Nghiên cứu cố định tế bào saccharomyces cerevisiae trên táo tươi (malus domessticus) bằng phương pháp bẫy hấp phụ và ứng dụng

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHẠM THỊ PHƯỢNG NGHIÊN CỨU CỐ ĐỊNH TẾ BÀO SACCHAROMYCES CEREVISIAE TRÊN TÁO TƯƠI (MALUS DOMESTICUS) BẰNG PHƯƠNG PHÁP BẪY HẤP PHỤ VÀ ỨNG DỤNG Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số ngành: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ Tp Hồ Chí Minh, tháng 10 năm 2010 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học : PGS.TS NGUYỄN ĐỨC LƯỢNG (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét : (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Luận văn thạc sĩ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày tháng 10 năm 2010 HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA KỸ THUẬT HÓA HỌC CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHIÃ VIỆT NAM Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc -oOo Tp HCM, ngày 20 tháng 10 năm 2010 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: PHẠM THỊ PHƯỢNG Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 03/ 11/ 1983 Nơi sinh: Hải Dương Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh học MSHV: 09310579 1- TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cứu cố định tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae táo tươi (Malus domesticus) ứng dụng 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN:  Xác định lượng enzyme pactinase tối ưu để thu nhận dịch trái long điều kiện nhiệt độ phòng 40oC, giờ, tỉ lệ phối trộn thịt với nước theo tỉ lệ 1:1  Khảo sát hiệu suất cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi (Malus domesticus)  Khảo sát khả tái sử dụng chế phẩm tế bào S.cerevisiae cố định  Khảo sát hoạt tính chế phẩm tế bào S.cerevisiae cố định sau bảo quản 4oC  So sánh hoạt tính tế bào S.cerevisiae cố định tự 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ : 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nội dung đề cương Luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN (Họ tên chữ ký) QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng KHOA QL CHUYÊN NGÀNH (Họ tên chữ ký) LỜI CẢM ƠN Với tất lòng biết ơn chân thành nhất, qua xin gởi lời cảm ơn tới: Bố, Mẹ, người động viên vuôn đắp cho nỗ lực Thầy Nguyễn Đức Lượng tận tình hướng dẫn bảo tơi suốt q trình học tập thực luận văn Cô Nguyễn Thuý Hương, cô Thuỷ Tiên, Oanh tận tình hướng dẫn tạo điều kiện cho thực luận văn PTN – ĐH Bách Khoa Tp.HCM Xin gởi lời cảm ơn tới Thầy, Cô Bộ môn Công Nghệ Sinh học Trường ĐH Bách Khoa Tp.HCM Xin chân thành cảm ơn cộng tác động viên bạn: Huyền Trang, Mỹ Đơng tồn thể bạn Cao học K2008 bạn PTN Công Nghệ Sinh học Trường ĐH Bách Khoa Tp.HCM Xin gởi lời chúc tới Bố, Mẹ, Thầy, Cô sức khoẻ thành công Chúc bạn Cao học K2008 sức khoẻ thành cơng chặng đường phía trước Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 10 Năm 2010 Phạm Thị Phượng HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng ABTRACT Immobilized Saccharomyces cerevisiae on apple piece to produce an immobilized biocatalyst for fermentation of juice fruit both in batch and continuous system The immobilized yeast showed an important operational stability without any decrease of its activity Fermentation with the immobilized yeast on apple piece can be winemaking not only low temperature but also high-temperature without any diminution of the ethanol productivity and improved quality product This experiment we have see that immobilized yeast productivity on apple piece is 69.24% with ratio between support and medium fermentation is 1:1 Low-temperature fermentation, ethanol productivity from biocatalyst is higher than free yeast and reverse Enzyme pectinase for harvest juice dragan is 0.1ml with ratio between fresh water and flesh dragan is 1:1 HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng TÓM TẮT Sự cố định tế bào lên chất mang nói chung nghiên cứu ứng dụng nhiều lĩnh vực sản xuất thực phẩm có cồn sản xuất sản phẩm probiotic Tế bào cố định đánh giá mang lại suất chất lượng cải thiện Tuy nhiên, nước ta việc nghiên cứu sử dụng táo tươi làm chất mang chưa nghiên cứu ứng dụng Trong nghiên cứu này, xác định hiệu suất cố định đạt 69.24% với tỷ lệ chất mang môi trường cố định :1 Sử dụng chế phẩm tế bào S.cerevisiae cố định tự cho lên men dịch trái long cho thấy lượng cồn từ tế bào nấm men cố định cao so với nấm men tự điều kiện nhiệt độ 4oC Tuy nhiên, điều kiện nhiệt độ phịng cho thấy hoạt tính tế bào S.cerevisiae tự lại cao Khảo sát hàm lượng enzyme pectinase thu nhận dịch trái long ghi nhận tỷ lệ thịt trái nước : lượng enzyme 0.1ml HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng DANH MỤC HÌNH Hình II.1: Tế bào hấp phụ bề mặt chất mang [39] 12 Hình II.2: Tế bào gắn bề mặt chất mang liên kết cộng hóa trị [39] 13 Hình II.3: Tế bào kết tự nhiên (a) kết tế bào liên kết chéo (b) [39] 14 Hình III.4: Tế bào cố định mạng lưới chất mang [39] 15 Hình II.5: Tế bào nấm men nhuộm Gram (x40) 21 Hình II.6: Tế bào S.cerevisiae [79] 22 Hình II.7: Hình thái trái táo tây (Malus domesticus) 25 Hình II.8: Sơ đồ quy trình sản xuất vang long 31 Hình III 1: Trái long để nguyên cắt dọc 37 Hình III 2: Trái táo tây (Malus domesticus) để nguyên cắt miếng 38 Hình III 3: Sơ đồ quy trình huấn luyện thích nghi giống 39 Hình III 4: Khuẩn lạc tế bào nấm men sau 48 nuôi cấy nhiệt độ phịng 40 Hình III 5: Sơ đồ quy trình nhân giống cấp 41 Hình III 6: Ống giống cấp 42 Hình III 7: Sơ đồ nhân giống cấp 42 Hình III 8: Nhân giống cấp 43 Hình III.9: Sơ đồ thu sinh khối nấm men 44 Hình III.10: Sơ đồ thu nhận chất mang 45 Hình III.11: Miếng táo sau xử lý 46 Hình III.12: Sơ đồ quy trình tạo chế phẩm tế bào nấm men cố định 47 Hình III.13: Tế bào nấm men nhuộm xanh methylen (x40) 49 Hình III.14: Tế bào S.cerevisiae buồng đếm hồng cầu (x40) Bảng III.2: Bảng đánh giá hoạt tính lên men tế bào nấm men tự cố định sau ngày lên men điều kiện nhiệt độ phòng 51 HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng DANH MỤC BẢNG Bảng II.1: Thành phần chất có 100g táo 26 Bảng III.1: Xác định mối quan hệ lượng chất mang hiệu suất cố định 48 Bảng III.2: Bảng đánh giá hoạt tính lên men tế bào nấm men tự cố định sau ngày lên men điều kiện nhiệt độ phòng 55 Bảng III.3: Đánh giá khả tái sử dụng tế bào nấm men cố định sau ngày lên men, nhiệt độ phòng 56 Bảng III.4: Đánh giá khả tái sử dụng tế bào nấm men cố định sau bảo quản 57 HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ IV.1: Mối quan hệ lượng dịch trái long thu điều kiện xử lý nhiệt độ phòng nhiệt độ 40oC Biểu đồ IV.2: Khảo sát hiệu suất cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Biểu đồ IV.3: Khảo sát khả tái sử dụng chế phẩm tế bào S.cerevisiae cố định Biểu đồ IV.4: Khảo sát hoạt tính tế bào S.cerevisiae cố định sau bảo quản 64 Biểu đồ IV.5: So sánh hoạt tính tế bào S.cerevisiae cố định tự 65 HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng 10 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DEAE – cellulose: Diethylaminoethyl cellulose CM – cellulose: Carboxymethyl cellulose DCM: delignified cellulosic materials GP: gluten pellets V/P: vòng/phút CFU: Clony Form Unit HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục PHỤ LỤC BẢNG KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 1/ Xác định lượng enzyme pectinase tối ưu để thu nhận dịch trái long điều kiện nhiệt độ phòng, giờ, tỉ lệ phối trộn thịt với nước theo tỉ lệ 1:1 Enzyme pectinase (ml) 0.05 0.10 0.15 0.20 Thịt (g) 100 100 100 100 170 165 175 169.5 174 170 175 170 170 174.5 175 174 167 173 172.5 173 168 174 176.5 176 168.0 173.2 173.6 173.6 Thể tích dịch sau lần thí nghiệm (ml) Thể tích dịch trung bình (ml) 2/ Xác định lượng enzyme pactinase tối ưu để thu nhận dịch trái long điều kiện nhiệt độ 40oC, giờ, tỉ lệ phối trộn thịt với nước theo tỉ lệ 1:1 Enzyme pectinase (ml) 0.05 0.10 0.15 0.20 Thịt (g) 100 100 100 100 172.0 168.0 175.0 169.0 175.0 168.5 174.5 168.5 174.0 174.5 176.0 175.0 Thể tích dịch sau lần thí nghiệm (ml) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Thể tích dịch trung bình (ml) Phụ lục 168.5 175.0 174.5 176.0 170.0 175.0 175.5 175.5 170.5 173.7 173.9 173.9 HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục 2/ Khảo sát hiệu suất cố định tế bào S.cerevisiae táo miếng 3/ Đánh giá khả tái sử dụng tế bào S cerevisiae cố định ươi (g) 25 hí nghiệm 50 75 100 4 11.2x109 6.4x109 8.1x109 7.2x109 11.2x109 6.4x109 8.1x109 7.2x109 11.2x109 6.4x109 8.1x109 9.3x109 11.2x109 6.4x109 8.1x1 định 8.0x109 4.7x109 5.8x109 5.1x109 4.1 x109 2.4x109 3.1x109 2.7x109 6.1x109 3.5x109 4.5x109 5.1x109 6.8x109 3.9x109 4.9x1 bào cố định 3.2x109 1.8x109 2.4x109 2.0x109 7.8x 109 4.4x109 5.6x109 5.0x109 5.0x109 2,9x109 3.7x109 4.2x109 4.4x109 2.5x109 3.2x1 28.57 28.13 29.63 27.78 69.64 68.75 69.14 69.44 44.64 45.31 45.68 45.16 39.29 39.06 39.5 khối nấm men cố định (tế 00ml) khối nấm men cố /100ml) ) suất cố định (%) suất cố định bình (%) 28.53 69.24 45.20 39.19 Chế phẩm tế bào nấm men cố định (g) 10 Thể tích dịch cho lần lên men (ml) 100 pH dịch lên men 4,5 Nhiệt độ lên men Nhiệt độ phịng (26 ÷3 Lượng chất khơ hịa tan (oBrix) Số lần tái sử dụng Lượng ethanol (%,v/v) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng 20 10.20 10.25 10.23 10.26 10.23 10.23 10.1 Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục 4/ Khảo sát hoạt tính tế bào S.cerevisiae sau bảo quản 4oC oC Nhiệt độ bảo quản Thời gian bảo quản 14 (ngày) Lần thí nghiệm Ethanol (%, v/v) 10.12 10.00 10.16 Ethanol trung bình (%, 10.14 10.11 10.14 10.08 10.15 10.13 10.12 10 10.11 10.12 10.14 28 35 42 v/v) Thời gian bảo quản (ngày) Lần thí nghiệm Ethanol (%, v/v) Ethanol trung 10.15 10.12 10.11 bình 10.13 10.14 10.15 5/ So sánh hoạt tính tế bào S.cerevisiae cố định táo tươi với tế bào S.cerevisiae tự sau ngày lên men nhiệt độ phòng Yếu tố Đơn vị Tế bào tự pH 4,5 Brix 20 Dịch lên men ml 100 Thời gian lên men 168 Nhiệt độ o Đường tổng Mật độ giống Khả tái sử dụng HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng o C 10.20 10.21 10.19 10.00 10.17 10.14 10 (%,v/v) pH dịch lên men 28-30 7% (w/v) 10.13 Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Số lần lên men Lần Ethanol (%,v/v) Phụ lục 11.23 11.21 11.24 11.23 10.24 IV.6 So sánh hoạt tính tế bào S.cerevisiae cố định táo tươi với tế bào S.cerevisiae tự sau ngày lên men nhiệt độ 4oC Yếu tố Đơn vị Tế bào tự pH dịch lên men pH 4,5 Brix 20 Ml 100 ngày o Đường tổng Dịch lên men Thời gian lên men o Nhiệt độ 26 – 30oC C Mật độ giống 7(%,w/v) Khả tái sử dụng Số lần lên men Ethanol Lần (%,v/v) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng 7.20 7.23 7.20 7.22 8.21 Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục TÀI LIỆU TIẾNG ANH [1] Angelo Mauricio Lother, Alcoholic and malolactic fermentation in continuous wine making, M.S., Esalq/ usp, Brazil, 1995 [2] Alteriis, E.D., et al., Kluyveromyces lactis cells entrapped in Ca-alginate beads for the continuous production of a heterologous glucoamylase, Journal of Biotechnology 109 : 83–92, (2004) [3] Aleksandra Milovanovic, Natasˇa Bozˇic´, Zoran Vujcˇic´, Cell wall invertase immobilization within calcium alginate beads, Food Chemistry 104, 81–86, 2007 [4] Athanasios Mallouchos et al., Volatile Compounds of Wines Produced by Cells Immobilized on Grape Skins, J Agric Food Chem 51, 3060-3066, 2003 [5] Argyris Tsakiris, Red Wine Making by Immobilized Cells and Influence on Volatile Composition, J Agric Food Chem 52, 1357-1363, 2004 [6] Bardi, E P., and A A Koutinas, Immobilization of Yeast on Delignified Cellulosic Material for Room Temperature and Low- temperature Wine Making, J Agric Food Chem, 42, 221-226,1994 [7] Bardi, E., et al., Volatile by-products formed in low-temperature winemaking using immobilized yeast cells, Process Biochemistry Vol 32, No 7, pp 579-584, (1997) [8] Bardi, E., et al., Room and low temperature brewing with yeast immobilized on gluten pellets, Process Biochemistry Vol 32 No g, pp 691-696, (1997) [9] Bardi, E., et al., Room Temperature and Low Temperature Wine Making Using Yeast Immobilized on Gluten Pellets, Process Biochemisty, Vol 31, No 5, pp 425-430, (1996) [10] Baptista, C.M.S.G., et al., Natural immobilisation of microorganisms for continuous ethanol production, Enzyme and Microbial Technology 40: 127 – 131, (2006) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục [11] Bakoyianis, V., et al., Comparative Study of Kissiris, ç-Alumina, and Calcium Alginate as Supports of Cells for Batch and Continuous WineMaking at Low Temperatures, J Agric Food Chem 45, 4884-4888, 1997 [12] Bekatorou, A., et al., Low-Temperature Brewing Using Yeast Immobilized on Dried Figs, J Agric Food Chem 50, 7249-7257 , 2002 [13] Carls S Pederson and Donald K Tressler, Flash Pasteurization of Apple Juice, Ind Eng Chem., 30 (8), pp 954–959, 1938 [14] Dejan Bezbradica et al, Immobilization of yeast cells in PVA particles for beer fermentation, Process Biochemistry 42, 1348–1351, 2007 [15] Fleet, G.H., Yeast interactions and wine flavour, International Journal of Food Microbiology 86 : 11 – 22, (2003) [16] Galazzo, J.L., and J E Bailey, Fermentation pathway kinetics and metabolic flux control in suspended and immobilized Saccharomyces cerevisiae, Enzyme Microb Technol, vol 12,pp 162 – 172, (1990) [17] Gao, M.T., et al., Fermentative lactic acid production with a metabolically engineered yeast immobilized in photo-crosslinkable resins, Biochemical Engineering Journal 47 : 66–70, (2009) [18] Giuseppe Meca et al., Reduction of ochratoxin A during the fermentation of Italian red wine Moscato, Food Control 21 (2010) 579–583 [19] Groboillot, A., et al., Immobilization of Cells for application in the Food Industry, Critical Reviews in Biorechnology, 14(2):75-107, 1994 [20] Irfana Mariam et al., Enhanced production of ethanol from free and immobilized S.cerevisiae under stationary culture, Pak J Bot., 41(2): 821833, 2009 [21] Jirku,V., A novel entrapping matrix for yeast-catalyzed ethanol Fermentation, Process Biochemistry 34 : 193–196, (1999) [22] Kopsahelis, N., et al., Comparative study of spent grains and deligniWed spent grains as yeast supports for alcohol production from molasses, Bioresource Technology 98 : 1440–1447, (2007) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục [23] Kopsahelis, N., et al., Low temperature brewing using cells immobilized on brewer’s spent grains, Food Chemistry 104 : 480 – 488, (2007) [24] Kourkoutas, Y., et al., Effect of fermentation conditions and immobilization supports on the wine making, Journal of Food Engineering 69 : 115–123, (2005) [25] Kourkoutas, Y., et al., Immobilization technologies and support materials suitable inalcohol beverages production: a review, Food Microbiology 21 : 377–397, (2004) [26] Kourkoutas, Y., et al., Wine production using yeast immobilized on quince biocatalyst at temperatures between 30 and oC, Food Chemistry 82 : 353 – 360, (2003) [27] Kourkoutas, Y., et al., Probiotic Cheese Production Using Lactobacillus casei Cells Immobilized on Fruit Pieces, J Dairy Sci 89:1439 – 1451, (2006) [28] Kourkoutas, Y., et al., Continuous wine fermentation using a psychrophilic yeast immobilized on apple cuts at different temperatures, Food Microbiology, 19, 127-134, 2002 [29] Kourkoutas, Y., et al., Wine Production Using Yeast Immobilized on Apple Pieces at Low and Room Temperatures, J Agric Food Chem 49, 14171425, 2001 [30] Kourkoutas, Y., et al., Apple pieces as immobilization support of various microorganisms, LWT 39 : 980–986, (2006) [31] Kourkoutas, Y., et al., Effect of fermentation conditions and immobilization supports on the wine making, Journal of Food Engineering 69 : 115–123, (2005) [32] Kourkoutas, Y., et al., Wine production using yeast immobilized on quince biocatalyst at temperatures between 30 and 0oC, Food Chemistry 82 : 353– 360, (2003) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục [33] Kourkoutas, Y., et al., Effect of storage of immobilized cells at ambient temperature on volatile by-products during wine-making, Journal of Food Engineering 74 : 217–223, (2006) [34] Kourkoutas, Y., et al., Effect of fermentation conditions and immobilization supports on the wine making, Journal of Food Engineering 69 : 115–123, (2005) [35] Kourkoutas, Y., et al., Continuous wine fermentation using a psychrophilic yeast immobilized on apple cuts at di¡erent temperatures, Food Microbiology, 19 :127 – 134, (2002) [36] Kubal, B.S., and S.F.D’Souza, Immobilization of catalase by entrapment of permeabilized yeast cells in hen egg white using glutaraldehyde, J Biochem Biophys Methods 59, 61–64, 2004 [37] Lei Liang, Yuan-ping Zhang, Li Zhang, Study of sugarcane pieces as yeast supports for ethanol production from sugarcane juice and molasses, J Ind Microbiol Biotechnol, 35:1605–1613, 2008 [38] Lebaka Veeranjaneya Reddyz, Production and Characterization of Wine with Sugarcane, Food Bioprocess Technol, DOI 10.1007/s11947-009-03219, 2009 [39] Lebaka Veeranjaneya Reddy, Lebaka Prasannanjaneya Reddy et al., Production and Characterization of Wine with Sugarcane Piece Immobilized Yeast Biocatalyst Food Bioprocess Technol 10.1007/s11947-009-0321-9, (2010) [40] Loureiro, V., Malfeito-Ferreira, M., Spoilage yeasts in the wine industry, International Journal of Food Microbiology 86 : 23–50, (2003) [41] Mai Ngoc Dung and Dong Thi Thanh Thu, Use of immobilized Yeast Cell in Alcohol Fermentation from Molasses, Science & Technology Development, Vol 11, No.09 – 2008 HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục [42] Mallouchos,A., et al., Wine fermentations by immobilized and free cells at different temperatures Effect of immobilization and temperature on volatile by-products, Food Chemistry 80 : 109–113, (2003) [43] Mcghee, St Julian and Detroy, Continuous and Static Fermentation of Glucose to Ethanol by Immobilized Saccharomyces cerevisiae Cells of Different Ages, Applied and Environmental Microbiology, Vol 44, No.1, p 19-22, July 1982 [44] Morad, M.A., A.H Hikal, R Buchanin, Gas-Liquid Chromatographic Determination of Ethanol in "Alcohol-Free" Beverages and Fruit Juices, Department of Pharmaceutics, College of Pharmacy, Riyad University, Riyad, Saudi Arabia, 1997 [45] Nam Sun Wang Measurements of Cell Biomass Concentration Department of Chemical Engineering University of Maryland, (2003) [46] Nikolaos Kopsahelis, Evaluation of the Thermally Dried Immobilized Cells of Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus on Apple Pieces as a Potent Starter Culture, J Agric Food Chem 55, 9829–9836, 2007 [47] Norbert, J Pienta, Extraction and Gas Chromatographic Determination of Ethanol in Beverages, ISSN VOL 1, NO 5, 1430-4171, 1996 [48] Nguyen, D N., Ton, N M N and * Le, V V M., Optimization of Saccharomyces cerevisiae immobilization in bacterial cellulose by ‘adsorption-incubation’ method, International Food Research Journal 16: 59 - 64, (2009) [49] Okunowo, Wahab Oluwanisola and Osuntoki, Akinniyi Adediran, Quantitation of alcohols in orange wine fermented by four strains of yeast, African Journal of Biochemistry Research Vol.1 (6), pp 095-100, November, 2007 [50] Panagiotis Kandylis and Athanasios A Koutinas, Extremely Low Temperature Fermentations of Grape Must by Potato-Supported Yeast, HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục Strain AXAZ-1 A Contribution Is Performed for Catalysis of Alcoholic Fermentation, J Agric Food Chem 56, 3317–3327, 2008 [51] Panagiotis Kandylis et al., Corn Starch Gel for Yeast Cell Entrapment A View for Catalysis of Wine Fermentation, J Agric Food Chem 56, 12037– 12045, 2008 [52] Plessas, S., et al., Use of Saccharomyces cerevisiae cells immobilized on orange peel as biocatalyst for alcoholic fermentation, Bioresource Technology 98 860–865, 2007 [53] Pieter, J Verbelen et al., Immobilized yeast cell systems for continuous fermentation applications, Biotechnol Lett 28:1515–1525, (2006) [54] Peinado, R A., et al., Yeast biocapsules: A new immobilization method and their applications, Enzyme and Microbial Technology 40 : 79 – 84, (2006) [55] Rakin et al., Bioethanol production by immobilized Sacharomyces cerevisiae var ellipsoideus cells, African Journal of Biotechnology Vol (3), pp 464471, February, 2009 [56] Reddy, L.V., et al., Wine production by novel yeast biocatalyst prepared by immobilization on watermelon (Citrullus vulgaris) rind pieces and characterization of volatile compounds, Process Biochemistry 43 : 748–752, (2008) [57] Reddy, L.V.A., et al., Wine Production by Guava Piece Immobilized Yeast from Indian Cultivar Grapes and its Volatile Composition, Biotechnology (4) : 449-454, (2006), ISSN 1682-296X [58] Redzepovic, S., et al., Differential malic acid degradation by selected strains of Saccharomyces during alcoholic fermentation, International Journal of Food Microbiology 83 : 49– 61, (2003) [59] Roca, E., et al., Ethanolic fermentation bv immobilized Saccharomyces cerevisiae yin a semipilot pulsing packed-bed bioreactor, Elsevier Science of Enzyme and Microbial Technology 19:132-139, (1996) HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục [60] Sablayrolles, J, M., Control of alcoholic fermentation in winemaking: Current situation and prospect, Food Research International 42 : 418–424, (2009) [61] Scott, A.L., A M O'Reilly, Co-Immobilization of Selected Yeast and Bacteria for Controlled Flavour Development in an Alcoholic Cider Beverage, Process Biochemistry Vol 31, No 2, pp I I - 117, (1996) [62] Sipsas, V., et al., Comparative study of batch and continuous multi-stage fixed-bed tower (MFBT) bioreactor during wine-making using freeze-dried immobilized cells, Journal of Food Engineering 90 : 495–503, (2009) [63] Sten Ohlson, Per-Olof Larsson, and Klaus Mosbach, Steroid Transformation by Living Cells Immobilized in Calcium Alginate, European J Appl Microbiol Biotechnol 7,103-110, 1979 [64] Tsakiris,A., et al., Immobilization of yeast on dried raisin berries for use in dry white wine-making, Food Chemistry 87 : 11–15, (2004) [65] Van Iersel, M.F.M., et al., Flavor formation and cell physiology during the production of alcohol-free beer with immobilized Saccharomyces cerevisiae, Enzyme and Microbial Technology 24:407 - 411, (1999) [66] Zhao, Q.X., F.W Bai, Yeast flocculation: New story in fuel ethanol production, Biotechnology Advances 27 : 849 – 856, (2009) [67] Ukuku, D.O et al., Use of hydrogen peroxide in combination with nisin, sodium lactate and citric acid for reducing transfer of bacterial pathogens from whole melon surfaces to fresh-cut pieces, International Journal of Food Microbiology 104, 225–233, 2005 [68] Y.H Hui, Y B (2006) Handbook of Fruist and Fruit Processing Blackwell Publishing HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [69] Lâm Kim Châu, Văn Đức Chín, Ngơ Đại Nghiệp Thực tập Sinh hóa Nhà xuất Đại học Quốc gia Tp.Hồ Chí Minh, (2004) [70] Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, Vi sinh vật học, NXB Giáo Dục, 2000 [71] Phạm Thành Hổ, Nhập môn công nghệ sinh học, 2005 [72] Lê Duy Linh, Trần Thị Hường, Nguyễn Thị Ánh Tuyết Thực tập Vi Sinh Cơ sở Nhà xuất Đại học Quốc gia, (2001) [73] Nguyễn Đức Lượng,vi sinh vật công nghiệp (tập 1, 2,3), NXB Đại học Quốc Gia Tp HCM, 2006 [74] Nguyễn Đức Lượng, Phan Thị Huyền, Nguyễn Ánh Tuyết, Thí nghiệm vi sinh vật học, NXB Đại học Quốc Gia Tp HCM, 2006 [75] TS Đàm Sao Mai, TS Nguyễn Khánh Hồng, Cơng nghệ sản xuất Rượu vang, NXB ĐH Quốc Gia Tp HCM, 2009 [76] Lê Thanh Mai, Các phương pháp phân tích ngành cơng nghệ lên men, NXB Khoa học Kỹ Thuật, 2009 [77] Lương Đức Phẩm, Nấm men công nghiệp, NXB Khoa học Kỹ thuật HN, 2005 TÀI LIỆU TỪ INTERNET [78] http://www.microbiologyprocedure.com/genetics/genetically-importantorganisms/images/Life-cycle-of-Bakers-Yeast-Saccharomyces-Cerevisiae HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục LÝ LỊCH TRÍCH NGANG Họ tên: PHẠM THỊ PHƯỢNG Ngày, tháng, năm sinh: 03/11/1983 Nơi sinh: Hải Dương Địa liên lạc:  Số nhà : 360/15 Dương Bá Trạc, P1, Q8, Tp.HCM  Điện thoại : 0903 619 680  Email : phuong_ot0311@yahoo.com QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO (Bắt đầu từ Đại học đến nay) ­ Từ năm 2001 đến 2005 : Sinh viên khoa Khoa Sinh học, chuyên ngành Sinh học Động vật – Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Tp HCM HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng Nghiên cứu cố định tế bào S.cerevisiae táo tươi Phụ lục ­ Từ năm 2009 đến : Học viên cao học chuyên ngành Công nghệ Sinh học Trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM Q TRÌNH CƠNG TÁC (Bắt đầu từ làm đến nay)  Từ năm 2006 đến 2007 : Trung tâm Đa khoa Phước An – HEPA  Từ 2007 đến 2008 : Công Ty Grobest & I-Mei Việt Nam  Từ 2008 đến - 2010 : Tập Đồn Cơng nghiệp Thiên Phú  Từ tháng 8-2010 đến : Công Ty EcO2 Việt Nam HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng ... tế bào tự [9; 40] Hiện nay, lĩnh vực công nghiệp việc sử dụng tế bào cố định hạn chế cịn phụ thuộc vào phương pháp cố định việc lựa chọn chất mang phù hợp Các phương pháp cố định tế bào dựa cố. .. TÀI LIỆU định tế bào nấm men thích hợp với giai đoạn điều kiện nhiệt độ thấp lên men rượu vang II.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP VÀ KỸ THUẬT CỐ ĐỊNH TẾ BÀO Tế bào cố định định nghĩa nhốt gắn tế bào vào vùng... loại tế bào tự khác cố định mạng lưới chất mang II.2.3 Kỹ thuật cố định tế bào dựa kết tế bào HVTH: Phạm Thị Phượng GVHD: PGS.TS Nguyễn Đức Lượng 26 Nghiên cứu cố định tế bào S .cerevisiae táo tươi