THỰC HÀNH hóa SINH ĐỘNG vật (hóa SINH ĐỘNG vật)

1 THỦY PHÂN MỠ BỞI LIPASE Mỡ = Este glycerol acid béo - Muốn cắt lk ester cần enzyme esterase - Lipase tuyến tụy thuỷ phân mạch ester mỡ - Đ/kiện cho lipase hđ: t° thích hợp, thời gian hđ, mỡ nhũ tương hoá nhờ acid mật - Lipase thuỷ phân mỡ, cho glycerol acid béo (mt acid) Chuẩn độ acid base (NaOH 0,1N) với thị màu fenolftalein (0,1% cồn) - Nếu lipase hđ mạnh, acid mật h/hoá nhũ hoá mỡ tốt, thời gian lâu → lượng acid béo sinh nhiều, lượng NaOH chuẩn độ tốn Thí nghiệm: Hai bình tam giác, cho vào bình: • 40 ml sữa tươi • ml chiết xuất lipase (dịch tuỵ) • Một giọt fenolftalein A • Thêm 0,5 ml dịch mật B • Thêm 0,5 ml nước cất • Lắc trộn • Lấy từ bình 10 ml đem chuẩn độ NaOH 0,1N, tới có màu hồng bền nửa phút, ghi lại số ml NaOH • Số dd cịn lại cho vào tủ ấm 37-40°C • Cứ sau 15 phút lại lấy tiếp 10 ml chuẩn độ tiếp (4 lần ch/độ) Từ kết qủa thu lập đồ thị NaOH 0,1N ? ? 15’ 30’ 45’ Thời gian ĐỊNH LƯỢNG CATALASE TRONG MÁU 2.1 Catalase gì? - Là E phân huỷ perhydrol thành nước ôxy H2O2 Catalase H2O + O2 perhydrol - Ở đ.vật, catalase có nhiều hồng cầu, lách , gan - Có nhiều cách định lượng E: Trực tiếp: tìm xem có mg E Gián tiếp: thông qua chất khác mà E tác dụng Định lượng catalase gián tiếp; thông qua lượng H2O2 bị catalase máu phân giải Cơ sở phản ứng: 2KMnO4 +8H2SO4 + 5H2O2 → 2MnSO4 + K2SO4 + 5O2 + 8H2O Lượng H2O2 biết trước, KMnO4 chuẩn độ biết 2.2 Ý nghĩa việc định lượng catalase? • Ý nghĩa việc đ/lượng E nói chung: tìm kh/năng trao đổi sâu kín t/bào • Đ/lượng catalase có t/dụng gì? H2O2 sản phẩm OXH thể; VD: ph/giải acid amin, oxidase có nhóm ghép FMN hay FAD tách cặp hydro chất Bình thường cặp hydro tách vào chuỗi hô hấp, nhường cho coenzyme Q, tr/hợp OXH aa, cặp hydro nhường tr/tiếp cho ôxy, tạo H2O2 H2O2 sinh catalase ph/giải Có tr/hợp bị peroxydase ph/giải cho H2O O (ôxy nguyên tử) Ôxy nguyên tử dễ t/động với acid béo gây độc (làm rách màng TLT, chuỗi hô hấp ngừng) → catalase có tác dụng khử độc Nếu qt OXH mạnh → H2O2 sinh nhiều → lượng catalase nhiều h/động mạnh Qua việc đ/lượng catalase, đánh giá tình trạng sức khoẻ gia súc, gia cầm 2.3 Cách làm thí nghiệm - Lấy máu: tĩnh mạch (tai thỏ, cánh gà) - Lấy 0,1 ml máu, cho vào bình định mức có 100 ml nước cất, thổi nhẹ máu xuống, hút nước cất lên vài lần lại thổi nhẹ vào bình → máu bị pha lỗng 0/00 - Lấy bình nón, cho vào bình 7-8 ml nước cất 1ml máu pha - Một bình đem đun sơi phút để khử men (ĐC), để nguội - Cho vào bình: ml H2O2 1% - Để 30 phút - Thêm vào bình 4-5 ml H2SO4 10% (để làm ngừng phản ứng tạo m/trường để chuẩn độ) - Dùng KMnO4 0,1N để chuẩn độ lượng H2O2 dư, thấy xuất màu hồng bền nửa phút dừng lại - Lấy số liệu bình đối chứng (khử men) trừ số liệu bình khơng khử men (thí nghiệm) nhân với 1,7 số catalase, số mg H2O2 bị catalase 1μl máu (1ml máu pha) ph/giải Số catalase = (ĐC – TN) 1,7 = số mg H2O2 Chỉ số catalase/hồng cầu = Số catalase Số hồng cầu 1μl máu gà có 2,5x106 hồng cầu [mg] ... LƯỢNG CATALASE TRONG MÁU 2.1 Catalase gì? - Là E phân huỷ perhydrol thành nước ôxy H2O2 Catalase H2O + O2 perhydrol - Ở đ .vật, catalase có nhiều hồng cầu, lách , gan - Có nhiều cách định lượng... cặp hydro nhường tr/tiếp cho ôxy, tạo H2O2 H2O2 sinh catalase ph/giải Có tr/hợp bị peroxydase ph/giải cho H2O O (ôxy nguyên tử) Ôxy nguyên tử dễ t /động với acid béo gây độc (làm rách màng TLT,... TLT, chuỗi hô hấp ngừng) → catalase có tác dụng khử độc Nếu qt OXH mạnh → H2O2 sinh nhiều → lượng catalase nhiều h /động mạnh Qua việc đ/lượng catalase, đánh giá tình trạng sức khoẻ gia súc, gia