Đang tải... (xem toàn văn)
Lai phân tử là quá trình kết hợp lại của hai mạch đơn DNA hoặc DNA- RNA... So sánh sự phân tích gene X sử dụng các kỹ thuật lai.[r]
(1)CHƯƠNG II:CÁC KỸTHUẬT NỀN CỦA CNSH HIỆN ĐẠI (10 TIẾT)
Chức ứng dụng enzyme giới hạn
Giới thiệu vector nhân dòng kỹ thuật nhân dòng gen
Các phương pháp lai phân tử
Phương pháp PCR, ứng dụng
Kỹ thuật xác định trình tự DNA
Kỹ thuật tạo thư viện genome cDNA
8/26/2014
(2) Sự bắt cặp lai (Hybridization) theo chế bổ sung (Complementarity)
Các dạng phức hợp lai bổ sung: – DNA - DNA
– DNA - RNA
– Protein – Protein (thường dạng phức hợp kháng nguyên – kháng thể)
CƠ SỞ KHOA HỌC
(3)Lai phân tử trình kết hợp lại của hai mạch đơn DNA DNA-RNA
Cơ sở việc lai phân tử mối liên kết hydro base trên hai mạch Giữa base A một base T (hoặc U) hình thành hai liên kết hydro cịn G C hình thành ba liên kết
LAI GIỮA CÁC NUCLEIC ACID
(DNA – DNA hoặc DNA – RNA)
Lai nucleic acid
T A
C G
U A
(4)LAI GIỮA CÁC NUCLEIC ACID
(5)• LAI SOUTHERN (DNA – DNA) • LAI NORTHERN (DNA – RNA)
• LAI WESTERN (PROTEIN – PROTEIN)
MỘT SỐ KỸ THUẬT LAI PHÂN TỬ
(6)So sánh phân tích gene X sử dụng kỹ thuật lai
(7)• Lịch sử
– Do Edwin Southern đề xuất năm 1975 sau tiếp tục hồn thiện
– Với phát triển kỹ thuật này, Southern đã nhận giải thưởng Lancaster lĩnh vực Y học vào năm 2005
LAI SOUTHERN
Edwin Southern
(8)LAI SOUTHERN
• Nguyên lý
– Dựa bắt cặp bổ sung phân tử DNA mạch đơn (DNA-DNA)
– Cho phép xác định có mặt trình tự nucleotide đoạn DNA hỗn hợp đoạn DNA khác dựa bắt cặp mẫu dị đánh dấu với đoạn DNA chứa trình tự bổ sung với mẫu dị
• Kỹ thuật lai Southern cho biết – Sự có mặt đoạn DNA (gen)
– Số lượng đoạn DNA có mặt (tương ứng với số gen) – Độ lớn đoạn DNA
(9)Các bước tiến hành
Bước1: Chuẩn bị DNA mẫu
Bước 2: Chuyển ssDNA lên màng lai
(giai đoạn gồm nhiều bước)
Bước 3: Lai ssDNA với mẫu dò
Bước 4: Kết thúc phản ứng lai, thu kết lai
(10)1
Mẫu nghiên cứu
3
Marker
1
Đối chứng
2