Là các tế bào có khả năng phân chia liên tục trong nuôi cấy và phát triển thành các tế bào chuyên hoá. 3.2.2 ĐẶC TRƢNG CƠ BẢN CỦA TẾ BÀO GỐC[r]
(1)CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐẠI CƢƠNG (SH3014)
Giảng viên:
(2)CHƢƠNG III: CÁC PHƢƠNG PHÁP VÀ ỨNG DỤNG CỦA CNSH ĐỘNG VẬT, NGƢỜI VÀ Y SINH (8 TIẾT)
3.1. Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật 3.2 Công nghệ tế bào gốc
3.3 Công nghệ nhân động vật
3.4. Kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
3.5 Công nghệ vacxin tái tổ hợp sản xuất kháng thể đơn dòng
(3)3.1 KỸ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
(kiến thức cần nhớ)
3
BM CNSH TV – Khoa CNSH
Đặc điểm tế bào động vật
•
10-100 microns
Có hình cầu dung dịch Khơng có thành tế bào
Màng plasma mỏng, dễ vỡ dễ bị biến đổi
(4)3.1 KỸ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
(kiến thức cần nhớ)
•
Chu kỳ tế bào
G1 Phase:
·Tế bào bƣớc vào pha tổng hợp
·Thoát khỏi chu kỳ tế bào để tiến hành phân hoá (reversible or irreversible)
·Các tế bào nhạy cảm để tác động điều khiển thời điểm
S Phase: Tổng hợp DNA
G2 Phase: Tế bào chuẩn bị cho
(5)3.1 KỸ THUẬT NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
5
BM CNSH TV – Khoa CNSH
3.1.1 KHÁI NIỆM
Là nuôi cấy mô, tế bào tách rời khỏi thể đƣợc đặt môi trƣờng đảm bảo dinh dƣỡng nhiệt độ thích hợp tế bào sống tiếp tục phân chia
Q trình diễn liên tục sau thời gian định tiến hành rửa bổ sung dung dịch nuôi cấy
Các mô, tế bào động vật hay sử dụng nuôi cấy: phôi ngƣời, phôi gà, thận khỉ, phôi lợn, màng ối ngƣời…
3.1.2 PHƢƠNG PHÁP NI CẤY
• NI CẤY CƠ QUAN • NUÔI CẤY MÔ
(6)3.1 PHƢƠNG PHÁP NI CẤY MƠ TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
Ni cấy quan (Organ Culture): q trình ni cấy tồn phơi, quan mơ đƣợc cắt khỏi thể giải phẫu mẫu sống (vivisection) sau não dừng hoạt động .
Đặc điểm:
Kiến trúc chức sinh lý bình thƣờng đƣợc trì Các tế bào trạng thái phân hóa (fully differentiated) Tốc độ sinh trƣởng chậm
Cần mẫu tƣơi cho lần thí nghiệm Hạn chế nuôi cấy quy mô lớn
Nuôi cấy mô (Tissue Culture): Nuôi cấy mẩu cắt từ mô cắt rời
Đặc điểm:
Một số chức bình thƣờng đƣợc trì Tổ chức ban đầu mơ bị phá huỷ
(7)3.1 PHƢƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
10/18/2011
BM CNSH TV – Khoa CNSH
Nuôi cấy tế bào (Cell Culture): Mô phần mẫu đƣợc làm tan rã ra, chủ yếu xử lý enzyme, thành
dịch huyền phù tế bào Nguồn nguyên liệu đƣợc sử dụng cho nuôi cấy đơn lớp nuôi cấy huyền phù.
Đặc điểm:
Phát triển dịng tế bào qua số hệ Có thể nuôi cấy qui mô lớn
(8)NUÔI CẤY ĐƠN LỚP
Ƣu điểm:
Dễ dàng thay đổi môi trƣờng rửa tế bào trƣớc bổ sung môi trƣờng
Các tế bào liên kết thể dễ dàng
Linh hoạt (Flexible) sử dụng đối vơi tất loại tế bào
Nhƣợc điểm:
Khó triển khai qui mô lớn
Cần nhiều không gian so với ni cấy huyền phù
Khó định lƣợng thông số cho mẫu để điều khiển sinh trƣởng tế bào
(9)Nuôi cấy tế bào phát triển theo kiêu liên kết bám dính (Anchorage Dependent Cultures)
9
BM CNSH TV – Khoa CNSH
Đặc điểm:
- Sự nhân lên tế bào liên kết bám dính xảy tạo đƣợc bề mặt ni cấy phù hợp
- Q trình liên kết tế bào liên quan loạt bƣớc:
• Sự bám yếu tố dinh kết với bề mặt nuôi cấy (Cold insoluble globulin or other attachment glycoproteins)
• Sự liên kết tế bào với bề mặt ni cấy
• Sự dính kết tế bào với bề mặt đƣợc bao phủ (các chất heparan
sulfate đa dạng tổng hợp tế bào )
• Sự phát triển lan rộng tế bào liên kết
(10)NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO Đặc điểm:
Có khả sinh trƣởng phân hố mà khơng cần q trình gắn kết tế bào với
(11)Phƣơng pháp nuôi cấy
11
(12)Một số khái niệm dòng tế bào
Dòng tế bào (Cell Lines) – thuật ngữ dùng để
quần thể tế bào giống hệt bắt nguồn từ tế bào ban đầu
Dòng tế bào liên tục (Continuous Cell Lines) –là dòng tế
(13)Sự sinh trƣởng tế bào nuôi cấy
13
(14)(15)MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY
15
BM CNSH TV – Khoa CNSH
Thành phần : muối vô cơ, dinh dƣỡng, chất đệm (phenol red)
Các mí vơ cơ (Na, K, Ca, Mg, Cl, P), vi lƣợng (iron, zinc, selenium), Đƣờng (glucose phổ biên nhât), Axit amin, vitamin Huyết
Kháng sinh
pH
Hầu hết tế bào sinh trƣởng tốt pH 7.4 Một số fibroblasts cần pH 7.4-7.7
Các tế bào biến nạp pH 7.0-7.4
Các tế bào Epidermal cần pH 5.5
Sử dụng thị Phenol Red
(16)(17)ỨNG DỤNG CỦA NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
17
BM CNSH TV – Khoa CNSH
• Mơ hình thử nghiệm chẩn đốn bệnh • Sản xuất hợp chất sinh học
+ Vacxin virus
+ Hoạt chất sinh học + Interferon
+ Kháng thể đơn dịng • Tạo nguyên liệu cấy ghép
• Tạo quan từ tế bào động vật ni cấy • Sản xuất virus diệt côn trùng
(18)3.2 CÔNG NGHỆ TẾ BÀO GỐC
3.2.1 KHÁI NIỆM
Là tế bào có khả phân chia liên tục nuôi cấy phát triển thành tế bào chuyên hoá
3.2.2 ĐẶC TRƢNG CƠ BẢN CỦA TẾ BÀO GỐC
– có khả tự tái tạo
– biệt hố thành tế bào tổ chức chuyên biệt đảm nhiệm chức đặc biệt
– phân lập trì đƣợc trạng thái chƣa bịêt hoá
(19)PHÂN LOẠI TẾ BÀO GỐC (Theo tiềm biệt hóa)
19
BM CNSH TV – Khoa CNSH
•
2
các TB phôi giai đoạn tiếp sau giai đoạn nêu (nút phơi dưỡng phơi) Phân hóa thành TB vài tiềm
3
TB có khả phân hóa thành loại hay họ TB chuyên hóa xác định
TB đa tiềm TB toàn
TB vài tiềm (TB mầm)
1
Tế bào hợp tử tế bào phôi giai đoạn 4-8 tế bào
(20)Day
Fertilized egg
Day 3-4
Multi-cell embryo