Đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam của bài thuốc ngũ tử diễn tông hoàn trên chuột nhắt trắng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ HUỲNH THỊ LƯU KIM HƯỜNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HƯỚNG SINH DỤC NAM CỦA BÀI THUỐC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC CỔ TRUYỀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ HUỲNH THỊ LƯU KIM HƯỜNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HƯỚNG SINH DỤC NAM CỦA BÀI THUỐC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG Chun ngành: Y HỌC CỔ TRUYỀN Mã số: 60 72 02 01 Luận văn Thạc sĩ Y học Cổ Truyền NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS.NGUYỄN PHƯƠNG DUNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan luận văn cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tác giả luận văn HUỲNH THỊ LƯU KIM HƯỜNG MỤC LỤC Trang bìa phụ Mục lục Trang ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 HORMON SINH DỤC NAM .4 1.1.1 Bài tiết, vận chuyển chuyển hoá hormon sinh dục nam 1.1.2 Trục hạ đồi – tuyến yên – tuyến sinh dục 1.1.3 Vai trò testosteron thể 1.2 SUY SINH DỤC NAM THEO YHHĐ 1.2.1 Phân loại suy sinh dục nam 1.2.2 Triệu chứng suy sinh dục nam 10 1.2.3 Tiêu chuẩn chẩn đoán suy giảm sinh dục nam: 10 1.2.4 Điều trị suy giảm sinh dục nam theo YHHĐ 11 1.3 QUAN ĐIỂM VỀ SUY SINH DỤC NAM THEO YHCT 13 1.3.1 Bệnh danh theo YHCT 13 1.3.2 Nguyên nhân – Cơ chế sinh bệnh 13 1.3.3 Bệnh cảnh lâm sàng điều trị theo YHCT 15 1.4 CÁC DƯỢC LIỆU NGHIÊN CỨU TRONG ĐỀ TÀI 17 1.4.1 Câu kỷ tử (Fructus Licii) 17 1.4.2 Thỏ ty tử (Cuscuta sinensis Lamk.) 19 1.4.3 Xa tiền tử (Semen Plantaginis) 19 1.4.4 Phúc bồn tử (Fructus Rubi) 20 1.4.5 Ngũ vị tử 21 1.5 CỞ SỞ LÝ LUẬN NGHIÊN CỨU BÀI THUỐC 22 1.5.1 Nguồn gốc thuốc 22 1.5.2 Cơ sở lý luận thuốc theo YHCT 22 1.5.3 Tác dụng thuốc theo YHCT YHHĐ 22 1.6 MƠ HÌNH SUY GIẢM SINH DỤC NAM TRÊN THỰC NGHIỆM 23 1.6.1 Mơ hình mào gà 23 1.6.2 Mô hình mào gà trống thiến 24 1.6.3 Mơ hình chuột nhắt trắng đực nhược sinh dục 24 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 27 2.1.1 Thuốc nghiên cứu 27 2.1.2 Thuốc đối chứng 27 2.1.3 Hóa chất 27 2.1.4 Thiết bị, dụng cụ 27 2.2 ĐỘNG VẬT THỬ NGHIỆM 28 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.3.1 Kiểm tra chất lượng dược liệu nghiên cứu 28 2.3.2 Phương pháp chiết xuất cao đặc 28 2.3.3 Khảo sát tiêu chuẩn chất lượng cao đặc Ngũ tử diễn tông 29 2.3.4 Độc tính cấp 33 2.3.5 Thử nghiệm dược lý 34 2.4 XỬ LÝ SỐ LIỆU THỰC NGHIỆM 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ 37 3.1 KIỂM TRA TIÊU CHUẨN CHẤT LƯỢNG DƯỢC LIỆU .37 3.1.1 Câu kỷ tử 37 3.1.2 Ngũ vị tử 39 3.1.3 Xa tiền tử 41 3.1.4 Thỏ ty tử 43 3.1.5 Phúc bồn tử 44 3.2 CHIẾT XUẤT CAO ĐẶC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN 45 3.3 MỘT SỐ TIÊU CHUẨN CỦA CAO THUỐC 45 3.3.1 Hình thức cảm quan 45 3.3.2 Độ ẩm 46 3.3.3 Độ tro 46 3.3.4 Định tính diện dược liệu cao thuốc 47 3.4 ĐỘC TÍNH CẤP ĐƯỜNG UỐNG 48 3.5 TÁC DỤNG ANDROGEN CỦA CAO ĐẶC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN TRÊN CHUỘT NHƯỢC NĂNG SINH DỤC 49 3.5.1 Khảo sát hàm lượng testosteron 49 3.5.2 Khảo sát trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt 51 3.5.3 Khảo sát trọng lượng nâng hậu môn 52 3.5.4 Khảo sát trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc 53 3.6 TÁC DỤNG ANDROGEN CỦA CAO ĐẶC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN TRÊN CHUỘT BÌNH THƯỜNG 55 3.6.1 Khảo sát hàm lượng testosteron 55 3.6.2 Khảo sát trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt 56 3.6.3 Khảo sát trọng lượng nâng hậu môn 57 3.6.4 Khảo sát trọng lượng tinh hoàn 58 3.6.5 Khảo sát trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc 59 CHƯƠNG BÀN LUẬN 61 4.1 TÁC DỤNG ANDROGEN CỦA CAO ĐẶC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN 61 4.1.1 Hướng tác dụng androgen 61 4.1.2 Hướng tác dụng đồng hóa 64 4.2 TÍNH AN TỒN CỦA BÀI THUỐC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN .66 4.3 ĐIỂM MỚI CỦA ĐỀ TÀI 67 4.4 HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI 67 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68 5.1 KẾT LUẬN 68 5.2 KIẾN NGHỊ 69 i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TIẾNG ANH TIẾNG VIỆT ACTH Adreno Cortico Tropin Hormone Hormon hướng vỏ thượng thận AMH Anti – Muller Hormone Hormon kháng Muller DHEA Dehydroepiandosteron DTH Dihydrotestosteron FSH Follicle – Stimulating Hormone Hormon kích thích tinh hồn GnRH Gonadotropin Releasing Hormone Hormon phóng thích Gonadotropin GPX Glutathione peroxidase LH Luteinizing Hormone Hormon hướng hoàng thể NT 0,32 Ngũ tử liều 0,32 g/kg NT 0,64 Ngũ tử liều 0,64 g/kg SHBG Sex hormon binding globulin Globulin gắn kết hormon sinh dục SOD Superoxide dismutase SSD Suy sinh dục YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại Tes Testocaps Thuốc đối chứng Andriol Testoscaps TM 40 mg ii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần tác dụng vị thuốc thuốc 22 Bảng 3.1 Độ ẩm Câu kỷ tử 37 Bảng 3.2 Tạp chất Câu kỷ tử 38 Bảng 3.3 Tro toàn phần Câu kỷ tử 38 Bảng 3.4 Tiêu chuẩn dược liệu Câu kỷ tử 38 Bảng 3.5 Độ ẩm Ngũ vị tử 39 Bảng 3.6 Tạp chất Ngũ vị tử 40 Bảng 3.7 Tro toàn phần Ngũ vị tử 40 Bảng 3.8 Tỷ lệ vụn nát Ngũ vị tử 40 Bảng 3.9 Tiêu chuẩn dược liệu Ngũ vị tử 41 Bảng 3.10 Độ ẩm Xa tiền tử 41 Bảng 3.11 Tạp chất Xa tiền tử 41 Bảng 3.12 Tro toàn phần Xa tiền tử 42 Bảng 3.13 Tro không tan acid Xa tiền tử 42 Bảng 3.14 Chỉ số trương nở Xa tiền tử 42 Bảng 3.15 Tiêu chuẩn dược liệu Xa tiền tử 43 Bảng 3.16 Độ ẩm Thỏ ty tử 43 Bảng 3.17 Tro toàn phần Thỏ ty tử 43 Bảng 3.18 Tiêu chuẩn dược liệu Thỏ ty tử 44 Bảng 3.19 Độ ẩm Phúc bồn tử 44 Bảng 3.20 Tạp chất Phúc bồn tử 44 Bảng 3.21 Tro toàn phần Phúc bồn tử 45 Bảng 3.22 Tiêu chuẩn dược liệu Phúc bồn tử 45 Bảng 3.23 Kết chiết xuất cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn 45 Bảng 3.24 Độ ẩm cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn 46 Bảng 3.25 Độ tro tồn phần cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn 46 Bảng 3.26 Thử nghiệm độc tính cấp cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn 48 iii Bảng 3.27 Hàm lượng testosteron lô chuột nhắt trắng đực nhược sinh dục 50 Bảng 3.28 Trọng lượng túi tinh-tuyến tiền liệt lô chuột nhắt trắng đực nhược sinh dục 51 Bảng 3.29 Trọng lượng nâng hậu môn lô chuột nhắt trắng đực nhược sinh dục 52 Bảng 3.30 Trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc lô chuột nhắt trắng đực nhược sinh dục 53 Bảng 3.31 Hàm lượng testosteron lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 55 Bảng 3.32 Trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 56 Bảng 3.33 Trọng lượng nâng hậu mơn lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 57 Bảng 3.34 Trọng lượng tinh hồn lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 58 Bảng 3.35 Trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc lô chuột nhắt trắng đực bình thường 59 iv DANH MỤC HÌNH VẼ, BIỂU ĐỒ Hình 1.1 Sơ đồ ngun nhân – chế gây bệnh Suy sinh dục nam theo YHCT 15 Hình 1.2 Sơ đồ chiết xuất cao đặc toàn phần thuốc 29 Hình 3.1 Sắc kí lớp mỏng dược liệu Câu kỷ tử chuẩn (C) Câu kỷ tử thử (T) 37 Hình 3.2 Sắc kí lớp mỏng dược liệu Ngũ vị tử chuẩn (C) Ngũ vị tử thử (T) 39 Hình 3.3 Cao Ngũ tử diễn tơng hồn 46 Hình 3.4 Sắc ký lớp mỏng Câu kỷ tử cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn 47 Hình 3.5 Sắc ký lớp mỏng Ngũ vị tử cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn 48 Biểu đồ 3.1 Hàm lượng testosteron lô chuột nhược sinh dục 50 Biểu đồ 3.2 Trọng lượng túi tinh – tiền liệt tuyến lô chuột nhược sinh dục 52 Biểu đồ 3.3 Trọng lượng nâng hậu môn lô chuột nhược sinh dục 53 Biểu đồ 3.4 Trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc lô chuột nhược sinh dục 55 Biểu đồ 3.5 Hàm lượng testosteron lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 56 Biểu đồ 3.6 Trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 57 Biểu đồ 3.7 Trọng lượng nâng hậu mơn lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 58 Biểu đồ 3.8 Trọng lượng tinh hồn lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 59 Biểu đồ 3.9 Trọng lượng súc vật lơ chuột nhắt trắng đực bình thường 60 61 CHƯƠNG 4.1 BÀN LUẬN TÁC DỤNG ANDROGEN CỦA CAO ĐẶC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN 4.1.1 Hướng tác dụng androgen 4.1.1.1 Trên chuột nhược sinh dục Cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn thể tác dụng làm tăng hàm lượng testosteron huyết tương, nhiên liều thử nghiệm 0,32 g/kg có xu hướng tăng chưa đạt ý nghĩa thống kê Đối với liều thử nghiệm 0,64 g/kg tăng đạt ý nghĩa thống kê Ở chuột nhược sinh dục, tổng hợp testosteron chủ yếu diễn theo đường thượng thận Androstenediol Androstenedion tiền chất quan trọng tạo thành testosteron tuyến thượng thận Hai tiền chất chuyển hóa phân tử cholesterol qua nhiều giai đoạn trung gian Cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn có tác dụng làm tăng testosteron liều 0,64 g/kg kích thích tuyến thượng thận thực vai trò này, đồng thời làm tăng trọng lượng quan sinh dục đực (túi tinh, tiền liệt tuyến) testosteron biến đổi thành dehydrotestosteron, sau dehydrotestosteron liên kết với thụ thể màng tế bào đích, từ phức hợp kích thích hàng loạt phản ứng tổng hợp protein tế bào đích, làm tăng sinh tế bào đích dẫn đến tăng trọng lượng túi tinh tuyến tiền liệt – hai quan sinh dục phụ nhạy với androgen Như cao Ngũ tử diễn tơng hồn liều thử nghiệm 0,64 g/kg khơi phục thiếu hụt testosteron mơ hình dược lý thực nghiệm So với nghiên cứu tác giả Nguyễn Phương Dung Nguyễn Thái Dương khảo sát tác dụng thuốc Tả quy ẩm (thành phần thuốc có vị thuốc Câu kỷ tử - có vai trị làm Thần thuốc) mơ hình tiêu đánh giá tương tự [4] Nhận thấy rằng, liều Tả quy ẩm 1,6 g/kg Ngũ tử diễn tơng hồn liều 0,64 g/kg: Hàm lượng testosteron (ng/ml) 0,441 0,543, nghiên cứu cải thiện hàm lượng testosteron chuột nhược gấp 1,23 Sự thay 62 đổi phụ thuộc vào hoạt chất chứa thuốc, nghiên cứu tác giả Nguyễn Thái Dương Nguyễn Phương Dung hoạt chất saponin [4] Với nghiên cứu chúng tôi, nghiên cứu chưa khảo sát hoạt chất thuốc với vị thuốc có vai trị chủ yếu tỷ lệ lượng thuốc nhiều Thỏ ty tử Câu kỷ tử thành phần hai vị thuốc có flavon [9] [46], vậy, có khả hoạt chất thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn flavon Tuy nhiên khơng nằm mục tiêu nghiên cứu nên phạm vi nghiên cứu không khảo sát, để làm rõ vấn đề tiến hành thêm xác định họat chất cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn, đồng thời so sánh tác dụng thuốc với Trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt (mg%) lần lượt: 70,57 46,74 nghiên cứu tác giả Nguyễn Thái Dương Nguyễn Phương Dung [4] gấp 1,51 lần nghiên cứu Trọng lượng quan sinh dục phụ tăng tăng kéo theo hàm lượng testosteron, nhiên so với lô chứng chuột bình thường tỷ lệ phần trăm cải thiện trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt nghiên cứu tác giả Nguyễn Thái Dương Nguyễn Phương Dung [4] 25,72%, nghiên chúng tơi 18,28% chấp nhận Từ kết nghiên cứu tác giả Jianxiong cộng [46], tác giả đưa nhận định rằng, chế làm cải thiện lại hàm lượng testosteron Thỏ ty tử tăng biểu gen mRNA protein thụ thể androgen thận tinh hoàn Dựa vào kết này, thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn với vị thuốc chủ trị Thỏ ty tử dự đốn chế làm cải thiện thuốc thông qua tăng biểu gen mRNA protein thụ thể androgen thận 4.1.1.2 Trên chuột bình thường Ở động vật bình thường tổng hợp testosteron diễn chủ yếu tinh hoàn phần nhỏ tuyến thượng thận Ở tế bào Leydig tinh hoàn, phân tử cholesterol màng tế bào vận chuyển vào bên trong, chuyển hóa thành pregnenolon, qua hàng loạt phản ứng xúc tác enzyme để tạo thành testosteron 63 Cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn liều thử nghiệm 0,32 g/kg liều 0,64 g/kg không làm thay đổi hàm lượng testosteron huyết tương trọng lượng quan sinh dục (túi tinh, tuyến tiền liệt) Ngược lại, lô dùng Testocaps làm tăng lượng testosteron trọng lượng quan sinh dục phụ đạt ý nghĩa thống kê Kết hoàn toàn phù hợp với kết nghiên cứu tác giả Nguyễn Thái Dương Nguyễn Phương Dung [4] Từ kết cho thấy sử dụng testosteron bổ sung từ vào làm tăng testosteron ngoại sinh khơng chịu điều hịa trục hạ đồi – tuyến yên – tuyến sinh dục nên tăng hàm lượng testosteron tác dụng mơ đích nhạy cảm làm tăng trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt, cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn khơng làm tăng testosteron cao thuốc kích thích tuyến thượng thận làm tăng tiết testosteron nội sinh, nên tác dụng chuột bình thường chịu chi phối trục hạ đồi – tuyến yên – tuyến sinh dục Như vậy, cao Ngũ tử diễn tơng hồn làm tăng testosteron nội sinh phát huy trường hợp thể bị thiếu hụt bệnh lý Các triệu chứng bệnh suy sinh dục nam rối loạn cương, xuất tinh sớm, giảm số lượng tinh trùng mô tả chứng theo YHCT: dương nuy, di tinh, mà chế bệnh sinh chủ yếu liên quan đến chức tạng Thận Thận với chức tàng tinh (mà chủ yếu tinh sinh dục), lo lắng tơ tưởng đến chuyện tình dục mức sinh chứng di tinh Hoặc suy nghĩ, lo sợ mức mắc bệnh lâu ngày dẫn đến: dương nuy Biện chứng luận trị YHCT nêu rõ: “Chữa bệnh phải tìm gốc, bệnh cấp chữa ngọn, bệnh hỗn chữa vào gốc” Những biểu bệnh: di tinh, dương nuy chủ yếu chức tạng Thận bị ảnh hưởng Trong đó, thể bệnh Thận khí bất túc – biểu hiện: không mộng mà xuất tinh không kể ngày đêm, tiểu tiện nhỏ giọt không dứt, sợ lạnh, tay chân lạnh, tinh thần mệt mỏi, sắc mặt tái nhợt, khó thở tự mồ hơi, chất lưỡng nhạt rêu mỏng, mạch trầm huyền tế – từ lâu người dân sử dụng thuốc Ngũ tử diễn tông hoàn để chữa cho bệnh cảnh 64 Bài thuốc phối ngẫu chặt chẽ Trong thuốc có Thỏ ty tử bổ dương ích âm, cố tinh súc niệu; Câu kỷ tử tư bổ Can Thận; Phúc bồn tử ích Thận trợ dương, cố tinh khơng cho rị rỉ ngồi; Ngũ vị tử liễm Phế tư Thận, sáp tinh tả Bốn vị thuốc nói tư Thận ơn dương, có tác dụng bổ tinh thu sáp Xa tiền tử lợi thủy tiết nhiệt khiến cho bổ có tả, sáp có lợi, tồn gộp lại đạt hiệu ích Thận ơn dương Bên cạnh đó, thành phần dược liệu thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn có tác dụng hướng sinh dục nam như: Câu kỷ tử chứng minh bảo vệ chuột khỏi bị tổn thương hệ thống sinh sản bisphenol A gây cách tăng hoạt động SOD GPX, tăng trọng lượng quan sinh dục chuột, tăng hiệu giao cấu, tăng tần suất xuất tinh rút ngắn thời gian xuất tinh trễ Thỏ ty tử cải thiện tình trạng giảm nồng độ testosteron cách khôi phục lại nồng độ testosteron, thụ thể androgen mRNA tăng biểu protein thận tinh hoàn Phúc bồn tử tác dụng tăng cường trục hạ đồi – tuyến yên – tuyến sinh dục Như vậy, phối hợp dược liệu thuốc Ngũ tử diễn tông hoàn đạt mục tiêu điều trị cho trường hợp suy sinh dục nam cải thiện nồng độ testosteron máu, vừa có lợi việc điều chỉnh rối loạn thường gặp suy giảm nồng độ testosteron máu 4.1.2 Hướng tác dụng đồng hóa 4.1.2.1 Trên chuột nhược Cao Ngũ tử diễn tơng hồn liều 0,32 g/kg làm trọng lượng nâng hậu môn thay đổi theo xu hướng tăng chưa đạt ý nghĩa thơng kê Cao Ngũ tử diễn tơng hồn liều 0,64 g/kg làm tăng trọng lượng nâng hậu môn chuột nhược sinh dục đạt ý nghĩa thống kê Từ kết cho thấy cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn có tác dụng đồng hóa lên thụ thể nhạy cảm androgen So sánh với nghiên cứu tác giả Nguyễn Thái Dương Nguyễn Phương Dung [4] liều Tả quy ẩm thử nghiệm không làm tăng trọng lượng nâng hậu môn Như vậy, nghiên cứu chúng tơi có tác dụng đồng hóa tốt 65 4.1.2.2 Trên chuột bình thường Cao đặc Ngũ tử diễn tơng hồn khơng làm tăng trọng lượng nâng hậu mơn chuột bình thường, điều giải thích hiệu ứng ức chế ngược, cao Ngũ tử diễn tơng hồn tổng hợp testosteron chủ yếu diễn theo đường thượng thận hàm lượng testosteron tăng cao thể bình thường điều hịa cách ức chế phóng thích LH từ giảm tiết testosteron, lượng testosteron bị ức chế nên không tác động mức đến quan có thụ thể androgen, đó, trọng lượng nâng hậu mơn so với nhóm chứng bình thường thay đổi khơng có ý nghĩa  Sự thay đổi trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc Như trình bày, thay đổi trọng lượng chuột sau dùng thuốc khơng biểu hoạt tính androgen hay đồng hóa mà phản ánh tác dụng phụ thuốc nhiễm khuẩn Trên chuột nhược So với lơ chứng nhóm, trọng lượng súc vật trước dùng thuốc không khác biệt trọng lượng súc vật sau dùng thuốc khác biệt có ý nghĩa thống kê Cụ thể, lô thử nghiệm cao Ngũ tử diễn tơng hồn, trọng lượng khơng thay đổi suốt trình sử dụng thuốc lại thấp so với tăng trọng lượng lô chứng nhược lô dùng Testocaps Tuy nhiên, so sánh lơ thử nghiệm trọng lượng trước sau dùng thuốc lô chứng nhược lô sử dụng Testocaps tăng đạt ý nghĩa thống kê Điều giải thích, nhóm chứng nhược, suy giảm testosteron cắt bỏ tinh hoàn, giảm ức chế Leptin, tăng trọng lượng súc vật liên quan đến tăng tích tụ mỡ thể [28] Đối với nhóm sử dụng Testocaps tăng trọng lượng giải thích tác dụng phụ sử dụng Testocaps kéo dài (15 ngày) làm tăng cân, tăng giữ muốn nước [10][15], tác dụng testosteron làm dãn nở sợi cơ, làm tăng khối lượng làm tăng trọng 66 So với nghiên cứu tác giả Seiwa Michihara cộng [38] mơ hình chuột thiến ghi nhận thay đổi trọng lượng tương tự nghiên cứu Ngũ tử diễn tơng hồn trước sau sử dụng thuốc so với nhóm chứng Mặc dù chưa lý giải chế dựa đặc điểm gợi ý thuốc khơng có tác dụng làm tăng cân, nghiên cứu rộng có ứng dụng sử dụng đối tượng suy giảm testosteron có béo phì Trên chuột bình thường Trọng lượng chuột trước dùng thuốc sau dùng thuốc không thay đổi so với nhóm chứng lơ thử nghiệm Lơ sử dụng Testocaps tăng trọng lượng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng, lý giải tác dụng phụ testocaps sử dụng kéo dài (15 ngày), thêm vào tăng trọng lượng khối Trên lô sử dụng liều Ngũ tử diễn tơng hồn liều 0,32 g/kg liều 0,64 g/kg thay đổi trọng lượng chuột trước sau dùng thuốc lô khơng có ý nghĩa, điều xem tác dụng ưu thuốc, nhiên để làm rõ tác dụng có thật có ý nghĩa hay tiến hành thử nghiệm kéo dài 4.2 TÍNH AN TỒN CỦA BÀI THUỐC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN Độc tính cấp Trong thử nghiệm độc tính cấp, liều cao bơm qua kim đầu tù cho chuột uống 15,8 g cao/kg thể trọng chuột (tương đương 79 g cao/kg người, khoảng 454,25 g dược liệu) Ở liều này, thuốc dạng hỗn dịch đậm đặc vừa đủ qua đầu kim để bơm thuốc vào dày chuột Sau uống thuốc, chuột ăn uống, hoạt động tiết bình thường, khơng thấy có biểu ngộ độc chuột khơng có chuột chết vịng 72 14 ngày sau uống thuốc Do chưa xác định LD50 cao chuột nhắt trắng theo đường uống Theo liều lượng sử dụng “Chứng trị chuẩn thằng”, khối lượng dược liệu toàn thuốc sử dụng ngày khoảng 27 g Cho thấy khoảng cách an toàn 67 rộng, dùng liều với lượng gấp 16,8 lần lượng thường sử dụng, liều tối đa bơm qua kim chưa ghi nhận LD50 cao chuột nhắt trắng theo đường uống 4.3 ĐIỂM MỚI CỦA ĐỀ TÀI Đề tài làm sáng tỏ tác dụng hướng sinh dục nam dùng thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn để điều trị Suy sinh dục nam, góp phần hỗ trợ điều trị bệnh theo YHHĐ, hạn chế tác dụng phụ phải sử dụng liệu pháp testosteron bổ sung 4.4 HẠN CHẾ CỦA ĐỀ TÀI - Chưa khảo sát độc tính bán trường diễn cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn - Chưa định tính, định lượng hoạt chất cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn - Chưa đánh giá số tác dụng sinh học khác cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn: số lượng tinh trùng, mơ học tinh hồn - Chưa xây dựng mơ hình bệnh lý chuột để khảo sát tốt tác dụng thuốc theo thể bệnh theo YHCT - Chưa khảo sát tác dụng cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn lâm sàng Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 68 CHƯƠNG 5.1 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trong thời gian thực đề tài với thời gian điều kiện giới hạn, thu kết sau: - Xác định Dmax cao Ngũ tử diễn tơng hồn 15,8 g cao/kg chuột, gấp 24,69 lần liều có tác dụng dược lý, tương đương gấp 16,8 lần liều dùng người - Cao Ngũ tử diễn tơng hồn liều 0,64 g/kg chuột có tác dụng hướng androgen chuột nhược biểu qua cải thiện hàm lượng testosteron, trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt - Cao Ngũ tử diễn tơng hồn liều 0,64 g/kg chuột có tác dụng đồng hóa chuột nhược qua việc cải thiện trọng lượng nâng hậu mơn - Cao Ngũ tử diễn tơng hồn liều 0,32 g/kg chuột liều 0,64 g/kg chuột tác dụng hướng androgen chuột bình thường: thay đổi hàm lượng testosteron trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê - Cao ngũ tử diễn tơng hồn khơng có tác dụng đồng hóa: thay đổi trọng lượng nâng hậu mơn khơng có khác biệt chuột bình thường hai liều 0,32 g/kg chuột liều 0,64 g/kg chuột Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 69 5.2 KIẾN NGHỊ Chúng đề nghị thực nghiên cứu sau: - Khảo sát độc tính bán trường diễn cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn chuột nhắt trắng - Định tính, định lượng hoạt chất cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn - Khảo sát hoạt tính sinh học khác cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn: mơ học tinh hoàn, số lượng tinh trùng - Xây dựng mơ hình bệnh lý để đánh giá tác dụng thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn theo thể bệnh YHCT - Từng bước thử nghiệm lâm sàng đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn người Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Nam Anh (2015), Rối loạn hormon khiến nhiều nam giới vô sinh, Cổng thông tin điện tử Bộ y tế, truy cập ngày 06/06-2016, trang web http://moh.gov.vn/news/pages/tinkhac.aspx?ItemID=2507 Trần Quán Anh Nguyễn Bửu Triều (2009), "Bệnh học giới tính nam", Nxb Y học, tr 24 - 30, 232 - 246 Đỗ Trung Đàm (2014), "Phương pháp xác định độc tính thuốc", Nxb Y học, Hà Nội, tr 17-26;59-67 Nguyễn Phương Dung Nguyễn Thái Dương (2014), Đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam cao chiết Tả quy ẩm chuột nhắt trắng, Y học cổ truyền, Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh Trình Nhu Hải Lý Gia Cảnh (2004), "Trung Quốc danh phương", Nxb Y học, tr 359-360 Bành Văn Khìu (2009), "Kết hợp Đơng - Tây y chữa số bệnh khó", Nxb Y học, Hà Nội, tr 249-251, 256-260 Trần Văn Kỳ (2016), "Thực hành nam khoa Đông y", Nxb Đà Nẵng, Tp Hồ Chí Minh, tr 7-10,14,19,95-97,244-260 Hạnh Lâm Nguyễn Văn Minh (2000), Dược tính nam, Vol 1, Nxb Hải Phịng Đỗ Tất Lợi (2004), "Những thuốc vị thuốc Việt Nam", Nxb Y học, tr 215 216, 395 - 396,850 - 853, 872 - 874 Mims (2016), "Vidal 2015/2016 Việt Nam", Ng Hui Ping cộng sự., chủ biên, Ben Yeo, tr 605 Nguyễn Thành Như (2013), "Nam khoa lâm sàng", Nxb Tổng hợp thành phố Hồ Chí Minh, tr 35 - 43, 108 - 111 N Phương (2008), Gia tăng bệnh nhân nam suy tuyến sinh dục khởi phát muộn, Báo người lao động điện tử, truy cập ngày 06/06-2016, trang web http://nld.com.vn/suc-khoe/gia-tang-benh-nhan-nam-suy-tuyen-sinh-duc-khoiphat-muon-217180.htm Đỗ Trung Quân (2005), "Bệnh nội tiết chuyển hóa thường gặp", Nxb Y học, tr 104-108 Đỗ Trung Quân (2013), "Bệnh nội tiết chuyển hóa", Nxb Giáo dục Việt Nam, tr 410 - 413 QuocBaoNet (2014), Andriol testocaps, truy cập ngày 01-08-2017, trang web http://www.benhhoc.com/thuoc/3621-Andriol-testocaps.html Nguyễn Thiện Quyến (2008), "Chẩn đoán phân biệt chứng trạng Đơng y", Nxb Văn hóa dân tộc, tr 1273-1277 Bộ Y tế (1996), "Quy chế đánh giá tính an tồn hiệu lực thuốc cổ truyền", tr 11 Bộ Y tế (2009), "Dược điển Việt Nam IV", Nxb Y học, tr 713,818 819,825,845,902-903 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 19 Đoàn Minh Thụy cộng (2010), "Tác dụng viên nang Hồi Xuân Hoàn chứng tinh hoàn chuột cống trắng bị biến tổn thương nhiệt", Tạp chí Dược học 408, tr 10-13 20 Viện nghiên cứu trung y (1995), "Đông dược học thiết yếu", Nxb Mũi Cà Mau, tr 516-517 21 Trần Mỹ Tiên cộng (2012), "Nghiên cứu tác dụng hướng sinh dục nam Ba kích (Morindaofficinalis How) ", Tạp chí Y học Thành phố Hồ Chí Minh 16, tr 192-198 22 Nguyễn Thị Thu Ba Tổ dược lý (1996), "Các phương pháp thực nghiệm dược lý bản, Kỷ yếu công nghiên cứu khoa học 30 năm thành lập Viện Y dược học dân tộc", tr 308-318 23 Viện dược liệu (2005), "Phương pháp nghiên cứu tác dụng thuốc từ dược thảo", tr 220-229 24 Phạm Đình Lựu (2008), "Sinh lý học", Nxb Y học, tr 138 - 142 Tiếng Anh 25 Chen, J., et al (2012), "[Effects of drug serum of plantaginis semen on bone formation function of rat osteoblast in vitro]", Zhong Yao Cai 35(11), pp 18204 26 Chen, Z and Duan, X (1990), "[Mechanism of the antiasthmatic effect of total coumarins in the fruit of Cnidium monnieri (L.)Cuss]", Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 15(5), pp 304-5, 320 27 Cheng, J., et al (2015), "An evidence-based update on the pharmacological activities and possible molecular targets of Lycium barbarum polysaccharides", Drug Des Devel Ther 9, pp 33-78 28 De Pergola, G (2000), "The adipose tissue metabolism: role of testosterone and dehydroepiandrosterone", Int J Obes Relat Metab Disord 24 Suppl 2, pp S5963 29 G.R Dohle (Chair), S Arver, C Bettocchi, T.H Jones, S Kliesch, M Punab (2014), Male Hypogonadism, accessed 20-03-2016, from https://uroweb.org/guideline/male-hypogonadism/#5 30 He, J M., et al (2015), "Suppression of nuclear factor-kappa B and mitogenactivated protein kinase signalling pathways by goshonoside-F5 extracted from Rubi Fructus", Int Immunopharmacol 24(2), pp 182-90 31 Henderson, Katherine E and Washington University (Saint Louis Mo.) School of Medicine (2009), The Washington manual endocrinology subspecialty consult, The Washington manual subspecialty consult series, Editor^Editors, Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, pp 207 217 32 Iacono, F., et al (1996), "[Value of high-dose pure FSH in the treatment of idiopathic male infertility]", J Urol (Paris) 102(2), pp 81-4 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 33 Kumar, P., et al (2010), "Male hypogonadism: Symptoms and treatment", J Adv Pharm Technol Res 1(3), pp 297-301 34 Lau, B W., et al (2012), "Polysaccharides from wolfberry prevents corticosterone-induced inhibition of sexual behavior and increases neurogenesis", PLoS One 7(4), p e33374 35 Liao, J C., et al (2014), "Antinociceptive and anti-inflammatory activities of Cuscuta chinensis seeds in mice", Am J Chin Med 42(1), pp 223-42 36 Matsuda, H., et al (2002), "Antipruritic effect of Cnidii Monnieri Fructus (fruits of Cnidium monnieri CUSSON)", Biol Pharm Bull 25(2), pp 260-3 37 McPhee, Stephen J editor of compilation, Papadakis, Maxine A editor of compilation, and Rabow, Michael W editor of compilation (2015), "Current medical diagnosis & treatment ", p 81 38 Michihara, S., et al (2013), "A Kampo formula, saikokaryukotsuboreito, improves serum testosterone levels of castrated mice and its possible mechanism", Aging Male 16(1), pp 17-21 39 Nieschlag, E., et al (2005), "Investigation, treatment and monitoring of lateonset hypogonadism in males ISA, ISSAM, and EAU recommendations", Eur Urol 48(1), pp 1-4 40 Phillips, G B., Yano, K., and Stemmermann, G N (1988), "Serum sex hormone levels and myocardial infarction in the Honolulu Heart Program Pitfalls in prospective studies on sex hormones", J Clin Epidemiol 41(12), pp 1151-6 41 Qi, M., et al (2012), "A novel strategy for target profiling analysis of bioactive phenylethanoid glycosides in Plantago medicinal plants using ultra-performance liquid chromatography coupled with tandem quadrupole mass spectrometry", J Sep Sci 35(12), pp 1470-8 42 Romanelli, F., Sansone, A., and Lenzi, A (2010), "Erectile dysfunction in aging male", Acta Biomed 81 Suppl 1, pp 89-94 43 Travison, T G., et al (2006), "The relationship between libido and testosterone levels in aging men", J Clin Endocrinol Metab 91(7), pp 2509-13 44 Tzeng, T F., et al (2016), "Antioxidant-Rich Extract from Plantaginis Semen Ameliorates Diabetic Retinal Injury in a Streptozotocin-Induced Diabetic Rat Model", Nutrients 8(9) 45 Wang, C., et al (2008), "Investigation, treatment and monitoring of late-onset hypogonadism in males: ISA, ISSAM, EAU, EAA and ASA recommendations", Eur J Endocrinol 159(5), pp 507-14 46 Yang, J., et al (2008), "The total flavones from Semen cuscutae reverse the reduction of testosterone level and the expression of androgen receptor gene in kidney-yang deficient mice", J Ethnopharmacol 119(1), pp 166-171 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PHỤ LỤC I Chuột nhắt đực bình thường Hàm lượng testosteron Samples SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg 0.567 0.561 0.686 0.647 0.562 0.567 0.598 0.054 0.747 0.850 0.75 0.853 0.797 0.835 0.805 0.048 0.526 0.536 0.835 0.521 0.529 0.547 0.582 0.124 558 531 644 535 526 554 0.558 0.044 Trọng lượng túi tinh tuyến tiền liệt Samples Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD 360 230 313.32 250.25 158.21 222.08 255.64 71.45 292.96 275.48 517.65 417.50 353.55 545.31 245.71 186.09 207.73 330.71 165.22 342.4 246.31 74.9 351.79 341.72 280 158.46 270.4 62.27 244.11 112.7 400.41 113.47 Trọng lượng nâng hậu môn Samples Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD 212.31 265.6 217 223.85 143.57 197.08 209.90 39.79 169.26 180.32 337.35 235.36 219.68 282.5 237.41 63.63 373.57 225.65 275.45 211.07 224.35 188.4 249.74 255 232.41 175.65 131.15 238.4 130.45 193.84 55.67 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 67.05 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Trọng lượng tinh hoàn Samples Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD 322.69 205.2 286.43 271.25 250 196.56 255.35 48.48 298.52 309.68 301.47 418.57 307.1 326.25 326.93 45.93 300.71 246.96 295.45 319.29 326.52 393.2 249.64 330 306.96 215.38 360.8 343.18 300.99 56.92 313.69 47.9 Trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc Samples SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD II Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg Ptrước 24 21 26 24 27 21 23.83 Psau 26 25 30 26 28 24 26.5 Ptrước 24 26 24 27 23 25 24.83 Psau 27 31 34 28 31 32 30.5 Ptrước 24 24 24 24 23 25 24 Psau 28 23 22 28 23 25 24.83 Ptrước 29 29 24 24 24 24 25.67 Psau 28 29 23 26 25 22 25.5 2.48 2.16 1.47 2.58 0.63 2.64 2.58 2.74 Chuột nhắt đực nhược Hàm lượng testosteron Samples Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD 0.452 0.492 0.446 0.506 0.502 0.503 0.626 0.526 0.557 0.555 0.588 0.568 0.57 0.034 0.51 0.48 0.497 0.497 0.497 0.479 0.493 0.012 0.55 0.556 0.524 0.551 0.547 0.531 0.484 0.027 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 0.543 0.013 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Trọng lượng túi tinh tuyến tiền liệt Samples SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg 22.19 40 25.56 34.33 39.21 36.33 32.94 7.38 55.25 45.2 53.94 45.94 93.1 44.52 56.32 18.60 45.19 43.25 45.83 42.86 43.04 40.38 43.43 1.93 54.17 33.04 46.82 45.56 61.3 39.57 46.74 10.08 Trọng lượng nâng hậu môn Samples Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD 57.81 70.33 70 109.67 71.32 71.21 75.06 17.73 278.06 228 109.39 104.69 164.83 124.84 168.30 70.75 112.22 101.79 72.17 120 63.75 141.2 101.86 29.39 187.27 102.08 90.45 98.75 100.87 213.04 132.08 53.51 Trọng lượng súc vật trước sau dùng thuốc Samples SMP01 SMP02 SMP03 SMP04 SMP05 SMP06 TRUNG BÌNH SD Chứng Testocaps mg/kg Ngũ tử liều 0.32 g/kg Ngũ tử liều 0.64 g/kg Ptruớc 23 25 24 24 27 27 25 Psau 29 30 30 30 38 33 31.67 Ptruớc 22 24 24 24 22 25 23.5 Psau 31 34 30 32 29 31 31.17 Ptruớc 25 24 25 24 21 24 23.83 Psau 27 28 23 26 24 25 25.5 Ptruớc 23 23 23 26 23 23 23.5 Psau 22 24 22 24 23 23 23 1.67 3.38 1.22 1.72 1.47 1.87 1.22 0.89 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... nghiên cứu đánh giá tác dụng hướng sinh dục nam cao thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn chuột nhắt trắng 3 CÂU HỎI NGHIÊN CỨU Bài thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn có tác dụng hướng sinh dục nam thực nghiệm hay... tác dụng điều trị suy sinh dục nam thuốc Ngũ tử diễn tơng hồn Để góp phần làm đánh giá tác dụng thuốc, góp phần làm phong phú thuốc điều trị suy sinh dục nam YHCT, tiến hành nghiên cứu đánh giá. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ HUỲNH THỊ LƯU KIM HƯỜNG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HƯỚNG SINH DỤC NAM CỦA BÀI THUỐC NGŨ TỬ DIỄN TƠNG HỒN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG