Nghiên cứu kỹ thuật bảo quản tinh hầu cửa sông (crassostrea rivularis) trong nitơ lỏng ( 1960c

Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp điểm, chất lượng cao có tính ổn định PHÀN MỞKhông ĐÀU với phương pháp bảo quản cònnhững cho phép nuôinghề đảmnuôi bảo động nguồnvậtnguyên liệu cho quáNam trìnhđang sản Trong nămngười gần thân mềm Việt xuấtxugiống, dàng quánhu trình biệtđặc có sản ý nghĩa quan có hướngdễphát triển mạnh, cầuvận tiêuchuyển thụ vàxa, xuấtđặckhẩu thân mềm trọngcao nhằm cung cấplàm tinh vụ triến cho tạota.ra giống hầu tăng góp phần tăngphục phát kinh tế nghiên thuỷ sảncứu lai nước cóTrong chất lượng quản vật tinhthân mềm giúp hai lưu mảnh giữ nguồn phầnchotrong số Bảo loài động vỏ thìgen, hầu góp loài giá công tác tế bảocao tồn Thịt đa dạng thuỷ nhiều lợi ích trị kinh hầugiống không đơnsảnthuần thức ăn khác cho ngư dân vùng ven Việt hầu sử cho Hầu đến biển màỜ cònNam, đượcphương biết đếnpháp lun giữ loại giống thực phẩm có dụng giá trịnitơ dinhlỏng dưỡng naythể vẫnănchưa công bố phơi Do cứu vỏ ứnghầu dụng phương nàybột có sống,cónấu chín, khô hay nghiên đóng hộp dùng nung pháp vôi làm cần thiết, nuôi phương nàynhững đáp nguồn phấn làmthành thức công ăn chăn gia pháp súc Vì giáứng trị vậytinh nêntrùng nhu hầu cầu phục vụ ngày nhữngcàng mụclớn đíchTuy trên.nhiên tình trạng khai thác mức nguồn lợi hầu hầu Vì nguồn nước lý bị đóảnh phạmcủa vi công đề tàinghiệp thực tập tốtđại nghiệp, lợi tự nhiên, hưởng nguồn đồngđang ý vàcó giúp đỡ củacạn cô kiệt, hướng tái tiếnphát hànhtriến thựcnguồn đề nguy khảdẫn lợi tài: hầu“ ởNghiên số cứu địa kỹ thuậtđãbảo hầukhó Cửa (Crassosírea nitơgiống lõng phương trở quản thành tinh vấn đề có Sông thể thực được.rivularis) Việc thu gom (-196°C)” tự nhiên không đủ đáp ứng cho nhu cầu nuôi Mục tiêu nghiên Với cứu thành công đề tài KC06-14NN (2001-2004), Viện nghiên cứu Cửa Nuôi Bước trồng đầu Thuỷxây sản dựng I kỹ xây thuật dựng bảo hoànquản chỉnhtinh quyhầu trình sảnSông xuất, (Cmssostrea chủ rivuỉaris) nitơ lỏng (-196°C) động nguồn giống lại khó đáp ứng đủ giống quanh năm Nội dung cứuhầu biến động qua tháng (Hà Đức Thắng, 2005) Vì để tỷ lệnghiên hầu đực, Nghiên cúnquá đặctrình điểm dịch hầuphương Cửa Sông quanhân chủ động sảnsinh xuấthọc continh giống phápthông thụ tinh tạo tiêuviệc nhưbảo hoạtquản lực, nguồn mật độ,tinh pH.trùng hầu càn thiết Xác tỷ lệ pha biện loãng,pháp chấtbảo chống nồng thu độ chất chống Mộtđịnh quảnđông hút quanđông tâm phù hợp bảo quản tinhxuất hầu Cửa Sông (-196°C) nhà chọn sản giống naynitơ lỏng phương pháp bảo quản tinh trùng phápgiới làmviệc lạnhbảo phùquản hợp bảo quản tinh Xác nitơ định lỏng.phương Trên tinh hầu nitơ hầu lỏngCửa Sông nitơ nghiên cúnlỏng từ (-196°C) lâu (Lanna, 1971; Hughes, 1973; Staeger, 1974; Zell ctv.,1979; Van der Horst ctv.,1985; Bougrier Rabenomanana, 1986 ) Những kết công bố cho thấy bảo quản phương pháp có nhiều ưu Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 21 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp PHÀN TỐNG QUAN 2.1 Đặc điếm sinh học hầu Cửa Sông 2.1.1 Vị trí phân loại Theo hệ thống phân loại Thiel (1931) vị trí phân loại hầu Cửa Sông sau: Ngành động vật thân mềm: Moỉlusca Lớp Bộ hai mảnh lệch vỏ: : Bivalvia Anỉsomyarya Họ hầu : Ostreidae Giống hầu: Crassostrea Loài hầu Cửa Sông: Crassostrea rivuỉaris 2.1.2 Đặc tính phân loại Vỏ to, dầy, dài, chắc, biến đổi có gần hình tròn, hình bầu dục, hình tam giác vỏ phải phang dẹp nhỏ vỏ trái, mặt vỏ có nhiều lớp vẩy mỏng mầu vàng nâu hay tím sẫm Hầu 1-2 tuổi vẩy thường phang mỏng giòn Hầu nhiều tuổi vẩy dầy, chắc, mặt vỏ mầu xám tím nâu Mặt vỏ mầu trắng, dây nề nâu tím đen vết khép vỏ to, mầu vàng nhạt hình dạng không định, phần lớn hình trứng hay bầu dục nằm phía lưng, vỏ trái to dầy lõm sâu Mặt mầu ngà 2.1.3 Đặc điểm sinh học Phân bố: hầu Cửa Sông (Crassostrea rivuỉaris) loại hầu phân bố rộng rãi nước ta Hầu hết cửa sông có vật bám thấy có hầu Cửa Sông, chúng thường hình thành bãi hầu lớn có dài hàng chục số sông Bạch Đằng, sông Chanh sông lân cận Vi hầu Cửa Sông loại hầu chiếm sản lượng chủ yếu nước ta Sản lượng hàng năm tới hàng Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp trăm vỏ Khai thác hầu Cửa Sông nghề sống chủ yếu nhân dân bãi hàu Trong loài hầu nuôi giới, hầu Cửa Sông với hầu ống hai loại hầu lớn cả, to hầu Cửa Sông tới 40cm Hầu Cửa Sông sống vùng nước lợ, tính thích ứng với độ muối rộng, có sống nước có độ muối từ l-30%o thích hợp 10-23%o Chúng phân bố từ tuyến triều cao độ sâu lOm, nhiều thường lớn phạm vi 5-7m Hiện tượng quần tập phổ biến, chúng thường kín vật bám nhiều bám chồng chất lên cụm lớn tua tủa lưỡi mai Có thiếu vật bám chúng bám lên vỏ hầu chết, vỏ hầu dài 15cm có tới 30 bám, trung bình lớn từ 5-20cm Vì vậy, ngư dân thường gọi nhiều dị tên khác nhau, thí dụ “hầu rùng” loại bám chi chít dầy khắp rạn đá lớn, “hầu lỗ” loại hầu bám đá, hầu “lưỡi mai”, “hầu rơi” loại bám vỏ hầu thành cụm, “hầu bạ” to thường bám đơn độc Phương thức sống: giai đoạn ấu trùng, chúng sống phù du, ấu trùng hầu có khả bơi lội nhờ hoạt động tiêm mao Ờ giai đoạn trưởng thành, hầu sống bám giá thể (sống cố định) suốt đời sống chúng Thức ăn phương thức bắt mồi: thức ăn ấu trùng bao gồm vi khuẩn, sinh vật nhỏ, mùn bã hữu cơ, tảo sillic, trùng roi có kích thước lOpm Âu trùng sử dụng vật chất hoà tan nước hạt vật chất hữu Khi trưởng thành thức ăn chúng chủ yếu thực vật phù du mùn bã hữu Các loài tảo thường gặp tảo Silic như: Melosira, Coscirìodiscus, Cycloteỉla, Skeỉetonema Phương thức bắt mồi hầu thụ động theo hình thức lọc Cũng loài Bivavia khác, hầu bắt mồi trình hô hấp nhờ vào cấu tạo đặc biệt Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp mang Khi hô hấp nước mang theo thức ăn qua bề mặt mang, hạt thức ăn giữ lại mang nhờ tiêm mao dịch nhờn tiết từ tiêm mao Các hạt thức ăn có kích thước nhỏ dịch nhờn tiêm mao dần phía miệng, hạt thức ăn lớn tiêm mao không giữ bị dòng nước khỏi bề mặt mang, sau tập chung mép màng áo bị màng áo đẩy Mặc dù hầu bắt mồi thụ động với cách thức bắt mồi vậy, chúng chọn lọc theo kích thước thức ăn Quá trình chọn lọc thực lần theo phương thức trên: lần xẩy bề mặt mang, lần thứ xay đường vận chuyển, lần xẩy xúc biện, lần thứ xẩy manh nang tiêu hoá Tại dầy, thức ăn tiêu hoá phần nhờ men như: Amylase, Lactase, Glipase, Maltase, Protease Các thức ăn không thích hợp đẩy xuống ruột qua hậu môn Các nhân tố tác động tới hoạt động bắt mồi hầu thuý triều, lượng thức ăn, yếu tố môi trường (nhiệt độ, độ muối ) Sinh trưởng: nhiệt độ yếu tố ảnh hưởng đến tốc độ sinh trưởng hầu Ở vùng nhiệt đới, nhiệt độ ấm áp nên tốc độ sinh trưởng hầu nhanh trình sinh trưởng diễn quanh năm Ờ vùng ôn đới, trình trình sinh trưởng diễn vào mùa xuân - hè, mùa thu đông gần không sinh trưởng Sự sinh trưởng hầu phụ thuộc vào mật độ, mật độ hầu cao hầu chậm lớn Tốc độ sinh trưởng hầu khác tuỳ theo vùng phân bố điều kiện môi trường nước vùng khác đặc trưng riêng loài (yếu tố di truyền) Một đặc điểm bật hầu vùng nhiệt đới trình sinh trưởng nhanh 6-12 tháng sau chậm dần Sinh sản: hầu Cửa Sông loài động vật phân tính rõ rệt đực riêng biệt, trường hợp trứng tinh trùng hình thành Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản Trướng ĐHNN Hà Nội Giai đoạn phát triển Trứng thụ tinh Thể cực Thòi gian Kích thước (jim) 30 phút Lê Thị Hồng Minh TS 50 50 50-60 Khơú luận tốt nghiệp Thể cực thứ 30 phút 50-60 BảngTuy 2.1 Bảng Quá 2.2 trình Sảnquá lượng phát triển phôi, số loài trùng nuôi hầu (25~28ƠC) cá thể trình phát dụcấuhầu có biến tính,(năm tỷ lệ1999) đực thay đổi Phân cắt lần 60 theo mùa vụ khác theo địa điểm Trong tự nhiên, tỷ lệ hầu 40Phân cắt lần 2 giờ-2 30 phút 60 68% hầu đực chiếm từ 21-61% (trong tháng đến tháng 10) Tỷ lệ Giai đoạn phôi nang 5-10 60-70 giảm thấp từ 0-16% (hầu cái) 38-90% (hầu đực) tháng từ 11 đến Áu trùng Verliger 12 70 tháng năm sau Hầu tham gia lần đầu sớm sau 6-7 tháng tuổi Âu trùng đỉnh vỏ thẳng 24 70 kích thước đạt 40-5Omm phát thấy có sản phẩm sinh dục có khả Àu trùng đỉnh vỏ lồi 8-10 ngày 150-180 tham gia sinh sản lần đầu Khi hầu bố mẹ tham gia sinh sản, tráng tinh Àu trùng có điểm mắt 17-20 ngày 200-250 trùng vào Dương môi trường nước,làquá ấu Hầu phóng Thái Bình (c.gigas) loàitrình hầu thụ tinh địa củaphát Nhậttriển Bảncủa Âu trùng có chân bò 20-22 ngày 220-250 trùng diễn ưu điếm vượt nước.trội Trong sản việc phóng trùngvàkích với hầu Thái trình Bình sinh Dương sớm đượctinh di nhập trở Àu trùng bám 22-25 ngày 270-300 thích hầu trứng Sứctrọng sinh sản lớn.sản Đólượng hầu thíchThái nghi Bình với thành loài hầuđẻnuôi quan hầu giới.là Tổng Tênđiều loài Sản lượng (nghìnấutấn) trứng,tấn, thụ năm tinh 1990 ngoài, trùng biến 2003 Dươngkiện nămsống 1950Hầu đạt đẻ 150000 1,2 triệutrải tấn,quacho đếnthái năm Hầu Thái Bình Dương (c.gigas) 3600 sinh sản phụ thuộc nhiều quần đẻ rấtbình nhiều trứng đạt đàn 4,38hầu triệuthường Trung hàng nămSức tốc độ tăng sản lượng đạt 7,8% có Hầu Châu Mỹ (C vỉrginica) 59 vào kích tăng thước cá thể thể sản2004) cao Nhiệt độ ảnh xu hướng mạnh trongCánhững năm lớn tiếp sức theosinh (FAO, hưởng lớnđến tới năm sức sinh hầu, yếu quan trựchầu tiếplà Hầu khác (Crassostrea spp)Tính 25đứngđộđầu 2000sản (FAO, 2004)nhiệt tốgiới trọng sản lượng ảnh hưởng thích hợpsản cholượng sinh sản Hầu Philippin (C iredaỉea) 19 Trung Quốc tới đạtsức 3,3sinh triệusản tấn.Nhiệt Đứngđộthứ hầu thường Nhậttrong Bản,phạm đồng vi 28-30°C Tuổi hưởng sức sinh nhóm hầu Ngu ôn: Đứcnghệ Thăngnuôi (2005) thời không nước có cóảnh công nghệtớisinh sản sản nhân tạo vàHà công hầu Saulượng, thụcông tinh, trứng hình tròndẫn đồng thời mộtgiống mànghầu suốt, tế 2.2 triển Sản công nghệ sản xuất phát sớm thếnghệ giới nuôi đầu sinh lượng từ năm 1980 bào chất bắt đầu lưu động tế bào tiêu biến Mộtcòn giò’bằng sau 5,6% thể cực gióisản lượng Việt Nam đến hầu liênnhân tục giảm, sảnthứlượng thể cực thứlượng, xuấtcông hiện, saunuôi trứng bắt nghệ đầu phân cắt, 2.2.1 Sản nghệ công sản trình xuất giống hầu sau trênlần thếphân cắt Trung Quốc thứ thành 64 tế có bàosản lượng phôi bắt giailượng đoạnnăm phát 2000) triển Sau giới Các nước hầuđầu lớnbước tiếp vào theocác (sản là: Hàn phôi tiếp tụcnay phát triển ấu trùng bánh ấunhưng trùng cóCác điểm ấusốtrùng thành giới có loài hầu chỉnước cómắt, loài Quốc - Hiện 208000 tấn; Pháp - 135000 tấn200 Mỹxe, - 50000 Đông Nam chân chuyến đoạn bám chúng không khả giábò trị kinh tế đưasang vào giai sản xuất công nghiệp Ácó có rấtkhi nhiều điều kiện thuận lợi, lại hoàn khôngtoàn quan tâm tới nghề nuôi bơi lội, dạng có chúng tương giống hầu trưởng hầu Chỉ hình có Philippin nghềđãnuôi hầuđốigốc địa với phương có sản thành, lượng chúng 12000 có khả đời (1999) Thái bám lan lần Malaixia bắt đầu nuôi hầu, sản lượng không đáng kể Theo FAO (2006) sản lượng hầu năm 2002 đạt 4,33 triệu tấn, năm 2004 đạt 4,6 triệu tấn, tốc độ sản lượng giai đoạn 3,1% Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 867 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp Cũng giống đối tượng nuôi khác, hầu nuôi theo phương pháp công nghiệp công tác sản xuất giống đóng vai trò then chốt, giúp người nuôi chủ động giống việc vớt giống từ tự nhiên gặp nhiều bất lợi không chủ động Đe xây dựng quy trình sản xuất giống nhân tạo suốt kỷ XX có nhiều nghiên cứu đặc điểm sinh học nghiên cún thức ăn cho loài thân mềm Với nhiều nghiên cứu khác đến năm 1991 Uting Spencer xây dựng hoàn thiện sơ đồ cung cấp tảo trình ương nuôi loài động vật thân mềm, điều giải khó khăn trại sản xuất, góp phần đem lại nhiều thành công sản xuất giống hầu nhân tạo Năm 2004 Helm Bourne thành công việc đưa quy trinh sản xuất hầu Thái Bình Dương Năm 2006 Rico cộng nghiên cứu công thức trộn hỗn hợp tảo làm thức ăn cho hầu c.gigas điều kiện hầu bố mẹ ương 19°c, cung cấp thức ăn 6% trọng lượng Khi tham gia sinh sản kết hợp tỷ lệ đực cái, đảm bảo 50 tinh trùng/ trứng Thu tỷ lệ ấu trùng 98% sử dụng thức ăn C.caỉcitrans Forma pumilnm Đỉnh cao phương pháp sản xuất giống nhân tạo thu hầu giống đơn Theo Cross Kingzett (1992) sau nuôi ấu trùng hầu đến giai đoạn hậu ấu trùng đỉnh vỏ lồi dùng LHG kích thích hầu xuống đáy mà không cần vật bám, dùng bột vỏ hầu, bột vỏ điệp kích thước 300-500pm Với phương pháp thu giống đơn phục vụ cho nghề nuôi hầu khay túi Cùng với việc nghiên cún sản xuất giống hầu nghiên cún công nghệ nuôi tiến hành Kết nghiên cứu cho đời nhiều phương thức nuôi khác như: nuôi treo mặt đáy, nuôi đá, Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp nuôi cọc, hình thức nuôi treo, nuôi bè, nuôi treo dây, hình thức nuôi hầu rời 2.2.2 Sản lượng, công nghệ nuôi công nghệ sản xuất giống hầu Việt Nam Ớ Việt Nam nghề nuôi hầu mẻ, nuôi hầu năm cuối kỷ XX Sản lượng hầu nuôi nước ta thấp chủ yếu đánh bắt tự nhiên, công nghệ nuôi hầu đơn giản phần lớn dựa vào giống tự nhiên, sau quản lý vùng bãi triều thu hoạch Năm 2001-2003 Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản I tiến hành thử nghiệm thành công sản xuất giống nhân tạo hầu biến (C gigas) công nghệ Australia Tuy nhiên việc nuôi hầu giống lên hầu thương phẩm chưa thu kết hầu bị chết hàng loạt (Đồng Xuân Vĩnh, 2004) Năm 2001-2004 đề tài KC06-NN14 Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản I xây dựng thành công quy trình sản xuất giống hầu (trên đối tượng hầu: c.rỉvularis, c belchery, c.ỉugubris) Quy trình sản xuất giống hầu hoàn toàn chủ động tất khâu (Hà Đức Thắng, 2005) Hiện Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản I triển khai đề tài KC.06.18/06-10 “Nghiên cún công nghệ sản xuất giống nuôi thương phẩm hầu Thái Bình Dương (C gigas) phục vụ xuất khẩu” Thành công đề tài mở hướng phát triển cho nghề nuôi hầu nước ta 2.3 Những yếu tố ảnh hưỏng đến tinh trùng trình bảo quản lạnh 2.3.1 Dung dịch pha loãng Dung dịch pha loãng nhà nghiên cún gọi extender, có tác dụng trì trạng thái vô hoạt, không làm tinh trùng chuyển động trước sử dụng, kéo dài thời gian sống tiềm sinh tinh trùng (Bates ctv., 1996) Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 10 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp Graybill Horton (1996) cho việc tìm extender thích hợp bước trình bảo quản tinh extender định nghĩa sau: “extender dung dịch muối vô hữu cơ, có tác dụng bảo vệ sống tế bào tinh trùng thời gian bảo quản” Extender thường bao gồm hỗn hợp chất vô chất hữu giống tinh trùng đồng thời thoả mãn điều kiện sống tinh trùng thể, đảm bảo chất dinh dưỡng giống tinh tươi cá cần đặc biệt ý tới yếu tố pH, áp suất thẩm thấu, tỷ trọng, độ nhớt, nhiệt độ, tỷ lệ chất điện giải không điện giải 2.3.2 Ảp suất thẩm thấu Áp suất thẩm thấu dung dịch bảo quản tương đương áp suất thẩm thấu tinh trùng nghĩa tinh trùng phải sống môi trường đắng trương có tinh trùng giữ nguyên hình thái, tiến hành trao đổi bình thường Các dung dịch ưu trương nhược trương có hại cho tinh trùng làm tinh trùng trương phồng teo lại chết nhanh chóng (Đỗ Văn Thu, 2000) 2.3.3 Tỷ trọng môi trường Tỷ trọng dung dịch bảo quản tương đương tỷ trọng tinh dịch đế tránh tình trạng tinh trùng bị lực Ascimet làm thay đôi hình thái môi tinh trùng 2.3.4 pH pH dung dịch bảo quản tương đương pH tinh trùng, trình trao đổi chất tinh trùng liên quan đến hàng loạt enzym Các enzym xúc tiến phản ứng hoá học giới hạn pH định (Đỗ Văn Thu, 2000) 2.3.5 Tỷ lệ chất điện giải không điện giải Đe giữ thăng áp lực thẩm thấu ổn định pH cho tinh trùng dung dịch bảo quản phải có chất điện giải Các ion điện giải, đặc biệt anion acid gây hại đến màng tinh trùng phải có chất không Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 11 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp điện giải ngăn ngừa tác động có hại ion, tránh tượng làm điện tích bề mặt tinh trùng gây tượng tụ dính tinh trùng (Đỗ Văn Thu, 2000) Milovanov (1962) nhận thấy dung dịch bảo quản tăng hoá trị cation có hại cho tinh trùng Muối có cation +2 (Ca, Mg, Ba) làm tinh trùng bị tụ dính, muối có cation +3 +4 (Al, Fe) làm tinh dịch bị đông đặc chết nhanh Theo Popov (1968) cation có hoá trị +1 (Na, K) +2 (Ca, Mg) có tác dụng Đối với anion có tương quan thuận, muối có hoá trị -2 tác động lên tinh trùng tốt hóa trị -1, nghĩa anion hoá trị tác dụng lên tình trùng giống Theo Popov (1968), dung dịch bảo quản dùng muối có anion hoá trị 2, 3, so với hoá trị làm tăng sức sống tinh trùng Theo Dương Đinh Long dùng Natri - bicarbonat vừa có tác dụng điều chỉnh pH vừa cung cấp lượng nhỏ C02 vào môi trường, ức chế hoạt động tinh trùng (Trích qua Đỗ Văn Thu, 2000) 2.3.6 Độ nhớt Độ nhớt dung dịch bảo quản phải tương đương với tinh dịch đế tránh tình trạng sức căng mặt tác động lên màng bọc tinh trùng ma sát nội phân tử qua lớn tinh trùng vận động ( Đỗ Văn Thu, 2000) Do đặc điểm sinh học loài khác lên dung dịch bảo quản khác nhau, việc tìm dung dịch phù hợp với loài cần thiết Horton Ott (1976) số extender đơn giản gồm thành phần NaCl, NaHCƠ3 Lectihin cho kết bảo quản thành công Dung dịch bảo quản điều chỉnh phát triển dựa đặc điểm sinh lý, hoá tinh dịch chúng có thành phần tương đối giống (Rao Gopal, 1989) Một số nghiên cứu cho biết thành phần đơn giản extender sau: NaCl, Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 12 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp KC1, CaCl, NaHCC>3, NaHPƠ4, MgS04 chất dinh dưỡng glucose, íructose, lòng đỏ trứng gà, leccithin, glycine 2.3.7 Tỷ lệ pha loãng Tỷ lệ pha loãng khác dẫn đến nồng độ tinh trùng mẫu khác Theo Smimov (1974) mật độ tinh trùng tinh dịch pha loãng ảnh hưởng lên kết đông lạnh, pha loãng tinh dịch có tỷ lệ, tinh dịch có nồng độ tinh trùng cao khả đông lạnh tinh dịch có nồng độ thấp Platanov (1978) cho nồng độ tinh trùng ảnh hưởng đến tốc độ đông lạnh phục hồi sức sống tinh trùng trình giải đông (Trích qua Đỗ Văn Thu, 2000) Tỷ lệ pha loãng tinh trùng extender loài khác Ở cá tỷ lệ thay đổi từ 1:1 đến 1:20, tỷ lệ pha loãng lớn 1:20 thường cho hoạt lực tinh sau giải đông thấp (Chamberyon Zohan, 1990; Gwo ctv., 1991) Đối với tinh trùng hầu Thái Bình Dương theo nghiên cứu Bougrier (1986) tỷ lệ pha loãng tốt 1:12,5 1:15 Tuy nhiên số nghiên cứu cho ràng tỷ lệ pha loãng tương đối rộng, việc lựa chọn cho phù hợp với loài cần thiết 2.3.8 Chất chống đông nồng độ chất chống đông Chất chống đông đóng vai trò chất bảo vệ giúp tinh trùng sống sót sau trình đông lạnh, hạn chế tối đa ảnh hưởng sốc nhiệt đến tinh trùng trình làm lạnh giải đông Trong số nghiên cứu chất chống đông, nguyên sinh chất tinh trùng có tượng kết dính lại tế bào bị phá huỷ, có extender tinh dịch nguyên sinh chất túi tinh không bảo vệ tinh trùng làm lạnh thấp Một số chất chống đông hay sử dụng để bảo quản tinh là: Glycerol, Ethylene Glycol (EG), Propylen Glycol, Dimethyl Sulíoxide (DMSO), Methanol, Dimthyl Acetamide (DMA) Trên thực tế nhiều công trình nghiên cứu chứng minh trình Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 13 Trướng ĐHNN Hà Nội Phương pháp làm lạnh Số mẫu Hoạt lực tinh trùng sau bảo quản (%) Lê Thị Hồng Minh TS 50 59,44 ± 10,14 Theo chương trình Tỷ lệ thụ tinh (%) 72,7 ± 6,2 Khơú luận tốt nghiệp Yankson & Moyse trực tiếp (có nghĩa đưa thẳng mẫu vào nito lỏng) phương pháp làm Làm lạnh nitơ 56,11 ±9,28 70,2 ± 4,9 lạnh gián tiếp (có nghĩa mẫu làm lạnh sơ sau chuyển vào bảo quản nitơ lỏng) Cả hai phương pháp đă thử nghiệm từ lâu đem lại nhiều kết bảo quản tinh hầu phương pháp làm lạnh bước khẳng định có hiệu Trong thí nghiệm thử nghiệm bàng hai phương pháp khác nhau: phương pháp làm lạnh bước bước dùng chương trình nhiệt Yankson & Moyse điều khiển máy tính Phương pháp làm lạnh trực tiếp bàng nitơ phút sau chuyển vào Caniter bình nitơ lỏng Cả hai phương pháp sử dụng dung dịch bảo quản nước biển với tỷ lệ pha loãng 1/9, chất chống đông DMSO 10% Ket thí nghiệm trình bầy bảng 4.6 ĐỒ thị 4.4 Ảnh hưởng nồng độ chất chống đông đến tỷ lệ thụ tinh sau Bảng 4.6 Ánh hưởng phương pháp làm lạnh đến chất lượng tinh 10 ngày bảo quản trùng sau tuần bảo quản Kết thí nghiệm chọn nồng độ chất chống đông cho thấy DMSO 15% cho kết tốt nhất, hoạt lực tinh trùng tý lệ thụ tinh 62,22% 73,6% nhiên thấp hon so với lô đối chứng (hoạt lực tinh trùng 86,67%; tỷ lệ thụ tinh 86%) DMSO 5% DMSO 10% cho kết thấp tương ứng với tỷ lệ thụ tinh 57,6% 71,4% Khi phân tích bàng ANOVA cho thấy sai khác hiệu nồng độ chất chống đông có ý nghĩa thống kê (P0,05) Như hai phương pháp, phương pháp xem có hiệu Tuy nhiên, thực tế dùng phương pháp đơn giản hơn, dễ thao tác 4.2 Thảo luận Nhìn chung qua đợt thí nghiệm bảo quản tinh hầu Cửa Sông cho kết tương đối tốt, nhiên kết tinh bảo quản thu nhỏ so với tinh tươi Tỷ lệ thụ tinh tinh bảo quản thấp so với tinh tươi nguyên nhân chất lượng tinh trùng, ảnh hưởng tốc độ giải đông Ớ thí nghiệm thử hai tỷ lệ pha loãng nhận thấy tỷ lệ pha loãng 1/9 cho kết bảo quản cao tỷ lệ 1/6 Sở dĩ có kết tinh dịch hầu Cửa Sông có mật độ tinh trùng cao nên thích ứng với tỷ lệ pha loãng cao Trong loại chất chống đông thử nghiệm có khác hoạt lực tinh trùng tỷ lệ thụ tinh bảo quản bàng loại chất chống đông khác sai khác phân tích phương sai ANOVA nhận thấy có ý nghĩa thống kê (P0,05) Như với kết đạt bước đàu xây dựng quy trình bảo quản dài hạn tinh trùng hầu Cửa Sông nitơ lỏng 5.2 Đề xuất Các nghiên cứu cần tiếp tục lặp lại để thu kết ổn định Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 42 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp Tiếp tục thử nghiệm thí nghiệm khác sử dụng chất chống đông khác với nồng độ khác nhau, thí nghiệm thời gian cân nhiệt, phương pháp giải đông, nhằm tìm quy trình thích hợp Tiếp tục nghiên cứu phương pháp làm lạnh đặc biệt phương pháp làm lạnh nitơ phương pháp đơn giản, dễ làm có hiệu kinh tế Mở rộng đối tượng nghiên cứu loài hầu khác, loài nhuyễn thể khác Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 43 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Cao Trường Giang, 2007 Thuyết minh đề tài nghiên cứu khoa học phát triên công nghệ: “Nghiên cứu công nghệ sản xuất giong nuôi thương phâm Hầu Thái Bình Dương, Crassostrea gigas phục vụ xuất khâu” Đồng Xuân Vĩnh, 2004 Kết tiếp nhận công nghệ nuôi sản xuất giống hầu biển Crassostrea gigas Báo cáo dự án Hà Đức Thắng, 2005 Báo Cáo tống kết đề tài nghiên cứu khoa học công nghệ, đề tài: “Nghiên cứu công nghệ sản xuất giống vù nuôi hầu (Crassostrea SP) thương phẩm” Hải Phòng Hà Đức Thắng, 2006 Chương trình học phần kỹ thuật nuôi động vật thân mềm Hải Phòng Trang 26-52 Hồ Kim Diệp ctv, 2002 Nghiên cứu bảo quản tinh cá Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học cấp Kim Thị Thoa, 2004 Luận văn thạc sĩ, đề tài “Bước đầu lưu giữ giong vi tảo nitơ lỏng nhiệt độ (~196°C) phục vụ sản xuất giống hải sản” Nguyễn Minh Thành ctv, 2003 Bảo quản tinh cá Tra (Pangasỉanodon hvpophathalmus) dài hạn nitơ lỏng Trong tuyển tập báo cáo khoa học Nuôi trồng Thuý sản hội nghị khoa học toàn quốc lần Nhà xuất Nông Nghiệp Tài liệu nước Adam, s L Smith, J F Roberts, R D Janke, A.R.Laspar, H F Tervit, H R Pugh, p A Webb, 2004 Cryopreservation of sperm of the PaciTic oyster (Crassostrea gigas)' deveĩopment of practical method for commercial spat production Aquaculture 242: 271-282 Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 44 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp Ashwood - Smith M J., 1980 Low temperature presevation of cell, tissues and organs In: Low temperature preservation in Medicine and Biology Pitman Medical tunbridge Wells: 19-44 10.Chamberyro F and Y Zohar, 1990 Adiluent for sperm cryopeservation of gilthead seambream, sparas aurata Aquaculture 90: 345 - 352 11 Durbin F J and Stott B and Durbin H., 1982 Short communication A note on the cryopreservation of grass carp milt Ministry of Agriculture, Fisheries and Food directorater of íĩsheries research, Salmon and Freshwater: Fisheries Laboratory 10 Whitehall Place, London sw 1A 2HH: 115-117 12.Gopal Rao, K., 1989 Cryopreservation of Common carp sperm Department of íìshery Science A p Agriculture University Andhara Pradesh In: Fish Genetic in India, Edrs and Jhingran 193-198 13.Horton H F and Ott A.G., 1976 Cryopreservation of fish spermatozoa Joumal of the Fisheries Research Board of Canada 33: 995-1000 14.Tiersch T R cryopreservation and of Wayman sperm In: W.R., 2000 Research Cryopeservation in methods aquatic for species Tiersch, T.R and Mazik, p M Editors World aquaculture society, Baton Rouge, Louriiana XXI-XXVI 15.Bougrier, s and Rabenomanana, LD, 1986 Cryopreservation of spermatozoa of the Japanese oyster, Crassostrea gigas Aquaculture, 58: 271-282 16.Dong, A R and Hoare, K, 2003 Biotechnology and genetics in Fisheries and Aquaculture Blachkwell Science 3: 102-103 Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 45 Trướng ĐHNN Hà Nội Hoạ st t lưc t ( % 85 80 90 95 10 080 80 90 85 95 01 90 11 80 21 95 31 90 41 10 089 T5 B st 7, d S t t Đếm mật độ tinh trùng D Lê LêThị Thị ThịHồng Hồng Hồng Minh MinhTS TS TS 50 50 50 Khơú Khơú Khơúluận luận luậntốt tốt tốtnghiệp nghiệp nghiệp 704Lê 697 Minh 729 176, 673 723 7,6 3174, 658 721 640 702 766 7,8 713 17.Dong, 681 Q Eudekine, 672 715 689 173, B Huang, c Allen, s D, 7,7 2005 Commercial-scale PHỤ LỤC 5172, 712 645 724 678 694 7,9 Bảng Ánhsprem hưỏng Ánh hưỏng chất chống tỷ sinh lệof đông pha loãng đến đến lực hoạt tinh lực trùng tinh tỷ lệ tỷ lệOyster, cryopreservation diploid and tetraploid Paciíìc Bảng 1.của Một sốcủa đặccác điểm học cuahoạt tinh dịch hầu Cửatrùng Sông 7173, 658 3.Bảng 723 715 711 653 7,7 0173, thụ thụ tỉnh tỉnh sau11tuần tuần bảo bảo quản quản 702 721 635 725sau 691 Crassostrea gigas Cryobiology, vol 50, nol, pp 1-16 7,6 664 653 741 697 724 174, 7,7 J.679B, 1973 examination of 7,8 egg challenged with 715 18.Hughes, 692 732 An 664 174, 1173, 701 663 725 spemiatozoa 659 7,9Crassostrea vỉginia cryopreserved of714the American, 648 715 687 709 668 171, 7,9 Cryobiology, 10: 324-344 685 682 766 710 712 177, 7,6 of small s w 697 19.Hwang, 669 624and Chen, 672 H p,1973 732 Fertility 169, 7,8 oyster gametes after 723 731 645 703 680 174, 7,8 freeze - thawing Chinese - American1 oyster, vommission on Rural 674 702 687 669 652 169, 7,6 Reconstraction Fisheries series 15: 1-5 726 698 675 682 704 174, 7,7 692 20.Lanna, 692,9 T 689,6 695,8 697,7 173, 7,7of the pacifíc oyster E, 1971 Experimental self- Fertilization 25,7 26,9 42,7 22,2 31,9 7,5 0,1 {Crassostrea gỉgas) untilizing cryopreserved sperm Genetics, 68: 599-60 1/6 21.Seel, s R, 1/9 Bamíord, M H and ĐC Hidu, H, 1979 Cryopreservation of Tỷ lệ sprematozoa Tỷ lệ Hoạt Hoạt of the Tỷ American lệ Hoạt lực (Crassostrea oyster virginica) Cryobiology thu tỉnh thu tinh lực lực thu tỉnh tỉnh (Vo) 12:448-tỉnh (Vo) (Vo) 460 tỉnh trùng (%) trùng 22.Tervit, trùng H R, 2005 Succesful cryopreservation of paciíĩc oyster (%) (%) 63,3 65 80,0 90 84,3 30 (Crassostrea gigas) Cryobiology Vol 51, no2: 142-151 56,7 70 71,0 95 92,3 50 23.Zell, s.50R Bamíor, H, 1979 Cryopreser vation of 71,0 75,7M H and 85 Hidu, 87,3 45 59,0 spermatozoa 55 69,0 American 90 oyster 88,3 of the (Crassostrea viginica) Gmelin 45 30 25 35 53,3 75 45 62,3 T b Std 50 S t t 60,0 Cryobiology, 65 16: 448-460 76,7 D:54,3 Mật độ tinh trùng 45 (xl09tt/ml) 82,3 85 90,0 90 89,7 72,3 85 86,7 50 76,7 95 93,0 52,3 60 65,7 85 82,7 39,44 59,1 59,44 74,4 89 88,3 9,50 DMSO 5,9 10,14 Methanol 3,4 Đôi chứng Hoạ Hoạt Tỷ lệ Hoạt Tỷ lệ Hoạt Tỷ lệ lực thụ lực thụ lực thụ tinh trùn tinh tin nuôi tinhthuỷ tỉnh 46 48 Khoa: Khoa: Khoa:Chăn Chăn Chăn nuôi nuôitỉnh và vànuôi nuôi nuôitrồng trồng trồng thuỷ thuỷsản sản sản47 (%) (%) (%) h trùn g 5,3 4,17 Glycerol (%) 60 74,4 trùn 35 g 39,0 g (%) 20 36,7 Tỷ lệ t lực thụ tỉnh tỉnh (%) trùn 85 g 86,7 Trướng Trướng TrướngĐHNN ĐHNN ĐHNNHà Hà HàNội Nội Nội 70 35 27,7 90 84,3 25 39,0 95 90,0 55 40 36,7 81,0 76,7 30 32,3 Lê Thị Hồng TS 50 64,3 25 Minh43,3 15 29,0 85 87,7 65 70,0 30 29,0 30 24,3 60 58,8 9,93 80,0 72,7 25 44,3 20 21,6 7,91 21,0 28,4 50 93,3 80 45 66,7 50 36,7 25 30,0 85 82,3 Bảng Bảng Ánh hưỏng chấtcác chống đông đến hoạt tinhđến trùng vàlực tỷ lệ Ảnhcủa hưỏng nồng độ chất chốnglực đông hoạt tinh 75 79,0 40 41,0 10 27,7 90 92,3 tháng trùngthụ vàtỉnh tỷ lệsau thụ1tinh saubảo 10 quản ngày bảo quản 50 61,0 30 35,7 15 20,0 85 86,7 T b std 7,4 DMSO hoạ s t t t lực tin h 55 trùn 60 50 65 60 50 tinh (%) 76,7 62,3 33,8 44,0 8,2 6,1 Methanol Glycerol Đôi chứng hoạ hoạ Tỷ hoạ Tỷ t lệ t lệ lực thụ lực thụ tỉn tinh (%) 29,0 tỉn tinh (%) 90,0 t thụ 81,0 87,1 lực tỉn h 35 trùn 40 Tỷ lệ thụ tỉnh (%) 39,0 36,7 h 15 trùn 87,7 5,06 6,4 4,2 20 25 16,7 h 90 trùn 85 24,3 85 82,3 26,7 85 87,7 23,3 95 84,3 91,0 32,3 43,3 62,3 20 35 29,0 10 30 66,7 15 36,7 15 17,7 90 85,7 40 77,7 35 41,0 20 85 93,3 60 65 73,3 30 35,7 10 20,0 16,7 80 86,7 73,3 25 44,3 80 56,11 69,6 29,44 37,6 81,0 86,9 8,0 5,0 DMSO 10% 31,0 20 18,3 22,8 6,6 5,4 DMSO 15% 86,11 4,8 4,1 Đôi chứng Hoạ Hoạ Tỷ Hoạ Tỷ t lệ t lệ std 60,0 74,3 8,2 6,8 DMSO 5% Hoạ stt Tỷ lệ 95 30 Tb Khơú luận tốt nghiệp t Tỷ lệ thụ lực tinh trùn g t Tỷ lệ thụ 49 lực tinhKhoa: Chăn lực nuôi tỉnh lực thuỷthụ nuôi trồng sản 50 (%) (%) tỉnh tỉn tinh tỉnh (%) trùn h trùn g trùn g thụ tinh (%) Trướng ĐHNN Hà Nội 40 53,3 70 72,3 85 83,3 55 56,7 50 63,3 65 Lê Thị Thị Hồng Hồng Minh Minh TS 50 50 60 54,3Lê 65 64,3TS 64,3 90 89,0 79,0 85 45 71,0 85 81,0 93,3 40 55 50 Tb std 9,29 60,0 52,3 55 57,6 58,3 7.91 70,0 77,7 50 4,7 71,4 5,9 62,2 9,05 73,6 Hoạt lực tinh 86,6 4,33 5,7 Hoi nito’ stt Khơú Khơú luận luận tốt tốt nghiệp nghiệp 65 72,3 70 77,7 90 83,3 Bảng Bảng6.7.Ánh Phân hưỏng tích ANOVA cáchmột làm nhân lạnh đến tố tỷhoạt lệ thụ lựctinh tinhcủa trùng hai cách tỷ pha lệ thụ 58,7 50 73,3 65 80,0 80 82,3 tỉnhloãng sau 1khác tuần bảo quản 63,3 70 79,0 75 75,7 95 85,7 Anova: Single Factor 65,7 50 65,7 55 76,7 85 86,7 SUMMARY 54,3 65 76,7 50 65,7 85 89,0 60 35 60 48,9 55 86,0 4,0 Chương trình Tỷ lệ thụ tinh trùng (%) (%) 60 65 70,0 50 Hoạt lực tinh Tỷ lệ thụ tinh (%) trùng (%) 70 75,7 76,7 60 55 81,0 76,7 55 65,7 65 72,3 45 66,7 50 66,7 65 73,3 75 74,3 65 71,0 50 65,7 60 40 77,7 45 63,3 63,3 65 79,0 Tb 56,11 70,2 59,44 72,7 std 9,28 4,9 10,14 6,2 Groups Column Column ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total 67,7 Count 9 Sum 323333 6.693333 Average 0.591481 0.743704 ss df MS F P-valưe 0.104 3.03E272 0.104272 32.97789 0551 Khoa: Khoa:Chăn Chănnuôi nuôivà vànuôi nuôitrồng trồngthuỷ thuỷsản sản 52 0.050 16 0.003162 59 0.154 17 862 Variance 0.003481 0.002843 F crit 4.493998 Trướng TrướngĐHNN ĐHNNHà HàNội Nội Bảng Phân tích ANOVA nhân tố tỷ lệ thụ tinh chất chống khác Lê Lê Thị Thị Hồng Hồng Minh Minh TS TS 50 50sau tuần bảo quản Anova: Single Factor Khơú Khơú luận luận tốt tốt nghiệp nghiệp SUMMARY Groups Column Column Column ANOVA Source Variation Between Groups Within Groups Total Groups Column Column Column of ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SUMMARY Groups Column Column Column ANOVA Source Variation Between Groups Within Groups Total Groups Column Colưmn of ANOVA Soưrce of Variation Between Groups Within Groưps Total Groups Count Sum Average Bảng 11 Phântích tíchANOVA ANOVA mộtnhân nhântố tốVariance tỷlệlệthụ thụtinh tinhcủa củacác haichất phưong pháp Bảng Phân tỷ chống 6.5311 0.725679 0.005388 làm lạnh 3.96 đông0.44 khác nhaukhác sau0.003689 1nhau tháng bảo quản 2.5533 0.283704 0.004082 Anova: Single Factor df MS ss PSUMMARY F value F crit SUMMARY 0.90 0.4520 103.06 1.66E- 3.402826 41 75 37 12 0.10 24 0.0043 53 86 1.00 26 94 Count Sum Average Variance 6.266667 0.696296 0.004646 3.38 0.375556 0.002486 2.053333 0.228148 0.002909 ss df MS F P-value F crit 1.0312 3.40282 0.515649 154.071 2.03E99 14 0.0803 24 0.003347 23Bảng 10 Phân tích ANOVA nhân tố tỷ lệ thụ tinh nồng độ chất 1.1116 26 22 chống Bảng 12 Phân tích ANOVA đông nhânkhác tố tỷ lệ thụ tinh hai thòi gian giải Coưnt Sum Avera Varianc Anova: Single Factor đông khác sử dụng chất chống đông DMSO ge e Anova: Single 6.62 Factor 0.74 0.0032 33 6.42 0.71 0.0035 33 5.18 0.58 0.0022 67 SUMMARY ss df 0.1345 69 0.0709 24 0.2055 26 39 Count 9 MS 0.07 Sum 6.32 6.546667 Pvalue 2.87E06 F 22.754 Average 0.702222 0.727407 F crit 3.402826 Variance 0.002433 0.003869 P-value ss MS df F F crit 54 53 0.0028 0.90582 0.35538 4.49399 Khoa: Khoa:Chăn Chăn nuôi0.002854 vànuôi nuôitrồng trồng thuỷ thuỷsản sản nuôi 54 0.0504 16 0.003151 17 0.0532 17 72 Count Sum Average Variance Trướng TrướngĐHNN ĐHNNHà HàNội Nội Column Column ANOVA Source Variation Between Groups Within Groups Total Groups Column Column ANOVA Source Variation Between Groups Within Groups 6.531111 6.266667 0.005388 0.004646 Lê Thị Hồng Minh TS 50 of of Total Groups Column Column ANOVA Source Variation Between Groưps Within Groups Total 0.725679 0.696296 Khơú luận tốt nghiệp ss df MS F P-value F crit Bảng 13 Phân tích ANOVA nhân tố tỷ lệ thụ tinh ỏ’ hai thòi gian giải 0.003885 0.003885 0.77437 0.39189 4.4939 đông khác sử dụng chất chống 98 đông Methanol 0.080273 16 0.005017 0.084158 17 Factor Anova: Single Count Sum Average Variance SUMMARY 3.96 0.44 0.003689 3.38 0.375556 0.002486 ss df 0.018689 0.0494 MS F P-value F crit 0.01868 6.05308 0.02563 4.49399 8 16 0.00308 0.068089 Count 9 17 Sum 2.553333 2.053333 Average 0.283704 0.228148 Variance 0.004082 0.002909 Bảng 14 Phân tích ANOVA nhân tố tỷ lệ thụ tinh hai thòi gian giải of ss chất chống df đông khác MS nhauFkhi sử dụng P-value F critđông Glycerol Anova: 0.0138 0.013889 3.97368 0.06355 4.49399 Single Factor 89 0.0559 16 0.003495 SUMMARY 23 0.0698 17 12 56 Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 55 Trướng ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khoá luận tốt nghiệp PHẦN MỞ ĐẦU PHẦN TỔNG QUAN 2.1 Đặc điêm sinh học hầu Cửa Sông 2.1.1 Vị trí phân loại 2.1.2 Đặc tính phân loại 2.1.3 Đặc điêm sinh học 2.2 Sản lượng, công nghệ nuôi công nghệ sản xuất giống hầu giới Việt Nam 2.3 Những yếu tố ảnh hưởng đến tinh trùng trình bảo quản lạnh10 2.3.1 Dung dịch pha loãng 10 2.3.2 Áp suất thâm thấu 11 2.3.3 .Tỷ trọng môi trường 11 2.3.4 pH .7 11 2.3.5 Tỷ lệ chất điện giải không điện giải 11 2.3.6 Độ nhớt 12 2.3.7 Tỷ lệ pha loãng 13 2.3.8 Chất chống đông nồng độ chất chổng đông 13 2.3.9 Nhiệt độ thời gian cân băng nhiệt 14 2.3.10 .Tố c độ hạ nhiệt 15 2.3.1 ỉ Phương pháp giải đông 16 2.3.12 Các yểu to khác 16 2.4 Tình hình nghiên cúu bảo quản tinh hầu giới Việt Nam 17 2.4 ỉ Tình hình nghiên cứu bảo quản tinh hâu giới .17 2.4.2 .Tình hình nghiên cứu bảo quản tinh hầu Việt Nam 20 PHẦN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 22 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cúu 22 3.2 Đối tượng nghiên cúu 22 3.3 Vật liệu phương pháp nghiên cứu .22 3.3.1 V ật liệu nghiên cứu 22 3.3.2 P Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 57 Trường ĐHNN Hà Nội Lê Thị Hồng Minh TS 50 Khơú luận tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 Tài liệu tiếng việt 44 Tài liệu nước .44 PHỤ LỤC 47 Khoa: Chăn nuôi nuôi trồng thuỷ sản 58 Trướng ĐHNN Hà Nội [...]... 4.1.2 Kết bảo iếm quảnsinh tinhhọc hầucủa Cửa Sông nitơ Sông lỏng ở 2 tỷ lệ 4.1.1 Mộtquả số đặc tinh dịchtrong hầu Cửa 39,44 ± 9,50 59,1 ±5,9 loãng (Crassostrea Tinh tươi Giải đôngpha tinh 59,44 ± 10,14 74,4 ± 5,3 bảo khác nhau rivularis) 88,89 ±4,17 88,3 ± 3,4 Tỷ lệ pha loãng một những yếu tố đặc rất quan trongchất quálượng trình tinh bảo quản Mầu sắc là một l trong điếm trọng đánh giá Tinh tinh hầu trùng... học của tinh trùng hầu Cửa Sông Hoạt lực tinh trùng hầu Cửa Sông trước khi bảo quản qua kiểm tra thấy đều tốt, trung bình đạt 89% dao động trong khoảng 80% - 100% Mật độ tinh trùng hầu Cửa Sông đạt trung bình 173,8x1 o9 tinh trùng/ml tinh dịch và dao động từ 169,2 xl09-177,8xl09 tinh trùng/mĩ pH của tinh dịch hầu Cửa Sông đạt 7,7 dao động trong khoảng 7,6 đến 7,9 Hình dạng tinh trùng hầu Cửa Sông đều... (Cryogentic) Bougrier (1 986) bảo quản tinh hầu Thái Bình Dương bằng cách làm lạnh trên hơi nitơ lỏng 5cm trong 3 phút sau đó được chuyển vào nitơ lỏng Còn Adam và ctv., (2 004) lại làm lạnh tinh hầu Thái Bình Dương sử dụng máy làm lạnh (Kryo-10 Serie II) với chương trình hạ nhiệt từ 0°c tới -80°c, giữ ở -80°c trong 10 phút sau đó bảo quản trong nitơ lỏng Nhiều nghiên cứu về bảo quản tinh cho thấy rằng tốc... 12,5% cho khả năng thụ tinh trùng cao hơn ở nồng độ 2,5%; 15% Neu nhúng trực tiếp lọ đựng tinh trùng sau khi đã được pha loãng với chất bảo quản vào trong nitơ thì khả năng thụ tinh của tinh trùng rất thấp Khả năng thụ tinh của tinh trùng bảo quản lạnh trong nitơ lỏng đạt 80% Theo Dong và cộng sự (2 005) nhằm đánh giá khách quan các chất bảo quản đối với việc bảo quản các mẫu tinh trùng hàu Thái Bình... viên (2 003) với quy trình bảo quản tinh cá tra trong nitơ lỏng với thời gian bảo quản 7-21 ngày Hầu chua phải là đối tuợng nuôi phố biến nên cho đến nay các nghiên cứu trên đối tuợng này là rất hạn chế Theo kết quả nghiên cứu của tác giả Hà Đức Thắng và cộng sự (2 005) thì khả năng hoạt động của tinh trùng không còn sau 810 giờ Tuy vậy khả năng thụ tinh rất kém nếu bảo quản trong thời gian quá lâu, trong. .. bằng, kỳ thuật đóng cọng, phương pháp làm lạnh, phương pháp giải đông, phương pháp thụ tinh 2.4 Tình hình nghiên cứu bảo quản tinh hầu trên thế giói và ở Việt Nam 2.4.1 Tinh hình nghiên cứu bảo quản tinh hầu trên thế giói Cùng với sự ra đời của công nghệ sản xuất giống nhân tạo, thì song song đó các phương pháp bảo quản tinh trùng của các loài cũng được nhiều nhà khoa học tiến hành nghiên cứu Mục đích... của tinh bảo quản là rất khó, do ảnh hưởng của nhiều yếu tố khác nhau lên tỷ lệ thụ tinh như kỹ thuật thụ tinh, nhiệt độ, chất lượng của trứng do vậy tỷ lệ thụ tinh của các thí nghiệm có sự dao động khá nhiều Câu hỏi đặt ra là thời gian bảo quản tinh kéo dài bao lâu? Theo cơ chế cũng như một số nhà nghiên cứu cho rằng thời gian bảo quản trong nitơ lỏng được xem là vô hạn vì trong điều kiện như vậy tinh. .. thòi gian nghiên cứu Địa điểm nghiên cứu: nghiên cứu được tiến hành tại Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thuỷ sản 1 - Từ Sơn - Bắc Ninh và Trung tâm giống Hải sản miền bắc - Cát Bà - Hải Phòng Thời gian nghiên cứu: từ tháng 2 đến tháng 8 năm 2009 3.2 Đối tượng nghiên cứu Hầu Cửa Sông: Crassostrea rivularis Nguồn hầu được thu thập từ khu vực bãi nuôi ven sông Chanh, Yên Hưng, Quảng Ninh Hầu bố mẹ trong giai... đối với ấu trùng Với kết quả đạt được trong những năm qua cho thấy kỹ thuật bảo quản tinh hàu ngày càng phát triển Các tác giả với những cách thức khác nhau đã thành công trong việc chứng minh tính khả thi của việc áp dụng tinh trùng bảo quản lạnh sâu trong sản xuất và góp phần không nhỏ vào việc bảo tồn đa dạng sinh học 2.4.2 Tinh hình nghiên cứu bảo quản tinh hầu ở Việt Nam Cho đến năm 2000 ở Việt... Tỷ lệ thụ tinh ở hai mẫu lần lượt là 7,0% và 9,3% Các kỹ thuật này được phát triển hoàn thiện hơn bởi các nhà khoa học như: Huges (1 973) bảo quản lạnh tinh trùng hầu C.virginica với nước biển và chất chống đông DMSO 5%, 10% Sau khi được pha loãng (tỷ lệ 1:1) với dung dịch bảo quản được lưu giữ ở nhiệt độ thấp Hwang và Chen (1 973) đã nghiên cún bảo quản tinh trùng hầu c.gigas, dung dịch bảo quản là nước ... tháng bảo quản 72,7%; 69,6%) DMSO 15% (hoạt lực tinh trùng 62,22% , tỷ lệ thụ tinh 73,6%) nồng độ tốt nồng độ thử nghiệm để bảo quản tinh hầu Cửa Sông Bảo quản tinh trùng hầu Cửa Sông nitơ lỏng (- 196°C)... thụ tinh 2.4 Tình hình nghiên cứu bảo quản tinh hầu giói Việt Nam 2.4.1 Tinh hình nghiên cứu bảo quản tinh hầu giói Cùng với đời công nghệ sản xuất giống nhân tạo, song song phương pháp bảo quản. .. thí nghiệm bảo quản tinh hầu Cửa Sông cho kết tương đối tốt, nhiên kết tinh bảo quản thu nhỏ so với tinh tươi Tỷ lệ thụ tinh tinh bảo quản thấp so với tinh tươi nguyên nhân chất lượng tinh trùng,