG Biểu đồ 4.1 Kết khảo sát số nang trøng 2mm/bng trøng theo mïa 47 BiĨu ®å 4.2 KÕt khảo sát số nang trứng < 2mm/buồng trứng theo mùa 48 Biểu đồ 4.3 Kết thu trứng từ c¸c nang cã kÝch th−íc ≥ 2mm theo mïa 52 Biểu đồ 4.4 Kết thu trứng loại A trâu, bò, lợn theo mùa 56 Biểu đồ 4.5 Kết thu trứng loại B trâu, bò, lợn theo mùa 57 Biểu đồ 4.6 Kết thu trứng loại C trâu, bò, lợn theo mùa 57 Biểu đồ 4.7 Tỷ lệ nuôi trứng trâu, bò, lợn thành thục theo mùa 62 vii ĐặT VấN Đề 1.1 Tính cấp thiết đề tài Cùng với phát triển ngành khoa học công nghệ, công nghệ sinh học sinh sản đ đợc quan tâm nghiên cứu nhiều quốc gia, bao gồm tổ hợp nghiên cứu nh: công nghệ phôi, công nghệ thụ tinh ống nghiệm, nhân vô tính, nhân vô tính khác loài, cấy chuyển gen vào trứng, bảo vệ đa dạng sinh học, song để đạt đợc thành công nghệ sinh học sinh sản, phải bắt đầu từ nguyên liệu tế bào trứng Trong công nghệ sinh sản hiƯn viƯc sư dơng trøng rÊt ®a dang, trøng trâu, bò dùng để nhân vô tính cho loài la (Bùi Xuân Nguyên (2006)[32]), trứng lợn dùng để nhân vô tính cho loài gÊu tróc, cõu, khØ, lỵn, cht (Dominko T vcs, 1999)[22],…Trong điều kiện thực tế chăn nuôi nớc ta, đối tợng vật nuôi phục vụ cho đời sống ngời, chủ yếu ba loài trâu, bò, lợn; việc thu trứng từ ba loài để phục vụ cho tổ hợp nghiên cứu công nghệ sinh học sinh sản vấn đề đợc quan tâm Hiện nghiên cứu phát triển buồng trứng tổ chức buồng trứng đ đợc thực nhiều loài khác nh chuột (Cahill vcs, 1981); lợn, cừu (Drian Court vcs, 1985); bò (Erickson, 1996 a; Mariana Nguyên, 1973), ngời (Barker Hunter, 1978) Các kết nghiên cứu cho thấy buồng trứng loài có tiềm khổng lồ sản sinh tế bào non Số lợng nang giai đoạn thành thục sinh sản 68000 - 70000 với bò (Erickson, 1996a); 12000 - 86000 lợn (Driancourt vcs, 1985), (Dẫn theo Bùi Xuân Nguyên (2006)[32]) Trên thực tế sinh sản tự nhiên số lợng trứng đợc sử dụng hạn chế so với tiềm nang buồng trứng Ước tính bò sư dơng tõ 10 - 15 trøng st mét đời sinh sản, tức cha tới 0,01% tiềm nang trứng có buồng trứng (Nguyễn Thị Ước vcs 1996)[16] Các nghiên cứu công nghệ sinh sản ứng dụng công nghệ sinh sản cần nhiều tế bào trứng đ thành thục, tế bào trứng có nhân phát triển giai đoạn trung kỳ II, biĨu hiƯn b»ng sù xt hiƯn thĨ thùc thø nhÊt cã thĨ quan s¸t thÊy d−íi kÝnh hiĨn vi Theo kết nghiên cứu đánh giá trạng thái phát triển tế bào trứng đợc khai thác từ buồng trứng nguyên thể cho thấy cần phải nuôi chín ống nghiệm tỷ lệ trứng thành thục, thụ tinh èng nghiƯm, trøng cã nhiƠm s¾c thĨ ë giai đoạn trung kỳ II, thấy thể cực thø nhÊt l¹i chØ chiÕm mét tû lƯ rÊt nhá Vì để công nghệ sinh sản thật thành công, đáp ứng đợc mong muốn sản xuất chăn nuôi, bảo tồn đa dạng sinh học, sản xuất tế bào phôi gốc phục vụ nghiên cứu điều trị bệnh, ngời ta đ tiến hành khai thác trứng phơng pháp in vitro từ lúc cha thành thục với số lợng tơng đối lớn nuôi thành thục Kết nuôi trứng thành thục chịu ảnh hởng bëi rÊt nhiỊu u tè nh− m«i tr−êng nu«i, thêi gian nuôi, nhiệt độ nuôi, điều kiện chăm sóc nuôi d−ìng vËt, Víi m«i tr−êng sèng ë miỊn bắc Việt Nam, điều kiện khí hậu nh: nhiệt độ, ẩm độ, ánh sáng, thức ăn nớc uống, thay đổi mùa khác năm có nhiều ảnh hởng đến đời sống sinh hoạt gia súc từ ảnh hởng đến hoạt động sinh lý sinh sản chúng kết khai thác nuôi thành thục trứng Chính việc tiến hành nghiên cứu so sánh khả nuôi thành thục trứng ba loài vật nuôi có số lợng phong phú mùa năm miền bắc Việt Nam việc cần thiết ®Ĩ tõ ®ã chóng ta chđ ®éng thiÕt kÕ thí nghiệm tổ hợp công nghệ sinh học sinh sản, Với khuôn khổ thời gian thực đề tài, tiến hành nghiên cứu khả nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn hai mùa năm mùa xuân mùa hè, hai mùa có kiểu thời tiết khác biệt, với đề tài: Nghiờn cu nh hng mùa vụ thu trứng đến kết ni thành thục trứng số lồi vật ni” ... thục với số lợng tơng đối lớn nuôi thành thục Kết nuôi trứng thành thục chịu ảnh hởng nhiều yếu tố nh môi trờng nuôi, thời gian nuôi, nhiệt độ nuôi, điều kiện chăm sóc nuôi dỡng vật, Với môi trờng... đến kết khai thác nuôi thành thục trứng trâu, bò, lợn ống nghiệm ĐốI TƯợNG - NộI DUNG Và PHƯƠNG PHáP NGHIÊN CứU 3.1 Đối tợng nghiên cứu 3.2 Nội dung nghiên cứu 3.3 Phơng pháp nghiên cứu 7 10 11... tạo đợc nguyên liệu cho nghiên cứu tế bào gốc phôi: nhân nuôi dòng tế bào fibroblast chuột làm lớp đệm nuôi tế bào gốc phôi, tạo thành phần cần thiết cho kỹ thu? ??t vi phẫu thu? ??t miễn dịch huyết