khảo sát ảnh hưởng của gel chlorhexidine in situ 0,5% lên một số đặc tính sinh học của nguyên bào sợi nướu người – nghiên cứu in vitro

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN NGỌC HOÀI BẢO KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA GEL CHLORHEXIDINE IN SITU 0,5% LÊN MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA NGUYÊN BÀO SỢI NƯỚU NGƯỜI – NGHIÊN CỨU IN VITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ RĂNG HÀM MẶT TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN NGỌC HOÀI BẢO KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA GEL CHLORHEXIDINE IN SITU 0,5% LÊN MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA NGUYÊN BÀO SỢI NƯỚU NGƯỜI – NGHIÊN CỨU IN VITRO Ngành: Răng – Hàm - Mặt Mã số: 8720501 Luận văn Thạc sĩ Răng – Hàm – Mặt NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN XUÂN VĨNH TP HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi hướng dẫn khoa học TS Trần Xuân Vĩnh Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Ngọc Hồi Bảo iv MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Mục lục DANH MỤC VIẾT TẮT i DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH ii DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH iv MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Mô nha chu 1.1.1 Cấu trúc 1.1.2 Nguyên bào sợi nướu người 1.2 Bệnh nha chu 1.3 Chlorhexidine 1.3.1 Giới thiệu 1.3.2 Công dụng y học 1.3.3 Công dụng hàm mặt 1.3.4 Gel chlorhexidine 10 1.3.5 Nghiên cứu ảnh hưởng chlorhexidine với nguyên bào sợi nướu in vitro 12 1.4 Thử nghiệm in vitro đánh giá tương hợp sinh học 13 1.4.1 Các phương pháp thử nghiệm 13 1.4.2 Độc tính tế bào 14 1.4.3 Sự lành hóa vết thương 16 1.4.4 Thử nghiệm đánh giá đặc tính di cư tế bào 16 1.4.5 Thử nghiệm đánh giá đặc tính co gel collagen tế bào 16 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 v 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu 18 2.3.2 Chuẩn bị trước nghiên cứu 18 2.4 Thực nghiên cứu 21 2.4.1 Chuẩn bị tế bào 21 2.4.2 Chuẩn bị dịch chiết 22 2.4.3 Đánh giá độc tính dịch chiết gel chlorhexidine lên nguyên bào sợi nướu23 2.4.4 Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết gel chlorhexidine lên đặc tính di cư nguyên bào sợi nướu 26 2.4.5 Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết gel chlorhexidine lên đặc tính co collagen nguyên bào sợi nướu 28 2.5 Thu thập phân tích số liệu 30 2.6 Kiểm soát sai lệch nghiên cứu 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 31 3.1 Đánh giá độc tính dịch chiết gel chlorhexidine lên nguyên bào sợi nướu 31 3.1.1 Kết sau ủ nguyên bào sợi nướu nghiệm thức 31 3.1.2 Kết sau ủ nguyên bào sợi nướu MTT 32 3.2 Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết gel chlorhexidine lên đặc tính di cư nguyên bào sợi nướu 35 3.2.1 Kết nuôi cấy nguyên bào sợi nướu đĩa giếng 35 3.2.2 Kết tế bào di cư nghiệm thức 35 3.3 Đánh giá ảnh hưởng dịch chiết gel chlorhexidine lên đặc tính co gel collagen nguyên bào sợi nướu 38 3.3.1 Kết tạo gel collagen thử nghiệm 38 3.3.2 Kết co gel collagen nghiệm thức 38 vi CHƯƠNG BÀN LUẬN 41 4.1 Vật liệu gel in situ điều trị bệnh nha chu 41 4.2 Chọn dòng tế bào nghiên cứu 41 4.3 Phương pháp thử nghiệm dịch chiết 42 4.4 Xác định nồng độ pha loãng dịch chiết 42 4.5 Thử nghiệm độc tính tế bào dịch chiết gel chlorhexidine lên nguyên bào sợi nướu 43 4.6 Ảnh hưởng dịch chiết gel chlorhexidine lên đặc tính di cư nguyên bào sợi nướu 45 4.7 Ảnh hưởng dịch chiết gel chlorhexidine lên đặc tính co gel collagen nguyên bào sợi nướu 47 4.8 Chlorhexidine gây độc tế bào in vitro an toàn lâm sàng 48 4.9 Thành phần gel chlorhexidine 50 Ý NGHĨA VÀ ỨNG DỤNG CỦA ĐỀ TÀI 53 KẾT LUẬN 54 HẠN CHẾ VÀ KIẾN NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO i DANH MỤC VIẾT TẮT BAC Benzalkonium chloride CHX Chlorhexidine cs cộng DMEM/F12 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium/Ham’s Nutrient Mixture F12 DMSO Dimethyl sulfoxide ECM Extracellular matrix EDTA Ethylene diaminetetraacetid acid FBS Fetal bovine serum IL Interleukin hGF Human gingival fibroblast HPMC Hydroxypropyl methylcellulose MTT 3-(4, 5–dimethylthiazol–2–yl)–2, 5–diphenyltetrazoliumbromid OD Optical denity PBS Phosphate buffered saline PEG Polyethylene glycol RGR Relative cell growth rate ii DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH Cạo vôi xử lý mặt gốc Scaling and root planning Dịch nướu Crevicular fluid Gel hình thành chỗ In situ-forming gel Huyết thai bò Fetal bovine serum Kính hiển vi đảo ngược Inverted microscope Nền ngoại bào Extracellular matrix Nguyên bào sợi nướu người Human gingival fibroblast cells Tại chỗ In situ Tế bào sống Viable cell Tỷ lệ tăng trưởng tương đối Relative cell growth rate Trong ống nghiệm In vitro iii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách dụng cụ sử dụng thử nghiệm 19 Bảng 2.2 Danh sách thiết bị sử dụng thử nghiệm 19 Bảng 2.3 Mức độ độc tế bào dựa theo phần trăm RGR 26 Bảng 3.1 Phần trăm RGR nghiệm thức 34 Bảng 3.2 Phần trăm diện tích vùng trống nghiệm thức 37 Bảng 3.3 Phần trăm diện tích gel collagen nghiệm thức 40 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo CHX Hình 2.1 Quy trình thực nghiên cứu 21 Hình 2.2 Buồng đếm tế bào 23 Hình 3.1 hGF sau ủ MTT độ phóng đại 40 lần 33 Hình 3.2 Hình ảnh hGF di cư nhóm chứng dương với độ phóng đại 40 lần 35 Hình 3.3 Hình ảnh hGF di cư nhóm thử nghiệm với độ phóng đại 40 lần 36 Hình 3.4 Gel collagen đĩa 96 giếng thời điểm 38 Hình 3.5 Hình ảnh gel collagen nhóm thử nghiệm vào ngày thứ 39 52 Oosterwaal cs (1990) cho biết gel chứa fluorescein biến vòng phút từ vào túi nha chu Nguyên nhân độ đàn hồi mô mềm, chảy máu sau dùng thuốc độ nhớt gel Bên cạnh đó, gel dịch nướu rửa dần giải phóng hồn tồn khỏi bề mặt túi nha chu thời gian ngắn Dịng chảy dịch nướu khoảng 20 ml/giờ nguyên nhân gây biến nhanh chóng gel túi nha chu [52] Do đó, cần có nghiên cứu in vitro khác với thời gian tiếp xúc khác để bổ sung thêm chứng độc tính in vitro gel CHX nghiên cứu Bất kỳ tác dụng gây độc tế bào vật liệu phải quan tâm Tuy nhiên, độc tính in vitro dấu hiệu khả gây độc in vivo Vì khơng dựa liệu độc tính tế bào in vitro vật liệu sử dụng có phù hợp với ứng dụng lâm sàng hay khơng [34] Cần có thêm nghiên cứu in vivo để xác nhận kết nghiên cứu 53 Ý NGHĨA VÀ ỨNG DỤNG CỦA ĐỀ TÀI Nghiên cứu bước đánh giá ban đầu tính tương hợp sinh học, thực với mong muốn cung cấp số chứng khoa học mức độ ảnh hưởng lên nguyên bào sợi nướu gel CHX in situ 0,5% hỗ trợ điều trị viêm nha chu Kết nghiên cứu đưa mức độ pha lỗng dịch chiết khơng gây độc tế bào theo tiêu chuẩn ISO 10993-5:2009 Từ mức pha loãng này, tiến hành thử nghiệm di cư co collagen hGF để đánh giá thêm tính chất gel Những khoa học làm tiền đề cho nghiên cứu để tạo chế phẩm gel CHX ứng dụng nha khoa 54 KẾT LUẬN Nghiên cứu in vitro có nhóm chứng nhằm đánh giá ảnh hưởng dịch chiết gel CHX 0,5% hGF cho phép đưa số kết luận sau: Về khả sống hGF Độc tính tế bào in vitro gel CHX phụ thuộc vào nồng độ dịch chiết pha loãng Dịch chiết gel CHX pha loãng 1/103 1/104 không gây độc tế bào in vitro (phần trăm RGR lớn 70%) Về khả di cư hGF Dịch chiết gel CHX pha loãng 1/103 1/104 làm giảm đặc tính di cư hGF tương đương dịch chiết gel đối chiếu Ảnh hưởng dịch chiết gel CHX 0,5% đến khả di cư hGF phụ thuộc vào nồng độ pha loãng Khả di cư hGF tăng theo độ pha loãng dịch chiết gel CHX Về khả co gel collagen hGF Dịch chiết gel CHX pha lỗng 1/103 khơng ảnh hưởng co gel collagen hGF Trong khi, dịch chiết gel CHX pha lỗng 1/104 làm tăng đặc tính co gel collagen hGF Ảnh hưởng dịch chiết gel nghiên cứu tương đương gel đối chiếu Ảnh hưởng dịch chiết gel CHX 0,5% đến khả co collagen hGF phụ thuộc vào nồng độ pha loãng Khả co gel collagen hGF tăng theo độ pha lỗng dịch chiết gel CHX Tóm lại, ảnh hưởng gel CHX nồng độ pha loãng 1/103 1/104 lên số đặc tính sinh học hGF tương đương gel đối chiếu (PerioKin®) sử dụng hiệu lâm sàng Gel nghiên cứu loại gel đảo ngược nhiệt có ưu điểm làm tăng thời gian lưu trú hoạt chất tăng hiệu điều trị 55 HẠN CHẾ VÀ KIẾN NGHỊ Do khó khăn thời gian vật liệu nên nghiên cứu chúng tơi có số hạn chế sau: Thời gian dịch chiết gel CHX tiếp xúc với hGF nghiên cứu tương đối dài (24 – theo ISO10993:5-2009) Vì vậy, cần có thêm nghiên cứu đánh giá so sánh thời gian ngắn hơn, phù hợp với thời gian sử dụng gel lâm sàng Ngoài ra, cần thêm nghiên cứu in vitro với nhiều dòng tế bào khác để bổ sung thêm thơng tin đặc tính gel CHX Gel nghiên cứu chứa 0,5% CHX Việc đánh giá gel chứa nồng độ CHX tá dược thấp cần thiết để xác định nồng độ an toàn in vitro Mơ hình in vitro cịn số hạn chế thử nghiệm vài khía cạnh hẹp trình lành thương phức tạp, chưa mơ hồn tồn tình trạng thực tế lâm sàng Vì cần thêm nghiên cứu đánh giá điều kiện in vivo khả lành thương gel CHX Chế phẩm gel CHX đảo ngược nhiệt sử dụng nghiên cứu giai đoạn hồn thiện cải tiến cơng thức, cần có nghiên cứu để đánh giá hiệu vật liệu 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Hà Thị Bảo Đan (2012), Nha Chu Học tập 1, Nhà xuất Y học, thành phố Hồ Chí Minh, tr 44-119 Trần Lê Bảo Hà, Tơ Minh Qn Đồn Nguyên Vũ (2014), Công nghệ vật liệu sinh học, NXB Giáo dục Việt Nam, tr 134-359 Trần Giao Hòa (2009), Phẫu thuật tạo hình nha chu, Nhà xuất Đại học quốc gia, Thành phố Hồ Chí Minh, tr 1-48 TÀI LIỆU TIẾNG ANH Abbaszadegan A., Gholami A., Ghahramani Y., Ghareghan R., Ghareghan M., Kazemi A., Iraji A and Ghasemi Y (2016), "Antimicrobial and Cytotoxic Activity of Cuminum Cyminum as an Intracanal Medicament Compared to Chlorhexidine Gel", Iran Endod J 11(1), pp 44-50 Addy M and Martin M V (2003), "Systemic antimicrobials in the treatment of chronic periodontal diseases: a dilemma", Oral Dis Suppl 1, pp 38-44 Apdik H., Doğan A., Demirci S., Aydın S and Şahin F (2015), "Dose-dependent Effect of Boric Acid on Myogenic Differentiation of Human Adipose-derived Stem Cells (hADSCs)", Biol Trace Elem Res 165(2), pp 123-30 Aslantürk Ö (2018), "In Vitro Cytotoxicity and Cell Viability Assays: Principles, Advantages, and Disadvantages", Genotoxicity - A Predictable Risk to Our Actual World, pp 1-4 Atay A., Bozok Cetintas V., Cal E., Kosova B., Kesercioglu A and Guneri P (2012), "Cytotoxicity of hard and soft denture lining materials", Dent Mater J 31(6), pp 6-1082 57 Balagopal S and Arjunkumar R (2013), "Chlorhexidine: The gold standard antiplaque agent", Journal of Pharmaceutical Sciences and Research 5, pp 270274 10 Ban Zuhair A (2020), "The Efficacy of Chlorhexidine Gel as an Adjunctive Treatment for Patient with Chronic Periodontitis", Indian Journal of Forensic Medicine & Toxicology 14(1), pp 544-550 11 Berner T., Nakahara K., Kobayashi E., Tanaka A., Taniguchi Y., Iizuka T and Sawada K (2020), "Investigating the effect of antiseptic solution on the release of interleukin-6 and transforming growth factor beta from human gingival fibroblasts using wound healing assays", Journal of Oral Science 62, pp 293297 12 Bisht N., Goswami L and Kothiyal P (2014), In-situ gel: a study of dental diseases, Journal of Applied Pharmaceutical Research, 11(2), pp 10-15 13 Cabral C T and Fernandes M H (2007), "In vitro comparison of chlorhexidine and povidone-iodine on the long-term proliferation and functional activity of human alveolar bone cells", Clin Oral Investig 11(2), pp 64-155 14 Chang Y C., Huang F M., Tai K W and Chou M Y (2001), "The effect of sodium hypochlorite and chlorhexidine on cultured human periodontal ligament cells", Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod 92(4), pp 50-446 15 Chava V K and Vedula B D (2013), "Thermo-reversible green tea catechin gel for local application in chronic periodontitis: a 4-week clinical trial", J Periodontol 84(9), pp 1290-6 16 Chiquet M., Katsaros C and Kletsas D (2015), "Multiple functions of gingival and mucoperiosteal fibroblasts in oral wound healing and repair", Periodontol 2000 68(1), pp 21-40 17 Chye R M L., Perrotti V., Piattelli A., Iaculli F and Quaranta A (2019), "Effectiveness of Different Commercial Chlorhexidine-Based Mouthwashes 58 After Periodontal and Implant Surgery: A Systematic Review", Implant Dent 28(1), pp 74-85 18 Coelho A S., Laranjo M., Goncalves A C., Paula A., Paulo S., Abrantes A M., Caramelo F., Ferreira M M., Silva M J., Carrilho E and Botelho M F (2019), "Cytotoxic effects of a chlorhexidine mouthwash and of an enzymatic mouthwash on human gingival fibroblasts", Odontology, 108(2), pp.260-270 19 Colombo M., Ceci M., Felisa E., Poggio C and Pietrocola G (2018), "Cytotoxicity evaluation of a new ozonized olive oil", European journal of dentistry 12(4), pp 585-589 20 Deutschle T., Porkert U., Reiter R., Keck T and Riechelmann H (2006), "In vitro genotoxicity and cytotoxicity of benzalkonium chloride", Toxicol In Vitro 20(8), pp 1472-7 21 Dommisch H., Reinartz M., Backhaus T., Deschner J., Chung W and Jepsen S (2012), "Antimicrobial responses of primary gingival cells to Porphyromonas gingivalis", J Clin Periodontol 39(10), pp 913-22 22 Garala K., Joshi P., Shah M., Ramkishan A and Patel J (2013), "Formulation and evaluation of periodontal in situ gel", Int J Pharm Investig 3(1), pp 29-41 23 George J., Klika A K and Higuera C A (2017), "Use of Chlorhexidine Preparations in Total Joint Arthroplasty", J Bone Jt Infect 2(1), pp 15-22 24 Goldschmidt P., Cogen R and Taubman S (1977), "Cytopathologic effects of chlorhexidine on human cells", J Periodontol 48(4), pp 212-5 25 Goodson J M., Offenbacher S., Farr D H and Hogan P E (1985), "Periodontal disease treatment by local drug delivery", J Periodontol 56(5), pp 265-72 26 Graves D T and Jiang Y (1995), "Chemokines, a family of chemotactic cytokines", Crit Rev Oral Biol Med 6(2), pp 109-18 27 H.R Rajeshwari, Dhamecha D., Jagwani S., Rao M., Jadhav K., Shaikh S., Puzhankara L and Jalalpure S (2019), "Local drug delivery systems in the 59 management of periodontitis: A scientific review", J Control Release 307, pp 393-409 28 Hammad H M., Hammad M M., Abdelhadi I N and Khalifeh M S (2011), "Effects of topically applied agents on intra-oral wound healing in a rat model: a clinical and histomorphometric study", Int J Dent Hyg 9(1), pp 9-16 29 Hidalgo E and Dominguez C (2001), "Mechanisms underlying chlorhexidineinduced cytotoxicity", Toxicol In Vitro 15(4-5), pp 271-6 30 Hintermann E., Bilban M., Sharabi A and Quaranta V (2001), "Inhibitory role of alpha beta 4-associated erbB-2 and phosphoinositide 3-kinase in keratinocyte haptotactic migration dependent on alpha beta integrin", The Journal of cell biology 153(3), pp 465-478 31 Hou L T and Yaeger J A (1993), "Cloning and characterization of human gingival and periodontal ligament fibroblasts", J Periodontol 64(12), pp 120918 32 Huỳnh Công Nhật Nam, Everts V., Leethanakul C., Pavasant P and Ampornaramveth R S (2016), "Rinsing with Saline Promotes Human Gingival Fibroblast Wound Healing In Vitro", PLoS One 11(7), pp e0159843 33 Huynh Trúc Thanh Ngọc (2019), "Development and Evaluation of In Situ Gel of Chlorhexidine Gluconate", ASEAN PharmNET 2017, pp.248-256 34 ISO (2009), " 10993-5 Biological evaluation of medical devices, Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity", Int Stand 3, pp 1-42 35 ISO (2012), "10993-12 Biological evaluation of medical devices - Part 12: Sample preparation and reference materials", Int Stand 4, pp 1-28 36 James P., Worthington H V., Parnell C., Harding M., Lamont T., Cheung A., Whelton H and Riley P (2017), "Chlorhexidine mouthrinse as an adjunctive treatment for gingival health", Cochrane Database Syst Rev 3, pp 1-36 60 37 Jaswal R., Dhawan S., Grover V and Malhotra R (2014), "Comparative evaluation of single application of 2% whole turmeric gel versus 1% chlorhexidine gel in chronic periodontitis patients: A pilot study", Journal of Indian Society of Periodontology 18(5), pp 575-580 38 Joshi D., Garg T., Goyal A K and Rath G (2016), "Advanced drug delivery approaches against periodontitis", Drug Deliv 23(2), pp 363-77 39 Kaur M and Kumar K (2016), "Importance of Chlorhexidine in Maintaining Periodontal Health", International Journal of Dentistry Research 1, pp 31-33 40 Kolliyavar B., Shettar L and Thakur S (2016), "Chlorhexidine: The Gold Standard Mouth Wash", J Pharm Biomed Sci, 6(2), pp 106-109 41 Li R., Guo W., Yang B., Guo L., Sheng L., Chen G., Li Y., Zou Q., Xie D., An X., Chen Y and Tian W (2011), "Human treated dentin matrix as a natural scaffold for complete human dentin tissue regeneration", Biomaterials 32(20), pp 4525-38 42 Liang C C., Park A Y and Guan J L (2007), "In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro", Nat Protoc 2(2), pp 329-33 43 Liu G., Li Y., Yang L., Wei Y., Wang X., Wang Z and Tao L (2017), "Cytotoxicity study of polyethylene glycol derivatives", RSC Advances 7(30), pp 252-259 44 Liu J X., Werner J., Kirsch T., Zuckerman J D and Virk M S (2018), "Cytotoxicity evaluation of chlorhexidine gluconate on human fibroblasts, myoblasts, and osteoblasts", J Bone Jt Infect 3(4), pp 165-172 45 Lucarotti M E., White H., Deas J., Silver I A and Leaper D J (1990), "Antiseptic toxicity to breast carcinoma in tissue culture: an adjuvant to conservation therapy?", Ann R Coll Surg Engl 72(6), pp 388-92 61 46 Mah W., Jiang G., Olver D., Cheung G., Kim B., Larjava H and Hakkinen L (2014), "Human gingival fibroblasts display a non-fibrotic phenotype distinct from skin fibroblasts in three-dimensional cultures", PLoS One 9(3), pp e90715 47 Mawardi H H., Elbadawi L S and Sonis S T (2015), "Current understanding of the relationship between periodontal and systemic diseases", Saudi Med J 36(2), pp 150-8 48 Mercan U., Gonen Z B., Salkin H., Yalcin Ulker G M and Meral D G (2019), "Comparison of the effect of postoperative care agents on human gingival fibroblasts: a preliminary study", Eur Oral Res 53(2), pp 67-73 49 Milstone A M., Passaretti C L and Perl T M (2008), "Chlorhexidine: expanding the armamentarium for infection control and prevention", Clin Infect Dis 46(2), pp 274-81 50 Ngo P., Ramalingam P., Phillips J A and Furuta G T (2006), "Collagen gel contraction assay", Methods Mol Biol 341, pp 103-9 51 Nie S., Hsiao W L., Pan W and Yang Z (2011), "Thermoreversible Pluronic F127-based hydrogel containing liposomes for the controlled delivery of paclitaxel: in vitro drug release, cell cytotoxicity, and uptake studies", Int J Nanomedicine 6, pp 151-66 52 Oosterwaal P J., Mikx F H and Renggli H H (1990), "Clearance of a topically applied fluorescein gel from periodontal pockets", Journal of clinical periodontology 17(9), pp 613-615 53 Patel K S., Vadalia K R and Jayvadan P (2014), "Development and evaluation of in situ gelling system for treatment of periodontitis", International Journal of PharmTech Research 6, pp 2102-2112 54 Pucher J J and Daniel J C (1992), "The effects of chlorhexidine digluconate on human fibroblasts in vitro", J Periodontol 63(6), pp 526-32 62 55 Radafshar G (2017), "Effect of Topical Gel Chlorhexidine 0.2% on Non-Surgical Treatment of Chronic Periodontitis" 19, pp 74-80 56 Riahi R., Yang Y., Zhang D D and Wong P K (2012), "Advances in woundhealing assays for probing collective cell migration", J Lab Autom 17(1), pp 5965 57 Sahgal A., Chaturvedi S., Bagde H., Agrawal P., Suruna R and Limaye M (2015), "Original Research A Randomized Control Trial to Evaluate Effi cacy of Anti-bacterial and Anti-infl ammatory Eff ect of Aloe vera, Pomegranate and Chlorhexidine Gel against Periodontopathogens" 7, pp 1-4 58 Samanth D S A (2017), The Most Effective Concentration of Chlorhexidine as a Mouthwash - Systematic Review, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 9(2), p 233-236 59 Sukumaran S K., Vadakkekuttical R J and Kanakath H (2020), "Comparative evaluation of the effect of curcumin and chlorhexidine on human fibroblast viability and migration: An in vitro study", J Indian Soc Periodontol 24(2), pp 109-116 60 Supranoto S C., Slot D E., Addy M and Van der Weijden G A (2015), "The effect of chlorhexidine dentifrice or gel versus chlorhexidine mouthwash on plaque, gingivitis, bleeding and tooth discoloration: a systematic review", Int J Dent Hyg 13(2), pp 83-92 61 Tolosa L., Donato M T and Gómez-Lechón M J (2015), "General Cytotoxicity Assessment by Means of the MTT Assay", Methods Mol Biol 1250, pp 333-48 62 Tomar G B., Srivastava R K., Gupta N., Barhanpurkar A P., Pote S T., Jhaveri H M., Mishra G C and Wani M R (2010), "Human gingiva-derived mesenchymal stem cells are superior to bone marrow-derived mesenchymal stem cells for cell therapy in regenerative medicine", Biochem Biophys Res Commun 393(3), pp 377-83 63 63 Uehara A and Takada H (2007), "Functional TLRs and NODs in human gingival fibroblasts", J Dent Res 86(3), pp 249-54 64 Van Meerloo J., Kaspers G J and Cloos J (2011), "Cell sensitivity assays: the MTT assay", Methods Mol Biol 731, pp 237-45 65 Van Strydonck D A., Slot D E., Van der Velden U and Van der Weijden F (2012), "Effect of a chlorhexidine mouthrinse on plaque, gingival inflammation and staining in gingivitis patients: a systematic review", J Clin Periodontol 39(11), pp 1042-55 66 Varoni E., Tarce M., Lodi G and Carrassi A (2012), "Chlorhexidine (CHX) in dentistry: state of the art", Minerva Stomatol 61(9), pp 399-419 67 Vernon R B and Gooden M D (2002), "An improved method for the collagen gel contraction assay", In Vitro Cell Dev Biol Anim 38(2), pp 97-101 68 Wang T., Chen L., Shen T and Wu D (2016), "Preparation and properties of a novel thermo-sensitive hydrogel based on chitosan/hydroxypropyl methylcellulose/glycerol", Int J Biol Macromol 93 (Pt A), pp 775-782 69 Wyganowska-Swiatkowska M., Kotwicka M., Urbaniak P., Nowak A., Skrzypczak-Jankun E and Jankun J (2016), "Clinical implications of the growthsuppressive effects of chlorhexidine at low and high concentrations on human gingival fibroblasts and changes in morphology", International Journal of Molecular Medicine 37, p 1594-1600 70 Zhao H., Hu J and Zhao L (2020), "Adjunctive subgingival application of Chlorhexidine gel in nonsurgical periodontal treatment for chronic periodontitis: a systematic review and meta-analysis", BMC Oral Health 20(1), pp 20-34 64 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết đo mật độ quang OD bước sóng 570 nm Nghiệm thức OD1 OD2 OD3 Dịch chiết gel CHX 0,5% 0,097 0,127 0,13 Dịch chiết 1/10 0,177 0,184 0,195 Dịch chiết 1/102 0,243 0,194 0,237 Dịch chiết 1/103 0,396 0,326 0,384 Dịch chiết 1/104 0,427 0,355 0,411 Chứng âm 0,428 0,345 0,412 Chứng dương 0,185 0,201 0,158 Giếng trống 0,033 0,034 0,033 Giếng trống 0,036 0,034 0,033 chưa pha loãng 65 Phụ lục 2: Kết diện tích vùng trống thử nghiệm đường rạch in vitro đo phần mềm ImageJ Nghiệm thức Giếng Diện tích vùng vơ bào Phần trăm diện tích vùng 24 trống sau 24 280449 8004 2,854 291306 0 280011 0 Dịch chiết gel 294687 217470 73,797 CHX pha loãng 321975 238083 73,945 1/103 291567 143532 49,228 Dịch chiết gel 291132 136725 46,963 CHX pha loãng 287586 161577 56,184 1/104 288663 79743 27,625 Dịch chiết gel X 289254 158394 54,759 pha loãng 1/103 289467 232185 80,211 281781 172524 61,226 Dịch chiết gel X 280557 189276 67,464 pha loãng 1/104 287391 158367 55,105 282744 171810 60,765 Chứng âm 66 Phụ lục 3: Kết diện tích gel collagen thử nghiệm đánh giá ảnh hưởng đặc tính co gel collagen đo phần mềm ImageJ Nghiệm thức Giếng Diện tích gel collagen Phần trăm gel collagen ngày lại sau ngày (%) 80922 66613 82,318 79416 63289 79,693 87050 66496 76,388 87069 86442 99,280 73640 72354 98,254 65898 62479 94,812 Dịch chiết gel 87678 66221 75,527 CHX 0,5% pha 88761 69869 78,716 loãng 1/103 101642 85987 84,598 Dịch chiết gel 91005 64851 71,261 CHX 0,5% pha 92744 62952 67,877 loãng 1/104 101966 64394 63,152 Dịch chiết gel X 96624 74337 76,934 pha loãng 1/103 101104 76692 75,855 98054 71149 72,561 Dịch chiết gel X 100222 73763 73,600 pha loãng 1/104 94628 60500 63,935 100334 74780 74,531 Chứng âm Chứng dương ... ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN NGỌC HOÀI BẢO KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA GEL CHLORHEXIDINE IN SITU 0,5% LÊN MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA NGUYÊN BÀO SỢI NƯỚU NGƯỜI – NGHIÊN CỨU... bào mô nha chu cụ thể nghiên cứu hGF, nhằm hỗ trợ điều trị bệnh nha chu, tiến hành nghiên cứu ? ?Khảo sát ảnh hưởng gel chlorhexidine in situ 0,5% lên số đặc tính sinh học nguyên bào sợi nướu người. .. người – nghiên cứu in vitro? ?? 3 CÂU HỎI NGHIÊN CỨU Ở nồng độ gel chlorhexidine an tồn (khơng gây độc) lên ngun bào sợi nướu người nồng độ an tồn gel chlorhexidine có ảnh hưởng đến đặc tính sinh học