các kỹ thuật sắc ký

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP.HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LỚP: DH06SH LỚP: DH06SH Bài báo cáo Bài báo cáo môn Chẩn đoán bệnh gia súc, gia cầm bằng sinh học phân tử môn Chẩn đoán bệnh gia súc, gia cầm bằng sinh học phân tử GVHD: PGS.TS NGUYỄN NGỌC HẢI GVHD: PGS.TS NGUYỄN NGỌC HẢI Sinh viên thực hiện: ĐINH CÁT ĐIỀM Sinh viên thực hiện: ĐINH CÁT ĐIỀM MSSV: 06126027 MSSV: 06126027 Tháng 10/2009 Tháng 10/2009 MỤC LỤC MỤC LỤC I) ĐẶT VẤN ĐỀ I) ĐẶT VẤN ĐỀ II) NỘI DUNG II) NỘI DUNG III) KẾT LUẬN III) KẾT LUẬN I) ĐẶT VẤN ĐỀ I) ĐẶT VẤN ĐỀ • Các tế bào sống chứa hàng trăm loại hợp chất hóa học khác nhau (protein, acid nucleic, lipid,… ) • Những hợp chất trên có thể hiện diện ở số lượng nhỏ, dưới dạng vết (enzyme) hay ở số lượng nhiều (các protein cấu tạo) • Người ta phải tìm cách tách các tách riêng chúng để xác định cấu trúc hóa học  Sắc ký (chromatography). • Sắc ký đã được sử dụng để tách tất cả các hợp chất dù có màu hay không, dù trọng lượng phân tử nhỏ hay lớn. • Nhưng vì các phân tử sinh học rất thiên hình vạn trạng với trọng lượng phân tử lớn nhỏ khác nhau, tính phân cực nhiều hay ít khác nhau nên không thể nào có một kỹ thuật sắc ký chung cho các loại hợp chất khác nhau. “Các kỹ thuật sắc ký” II) NỘI DUNG II) NỘI DUNG • II.1) Lịch sử sắc ký • II.2) Định nghĩa sắc ký • II.3) Các giai đoạn của quá trình sắc ký • II.4) Các kỹ thuật sắc ký • II.4.1) Sắc ký giấy • II.4.2) Sắc ký lớp mỏng • II.4.3) Sắc ký cột • II.4.4) Sắc ký trao đổi ion • II.4.5) Sắc ký gel • II.4.6) Sắc ký ái lực • II.4.7) Sắc ký tương tác kỵ nước • II.4.8) Sắc ký khí • II.4.9) Sắc ký lỏng cao áp II.1) Lịch sử sắc ký II.1) Lịch sử sắc ký  Năm 1903, nhà bác học Nga Michael Tswett đã cho dung dịch các sắc tố thực vật trong ete dầu hoả lên cột nhồi bột mịn canxi cacbonat, ông thấy các sắc tố bị hấp phụ lên trên đầu cột. Khi cho ete dầu hoả lên cột, các sắc tố di chuyển trong cột từ trên xuống dưới, mỗi sắc tố có một tốc độ riêng, tách thành những vùng hay vòng màu xếp chồng lên nhau, hình thành một hệ mà Tvest gọi đó là sắc đồ. Ông đặt tên cho phương pháp tách này là sắc ký (Chromatography).  Đến thập kỷ 1930-1940, phương pháp này được phát triển nhanh chóng với nhiều kỹ thuật khác nhau  Năm 1954, Mould D.L phát triển sắc ký gel. Đến năm 1964, Moor gọi là “gel permeation chromatography”  Năm 1906, sắc ký khí được biết đến nhưng đến 1952, kỹ thuật này mới phát triển mạnh mẽ, nhất là trong thập niên 1960.  Năm 1967, Horvath C. là tác giả tạo máy sắc ký lỏng cao áp. Michael Tswett (1872 – 1919) II.2) Định nghĩa sắc ký II.2) Định nghĩa sắc ký Sắc ký là một nhóm các phương pháp hoá lý dừng để tách các thành phần của một hỗn hợp. Sự tách sắc ký được dựa trên sự phân chia khác nhau của các chất khác nhau vào hai pha luôn tiếp xúc và không hoà lẫn vào nhau: một pha tĩnh và một pha động Sắc ký là phương pháp để phân tách và tinh sạch các phân tử sinh học II.3) Các giai đoạn của quá II.3) Các giai đoạn của quá trình sắc ký trình sắc ký a) Đưa hỗn hợp lên pha tĩnh  Các chất được giữ trên pha tĩnh. b) Cho pha động chạy qua pha tĩnh Pha động sẽ kéo theo các chất di chuyển trên pha tĩnh với tốc độ khác nhau, tách khỏi nhau và có vị trí khác nhau trên pha tĩnh tạo thành sắc ký đồ (chromatogram). c) Phát hiện các chất Các chất màu có thể phát hiện dễ dàng, các chất không màu có thể phát hiện bằng đèn tử ngoại hay bằng các thuốc thử. II.4) Các kỹ thuật sắc ký . II.4.7) Sắc ký tương tác kỵ nước • II.4.8) Sắc ký khí • II.4.9) Sắc ký lỏng cao áp II.1) Lịch sử sắc ký II.1) Lịch sử sắc ký  Năm 1903, nhà bác học Nga. trong thập niên 1960.  Năm 1967, Horvath C. là tác giả tạo máy sắc ký lỏng cao áp. Michael Tswett (1872 – 1919) II.2) Định nghĩa sắc ký II.2) Định nghĩa