Tuyển chọn chủng nấm men saccharomyces và tối ưu hóa điều kiện lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM LÊ HỒNG QUANG TUYỂN CHỌN CHỦNG NẤM MEN SACCHAROMYCES VÀ TỐI ƯU HOÁ ĐIỀU KIỆN LEN MEN THU NHẬN SINH KHỐI NẤM MEN GIÀU KẼM Ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số: 54 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS Vũ Thị Kim Oanh NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP – 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực khóa luận cám ơn thơng tin trích dẫn khóa luận ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 15 tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Lê Hồng Quang ii LỜI CẢM ƠN Trước tiên, tơi xin gửi lời cảm ơn tới tồn thể thầy cô giáo Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam, thầy cô Khoa Công Nghệ Thực Phẩm trang bị cho kiến thức cần thiết, tảng quan trọng cho trình thực tập hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Vũ Thị Kim Oanh giảng viên Khoa Công Nghệ Thực Phẩm – Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam dành nhiều thời gian trực tiếp bảo hướng dẫn thực đề tài Xin gửi lời cảm ơn đến Ban Lãnh Đạo cô, chú, anh, chị cán Viện Công nghiệp thực phẩm Đặc biệt cơ, chú, anh, chị Trung tâm Hố sinh cơng nghiệp môi trường – Viện Công nghiệp thực phẩm đề tài “Nghiên cứu ứng dụng phát triển công nghệ cấp quốc gia – ĐTĐL.CN-59/15” tạo điều kiện thuận lợi để tiếp cận, giao lưu học hỏi tăng cường nhận thức nghề nghiệp hoàn thành đề tài Cuối tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè, người động viên giúp đỡ tinh thần vật chất trình học tập thực đề tài Hà Nội, ngày 15 tháng 10 năm 2018 Tác giả luận văn Lê Hồng Quang iii MỤC LỤC Lời cam đoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Trích yếu luận văn ix Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu chung 1.2.2 Mục tiêu cụ thể Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Vai trò, nhu cầu vi chất kẽm 2.1.1 Tầm quan trọng nguyên tố vi lượng kẽm (Zn) 2.1.2 Nhu cầu bổ sung kẽm thể 2.1.3 Tình hình sử dụng kẽm 2.1.4 Phương pháp bổ sung kẽm 2.2 Nấm men saccharomyces nguyên tố vi lượng kẽm 2.2.1 Giới thiệu chung nấm men Saccharomyces 2.2.2 Khả hấp thụ kẽm nấm men 10 2.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng tới trình sinh trưởng nấm men 12 2.2.4 Ảnh hưởng điều kiện ni cấy đến q trình chuyển hố, tích luỹ kẽm 14 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 16 3.1 Vật liệu 16 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 3.1.2 Hóa chất vật liệu 16 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ 16 iv 3.2 Nội dung 17 3.3 Phương pháp nghiên cứu 17 3.3.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 17 3.3.2 Phương pháp phân tích 20 3.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 20 Phần Kết nghiên cứu 21 4.1 Kết tuyển chọn chủng nấm men có khả tích lũy kẽm cao 21 4.2 Kết ảnh hưởng nguồn muối kẽm khác đến trình lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm 22 4.3 Kết lựa chọn nguồn dinh dưỡng cho lên men 25 4.3.1 Kết lựa chọn nguồn dinh dưỡng 25 4.3.2 Kết ảnh hưởng ion kim loại 29 4.4 Kết lựa chọn điều kiện lên men 32 4.4.1 Kết lựa chọn nhiệt độ 32 4.4.2 Kết lựa chọn pH 33 4.4.3 Kết lựa chọn chế độ lắc 35 4.4.4 Kết tối ưu hóa điều kiện lên men 35 Phần Kết luận kiến nghị 40 5.1 Kết luận 40 5.2 Kiến nghị 40 Tài liệu tham khảo 41 Phụ lục 47 v DANH MỤC VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt AAS ATP CNTP DNA FAO Atomic absorption spectroscopy Adenosine Triphosphate Deoxyribonucleic acid Food and Agriculture Organization Quang phổ hấp thu nguyên tử Công nghiệp thực phẩm Axit deoxyribonucleic Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc WHO World Health Organisation Tổ chức Y tế giới YM Yeast medium Môi trường nấm men vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Nhu cầu kẽm đối tượng khác theo độ tuổi giới tính Bảng 2.2 Những protein vận chuyển kẽm tham gia vào trình cân nội bào kẽm 11 Bảng 2.3 Nhu cầu khoáng nấm men 15 Bảng 4.1 Khả sinh trưởng hàm lượng kẽm sinh khối 15 chủng có khả tích lũy kẽm cao 22 Bảng 4.2 Ảnh hưởng loại muối kẽm tới khối lượng sinh khối khô hàm lượng kẽm tích lũy 23 Bảng 4.3 Ảnh hưởng nguồn cacbon tới khối lượng sinh khối khô hàm lượng kẽm tích lũy 26 Bảng 4.4 Ảnh hưởng nguồn nitơ tới khối lượng sinh khối khô hàm lượng kẽm tích lũy 27 Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng bổ sung khoáng chất tới khối lượng sinh khối khơ hàm lượng kẽm tích lũy 30 Bảng 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khối lượng sinh khối khơ hàm lượng kẽm tích lũy 32 Bảng 4.7 Ảnh hưởng pH tới khối lượng sinh khối khơ hàm lượng kẽm tích lũy 34 Bảng 4.8 Ảnh hưởng chế độ lắc tới khối lượng sinh khối khô hàm lượng kẽm tích lũy 35 Bảng 4.9 Khối lượng sinh khối khơ hàm lượng kẽm tích lũy sau lên men điều kiện khác 36 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Tình trạng thiếu kẽm giới Hình 2.2 Hình dạng tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae 10 Hình 2.3 Sơ đồ vận chuyển kẽm tế bào nấm men 12 Hình 4.1 Khả tích lũy kẽm sinh khối chủng nấm men sàng lọc 21 Hình 4.2 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung muối kẽm tới khối lượng sinh khối khơ hàm lượng kẽm tích lũy 24 Hình 4.3 Ảnh hưởng nồng độ glucose tới khối lượng sinh khối khô hàm lượng kẽm tích lũy 26 Hình 4.4 Ảnh hưởng nồng độ cao nấm men tới khối lượng sinh khối khơ hàm lượng kẽm tích lũy 28 Hình 4.5 Thí nghiệm tối ưu hóa q trình lên men tạo sinh khối nấm men giàu kẽm 37 Hình 4.6 Kết phân tích JMP hàm lượng kẽm sinh khối (A), khối lượng sinh khối (B) hệ số hồi quy thu từ thực nghiệm 37 Hình 4.7 Điều kiện tối ưu hiệu xuất dự kiến phần mềm JMP 39 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Lê Hồng Quang Tên Luận văn: Tuyển chọn chủng nấm men Saccharomyces tối ưu hoá điều kiện lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm Ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số: 54 01 01 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Tuyển chọn chủng nấm men Saccharomyces có khả tích luỹ kẽm cao từ sưu tập giống Viện Công nghiệp thực phẩm - Tối ưu hoá điều kiện lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm Phương pháp nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu: Chỉ tiêu theo dõi: nồng độ Zn2+ tích lũy tế bào nấm men, sinh khối nấm men tất thí nghiệm - Thí nghiệm 1: Mơi trường lên men có bổ sung muối Zn(NO3)2 với nồng độ 1g/l, tỷ lệ tiếp giống 10% Quá trình lên men thực bình tam giác 250ml với thể tích mơi trường lên men 100ml Điều kiện lên men tiến hành máy lắc 150 vòng/phút, điều kiện nhiệt độ 28°C 72 - Thí nghiệm 2: Các loại muối kẽm khảo sát là: Zn(NO3)2, ZnSO4, ZnCl2 Với dải nồng độ: 0; 0,25; 0,5; 0,75; 1; 2g/l bổ sung vào mơi trường lên men có: 3g/l cao nấm men, 3g/l dịch chiết man, 5g/l bacto pepton, 10g/l glucose với tỷ lệ tiếp giống 10% Thí nghiệm tiến hành mơi trường có pH hiệu chỉnh 6,0; lên men 28°C 72 giờ, chế độ lắc 150 vịng/phút Sau khảo sát thời điểm bổ sung muối kẽm 0, 9, 18, 27 để xác định điều kiện phù hợp - Thí nghiệm 3: +Các nguồn cacbon khảo sát: Glucose, galactose, frutose, lactose, maltose, sucrose với nồng độ 10g/l thêm vào mơi trường có: 3g/l cao nấm men, 3g/l dịch chiết man, 5g/l bacto pepton, 1g/l ZnSO4 với 10% tỷ lệ tiếp giống Tiếp khảo sát nồng độ cacbon thích hợp 10, 50, 100, 150g/l Quá trình lên men tiến hành 28°C 72 giờ, chế độ lắc 150vòng/phút + Nguồn nitơ khảo sát: cao nấm men, tripton, pepton, cao thịt bò, casein, 10g/l loại bổ sung vào mơi trường có: 3g/l dịch chiết man, 10g/l glucose, 1g/l ZnSO4 với tỷ lệ tiếp giống 10% Tiếp tục khảo sát nồng độ nitơ thích hợp với mức 5; 10; 15; 20g/l để xác định nồng độ phù hợp Quá trình lên men tiến hành 28°C 72 giờ, chế độ lắc 150vòng/phút ix FE2(SO4)3 = 1.0 subtracted from: FE2(SO4)3 Lower Center Upper 2.0 -0.19961 -0.13000 -0.06039 FE2(SO4)3 -+ -+ -+ -+ 2.0 ( -* ) -+ -+ -+ -+ -0.15 0.00 0.15 0.30 DINH DƯỠNG 3.1 NGUỒN CACBON 3.1.1 LOẠI CACBON 3.1.1.1 ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN CACBON ĐẾN KHỐI LƯỢNG SINH KHỐI One-way ANOVA: KLSK versus CACBON Source DF SS MS F P CACBON 0.791578 0.158316 351.81 0.000 Error 12 0.005400 0.000450 Total 17 0.796978 S = 0.02121 R-Sq = 99.32% R-Sq(adj) = 99.04% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+-Frutose 0.79667 0.02082 (-*-) Galactose 0.72667 0.02309 (*-) Glucose 0.86333 0.02082 (-*) Lactose 0.39333 0.02082 (-*-) Maltose 0.36667 0.01528 (*-) Sucrose 0.86667 0.02517 (-*-) -+ -+ -+ -+-0.45 0.60 0.75 0.90 Pooled StDev = 0.02121 Grouping Information Using Tukey Method CACBON N Mean Grouping Sucrose 0.86667 A Glucose 0.86333 A Frutose 0.79667 B Galactose 0.72667 C Lactose 0.39333 D Maltose 0.36667 D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CACBON Individual confidence level = 99.43% CACBON = Frutose subtracted from: CACBON Lower Center Upper Galactose -0.12818 -0.07000 -0.01182 Glucose 0.00849 0.06667 0.12484 Lactose -0.46151 -0.40333 -0.34516 Maltose -0.48818 -0.43000 -0.37182 Sucrose 0.01182 0.07000 0.12818 CACBON -+ -+ -+ -+ Galactose (-*-) Glucose (-*-) Lactose (-*) Maltose (-*-) Sucrose (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.30 0.00 0.30 0.60 CACBON = Galactose subtracted from: 74 CACBON Lower Center Upper Glucose 0.07849 0.13667 0.19484 Lactose -0.39151 -0.33333 -0.27516 Maltose -0.41818 -0.36000 -0.30182 Sucrose 0.08182 0.14000 0.19818 CACBON -+ -+ -+ -+ Glucose (-*) Lactose (-*-) Maltose (-*-) Sucrose (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.30 0.00 0.30 0.60 CACBON = Glucose subtracted from: CACBON Lower Center Upper Lactose -0.52818 -0.47000 -0.41182 Maltose -0.55484 -0.49667 -0.43849 Sucrose -0.05484 0.00333 0.06151 CACBON -+ -+ -+ -+ Lactose (-*-) Maltose (*-) Sucrose (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.30 0.00 0.30 0.60 CACBON = Lactose subtracted from: CACBON Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ Maltose -0.08484 -0.02667 0.03151 (-*-) Sucrose 0.41516 0.47333 0.53151 (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.30 0.00 0.30 0.60 CACBON = Maltose subtracted from: CACBON Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ Sucrose 0.44182 0.50000 0.55818 (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.30 0.00 0.30 0.60 3.1.1.2 ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN CACBON ĐẾN HÀM LƯỢNG KẼM One-way ANOVA: HLK versus CACBON Source DF SS MS F P CACBON 130.8870 26.1774 39266.11 0.000 Error 12 0.0080 0.0007 Total 17 130.8950 S = 0.02582 R-Sq = 99.99% R-Sq(adj) = 99.99% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ Frutose 7.7833 0.0306 * Galactose 6.5767 0.0351 * Glucose 9.0667 0.0252 * Lactose 2.6467 0.0306 * Maltose 2.3067 0.0153 (* Sucrose 8.4367 0.0058 * -+ -+ -+ -+ 4.0 6.0 8.0 10.0 Pooled StDev = 0.0258 Grouping Information Using Tukey Method CACBON N Mean Grouping Glucose 9.0667 A Sucrose 8.4367 B 75 Frutose 7.7833 C Galactose 6.5767 D Lactose 2.6467 E Maltose 2.3067 F Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CACBON Individual confidence level = 99.43% CACBON = Frutose subtracted from: CACBON Lower Center Upper Galactose -1.2775 -1.2067 -1.1359 Glucose 1.2125 1.2833 1.3541 Lactose -5.2075 -5.1367 -5.0659 Maltose -5.5475 -5.4767 -5.4059 Sucrose 0.5825 0.6533 0.7241 CACBON + -+ -+ -+ Galactose (* Glucose (* Lactose *) Maltose *) Sucrose * + -+ -+ -+ -7.0 -3.5 0.0 3.5 CACBON = Galactose subtracted from: CACBON Lower Center Upper + -+ -+ -+ Glucose 2.4192 2.4900 2.5608 * Lactose -4.0008 -3.9300 -3.8592 * Maltose -4.3408 -4.2700 -4.1992 * Sucrose 1.7892 1.8600 1.9308 *) + -+ -+ -+ -7.0 -3.5 0.0 3.5 CACBON = Glucose subtracted from: CACBON Lower Center Upper + -+ -+ -+ Lactose -6.4908 -6.4200 -6.3492 (* Maltose -6.8308 -6.7600 -6.6892 (* Sucrose -0.7008 -0.6300 -0.5592 * + -+ -+ -+ -7.0 -3.5 0.0 3.5 CACBON = Lactose subtracted from: CACBON Lower Center Upper + -+ -+ -+ Maltose -0.4108 -0.3400 -0.2692 * Sucrose 5.7192 5.7900 5.8608 (* + -+ -+ -+ -7.0 -3.5 0.0 3.5 CACBON = Maltose subtracted from: CACBON Lower Center Upper + -+ -+ -+ Sucrose 6.0592 6.1300 6.2008 (* + -+ -+ -+ -7.0 -3.5 0.0 3.5 3.1.2 NỒNG ĐỘ CABON 3.1.2.1 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ GLUCOSE ĐẾN KHỐI LƯỢNG SINH KHỐI One-way ANOVA: KLSK versus GLUCOSE Source DF SS MS F P GLUCOSE 0.312158 0.104053 445.94 0.000 Error 0.001867 0.000233 Total 11 0.314025 76 S = 0.01528 R-Sq = 99.41% R-Sq(adj) = 99.18% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -10 0.5867 0.0208 (-*-) 50 0.8833 0.0153 (-*) 100 0.9767 0.0058 (*-) 150 0.9833 0.0153 (-*-) -+ -+ -+ -+ -0.60 0.72 0.84 0.96 Pooled StDev = 0.0153 Grouping Information Using Tukey Method GLUCOSE N Mean Grouping 150 0.98333 A 100 0.97667 A 50 0.88333 B 10 0.58667 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of GLUCOSE Individual confidence level = 98.74% GLUCOSE = 10 subtracted from: GLUCOSE Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 50 0.25672 0.29667 0.33662 ( *-) 100 0.35005 0.39000 0.42995 ( * ) 150 0.35672 0.39667 0.43662 (-* ) -+ -+ -+ -+ 0.00 0.15 0.30 0.45 GLUCOSE = 50 subtracted from: GLUCOSE Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 100 0.05338 0.09333 0.13328 (-* ) 150 0.06005 0.10000 0.13995 ( *-) -+ -+ -+ -+ 0.00 0.15 0.30 0.45 GLUCOSE = 100 subtracted from: GLUCOSE Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 150 -0.03328 0.00667 0.04662 (-* ) -+ -+ -+ -+ 0.00 0.15 0.30 0.45 3.1.2.2 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ GLUCOSE ĐẾN HÀM LƯỢNG KẼM One-way ANOVA: HLK versus GLUCOSE Source DF SS MS F P GLUCOSE 0.414833 0.138278 233.71 0.000 Error 0.004733 0.000592 Total 11 0.419567 S = 0.02432 R-Sq = 98.87% R-Sq(adj) = 98.45% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ 10 8.3067 0.0208 (-*-) 50 7.9267 0.0231 (-* ) 100 7.8700 0.0265 (-*-) 150 7.8500 0.0265 (-*-) -+ -+ -+ -+ 7.95 8.10 8.25 8.40 Pooled StDev = 0.0243 Grouping Information Using Tukey Method GLUCOSE N Mean Grouping 77 10 8.30667 A 50 7.92667 B 100 7.87000 B C 150 7.85000 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of GLUCOSE Individual confidence level = 98.74% GLUCOSE = 10 subtracted from: GLUCOSE Lower Center Upper + -+ -+ -+ 50 -0.44362 -0.38000 -0.31638 ( * ) 100 -0.50028 -0.43667 -0.37305 ( * ) 150 -0.52028 -0.45667 -0.39305 ( * ) + -+ -+ -+ -0.40 -0.20 -0.00 0.20 GLUCOSE = 50 subtracted from: GLUCOSE Lower Center Upper + -+ -+ -+ 100 -0.12028 -0.05667 0.00695 ( * ) 150 -0.14028 -0.07667 -0.01305 ( * ) + -+ -+ -+ -0.40 -0.20 -0.00 0.20 GLUCOSE = 100 subtracted from: GLUCOSE Lower Center Upper + -+ -+ -+ 150 -0.08362 -0.02000 0.04362 ( * ) + -+ -+ -+ -0.40 -0.20 -0.00 0.20 3.2 NGUỒN NITO 3.2.1 LOẠI NITO 3.2.1.1 ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN NITO ĐẾN KHỐI LƯỢNG SINH KHỐI One-way ANOVA: KLSK versus NITO Source DF SS MS F P NITO 0.153560 0.038390 53.82 0.000 Error 10 0.007133 0.000713 Total 14 0.160693 S = 0.02671 R-Sq = 95.56% R-Sq(adj) = 93.79% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -Beef extract 0.86667 0.03512 ( -* ) Casein 0.62333 0.03215 ( * -) Peptone 0.83667 0.03055 ( -* ) Tryptone 0.85667 0.01528 ( -* ) Yeast extract 0.91333 0.01155 ( * -) -+ -+ -+ -+ -0.60 0.70 0.80 0.90 Pooled StDev = 0.02671 Grouping Information Using Tukey Method NITO N Mean Grouping Yeast extract 0.91333 A Beef extract 0.86667 A B Tryptone 0.85667 A B Peptone 0.83667 B Casein 0.62333 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NITO Individual confidence level = 99.18% NITO = Beef extract subtracted from: 78 NITO Lower Center Upper Casein -0.31504 -0.24333 -0.17163 Peptone -0.10170 -0.03000 0.04170 Tryptone -0.08170 -0.01000 0.06170 Yeast extract -0.02504 0.04667 0.11837 NITO + -+ -+ -+Casein ( -* ) Peptone ( * -) Tryptone ( * -) Yeast extract ( * -) + -+ -+ -+-0.20 0.00 0.20 0.40 NITO = Casein subtracted from: NITO Lower Center Upper Peptone 0.14163 0.21333 0.28504 Tryptone 0.16163 0.23333 0.30504 Yeast extract 0.21830 0.29000 0.36170 NITO + -+ -+ -+Peptone ( -* ) Tryptone ( -* ) Yeast extract ( -* ) + -+ -+ -+-0.20 0.00 0.20 0.40 NITO = Peptone subtracted from: NITO Lower Center Upper Tryptone -0.05170 0.02000 0.09170 Yeast extract 0.00496 0.07667 0.14837 NITO + -+ -+ -+Tryptone ( -* -) Yeast extract ( -* ) + -+ -+ -+-0.20 0.00 0.20 0.40 NITO = Tryptone subtracted from: NITO Lower Center Upper Yeast extract -0.01504 0.05667 0.12837 NITO + -+ -+ -+Yeast extract ( -* ) + -+ -+ -+-0.20 0.00 0.20 0.40 3.2.1.2 ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN NITO ĐẾN HÀM LƯỢNG KẼM One-way ANOVA: HLK versus NITO Source DF SS MS F P NITO 1.91220 0.47805 375.43 0.000 Error 10 0.01273 0.00127 Total 14 1.92493 S = 0.03568 R-Sq = 99.34% R-Sq(adj) = 99.07% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ Beef extract 8.1033 0.0306 (-*) Casein 7.5433 0.0513 (-*) Peptone 8.1667 0.0404 (*-) Tryptone 7.9667 0.0252 (-*) Yeast extract 8.6533 0.0231 (*-) + -+ -+ -+ 7.70 8.05 8.40 8.75 Pooled StDev = 0.0357 Grouping Information Using Tukey Method 79 NITO N Mean Grouping Yeast extract 8.6533 A Peptone 8.1667 B Beef extract 8.1033 B Tryptone 7.9667 C Casein 7.5433 D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NITO Individual confidence level = 99.18% NITO = Beef extract subtracted from: NITO Lower Center Upper Casein -0.6558 -0.5600 -0.4642 Peptone -0.0325 0.0633 0.1591 Tryptone -0.2325 -0.1367 -0.0409 Yeast extract 0.4542 0.5500 0.6458 NITO -+ -+ -+ -+-Casein (*) Peptone (*) Tryptone (*) Yeast extract (-*) -+ -+ -+ -+ 0.70 0.00 0.70 1.40 NITO = Casein subtracted from: NITO Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-Peptone 0.5275 0.6233 0.7191 (*) Tryptone 0.3275 0.4233 0.5191 (*) Yeast extract 1.0142 1.1100 1.2058 (-*) -+ -+ -+ -+ 0.70 0.00 0.70 1.40 NITO = Peptone subtracted from: NITO Lower Center Upper Tryptone -0.2958 -0.2000 -0.1042 Yeast extract 0.3909 0.4867 0.5825 NITO -+ -+ -+ -+-Tryptone (*-) Yeast extract (*) -+ -+ -+ -+ 0.70 0.00 0.70 1.40 NITO = Tryptone subtracted from: NITO Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-Yeast extract 0.5909 0.6867 0.7825 (-*) -+ -+ -+ -+ 0.70 0.00 0.70 1.40 3.2.2 NỒNG ĐỘ NI TƠ 3.2.2.1 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ YEAST EXTRACT ĐẾN KHỐI LƯỢNG SINH KHỐI One-way ANOVA: KLSK versus YEASTEXTRACT Source DF SS MS F P YEASTEXTRACT 0.350967 0.116989 233.98 0.000 Error 0.004000 0.000500 Total 11 0.354967 S = 0.02236 R-Sq = 98.87% R-Sq(adj) = 98.45% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -5 0.5667 0.0208 (-* ) 10 0.9833 0.0208 ( *-) 15 0.9567 0.0321 ( *-) 80 20 0.9400 0.0100 (-* ) -+ -+ -+ -+ -0.60 0.72 0.84 0.96 Pooled StDev = 0.0224 Grouping Information Using Tukey Method YEASTEXTRACT N Mean Grouping 10 0.98333 A 15 0.95667 A 20 0.94000 A 0.56667 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of YEASTEXTRACT Individual confidence level = 98.74% YEASTEXTRACT = subtracted from: YEASTEXTRACT Lower Center Upper 10 0.35818 0.41667 0.47515 15 0.33152 0.39000 0.44848 20 0.31485 0.37333 0.43182 YEASTEXTRACT -+ -+ -+ -+-10 ( -* -) 15 ( -* -) 20 ( -* -) -+ -+ -+ -+-0.00 0.15 0.30 0.45 YEASTEXTRACT = 10 subtracted from: YEASTEXTRACT Lower Center Upper 15 -0.08515 -0.02667 0.03182 20 -0.10182 -0.04333 0.01515 YEASTEXTRACT -+ -+ -+ -+-15 ( -* -) 20 ( -* -) -+ -+ -+ -+-0.00 0.15 0.30 0.45 YEASTEXTRACT = 15 subtracted from: YEASTEXTRACT Lower Center Upper 20 -0.07515 -0.01667 0.04182 YEASTEXTRACT -+ -+ -+ -+-20 ( -* -) -+ -+ -+ -+-0.00 0.15 0.30 0.45 3.2.2.2 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ YEAST EXTRACT ĐẾN HÀM LƯỢNG KẼM One-way ANOVA: HLK versus YEASTEXTRACT Source DF SS MS F P YEASTEXTRACT 0.49769 0.16590 130.12 0.000 Error 0.01020 0.00127 Total 11 0.50789 S = 0.03571 R-Sq = 97.99% R-Sq(adj) = 97.24% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 8.8167 0.0306 ( * ) 10 9.2933 0.0208 ( * ) 15 8.9133 0.0252 ( * ) 20 8.7800 0.0557 ( * ) + -+ -+ -+ 8.80 8.96 9.12 9.28 81 Pooled StDev = 0.0357 Grouping Information Using Tukey Method YEASTEXTRACT N Mean Grouping 10 9.29333 A 15 8.91333 B 8.81667 C 20 8.78000 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of YEASTEXTRACT Individual confidence level = 98.74% YEASTEXTRACT = subtracted from: YEASTEXTRACT Lower Center Upper 10 0.38328 0.47667 0.57006 15 0.00328 0.09667 0.19006 20 -0.13006 -0.03667 0.05672 YEASTEXTRACT -+ -+ -+ -+-10 ( *-) 15 ( *-) 20 ( * ) -+ -+ -+ -+ 0.35 0.00 0.35 0.70 YEASTEXTRACT = 10 subtracted from: YEASTEXTRACT Lower Center Upper 15 -0.47339 -0.38000 -0.28661 20 -0.60672 -0.51333 -0.41994 YEASTEXTRACT -+ -+ -+ -+-15 ( * ) 20 (-* ) -+ -+ -+ -+ 0.35 0.00 0.35 0.70 YEASTEXTRACT = 15 subtracted from: YEASTEXTRACT Lower Center Upper 20 -0.22672 -0.13333 -0.03994 YEASTEXTRACT -+ -+ -+ -+-20 (-* ) -+ -+ -+ -+ 0.35 0.00 0.35 0.70 ĐIỀU KIỆN LÊN MEN 4.1 NHIỆT ĐỘ 4.1.1 ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ ĐẾN KHỐI LƯỢNG SINH KHỐI One-way ANOVA: KLSK versus NHIETDO Source DF SS MS F P NHIETDO 0.087025 0.029008 128.93 0.000 Error 0.001800 0.000225 Total 11 0.088825 S = 0.015 R-Sq = 97.97% R-Sq(adj) = 97.21% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+-25 0.9433 0.0208 ( * ) 28 1.0133 0.0115 ( * ) 30 1.0233 0.0153 ( * ) 35 0.8100 0.0100 ( * ) -+ -+ -+ -+-0.840 0.910 0.980 1.050 82 Pooled StDev = 0.0150 Grouping Information Using Tukey Method NHIETDO N Mean Grouping 30 1.02333 A 28 1.01333 A 25 0.94333 B 35 0.81000 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NHIETDO Individual confidence level = 98.74% NHIETDO = 25 subtracted from: NHIETDO Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-28 0.03077 0.07000 0.10923 ( *-) 30 0.04077 0.08000 0.11923 (-* ) 35 -0.17256 -0.13333 -0.09410 ( * ) -+ -+ -+ -+ 0.15 0.00 0.15 0.30 NHIETDO = 28 subtracted from: NHIETDO Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-30 -0.02923 0.01000 0.04923 ( *-) 35 -0.24256 -0.20333 -0.16410 (-* ) -+ -+ -+ -+ 0.15 0.00 0.15 0.30 NHIETDO = 30 subtracted from: NHIETDO Lower Center Upper -+ -+ -+ -+-35 -0.25256 -0.21333 -0.17410 ( *-) -+ -+ -+ -+ 0.15 0.00 0.15 0.30 4.1.2 ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ ĐẾN HÀM LƯỢNG KẼM One-way ANOVA: HLK versus NHIETDO Source DF SS MS F P NHIETDO 2.48417 0.82806 666.89 0.000 Error 0.00993 0.00124 Total 11 2.49410 S = 0.03524 R-Sq = 99.60% R-Sq(adj) = 99.45% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -25 8.8400 0.0265 (-*) 28 9.0500 0.0361 (-*) 30 9.1133 0.0306 (*-) 35 7.9767 0.0451 (*) -+ -+ -+ -+ -8.05 8.40 8.75 9.10 Pooled StDev = 0.0352 Grouping Information Using Tukey Method NHIETDO N Mean Grouping 30 9.1133 A 28 9.0500 A 25 8.8400 B 35 7.9767 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of NHIETDO Individual confidence level = 98.74% NHIETDO = 25 subtracted from: NHIETDO Lower Center Upper + -+ -+ -+- 83 28 30 35 0.1178 0.2100 0.3022 (*) 0.1812 0.2733 0.3655 (*) -0.9555 -0.8633 -0.7712 (-*) + -+ -+ -+-0.70 0.00 0.70 1.40 NHIETDO = 28 subtracted from: NHIETDO Lower Center Upper + -+ -+ -+30 -0.0288 0.0633 0.1555 (*) 35 -1.1655 -1.0733 -0.9812 (-*) + -+ -+ -+-0.70 0.00 0.70 1.40 NHIETDO = 30 subtracted from: NHIETDO Lower Center Upper + -+ -+ -+35 -1.2288 -1.1367 -1.0445 (-*) + -+ -+ -+-0.70 0.00 0.70 1.40 4.2 pH 4.2.1 ẢNH HƯỞNG CỦA pH ĐẾN KHỐI LƯỢNG SINH KHỐI One-way ANOVA: KLSK versus pH Source DF SS MS F P pH 0.660514 0.110086 316.68 0.000 Error 14 0.004867 0.000348 Total 20 0.665381 S = 0.01864 R-Sq = 99.27% R-Sq(adj) = 98.96% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ 4.0 0.59000 0.02646 (*-) 4.5 0.92667 0.01528 (-*) 5.0 0.96000 0.01732 (-*-) 5.5 0.97000 0.01000 (-*) 6.0 0.87667 0.02517 (*-) 6.5 0.84333 0.00577 (*-) 7.0 0.48667 0.02082 (*-) -+ -+ -+ -+ 0.60 0.75 0.90 1.05 Pooled StDev = 0.01864 Grouping Information Using Tukey Method pH N Mean Grouping 5.5 0.97000 A 5.0 0.96000 A 4.5 0.92667 A B 6.0 0.87667 B C 6.5 0.84333 C 4.0 0.59000 D 7.0 0.48667 E Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of pH Individual confidence level = 99.58% pH = 4.0 subtracted from: pH Lower Center Upper + -+ -+ -+4.5 0.28467 0.33667 0.38866 (-*-) 5.0 0.31801 0.37000 0.42199 (*-) 5.5 0.32801 0.38000 0.43199 (-*) 6.0 0.23467 0.28667 0.33866 (-*) 6.5 0.20134 0.25333 0.30533 (*-) 7.0 -0.15533 -0.10333 -0.05134 (-*) 84 + -+ -+ -+-0.30 0.00 0.30 0.60 pH = 4.5 subtracted from: pH Lower Center Upper + -+ -+ -+5.0 -0.01866 0.03333 0.08533 (-*-) 5.5 -0.00866 0.04333 0.09533 (*-) 6.0 -0.10199 -0.05000 0.00199 (*-) 6.5 -0.13533 -0.08333 -0.03134 (-*-) 7.0 -0.49199 -0.44000 -0.38801 (*-) + -+ -+ -+-0.30 0.00 0.30 0.60 pH = 5.0 subtracted from: pH Lower Center Upper + -+ -+ -+5.5 -0.04199 0.01000 0.06199 (*-) 6.0 -0.13533 -0.08333 -0.03134 (-*-) 6.5 -0.16866 -0.11667 -0.06467 (-*-) 7.0 -0.52533 -0.47333 -0.42134 (-*-) + -+ -+ -+-0.30 0.00 0.30 0.60 pH = 5.5 subtracted from: pH Lower Center Upper + -+ -+ -+6.0 -0.14533 -0.09333 -0.04134 (-*-) 6.5 -0.17866 -0.12667 -0.07467 (-*-) 7.0 -0.53533 -0.48333 -0.43134 (-*-) + -+ -+ -+-0.30 0.00 0.30 0.60 pH = 6.0 subtracted from: pH Lower Center Upper + -+ -+ -+6.5 -0.08533 -0.03333 0.01866 (-*-) 7.0 -0.44199 -0.39000 -0.33801 (-*-) + -+ -+ -+-0.30 0.00 0.30 0.60 pH = 6.5 subtracted from: pH Lower Center Upper + -+ -+ -+7.0 -0.40866 -0.35667 -0.30467 (-*-) + -+ -+ -+-0.30 0.00 0.30 0.60 4.2.2 ẢNH HƯỞNG CỦA pH ĐẾN HÀM LƯỢNG KẼM One-way ANOVA: HLK versus pH Source DF SS MS F P pH 6.918314 1.153052 1241.75 0.000 Error 14 0.013000 0.000929 Total 20 6.931314 S = 0.03047 R-Sq = 99.81% R-Sq(adj) = 99.73% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+4.0 7.6367 0.0208 (* 4.5 7.8167 0.0289 *) 5.0 8.3700 0.0265 *) 5.5 8.8633 0.0503 *) 6.0 9.0733 0.0351 *) 6.5 9.2233 0.0153 *) 7.0 8.8267 0.0231 (* + -+ -+ -+8.00 8.50 9.00 9.50 Pooled StDev = 0.0305 Grouping Information Using Tukey Method 85 pH N Mean Grouping 6.5 9.2233 A 6.0 9.0733 B 5.5 8.8633 C 7.0 8.8267 C 5.0 8.3700 D 4.5 7.8167 E 4.0 7.6367 F Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of pH Individual confidence level = 99.58% pH = 4.0 subtracted from: pH Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 4.5 0.0950 0.1800 0.2650 (*) 5.0 0.6484 0.7333 0.8183 (*) 5.5 1.1417 1.2267 1.3116 (*) 6.0 1.3517 1.4367 1.5216 (*) 6.5 1.5017 1.5867 1.6716 (*) 7.0 1.1050 1.1900 1.2750 (*) -+ -+ -+ -+ -0.80 0.00 0.80 1.60 pH = 4.5 subtracted from: pH Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 5.0 0.4684 0.5533 0.6383 (*) 5.5 0.9617 1.0467 1.1316 (*) 6.0 1.1717 1.2567 1.3416 (*) 6.5 1.3217 1.4067 1.4916 (*) 7.0 0.9250 1.0100 1.0950 (*) -+ -+ -+ -+ -0.80 0.00 0.80 1.60 pH = 5.0 subtracted from: pH Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 5.5 0.4084 0.4933 0.5783 (*) 6.0 0.6184 0.7033 0.7883 (*) 6.5 0.7684 0.8533 0.9383 (*) 7.0 0.3717 0.4567 0.5416 (*) -+ -+ -+ -+ -0.80 0.00 0.80 1.60 pH = 5.5 subtracted from: pH Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 6.0 0.1250 0.2100 0.2950 (*) 6.5 0.2750 0.3600 0.4450 (-*) 7.0 -0.1216 -0.0367 0.0483 (-*) -+ -+ -+ -+ -0.80 0.00 0.80 1.60 pH = 6.0 subtracted from: pH Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 6.5 0.0650 0.1500 0.2350 (*) 7.0 -0.3316 -0.2467 -0.1617 (*) -+ -+ -+ -+ -0.80 0.00 0.80 1.60 pH = 6.5 subtracted from: pH Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ 7.0 -0.4816 -0.3967 -0.3117 (*) -+ -+ -+ -+ 86 -0.80 0.00 0.80 1.60 4.3 CHẾ ĐỘ LẮC 4.3.1 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ ĐỘ LẮC ĐẾN KHỐI LƯỢNG SINH KHỐI One-way ANOVA: KLSK versus CHEDOLAC Source DF SS MS F P CHEDOLAC 0.842558 0.280853 543.59 0.000 Error 0.004133 0.000517 Total 11 0.846692 S = 0.02273 R-Sq = 99.51% R-Sq(adj) = 99.33% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ 0.5067 0.0231 (*-) 50 0.9667 0.0153 (*-) 150 1.1500 0.0361 (-*) 200 1.1600 0.0000 (-*-) + -+ -+ -+ 0.60 0.80 1.00 1.20 Pooled StDev = 0.0227 Grouping Information Using Tukey Method CHEDOLAC N Mean Grouping 200 1.16000 A 150 1.15000 A 50 0.96667 B 0.50667 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CHEDOLAC Individual confidence level = 98.74% CHEDOLAC = subtracted from: CHEDOLAC Lower Center Upper 50 0.40055 0.46000 0.51945 150 0.58388 0.64333 0.70278 200 0.59388 0.65333 0.71278 CHEDOLAC + -+ -+ -+ 50 (-* ) 150 ( *-) 200 (-* ) + -+ -+ -+ -0.25 0.00 0.25 0.50 CHEDOLAC = 50 subtracted from: CHEDOLAC Lower Center Upper 150 0.12388 0.18333 0.24278 200 0.13388 0.19333 0.25278 CHEDOLAC + -+ -+ -+ 150 (-* ) 200 ( *-) + -+ -+ -+ -0.25 0.00 0.25 0.50 CHEDOLAC = 150 subtracted from: CHEDOLAC Lower Center Upper 200 -0.04945 0.01000 0.06945 CHEDOLAC + -+ -+ -+ 200 (-* ) + -+ -+ -+ -0.25 0.00 0.25 0.50 4.3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA CHẾ ĐỘ LẮC ĐẾN HÀM LƯỢNG KẼM 87 One-way ANOVA: HLK versus CHEDOLAC Source DF SS MS F P CHEDOLAC 15.44030 5.14677 9650.19 0.000 Error 0.00427 0.00053 Total 11 15.44457 S = 0.02309 R-Sq = 99.97% R-Sq(adj) = 99.96% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ -0 6.3533 0.0289 *) 50 8.6367 0.0153 * 150 9.0633 0.0115 *) 200 9.1133 0.0306 * -+ -+ -+ -+ -6.40 7.20 8.00 8.80 Pooled StDev = 0.0231 Grouping Information Using Tukey Method CHEDOLAC N Mean Grouping 200 9.1133 A 150 9.0633 A 50 8.6367 B 6.3533 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CHEDOLAC Individual confidence level = 98.74% CHEDOLAC = subtracted from: CHEDOLAC Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ -50 2.2229 2.2833 2.3437 (* 150 2.6496 2.7100 2.7704 (*) 200 2.6996 2.7600 2.8204 (* -+ -+ -+ -+ -0.0 1.0 2.0 3.0 CHEDOLAC = 50 subtracted from: CHEDOLAC Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ -150 0.3663 0.4267 0.4871 *) 200 0.4163 0.4767 0.5371 (* -+ -+ -+ -+ -0.0 1.0 2.0 3.0 CHEDOLAC = 150 subtracted from: CHEDOLAC Lower Center Upper -+ -+ -+ -+ -200 -0.0104 0.0500 0.1104 *) -+ -+ -+ -+ -0.0 1.0 2.0 3.0 88 ... hoá điều kiện lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm? ?? 1.2 MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI 1.2.1 Mục tiêu chung Tuyển chọn chủng nấm men Saccharomyces tối ưu hoá điều kiện lên men thu nhận sinh khối nấm. .. trình lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm; - Nghiên cứu lựa chọn nguồn dinh dưỡng, thành phần môi trường, điều kiện lên men phù hợp cho trình lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm; ... cứu điều kiện lên men phù hợp cho trình lên men thu nhận sinh khối nấm men giàu kẽm Nội dung 5: Tối ưu hoá điều kiện lên men thu sinh khối nấm men giàu kẽm 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.3.1 Phương