Nghiên cứu đánh giá chất lượng và dự đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia việt nam

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ CHẤT LƢỢNG VÀ DỰ ĐOÁN HẠN DÙNG VẮC XIN UỐN VÁN DỰ TUYỂN MẪU CHUẨN QUỐC GIA VIỆT NAM VŨ DUY DŨNG Hà Nội - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã ngành: 8420201 Đề tài: “Nghiên cứu đánh giá chất lƣợng dự đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển Mẫu chuẩn Quốc gia Việt Nam” HỌC VIÊN THỰC HIỆN: VŨ DUY DŨNG HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS PHẠM VĂN HÙNG ThS LÊ THỊ HOÀNG YẾN Hà Nội, 5/2020 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan: Luận văn “Nghiên cứu đánh giá chất lượng dự đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển Mẫu chuẩn Quốc gia” cơng trình nghiên cứu cá nhân thực hướng dẫn khoa học TS Phạm Văn Hùng Ths Lê Thị Hoàng Yến Các nội dung, số liệu kết trình bày luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng Học viên Vũ Duy Dũng iii năm 2020 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, nhận giúp đỡ nhiệt tình nhiều người Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới TS Phạm Văn Hùng, Phó Viện trưởng Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế, ThS Lê Thị Hồng Yến, Phó trưởng khoa Kiểm định vắc xin vi khuản người thầy tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực đề tài luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo, cán khoa công nghệ Sinh học trường Đại học mở Hà Nội có nhiều dẫn giúp đỡ suốt trình học tập Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế cho hội thực đề tài Để hồn thành luận văn, nhận giúp đỡ quý báu bạn đồng nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn ThS Đỗ Khánh Linh, Ths Nguyễn Phương Liên, CN Bùi Thị Kim Xuyến anh chị đồng nghiệp Khoa Kiểm định vắc xin Vi khuẩn – Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Cuối cùng, vô biết ơn gia đình, bạn bè giúp đỡ động viên tơi suốt q trình học tập thực đề tài Hà Nội, ngày tháng Học Viên Vũ Duy Dũng iv năm 2020 MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN ii LỜI CẢM ƠN iv MỤC LỤC v DANH MỤC BẢNG BIỂU vii DANH MỤC HÌNH VẼ viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT viii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm sinh học vi khuẩn uốn ván .4 1.2 Đặc điểm dịch tễ bệnh uốn ván 1.2.1 Cơ chế bệnh sinh .6 1.2.2 Dịch tễ học bệnh uốn ván 1.3 Vắc xin uốn ván .9 1.3.1 Lịch sử phát triển vắc xin uốn ván 1.3.2 Quy trình sản xuất kiểm định vắc xin Uốn ván 11 1.4 Sản xuất thiết lập mẫu chuẩn 13 1.4.1 Sự cần thiết mẫu chuẩn 13 1.4.2 Hướng dẫn Tổ chức Y tế giới thiết lập mẫu chuẩn quốc gia vắc xin 14 1.4.3 Vắc xin uốn ván mẫu chuẩn Quốc gia Việt Nam 16 1.4.4 Tính cấp thiết việc thiết lập vắc xin uốn ván MCQG Việt Nam đạt tiêu chuẩn TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006) .17 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 20 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu .20 v 2.3 Vật liệu nghiên cứu: 20 2.3.1 Vắc xin mẫu chuẩn vắc xin mẫu thử .20 2.3.2 Các vật tư hóa chất .20 2.3.3 Các thiết bị 21 2.3.4 Các dụng cụ nguyên vật liệu khác .21 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu .21 2.4.1 Nội dung mơ hình nghiên cứu 22 2.4.2 Kỹ thuật nghiên cứu 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 30 3.1 Kết kiểm định xuất xƣởng lô vắc xin dự tuyển MCQG RT52017 30 3.1.1 Kết kiểm tra vô trùng 30 3.1.2 Kết kiểm tra nhận dạng đặc hiệu 33 3.1.3 Kết kiểm tra công hiệu .34 3.2 Kết kiểm tra độ ẩm tồn dƣ .41 3.3 Kết kiểm tra tính đồng trọng lƣợng lọ vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 42 3.4 Kết tính ổn định cơng hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT52017 theo thời gian 3-6-12-18-24 tháng bảo quản nhiệt độ tối ƣu 2oC-8 o C 45 3.5 Kết nghiên cứu xác định đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 .47 KẾT LUẬN 51 KIẾN NGHỊ .52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 vi DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1: Kết kiểm tra cảm quan mẫu chuẩn quốc gia dự tuyển uốn ván RT5 NICVB IVAC 34 Bảng 3.2 Kết đo độ ẩm tồn dư mẫu RT5 37 Bảng 3.3 Kết công hiệu mẫu RT5 thực NICVB 38 Bảng 3.4 Kết công hiệu mẫu RT5 thực IVAC chuột swiss 40 Bảng 3.5 Kết công hiệu mẫu RT5 thực IVAC chuột ICR 41 Bảng 3.6 Kết công hiệu tổng hợp mẫu RT5 NICVB IVAC 43 Bảng 3.7 Kết đồng trọng lượng lọ vắc xin dự tuyển MCQG RT5-2017 45 Bảng 3.8: Kết công hiệu vắc xin mẫu chuẩn bảo quản 45 oC theo thời gian 47 Bảng 3.9: Kết công hiệu vắc xin mẫu chuẩn bảo quản 56 oC theo thời gian 48 Bảng 3.10 Kết tổng hợp vắc xin mẫu chuẩn dự đoán hạn dùng 48 vii DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 Hình ảnh trực khuẩn uốn ván quan sát kính hiển vi Hình 1.2 Số lượng tử vong uốn ván theo khu vực giới Hình 1.3 Số ca mắc tương ứng tỷ lệ tiêu phòng vắc xin uốn ván 1980-2019 Hình 1.4 Vắc xin uốn ván sử dụng TCMR 10 Hình 1.5 Sơ đồ sản xuất kiểm định vắc xin uốn ván 12 Hình 2.1 Mơ hình nghiên cứu 23 Hình 3.1 Kết kiểm tra vô trùng mẫu RT5-2017 32 Hình 3.2 Kết nhận dạng đặc hiệu mẫu dự tuyển MCQG RT5-2017 33 Hình 3.3 Kết cơng hiệu vắc xin RT5- 2017 NICVB 35 Hình 3.4 Kết công hiệu vắc xin RT5-2017 chuột swiss IVAC 35 Hình 3.5 Kết cơng hiệu vắc xin RT5-2017 chuột ICR IVAC 36 Hình 3.6 Kết tổng hợp cơng hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 NICVB IVAC 38 Hình 3.7 Vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 bảo quản 39 Hình 3.8 Kết độ ẩm tồn dư vắc xin RT5-2017 NICVB IVAC 42 Hình 3.9 Kết tính đồng trọng lượng ống vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 44 Hình 3.10 Kết ổn định công hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 theo thời gian bảo quản 46 viii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ATCC American type culture collection (Trung tâm cung cấp nguyên liệu sinh học toàn cầu) IVAC Institute of Vaccine (Viện vắc xin sinh phẩm y tế) BTPCC Bán thành phẩm cuối BTP Bán thành phẩm CV Coefficient of variation (Hệ số biến thiên) CI Khoảng tin cậy 95% DĐVN Dược điển Việt Nam GM Geomean (Trung bình nhân) GMP Good Manufacturing practice (Thực hành sản xuất tốt) KĐQG Kiểm định quốc gia MCDT Mẫu chuẩn dự tuyển MCQT Mẫu chuẩn quốc tế MCQG Mẫu chuẩn quốc gia LD50 Lethal Dose 50 (Liêu gây chết 50%) NICVB National institude for control of vaccine and biological (Viện Kiểm định Vắc xin Sinh phẩm y tế) UVSS Uốn ván sơ sinh SPF Specific-pathogen-free SD Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) PCR Polymerase Chain Reaction TCMRQG Tiêm chủng mở rộng Quốc gia TCYTTG Tổ chức y tế giới TSB Trypticase soy broth WHO World Health Organization (Tổ chức y tế giới) WHO TRS World Health Organization Technical Report Series ix ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh uốn ván bệnh truyền nhiễm cấp tính ngoại độc tố vi khuẩn uốn ván (Clostridium tetani) phát triển vết thương điều kiện yếm khí gây với tỷ lệ tử vong cao từ 45-90%, đặc biệt uốn ván rốn trẻ sơ sinh (UVSS) có tỷ lệ tử vong 95% Các triệu chứng bệnh biểu co cơ, nhiễm độc làm tổn thương não hệ thần kinh trung ưng dẫn đến co cứng trơn toàn thân bệnh nhân tử vong nhanh để lại di chứng nặng nề Bệnh uốn ván gặp thời gian năm, khơng mang tính chất mùa rõ rệt tập trung nước nước phát triển vùng nông nghiệp nhiệt đới khu vực Châu Á, Châu Phi Nam Mỹ Theo ước tính Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) năm cuối thể kỷ 20, năm có khoảng 500.000 trẻ bị chết UVSS, tập trung nước phát triển [2] Tỷ lệ chết/mắc UVSS cao 80%, đặc biệt trường hợp có thời gian ủ bệnh ngắn Tỷ lệ chết/mắc uốn ván từ 10-90%, tỷ lệ chết cao bệnh nhân cấp tính, trẻ nhỏ người cao tuổi [2] Ở Việt Nam, bệnh uốn ván xuất tản phát khắp tỉnh nước Chương trình loại trừ UVSS triển khai từ năm 1992 thông qua Chương trình Tiêm chủng mở rộng Quốc gia (TCMRQG) Trong giai đoạn 1996 - 2000, tỷ lệ mắc UVSS trung bình năm nước 0,13/1.000 trẻ đẻ sống Từ năm 2005 TCMRQG công bố loại trừ bệnh UVSS theo quy mô huyện với tỷ lệ mắc UVSS 1/1.000 trẻ đẻ sống [4], nhiên nhóm người trưởng thành lớn tuổi vấn đề phịng ngừa uốn ván chưa quan tâm nhiều, nên uốn ván thường gặp cộng đồng có tỷ lệ tử vong cao Do đặc điểm bệnh uốn ván không tạo miễn dịch tồn lưu thể sau mắc, cách phòng tránh bệnh uốn ván hiệu tiêm vắc xin phịng bệnh uốn ván chủ động Hiện thị trường có nhiều loại vắc xin phòng bệnh uốn ván hấp phụ bao gồm (vắc xin uốn ván đơn phối hợp nhiều thành phần bạch hầu, ho gà, bại liệt, viêm gan B Hib) đuwọc sản xuất nước nhập Vắc xin uốn ván trước sử dụng phòng bệnh cho cộng đồng phải kiểm định chất lượng đạt tiêu chuẩn (an toàn chung, an tồn đặc hiệu, vơ khuẩn, nhận dạng, cơng hiệu, tính chất hóa lý ) quan kiểm Hình 3.8 Kết độ ẩm tồn dƣ vắc xin RT5-2017 NICVB IVAC Kết bảng 3.5 hình 3.8 cho thấy kết lần thử nghiệm NICVB IVAC đạt yêu cầu ≤3%, giá trị nằm khoảng GM±2SD Mặt khác số độ ẩm tồn dư sản phẩm vắc xin đơng khơ nói chung số quan trọng ảnh hưởng trực tiếp tới chất lượng độ ổn định vắc xin, đặc biệt vắc xin mẫu chuẩn cần thời gian sử dụng lưu trữ thời gian dài 10 năm theo qui định TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006) Độ ẩm tồn dư thực chất xác định lượng nước cịn lại sản phẩm đơng khơ, lượng nước cao khiến phản ứng giáng hóa protein kháng nguyên giải độc tố uốn ván tiếp tục diễn ảnh hưởng đến hàm lượng kháng nguyên uốn ván ống mẫu vắc xin Do vậy, độ ẩm tồn dư thấp độ ổn định cao ngược lại Ngồi độ ẩm tồn dư giúp đánh giá trình đơng khơ tốt hay chưa tốt Sau đơng khơ sản phẩm hàn điều kiện khác độ ẩm tồn dư khác Kết cho thấy độ ẩm tồn dư lô vắc xin uốn ván dự tuyển MCQF RT52017 1,82%, đạt yêu cầu chất lượng chuẩn tiêu chuẩn TCYTTG (WHO TRS No 980 phần 6, 2014), NICVB DĐVN V,2017 vắc xin uốn ván hấp phụ 3.3 Kết kiểm tra tính đồng trọng lƣợng lọ vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 42 Tính đồng trọng lượng kháng nguyên giưa ống vắc xin lô vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 tiến hành phương pháp cân trọng lượng mẫu tối thiểu 06 mẫu vắc xin cho kết bảng 3.6 hình 3.9 sau: Bảng 3.6 Kết đồng trọng lƣợng lọ vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 Cân trọng lượng mẫu thử/các kết khảng GM±2SD STT Phƣơng pháp/tiêu chuẩn Trọng lƣợng (g) Ống chứa mẫu vắc xin 6,5251 Ống không chứa mẫu 6,5116 6,6493 6,6358 0,0135 6,6041 6,5907 0,0134 6,6060 6,5924 0,0136 6,6050 6,5916 0,0134 6,5842 6,5709 0,0133 6,5982 6,5847 0,0135 Mẫu vắc xin 0,0135 MTB (Khối lượng trung bình mẫu) 0,0135 SD (độ lệch chuẩn khối lượng tính phần mềm Excel) 9,76.10-5 Độ lệch khối lượng CV%=(S*100)/MTB 0,73 GM+2SD GM-2SD 43 Hình 3.9 Kết tính đồng trọng lƣợng ống vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 Kết bảng 3.6 hình 3.9 cho thấy: Khối lượng/trọng lượng khô mẫu vắc xin uốn ván dự tuyển RT5-2017 trung bình cộng là: 0,0135 (g/ống) với độ biến thiên CV= 0,73 (%) Các giá trị trọng lượng kháng nguyên khô ống vắc xin nằm khoảng giá trị GM±2SD Kết cho thấy lô vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 đạt yêu cầu tính đồng trọng lượng kháng nguyên ống theo tiêu chuẩn TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006) vắc xin mẫu chuẩn Tiêu chuẩn tính đồng ống vắc xin MCQG yêu cầu bắt buộc tính chất sử dụng mẫu chuẩn để làm thước đo dùng cho kiểm định chất lượng sản phẩm xuất xưởng sử dụng cho cộng đồng Tính đồng khối lượng khô số phản ánh đồng vắc xin mẫu chuẩn phân liều đóng ống đông khô Khối lượng khô ống đồng lượng kháng nguyên uốn ván ống mẫu chuẩn gần yếu tố cần thiết để đánh giá tính ổn định phương pháp kết kiểm định chất lượng xuất xưởng vắc xin Kết bảng 3.6 hình 3.9 cho thấy: Khối lượng/trọng lượng khô mẫu vắc xin uốn ván dự tuyển RT5-2017 trung bình cộng là: 0,0135 g/ống với độ biến thiên CV= 0,73 (%) Các giá trị trọng lượng kháng nguyên khô ống vắc xin nằm khoảng giá trị GM±2SD Kết cho thấy lô vắc xin 44 uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 đạt yêu cầu tính đồng trọng lượng kháng nguyên ống theo tiêu chuẩn TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006) vắc xin mẫu chuẩn 3.4 Kết tính ổn định cơng hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT52017 theo thời gian 3-6-12-18-24 tháng bảo quản nhiệt độ tối ƣu 2oC-8 oC Tính ổn định cơng hiệu theo thời gian bảo quản điều kiện nhiệt độ tối ưu tiêu chuẩn bắt buộc chất lượng mẫu chuẩn Kết kiểm tra đánh giá tính ổn định công hiệu theo thời gian 3-6-12-18-24 tháng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 bảng 3.7 hình 3.10 Tại thời điểm thử nghiệm lặp lại lần cho giá trị công hiệu trung bình Bảng 3.7 Kết kiểm tra cơng hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT52017 theo thời gian bảo quản ≥550IU/ống Công hiệu≥ chuẩn RSD ≤50% M3 pháp chuột M2 Tiêu thử thách M1 Phƣơng Miễn dịch STT Thời gian (Tháng) SX 3t 6t 12t 18t 24t 624,52 714,04 702,16 586,78 629,17 589,2 591,12 623,42 604,28 760,72 608,64 641,1 676,27 587,76 722,43 711,21 596,38 612,24 TB 630,63 641,74 678,95 649,57 609,06 614,18 Độ giảm % 2,6% GM 637,35 GM+2SD 688,49 GM-2SD 586,21 45 Hình 3.10 Kết ổn định công hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 theo thời gian bảo quản Kết bảng 3.7 hình 3.10 cho thấy cơng hiệu trung bình vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 thời điểm xuất xưởng; sau tháng; sau tháng; sau 12 tháng; sau 18 tháng sau 24 tháng đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn giá trị công hiệu ≥550IU/ống, giá trị nằm khoảng GM ±2SD bảo quản điều kiện nhiệt độ tối ưu 2oC-8 oC Độ giảm % công hiệu sau năm 2,6% Từ kết nghiên cứu khẳng định lô vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 đạt u cầu tính ổn định cơng hiệu theo thời gian bảo quản điều kiện nhiệt độ tối ưu theo tiêu chuẩn TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006) vắc xin mẫu chuẩn Đối với vắc xin MQCG yếu tố ổn định công hiệu (hay ổn định hiệu bảo vệ đồng hàm lượng kháng nguyên) theo thời gian bảo quản nhiệt độ sử dụng tối ưu yêu cầu bắt buộc để chứng minh tính ổn định chất lượng lô vắc xin dự tuyển MCQG Kết nghiên cứu tính ổn định cơng hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 trình bày bảng 3.7 hình 3.10 cho thấy cơng hiệu trung bình vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 thời điểm xuất xưởng; sau tháng; sau tháng; sau 12 tháng; sau 18 tháng sau 24 tháng đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn TCYTTG, quan kiểm định quốc gia NICVB DĐVN V,2017 46 vắc xin uốn ván giá trị công hiệu ≥550IU/ống Các giá trị kết kiểm tra công hiệu nằm khoảng GM ±2SD bảo quản điều kiện nhiệt độ tối ưu 2oC8 oC Độ giảm % công hiệu sau so với xuất xưởng năm 2,6% đạt yêu cầu chất lượng tính ổn định kháng nguyên sản phẩm MCQG ≤10% Từ kết nghiên cứu khẳng định lô vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 đạt yêu cầu tính ổn định công hiệu theo thời gian bảo quản điều kiện nhiệt độ tối ưu theo tiêu chuẩn TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006 WHO TRS No 800, phần 5, 2014) DĐVN V,2017 vắc xin uốn ván MCQG Kết nghiên cứu tương đương với số nghiên cứu tính ổn định vắc xin MCQG đơng khơ khác vắc xin BCG, Bạch hầu, Sởi, HiB trước [13,14] 3.5 Kết nghiên cứu xác định đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 Tiến hành xác định đánh giá dự đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 phương pháp thúc đẩy nhiệt lão hóa cấp tốc Đánh giá cơng hiệu mẫu bảo quản điều kiện nhiệt độ khác (37°C; 45°C; 56°C) khoảng thời gian khác cho kết sau: 3.5.1 Kết công hiệu bảo quản nhiệt độ 37 oC Bảng 3.8 Kết công hiệu điều kiện 37oC Đơn vị tính: IU/ống Thời gian 66 (ngày) 181 (ngày) 202 (ngày) M1 532,13 419,88 386,22 M2 491,96 450,35 396,13 M3 484,09 409,7 360,36 TB 502,73 426,64 380,90 Kết 47 3.5.2 Kết công hiệu bảo quản nhiệt độ 45 oC Bảng 3.9 Kết cơng hiệu điều kiện 45oC Đơn vị tính: IU/ống Thời gian 106 (ngày) 147 (ngày) 188 (ngày) M1 413,19 367,35 391,78 M2 478,36 378,9 339,91 M3 458,34 391,17 355,89 TB 449,96 379,14 362,53 Kết 3.5.3 Kết công hiệu bảo quản nhiệt độ 56 oC Bảng 3.10 Kết công hiệu điều kiện 56oC Đơn vị tính: IU/ống Thời gian 23 (ngày) 42 (ngày) 74 (ngày) M1 403,1 387,11 344,73 M2 399,44 368,69 351,29 M3 400,89 361,13 352,98 TB 401,14 372,31 349,67 Kết 3.5.4 Phân tích số liệu tính dự đốn hạn dùng (Shelf-line) vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 Việc nghiên cứu xác định giá trị công hiệu sản phẩm đông khô bảo quản điều kiện nhiệt độ khác thực chất bước đầu đánh giá tính ổn định cơng hiệu (kháng ngun) theo thời gian Theo tiêu chuẩn TCYTTG cho ứng viên MCQG ngồi qui định trung đạt u cầu chất lượng xuất xưởng, tính đồng ống trọng lượng khơ (hàm lượng kháng ngun) yếu tố quan trọng phải đạt yêu cầu tính ổn định cơng hiệu (hiệu lực) nhiều 48 năm bảo quản nhiệt độ tối ưu để phụ vụ cho công tác kiểm định chất lượng Theo qui định vắc xin đông khô MCQG việc giảm giá trị cơng hiệu bảo quản phải ≤10% Do việc nghiên cứu dự đoán hạn dùng q trình nghiên cứu xây dựng lơ vắc xin dự tuyển MCQG quan trọng, tiêu chuẩn tiên để lựa chọn, công bố lô vắc xin có đủ tiêu chuẩn vắc xin MCQG để sử dụng toàn quốc cho việc kiểm định chất lượng giám sát khậu kiểm định vắc xin sau xuất xưởng lưu hành thị trường hay không Kết kiểm tra công hiệu vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 bảo quản điều kiện nhiệt độ khác (37oC, 45oC, 56oC) bảng 3.8, 3.9 3.10 cho thấy giá trị cơng hiệu có giảm rõ tỷ lệ thuận điều kiện nhiệt độ cao bảo quản với thời gian dài Từ kết công hiệu bảo quản điều kiện nhiệt độ khác (37oC, 45oC, 56oC) bảng 3.8, 3.9 3.10 Ap dụng cơng thức tính hệ số giảm cơng hiệu tính thời gian (t) hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 sau:  Áp dụng cơng thức (1) tính hệ số giảm cơng hiệu (K) sau theo thời gian nhiệt độ bảo quản khác nhau: (1)K = [2,303/(t-to)]xlog(Co/Ct) Trong đó: + K hệ số giảm công hiệu vắc xin theo thời gian nhiệt độ bảo quản + t: thời điểm bắt đầu giảm công hiệu + to: Là thời điểm kiểm tra công hiệu sau xuất xưởng + Co: Là công vắc xin mẫu dự tuyển sau xuất xưởng (754,53IU/ống) + Ct: Là công hiệu vắc xin mẫu dự tuyển thời điểm t + Hệ số 2,303: hệ số quy đổi từ ln sang log (theo phương trình Arrhenius) Ta có kết sau: + Tính hệ số K37oC = 2,303/6 x log 754,53/426,64= 0,00968 Như log K37oC= -2,324 + Tính hệ số K45oC = 2,303/6 x log 754,53/362,53= 0,01326 49 Như log K45oC = -1,946 + Tính hệ số K56oC = 2,303/2 x log 754,53/349,67= 0,28774 Như log K56oC = - 0,568  Tính giá trị nhiệt độ bảo quản (nhiệt độ Kenvin) Tính giá trị nhiệt độ nhiệt độ bảo quản khác (37oC, 45oC, 56oC) nhiệt độ tuyệt đối tính độ K Từ tính giá trị nghịch đảo giá trị nhiệt độ bảo quản (1/T) Ta có T37oC = 273 + 37 = 310 1/T37oC = 0,00322 T45oC = 273 + 45 = 318 1/T45oC = 0,00314 T56oC = 273 + 56 = 329 1/T56oC = 0,00303  Từ điểm rời rạc kết thu trên, dựa vào chương trình Forest-Microsoft Excel để dự đốn log K5 oC Ta có log K-20oC = -4,266 K-20oC = 0,00062  Tính dự đốn hạn dùng vắc xin (shelf-life): Theo yêu cầu, công hiệu vắc xin uốn ván MCQG không giảm 10% so với thời điểm xuất xưởng Áp dụng công thức (2) Shelf-life (t10%) = 2,303/K-20oC x log 100/90 = 0,104/0,00062 Kết quả: t10% = 148 tháng (tương đương 12 năm tháng) Trong đó: + K-20oC hệ số giảm cơng hiệu theo thời gian nhiệt độ bảo quản thích hợp vắc xin uốn ván MCQG RT5-2017 dạng đông khô + t10% tỷ lệ % công hiệu giảm tối đa vắc xin so với tiêu chuẩn 10% Như vậy, Hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 12 năm tháng Đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn qui định TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006 WHO TRS No 800, phần 5, 2014) DĐVN V,2017 vắc xin uốn ván MCQG 50 KẾT LUẬN Qua kết nghiêu cứu đánh giá chất lượng dự đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017, chúng tơi có kết luận sau: Vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 đạt yêu cầu chất lượng xuất xưởng vắc xin uốn ván hấp phụ với kết giá trị cơng hiệu trung bình 754,53 IU/ống với giá trị 95% độ tin cậy khoảng (giới hạn trên: 988,56 IU/ống; giới hạn dưới: 520,50 IU/ống) Đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn TCYTTG, quan kiểm định quốc gia NICVB và DĐVN V,2017 vắc xin uốn ván hấp phụ Vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 đạt yêu cầu độ ẩm tồn dư, tính đồng hàm lượng kháng nguyên ống tính ổn định công hiệu theo thời gian bảo quản điều kiện nhiện độ tối ưu 2-80C Đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006) quan kiểm định quốc gia NICVB vắc xin MCQG Hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 có kết nghiên cứu dự đoán theo phương pháp thúc đẩy nhiệt lão hóa cấp tốc (Arrhenius) theo lý thuyết 12 năm tháng Đạt yêu cầu theo qui định chất lượng TCYTTG (WHO TRS No 932, phần 3, 2006) quan kiểm định quốc gia NICVB vắc xin MCQG ≥ 10 năm 51 KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu đánh giá chất lượng dự đoán hạn dùng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG RT5-2017 trình bày Chúng tơi kiến nghị Viện kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế, Bộ Y tế xem xét công nhận kết phê chuẩn vắc xin dự tuyển MCQG RT5-2017 thức vắc xin uốn ván RT5-2017 MCQG sử dụng công tác kiểm định giám sát-hậu kiểm chất lượng vắc xin uốn ván toàn quốc Kết nghiên cứu góp phần hồn thiện đề dài nhánh đề tài cấp Nhà Nước nghiên cứu thiết lập 11 vắc xin MCQG thuộc chương trình phát triển sản phẩm quốc gia vắc xin phòng bệnh cho người thực NICVB Tiếp tục đánh giá tính ổn định công hiệu lô vắc xin uốn ván MCQG RT5-2017 năm lần để xác định giá trị công hiệu hạn dùng thật mẫu chuẩn RT5-2017 theo thời gian điều kiện bảo quản điều kiện (-200C) 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Lê Văn Phủng (2009), Vi Khuẩn Y học, Nhà xuất giáo dục Việt Nam, Hà Nội, tr.475 – 481 Bùi Đại (2009) cs, Bệnh học truyền nhiễm, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr.425 – 435 Lê Văn Hiệp (2006), Vắc xin học vấn đề bản, Nhà xuất Y học, phần Dự án tiêm chủng mở rộng Quốc gia (2005), Tổng kết công tác tiêm chủng mở rộng năm 2005, Hà Nội, Trần Tử An (2005), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, Phần 7, tr81-86 Dự án Tiêm chủng mở rộng (2015), Báo cáo tổng kết tiêm chủng mở rộng 2014 Tạp chí YHDP 32, pp 123-126 Dự án Tiêm chủng mở rộng (2014), Báo cáo tổng kết tiêm chủng mở rộng 2013 Tạp chí YHDP 16, pp 112-116 Nguyễn Thị Kê cs Nghiên cứu tiếp thu công nghệ xây dựng quy trình sản xuất vắc xin thương hàn Đề tài cấp nhà nước KC11-11B, Nghiệm thu 5/2001 Đỗ Thủy Ngân (2000) Nghiên cứu sản xuất vắc xin mẫu chuẩn quốc gia viêm gan B từ huyết tương người dung để kiểm định vắc xin viêm gan B sản xuất Việt Nam Luận án Tiến sỹ sinh học, 2000 10 Huỳnh Phƣơng Liên (2007) cs Nghiên cứu sản xuất vắc xin viêm não mẫu chuẩn VNR203 dùng kiểm định chất lượng vắc xin VNNB Đề tài nhánh cấp nhà nước KC10-10, nghiệm thu 1/2005 11 Hoàng Thị Liên (2000) Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn hiệu lực cho mẫu chuẩn quốc gia văcxin uống phòng bại liệt Luận án Tiến sỹ y học, 2000 12 Hoàng Minh Hiền (2001) Nghiên cứu văcxin mẫu chuẩn quốc gia phòng bệnh dại Luận án Tiến sỹ Y học, 2001 53 13 Nguyễn Mai Hƣơng (2018) Nghiên cứu tính ổn định cơng hiệu xác định mối tương quan hai phương pháp tạo đám hoại tử (PFU) liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia Việt Nam Luận văn thạc sỹ y học 14 Nguyễn Đình Bảng (2003) cs Nghiên cứu sản xuất số mẫu chuẩn quốc gia vắc xin sinh phẩm để tiêu chuẩn hóa sản phẩm vắc xin sinh phẩm Việt Nam Đề tài cấp nhà nước KC-10-01, nghiệm thu 12/2004 15 Hoàng Quang Huy (2003) Đánh giá chất lượng kháng độc tố uôn ván dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Luận văn thạc sỹ y học, 2003 16 Phạm Văn Hùng (2005) Nghiên cứu tính ổn định vắc xin BCG mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam lần thứ Luận văn thạc sỹ y học, 2005 17 Lê Văn Hiệp (2006) cs, “Sự tương quan độ ẩm tồn dư tính ổn định nhiệt vắc xin BCG sống – đơng khơ”, Tạp chí Y học Dự phịng, XVI (2(81) phụ bản), 82-85 Tiếng Anh 18 WHO/IVB 11.11 (2013), Manual for Quality Control of Diphtheria, Tetanus and Pertussis Vaccines April 2013 19 WHO (2015), Expert committee on Biological Stadardization WHO technical Report Series No 993, 2015 20 WHO/BS/10.2150 (2010), Calibration of Replacement WHO International Standard for Tetanus Toxoid Adsorbed 21 WHO (2004), “Part 2: Validation”, A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements, pp.63 - 87 22 WHO (2013), Manual for the establishment of national and other secondary standards for vaccines, Vol Vii,Viii WHO/IBV/11.03 23 Centers for Disease Control and Prevention (2013), Advisory committee on immunization practices (ACIP) recommended immunization schedules for persons aged through 18 years and adults aged 19 years and older United States MMWR, 62(S1), 1-19 54 24 Centers for Disease Control and Prevention (2013), Vaccine safety and adverse events 25 Fukumi H et al (2015), Vaccination, International medical foundation of Japan Tokyo 1-176 26 Plotkin S.A (2010), Immunologic correlates of protection induced by vaccination Clinical and Vaccine Immunology, 17(7), 1055-1065 27 Plotkin S.A (2010) Immunologic correlates of protection induced by vaccination Clinical and Vaccine Immunology, 17(7), 1055-1065 28 WHO (2016) Requirements for Preparation and Calibration National Standard Subtances of Biologics, pp.1-6 29 WHO (2017), Manual of laboratory methods: for testing of vaccines used in the WHO expanded Programme on Immunization, World Health Organization Geneva 30 WHO (2006), Recommendations for the preparation, characterization and establishment of international and other biological reference standards WHO Technical Report Series, No 932 Annex 31 WHO (2014), Recommendations to assure the quality, safety and efficacy of tetanus vaccines (adsorbed) WHO Technical Report Series, No 800, and Annex of WHO Technical Report Series, No 927 32 WHO (2011), Manual for the establishment of National and other secondary stabdards for vaccines 33 WHO (2013) Guidelines for preparation, characterization and establishment of International and other standard and refneuce for biological substances N 800, Annex 2013 34 Supaporn Phumiamorn (2010) Reviewing preparation and collaborative study of regional working reference preparation of Japanese encephalitis vaccines, Institute of biological Products 2010, Thai Lan 35 WHO (2009) Report of fourth informal meeting to develop regional working reference standard for pertussis and Japanese encephalitis vaccines, Bangkok, Thai Lan 55 36 Hmwe H Kyu et al (2017), Mortality from tetanus between 1990 and 2015: findings from the global burden of disease study MC Public Health 17, 179 (2017) Các trang Wesite 37 http://www.biomedcentral.com/1472-6750/11/102 38 http://www.biomedcentral.com/1472-6750/11/102 39 https://ourworldindata.org/tetanus 40 https://www.who.int/immunization/monitoring_surveillance/burden/vpd/surveil lance_type/passive/tetanus/en/ 41 https://www.healthlinkbc.ca/healthlinkbc-files/dtap-ipv-hib-vaccine 56 ... mẫu chuẩn vắc xin quốc gia có vắc xin mẫu chuẩn quốc gia uốn ván Nhằm thực phẩn nhánh đề tài cấp nhà nước, tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên cứu đánh giá chất lƣợng dự đoán hạn dùng vắc xin uốn ván. .. để nghiên cứu đánh giá chất lượng dự đốn hạn dùng lơ mẫu chuẩn dự tuyển RT5-2017 Vắc xin MCQG dự tuyển uốn ván đạt yêu cầu tiêu MCQG vắc xin đơng khơ mẫu dự tuyển RT5-2017 cơng nhận MCQG vắc xin. .. ván dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam? ?? với mục tiêu sau: Mục tiêu thứ nhất: Đánh giá chất lượng vắc xin uốn ván dự tuyển MCQG Việt Nam đạt chất lượng theo tiêu chuẩn WHO Mục tiêu thứ 2: Dự