Nghiên cứu kỹ thuật bảo tồn tinh dịch gà đông tảo

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ LÀNH NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT BẢO TỒN TINH DỊCH GÀ ĐÔNG TẢO Ngành: Chăn nuôi Mã số: 8620105 Người hướng dẫn khoa học: TS Đỗ Văn Thu NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày… tháng… năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Lành i LỜI CẢM ƠN Trong trình thực đề tài này, nỗ lực thân, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Văn Thu tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi để tơi hồn thành tốt đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn tới cán phịng Sinh học tế bào sinh sản Viện cơng nghệ sinh học - Viện Hàn lâm khoa học Công nghệ Việt Nam, hộ nông dân chăn nuôi gà thuộc xã Đơng Tảo - huyện Khối Châu - tỉnh Hưng Yên giúp đỡ tạo điều kiện thí nghiệm tốt suốt q trình tơi nghiên cứu hồn thành đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến tồn thầy cô thuộc khoa Chăn nuôi - Học viện Nông nghiệp Việt Nam cho môi trường học tập tốt, với tri thức bổ ích giúp cho vững vàng sống Đồng thời xin chân thành cảm ơn thầy dìu dắt, dạy dỗ suốt thời gian học Học viện, thầy cô khoa Chăn nuôi nhiệt tình giúp đỡ, dạy bảo, truyền đạt cho kinh nghiệm kỹ chuyên môn Đặc biệt xin cảm ơn PGS.TS Nguyễn Bá Mùi người giúp đỡ, hướng dẫn tơi để hồn thành tốt đề tài Cuối cùng, xin cảm ơn tới gia đình, bạn bè đóng góp ý kiến, khích lệ, giúp đỡ tơi hồn thành đề tài luận văn Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày… tháng… năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Lành ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt Error! Bookmark not defined Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii Thesis abstract ix Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Cơ sở khoa học sinh lý sinh sản gia cầm 2.2 Kỹ thuật lấy tinh cho gia cầm 11 2.3 Mơi trường pha lỗng, bảo tồn tinh dịch điều kiện bảo tồn tinh dịch gà đông tảo 12 2.4 Tình hình nghiên cứu kỹ thuật bảo tồn tinh dịch gà đơng tảo ngồi nước 19 2.4.1 Tình hình nghiên cứu nước 19 2.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 25 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 26 3.1 Đối tượng địa điểm, thời gian nghiên cứu 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.3 Phương pháp nghiên cứu 27 3.3.1 Phương pháp đánh giá số tiêu sinh học tinh dịch gà 27 3.3.2 Phương pháp xác định tính chất lý - hóa tinh dịch môi trường bảo tồn 29 3.3.3 Phương pháp pha lỗng bảo tồn tinh dịch gà đơng tảo 30 3.3.4 Phương pháp đông lạnh tinh dịch gà đông tảo -196oc 33 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 35 Phần Kết thảo luận 36 iii 4.1 Một số tiêu sinh học tinh dịch gà 36 4.2 Một số tiêu lý - hóa học tinh dịch gà 39 4.3 Kỹ thuật pha loãng tinh dịch gà 39 4.3.1 Một số tiêu lý - hóa học số mơi trường pha lỗng tinh dịch gà 39 4.3.2 Ảnh hưởng mơi trường pha lỗng lên chất lượng tinh dịch thời gian bảo tồn 40 4.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ pha loãng tinh dịch với môi trường lên chất lượng tinh dịch 43 4.3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ pha lỗng (tinh dịch: mơi trường) lên hoạt lực tinh trùng thời gian bảo tồn 44 4.3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo tồn lên hoạt lực tinh trùng gà thời gian bảo tồn 45 4.4 Kỹ thuật đông lạnh tinh dịch gà 46 4.4.1 Một số tính chất lý, hóa học mơi trường đơng lạnh 46 4.4.2 Ảnh hưởng môi trường đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh 47 4.4.3 Ảnh hưởng chất bảo vệ lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh 48 4.4.4 Ảnh hưởng nồng độ glycerol môi trường lên phẩm chất tinh dịch 49 4.4.5 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch đông lạnh 50 4.4.6 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên chất lượng tinh trùng sau đông lạnh 51 4.4.7 Ảnh hưởng tốc độ đông lạnh lên chất lượng tinh trùng sau đông lạnh 52 4.4.8 Ảnh hưởng nhiệt độ giải đông lên chất lượng tinh đông lạnh sau giải đông 53 4.4.9 Đánh giá chất lượng tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -196oc 54 4.5 Kết thụ tinh nhân tạo cho gà 58 4.5.1 Kết thụ tinh nhân tạo cho gà sử dụng tinh pha loãng 58 4.5.2 Kết thụ tinh nhân tạo cho gà sử dụng tinh đông lạnh 59 Phần Kết luận kiến nghị 61 5.1 Kết luận 61 5.2 Kiến nghị 61 Phụ lục 65 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt  Năng lực đệm  Độ nhớt A Hoạt lực C Nồng độ tinh trùng D Tỷ trọng DMA Dimethylacetamide DMSO Dimethyl sulfoxide K Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình LS Tỷ lệ tinh trùng sống MT Mơi trường MTĐL Môi trường đông lạnh MTPL Môi trường pha loãng Posm Áp lực thẩm thấu TTNT Thụ tinh nhân tạo V Lượng tinh dịch (Thể tích tinh dịch) V.A.C Tổng số tinh trùng tiến thẳng v DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết số tiêu sinh học tinh dịch gà Đông Tảo 36 Bảng 4.2 Một số tiêu tính chất lý - hóa học tinh dịch gà Đơng Tảo 39 Bảng 4.3 Một số tính chất lý - hóa học mơi trường pha lỗng tinh dịch gà 40 Bảng 4.4 Ảnh hưởng môi trường pha lỗng lên chất lượng tinh dịch gà Đơng Tảo thời gian bảo tồn 5oC (n= 30) 41 Bảng 4.5 Ảnh hưởng nhiệt độ pha môi trường với tinh dịch 43 lên hoạt lực tinh trùng thời gian bảo tồn (n= 30) 43 Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng tỷ lệ pha lỗng tinh dịch mơi trường 44 lên hoạt lực tinh trùng thời gian bảo tồn (n= 30) 44 Bảng 4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo tồn lên hoạt lực tinh trùng gà thời gian bảo tồn (n= 30) 45 Bảng 4.8 Một số tính chất lý, hóa học mơi trường đơng lạnh 47 Bảng 4.10 Ảnh hưởng chất bảo vệ lạnh lên chất lượng tinh sau đông lạnh 48 Bảng 4.11 Ảnh hưởng nồng độ glycerol môi trường lên phẩm chất tinh đông lạnh 49 Bảng 4.13 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh 52 lên phẩm chất tinh đông lạnh 52 Bảng 4.14 Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh (n= 30) 53 Bảng 4.15 Ảnh hưởng tốc độ giải đông lên chất lượng tinh đông lạnh sau giải đông 54 Bảng 4.17 Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình tinh đông lạnh thời gian bảo tồn -196oC 56 Bảng 4.18 Tỷ lệ sống tinh trùng thời gian bảo tồn -196oC 57 Bảng 4.19 Kết TTNT gà Đông Tảo sử dụng tinh pha loãng 58 Bảng 4.20 Kết thu tinh nhân tạo cho gà sử dụng tinh đông lạnh 59 vi DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Ảnh hưởng mơi trường pha loãng lên hoạt lực tinh trùng 43 Hình 4.2 Ảnh hưởng tỷ lệ pha lỗng lên chất lượng tinh dịch 45 Hình 4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ bảo tồn lên chất lượng tinh dịch 46 Hình 4.4 Ảnh hưởng môi trường đông lạnh lên chất lượng tinh dịch 48 Hình 4.5 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch 51 Hình 4.6 Ảnh hưởng nhiệt độ đông lạnh lên chất lượng tinh đông lạnh 53 vii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Lành Tên luận văn: “Nghiên cứu kỹ thuật bảo tồn tinh dịch gà Đông Tảo” Ngành: Chăn nuôi Mã số: 8620105 Tên sở đào tạo: Học viện Nơng nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: - Pha lỗng, bảo tồn tinh dịch gà Đơng Tảo phục vụ thụ tinh nhân tạo - Đông lạnh tinh dịch gà Đơng Tảo góp phần bảo tồn nguồn gen Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành 15 gà trống Đông Tảo nuôi hộ chăn nuôi tham gia đề tài Thu thập tiêu lượng tinh dịch, hoạt lực tinh trùng, nồng độ tinh trùng, tổng số tinh trùng lần lấy tinh, tổng số tinh trùng tiến thẳng, pH, áp lực thẩm thấu, tỷ trọng, độ nhớt Nghiên cứu xác định số tính chất lý - hóa học hai mơi trường pha lỗng, đơng lạnh tinh dịch gà Kết kết luận - Kết nhận được, chúng tơi chọn MTPL để pha lỗng bảo tồn tinh dịch gà 5oC Tuy nhiên, tinh dịch sau 06 pha loãng bảo tồn sử dụng MTPL (hoạt lực tinh trùng 65,24%; tỷ lệ tinh trùng sống 70,62%) cao sử dụng MTPL (hoạt lực tinh trùng 50,51%; tỷ lệ tinh trùng sống 60,53%) Sau 09 bảo tồn, tinh dịch MTPL tiếp tục trì hoạt lực tinh trùng đạt tiêu chuẩn thụ tinh (50,18%); đó, hoạt lực tinh trùng sử dụng mơi trường 36,72% Thời điểm sau 10 bảo tồn, tỷ lệ tinh trùng sống MTPL đạt 55,95%, MTPL cịn 40,73% - Với kết nhận được, chọn MTĐL dùng để đông lạnh tinh dịch gà Tinh dịch đông lạnh MTĐL (hoạt lực tinh trùng: 39,90%; tỷ lệ sống tinh trùng 68,95%) sau đông lạnh cao so với tinh dịch đông lạnh MTĐL (hoạt lực tinh trùng: 32,76%; tỷ lệ sống tinh trùng: 54,59%) Chất lượng tinh đông lạnh ổn định thời gian bảo tồn -196oC viii THESIS ABSTRACT Master candidate: Nguyen Thi Lanh Thesis title: Research on techniques of preserving semen of Dong Tao chicken Major: Animal science Code: 8620105 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives - Diluting and preserving Dong Tao chicken semen for artificial insemination - Frozen Dong Tao chicken semen contributes to the conservation of genetic resources Materials and Methods The study was conducted on 15 Dong Tao roosters raised at breeding households participating in the project Collecting indicators of semen volume, sperm motility, sperm concentration, total sperm count in sperm collection, total sperm count going straight, pH, osmotic pressure, density, viscosity The study has identified a number of physical and chemical properties of diluted, frozen chicken semen media Main findings and conclusions - Results obtained, we selected diluted medium to dilute and preserve chicken semen at 5oC However, semen after 06 hours of dilution was conserved when using diluted medium (sperm motility 65.24%; sperm survival rate 70.62%) was higher than when using diluted medium (sperm motility 50, 51%; live sperm percentage 60.53%) After 09 hours of preservation, semen in diluted medium continued to maintain sperm motility meeting sperm fertilization standards (50.18%); meanwhile, sperm motility when using environment is only 36.72% After 10 hours of preservation, the percentage of sperm living in diluted medium still reached 55.95%, while diluted medium was only 40.73% - With the results received, we have selected frozen environment to freeze chicken semen Frozen semen at frozen environment (sperm motility: 39.90%; sperm survival rate 68.95%) after freezing was higher than frozen semen at frozen environment (sperm motility: 32, 76%; sperm survival rate: 54.59%).The quality of frozen semen was stable during the preservation period of -196oC ix thời điểm bổ sung glycerol Bổ sung phần môi trường có glycerol vào tinh dịch thời điểm sau 30 phút ủ tinh pha loãng 5oC, cho hoạt lực tinh trùng sau đơng lạnh cao có ý nghĩa so với bổ sung mơi trường có glycerol thời điểm 0; 10; 20 phút Hoạt lực tinh trùng sau đông lạnh trường hợp bổ sung môi trường có glycerol thời điểm 10 phút 20 phút cao có ý nghĩa thống kê so với thời điểm bổ sung mơi trường có glycerol thời điểm phút Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng trước sau đơng lạnh khác khơng có ý nghĩa thời điểm bổ sung mơi trường có glycerol 80 Hoạt lực tinh trùng (%) 70 70.37 73.68 70.73 72.26 60 50 40.83 36.68 40 30 35.39 29.74 Trước đông lạnh Sau đông lạnh 20 10 0 phút Sau ủ 10 phút Sau ủ 20 phút Sau ủ 30 phút Thời điểm bổ sung glycerol Hình 4.5 Ảnh hưởng thời điểm bổ sung glycerol lên chất lượng tinh dịch Tỷ lệ sống tinh trùng trước đông lạnh (85,93%) trường hợp bổ sung môi trường có glycerol thời điểm 30 phút cao có ý nghĩa so với thời điểm bổ sung môi trường có glycerol thời điểm 0; 10; 20 phút Với kết nhận cho thấy bổ sung phần môi trường có glycerol thời điểm sau 30 phút ủ tinh dịch 5oC cho phẩm chất tinh dịch sau đông lạnh tốt so với bổ sung glycerol thời điểm 0; 10; 20 phút 4.4.6 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên chất lượng tinh trùng sau đông lạnh 51 Bảng 4.13 Ảnh hưởng thời gian ủ tinh dịch trước đông lạnh lên phẩm chất tinh đông lạnh Hoạt lực tinh trùng Thời gian (%) ủ tinh dịch Trước Sau đông trước lạnh đông lạnh đông lạnh Trước đông lạnh Sau đông lạnh Trước đông lạnh Sau đông lạnh (n= 15) 69,38a ± 1,33 38,87a ± 1,22 12,88a ± 2,26 15,39a ± 2,01 74,93a ± 2,09 69,04a ± 1,54 1,5 70,27a ± 37,63a ± 11,27a ± 15,31a ± 75,46a ± 67,06a ± (n= 15) 0,95 2,51 1,78 1,63 0,87 2,37 02 69,16a ± 2,27 26,72b ± 1,90 12,98a ± 2,25 16,39a ± 2,11 75,64a ± 2,08 47,69b ± 4,86 01 (n= 15) Tỷ lệ kỳ hình tinh trùng (%) Tỷ lệ sống tinh trùng (%) Ghi chú: Các giá trị cột có chữ khác khác có ý nghĩa thống kê (p