xây dựng quy trình aso pcr xác định điểm đa hình rs2231142 trên gen abcg2

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH ASO PCR XÁC ĐỊNH ĐIỂM ĐA HÌNH rs2231142 TRÊN GEN ABCG2 Mã số: Chủ nhiệm đề tài: TS.BS.MAI PHƯƠNG THẢO Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH ASO PCR XÁC ĐỊNH ĐIỂM ĐA HÌNH rs2231142 TRÊN GEN ABCG2 Mã số: Chủ nhiệm đề tài: TS.BS.MAI PHƯƠNG THẢO Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2018 DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH Danh sách thành viên tham gia nghiên cứu: STT Họ tên Chuyên ngành Cơ quan công tác Mai Phương Thảo Sinh lý học ĐH Y Dược TP.HCM Lê Thị Kim Hoàng Xét nghiệm ĐH Y Dược TP.HCM Tơ Thị Bích Phương Thần kinh ĐH Y Dược TP.HCM Lê Đông Trúc Y sinh học phân tử ĐH Y Dược TP.HCM Đỗ Đức Minh Y sinh học phân tử ĐH Y Dược TP.HCM Nơi thực đề tài: Đại học Y Dược TPHCM DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chương 1: TỔNG QUAN ĐỀ TÀI Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 Đối tượng nghiên cứu: .11 2.2 Vật liệu nghiên cứu: 11 2.2.1 Cặp mồi phản ứng PCR ASO PCR: 11 2.2.2 Thiết bị - Dụng cụ: 11 2.2.3 Hóa chất: 11 2.2.4 Phần mềm tin-sinh: 12 2.3 Phương pháp nghiên cứu: 13 2.3.1 Thu nhận mẫu máu: 13 2.3.2 Tách chiết DNA từ mẫu máu: 13 2.3.3 Thiết kế mồi: 14 2.3.4 Phản ứng PCR giải trình tự kỹ thuật Sanger 14 2.3.4.1 Phản ứng PCR: 14 2.3.4.2 Kiểm tra sản phẩm PCR điện di gel agarose: 15 2.3.4.3 Gửi mẫu giải trình tự: 15 2.3.4.4 Phân tích kết giải trình tự: .16 2.3.5 Phản ứng ASO PCR: 16 2.3.5.1 Cách tiến hành thiết kế mồi cho phản ứng ASO PCR: 16 2.3.5.2 Phản ứng ASO PCR: .17 2.3.5.4 Điện di phân tích kết điên di sản phẩm ASO PCR: 19 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 3.1 Kết phản ứng PCR: 21 3.2 Kết giải trình tự kỹ thuật Sanger: .22 3.3 Giai đoạn ASO PCR: .26 3.4 So sánh kết ASO PCR với phương pháp PCR giải trình tự kỹ thuật Sanger: 31 KẾT LUẬN: 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO: 36 DANH MỤC BẢNG BIỂU, HÌNH VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1: Hoá chất sử dụng đề tài 11 Bảng 2: Thành phần thể tích phản ứng PCR 14 Bảng 3: Chu trình luân nhiệt phản ứng PCR khuếch đại exon gen ABCG2 15 Bảng 4: Trình tự mồi dùng cho phản ứng ASO PCR 17 Bảng 5: Thành phần thể tích phản ứng ASO PCR 18 Bảng 6: Chu kỳ luân nhiệt phản ứng ASO PCR 18 Bảng 7: Kết kiểu gen xác định phương pháp ASO PCR 29 Bảng 8: So sánh kết giải trình tự kết ASO PCR 31 Bảng 9: kết so sánh độ nhạy độ đặc hiệu bốn cặp mồi 33 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Cấu trúc gen ABCG2 (Nguồn lấy từ NCBI) Hình 2: Sơ đồ rối loạn chức ABCG2 [25] Hình 3: Sơ đồ biểu diễn thiết kế mồi AS-PCR [21] Hình 4: Phân tích đặc trưng cho SNP mồi B oleracea 10 Hình 5: sơ đồ xây dựng quy trình nghiên cứu 13 Hình 6: Hình ảnh kết điện di mẫu CC, CA, AA 19 Hình 7: Kết điện di sản phầm PCR 30 mẫu DNA khuếch đại exon gen ABCG2 21 Hình 8: Kết giải trình tự ba kiểu gen CA, CC, AA 26 Hình 9: Hình ảnh kết điện di mẫu P8, P13, P21, P22, P26 26 Hình 10: Hình ảnh kết điện di mẫu P32, P33, P35, P36, P40 27 Hình 11: Hình ảnh kết điện di mẫu P41, P45, P46, P47, P48 ………… 23 Hình 12: Hình ảnh kết điện di mẫu P49, P50, P51, P56, P57 ………………23 Hình 13: Hình ảnh kết điện di mẫu P58, P60, P62, P63, P74 24 Hình 14: Hình ảnh kết điện di mẫu P75, P78, P82, P83, P84 24 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ABCG2: Adenine triphosphate (ATP) - binding cassette (ABC) subfamily G member BCRP: Breast cancer resistance protein SUA: serum uric acid PCR: Polymerase Chain Reaction ASO PCR: Allele Specific Oligonucleotide Polymerase Chain Reaction SNP: single-nucleotide polymorphism DNA: Deoxyribonucleic Acid THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG Thơng tin chung: - Tên đề tài: Xây dựng quy trình ASO PCR xác định điểm đa hình rs2231142 gen ABCG2 - Mã số: - Chủ nhiệm đề tài: TS.BS.Mai Phương Thảo Điện thoại: 0918329999 Email: drmaithao@ump.edu.vn (maithao292@gmail.com) - Đơn vị quản lý chuyên môn : Khoa Y, Bộ môn Sinh lý học - Thời gian thực hiện: Từ 02/5/2016 đến 29/4/2018 Mục tiêu: Xác định giá trị kỹ thuật ASO PCR xác định điểm đa hình rs2231142 gen ABCG2 Nội dung chính: - So sánh kết ASO PCR với phương pháp PCR giải trình gen kỹ thuật Sanger - Xác định cặp mồi tối ưu cho phản ứng ASO PCR nhận diện điểm đa hình rs2231142 gen ABCG2 Kết đạt được: - Xác định cặp mồi đặc hiệu nhận diện điểm đa hình rs2231142 gen ABCG2 kỹ thuật ASO PCR - Hướng dẫn 01 học viên cao học chuyên ngành Xét nghiệm, ĐHYD.TPHCM MỞ ĐẦU Protein ABCG2 (ATP binding cassette sub-family G member 2) protein vận chuyển nằm màng tế bào thuộc đại gia đình protein vận chuyển phụ thuộc ATP Protein ABCG2 mã hóa gen ABCG2 nằm nhánh dài nhiễm sắc thể số 4, có vai trị vận chuyển thuốc hóa trị ung thư, nhiều nhóm thuốc hợp chất (statin, cimetidine, flavonoid…) Các nghiên cứu gần đây, phát vai trò vận chuyển tiết acid uric thận, gan, ruột não protein ABCG2 Gen ABCG2 có tính đa hình tương đối cao, r2231142 (Q141K, 421.C>A) điểm đa hình nghiên cứu nhiều có ý nghĩa quan trọng chuyển hóa thuốc acid uric Biến thể Q141K vừa làm giảm biểu protein ABCG2 vừa làm giảm hoạt động vận chuyển phụ thuộc ATP protein Việc xác định biến thể rs2231142 gen ABCG2 có ý nghĩa quan trọng dược động học, chuyển hóa đào thải loại thuốc chuyển hóa acid uric Có nhiều phương pháp để phát vị trí đột biến gen giải trình tự, ASO-PCR, RFLP PCR… đó, giải trình tự chuỗi DNA tiêu chuẩn vàng Tuy nhiên phương pháp có điểm hạn chế chi phí cao thời gian trả kết chậm Để khắc phục nhược điểm phương pháp giải trình tự DNA, yêu cầu đặt cần có phương pháp phát biến thể rs2231142 gen ABCG2 chi phí thấp hơn, thời gian trả kết nhanh đảm bảo độ xác Chương 1: TỔNG QUAN ĐỀ TÀI Protein ABCG2 gọi Protein kháng ung thư vú (BCRP: breast cancer resistance protein), trọng lượng khoảng 75 kDa gồm 655 acid amin với miền ký ABC riêng vùng liên kết nucleotide sáu vùng xuyên màng ABCG2 / BCRP biểu rộng rãi thai, hàng rào máu-não, đường tiêu hóa, gan, thận, tinh hồn tuyến vú ABCG2 / BCRP vùng đỉnh biểu mô ruột non đại tràng, bề mặt khoang tế bào nội mô não, bề mặt khoang ống thận Sự ức chế thực nghiệm hoạt động ABCG2 / BCRP ảnh hưởng đến phân bố thuốc khác thí nghiệm thể [30] Gen ABCG2 mã hóa protein ABCG2, nằm nhánh dài nhiễm sắc thể số băng 22 (4q22), vị trí từ 88,090,264 bp từ pter kết thúc 88,231,417 bp từ pter, gồm 20 exon vùng mã hóa bắt đầu từ exon thứ Hình 1: Cấu trúc của gen ABCG2 (Nguồn lấy từ NCBI) Sự biểu ABCG2 / BCRP tạo kiểu hình đa kháng tế bào ung thư ảnh hưởng đến việc hấp thu thuốc, phân phối, chuyển hóa tiết mơ bình thường, làm ảnh hưởng hiệu lực thuốc hóa trị liệu thể Các đa hình nucleotide đơn tham gia vào việc định hiệu hóa trị liệu, làm giảm chức hoạt động ABCG2 / BCRP liên quan đến phản ứng bất lợi không ngờ từ thuốc chống ung thư chất ABCG2 / BCRP Điều quan trọng, gần thuốc ung thư nhắm phân tử đích, chẳng hạn loại thuốc tyrosine kinase, imatinib mesylate, gefitinib, thuốc khác, ảnh hưởng qua lại với ABCG2 / BCRP ABCG2 chứng minh có vai trò quan trọng việc tiết urat thận tthận, đặc biệt tiết đường ruột Với vai trò vận chuyển acid uric ruột, khả vận chuyển urat thận bị ảnh hưởng suy giảm chức thận, thì vận chuyển ABCG2 ngồi thận đóng vai trị tiết acid uric [2] Rối loạn chức ABCG2 làm giảm tiết acid uric thận gây tăng acid uric huyết q tải acid uric thận khơng đáng kể Ngồi vai trị tiết acid uric ngồi thận, ABCG2 cịn có vai trị lớn tiết acid uric qua hàng rào máu não [1], [6] Đa hình rs2231142 (Q141K) gen ABCG2, có liên quan đáng kể với nồng độ acid uric máu tăng tỷ lệ mắc bệnh gout người Mỹ gốc Châu Âu, người Mỹ gốc Phi, người Mỹ gốc Mexico, người Mỹ gốc Ấn Độ Ngoài ra, SNP dường có ảnh hưởng khác đến nồng độ acid uric huyết tỷ lệ mắc bệnh gout theo giới tính kết hợp khơng đồng suốt thời kỳ mãn kinh liệu pháp sử dụng hormone với nồng độ acid uric, làm sáng tỏ khác giới tính tuổi tính nhạy cảm với bệnh gout Gần nhà nghiên cứu tìm vai trị gen ABCG2 có liên quan đến nhiều vấn đề bệnh Parkinson, tính đa kháng thuốc, hội chứng chuyển hóa đáng quan tâm ảnh hưởng gen ABCG2 biến thể đến bệnh Parkinson tăng acid uric huyết thanh, có liên quan trực tiếp đến vấn đề sức khỏe toàn xã hội [5] Trong 30 trường hợp mẫu bệnh nhân, kết điện di sản phẩm PCR exon cần nghiên cứu gen ABCG2 cho thấy hầu hết mẫu hình ảnh điện di cho băng sản phẩm có kích thước xấp xỉ 339bp (tương ứng với độ dài exon 5) 3.2 Kết giải trình tự kỹ thuật Sanger: Kết giải trình tự phân tích phần mềm CLC main workbench 5.5 (CLC bio) so sánh với trình tự chuẩn exon gen ABCG2 (NG_032067.2) 22 23 24 25 Hình 8: Kết giải trình tự exon của 30 mẫu DNA xác định kiểu gen CA, CC, AA 3.3 Giai đoạn ASO PCR: Chúng sử dụng năm cặp mồi Wild-type, F2.1, F2.2, F2.3, F2.4 để tiến hành thực phản ứng ASO PCR Kết sau: Kb Thang (kb) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 2000 1000 500 200 75 Hình 9: Hình ảnh kết điện di mẫu P8, P13, P21, P22, P26 (tương ứng giếng chạy với mồi WT, F2.1, F2.2, F2.3 F2.4 cho mẫu) Mẫu P8, P13 mẫu P26 vị trí mồi wide-type có xuất băng điện di nên alen C, bốn cặp mồi có băng điện di alen A, nên kiểu gen P8, P13 P26 CA 26 25 Mẫu P21 mồi wide-type không xuất băng nên nucleotide C đột biến thành A, mồi khác có băng sản phẩm điện di alen A, nên mẫu P21 có kiểu gen AA Mẫu P22 wide-type có băng điện di alen C, vị trí khác khơng thấy xuất băng sản phẩm điện di alen C, nên mẫu P22 có kiểu gen CC Hình 10: Hình ảnh kết điện di mẫu P32, P33, P35, P36, P40 Hình 11: Hình ảnh kết điện di mẫu P41, P45, P46, P47, P48 27 Hình 12: Hình ảnh kết điện di mẫu P49, P50, P51, P56, P57 Hình 13: Hình ảnh kết điện di mẫu P58, P60, P62, P63, P74 28 Hình 14: Hình ảnh kết điện di mẫu P75, P78, P82, P83, P84 Bảng 7: Kết kiểu gen xác định phương pháp ASO PCR STT Mã bệnh nhân Kết ASO PCR Mồi WT Mồi Mồi Mồi Mồi F2.1 F2.2 F2.3 F2.4 P8 x x x x x P13 x x x x x P21 x x x x P22 x P26 x x x x x P32 x x x x x P33 x x x x P35 x x x x P36 x x x x 10 P40 x x x 29 11 P41 x 12 P45 x 13 P46 x 14 P47 x 15 P48 x 16 P49 x 17 P50 18 x x x x x x x x x x P51 x x x x x 19 P56 x x x x x 20 P57 x x x x X 21 P58 x x x x X 22 P60 x 23 P62 x x 24 P63 x x 25 P74 x x 26 P75 x x 27 P78 x x 28 P82 x x 29 P83 x x 30 P84 x x x x x x Từ bảng nhận thấy: Mồi wild-type nhận diện C tất 30 mẫu DNA phương pháp ASO PCR Bốn cặp mồi nhận diện vị trí đột biến thì có hai cặp mồi F2.3 F2.4 cho kết nhận diện giống nhau, cặp mồi F2.2 nhận diện 30 khơng giống hai cặp mồi F2.3 F2.4 tất mười vị trí, cịn cặp mồi F2.1 nhận diện khơng giống vị trí Kết xác định kiểu gen phương pháp ASO PCR sẽ đem so sánh với kết giải trình tự kỹ thuật Sanger, từ sẽ tìm cặp mồi xác định vị trí đột biến 3.4 So sánh kết ASO PCR với phương pháp PCR giải trình tự kỹ thuật Sanger: Tất 30 mẫu DNA sau chạy phản ứng ASO PCR sản phẩm thu đem điện di, kết điện di sẽ so sánh với kết PCR giải trình tự kỹ thuật Sanger Mồi wide-type bắt buộc phải nhận diện alen C, bốn mồi nhận diện vị trí đột biến cịn lại sẽ nhận diện alen, kết hợp hai alen sẽ cho kiểu gen mẫu DNA Nếu mồi nhận diện vị trí đột biến sản phẩm điện di có kiểu gen giống với kết giải trình tự thì mồi xem đặc hiệu Bảng 8: So sánh kết giải trình tự kết ASO PCR Mã bệnh Kết giải nhân trình tự P8 CA P13 STT Kết ASO PCR Mồi F2.1 Mồi F2.2 Mồi F2.3 Mồi F2.4 CA CA CA CA CA CA CA CA CA P21 AA AA AA AA AA P22 CC CC CC CC CC P26 CA CA CA CA CA P32 CA CA CA CA CA P33 AA AA AA AA AA P35 CA CA CA CA CA 31 P36 AA AA AA AA AA 10 P40 CC CC CA CC CC 11 P41 CC CC CA CC CC 12 P45 CA CA CA CA CA 13 P46 CC CC CC CC CC 14 P47 CC CC CC CC CC 15 P48 CC CC CC CC CC 16 P49 CC CC CC CC CC 17 P50 CA CA CA CA CA 18 P51 CA CA CA CA CA 19 P56 CA CA CA CA CA 20 P57 CA CA CA CA CA 21 P58 CA CA CA CA CA 22 P60 CC CC CA CC CC 23 P62 AA AA AA AA AA 24 P63 CC CC CA CC CC 25 P74 CC CC CA CC CC 26 P75 CC CC CA CC CC 27 P78 CC CC CA CC CC 28 P82 CC CC CA CC CC 29 P83 CC CC CA CC CC 30 P84 CC CA CA CC CC Nhận thấy: từ bảng tất 30 mẫu mồi wide-type nhận diện vị trí, mồi F2.3 F2.4 nhận diện tất mẫu cho kết hoàn toàn giống với kết 32 giải trình tự Mồi F2.2 nhận diện không 10 mẫu mồi F2.1 nhận diện sai vị trí so với kết giải trình tự Vì mục tiêu phương pháp ASO PCR xác định có alen A đối tượng nghiên cứu dựa bốn cặp mồi để phát hiện, từ đưa kết cặp mồi có độ nhạy độ đặc hiệu cao ứng dụng thực tiễn Bảng 9: kết so sánh độ nhạy độ đặc hiệu của bốn cặp mồi Mồi ASO PCR Độ nhạy Độ đặc hiệu Giá trị chẩn đoán dương Giá trị chẩn đoán âm Mồi F2.1 93,8 100 100 93,3 Mồi F2.2 60 100 100 33,3 Mồi F2.3 100 100 100 100 Mồi F2.4 100 100 100 100 Trong cặp mồi nhận diện vị trí đột biến, tất bốn cặp mồi có độ đặc hiệu 100%; hai cặp mồi F2.3 F2.4 nhận diện vị trí A có độ nhạy 100%, cặp mồi F2.1 có độ nhạy 93,8%, cặp mồi F2.2 có độ nhạy 60% Từ kết so sánh cho thấy, mồi F2.3, F2.4 thiết kế nhận diện vị trí đột biến gây thêm vị trí đột biến khác cách vị trí đột biến 2, nucleotide từ đầu 3’ thì nhận diện đặc hiệu với độ nhạy 100% thiết kế mồi nhận diện vị trí đột biến gây thêm vị trí đột biến cách nucleotide từ vị trí đột biến Dựa vào kết điện di sau khảo sát độ đặc hiệu mồi, tiến hành khảo sát tối ưu hoá phản ứng PCR, nhằm khuếch đại exon gen ABCG2 Các cặp mồi F2.3, F2.4 cho kết giống giải trình tự có độ nhạy độ đặc hiệu 100% chọn tối ưu hóa quy trình ASO PCR Trong nghiên cứu này, ghi nhận thiết kế mồi nhận diện vị trí đột biến cần gây thêm vị trí đột biến khác cách nucleotide kể từ vị trí đột biến cần nhận diện sẽ đặc hiệu Kết chúng tơi hồn tồn phù hợp với kết tác giả Jing Liu cộng (2012) việc gây thêm vị trí đột biến 33 nucleotide thứ từ đầu 3’, có độ đặc hiệu alen cao (81,9% ) [5] Tuy nhiên, tác giả Jing Liu cộng áp dụng kỹ thuật ASO PCR đối tượng khác với 34 KẾT LUẬN: Hai cặp mồi F2.3 F2.4 nhận diện vị trí A có độ nhạy độ đặc hiệu 100% giá trị chẩn đoán âm 100%, cho kết hoàn toàn trùng hợp với phương pháp PCR giải trình gen kỹ thuật Sanger Trình tự hai mồi sau: F2.3: GACGGTGAGAGAAAACTGAA F2.4: GACGGTGAGAGAAAACCTAA Điều kiện phản ứng xác định điểm đa hình rs2231142 (Q141K) gen ABCG2 kỹ thuật ASO PCR: nhiệt độ 56oC, 40 chu kỳ khuếch đại nồng độ DNA 25ng/25µl 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO: Ascherio Alberto, LeWitt Peter A, Xu Kui, Eberly Shirley, Watts Arthur, Matson Wayne R, Marras Connie, Kieburtz Karl, Rudolph Alice, Bogdanov Mikhail B (2009), "Urate as a predictor of the rate of clinical decline in Parkinson disease" Archives of neurology, 66 (12), 1460-1468 Cha R S., Zarbl H., Keohavong P., Thilly W G (1992), "Mismatch amplification mutation assay (MAMA): application to the c-H-ras gene" PCR Methods Appl, (1), 14-20 Litvan Irene, Bhatia Kailash P, Burn David J, Goetz Christopher G, Lang Anthony E, McKeith Ian, Quinn Niall, Sethi Kapil D, Shults Cliff, Wenning Gregor K (2003), "SIC Task Force appraisal of clinical diagnostic criteria for parkinsonian disorders" Movement Disorders, 18 (5), 467-486 Liu Jing, Huang Shunmou, Sun Meiyu, Liu Shengyi, Liu Yumei, Wang Wanxing, Zhang Xiurong, Wang Hanzhong, Hua Wei (2012), "An improved allele-specific PCR primer design method for SNP marker analysis and its application" Plant Methods, (1), Matsuo H., Tomiyama H., Satake W., Chiba T., Onoue H., Kawamura Y., Nakayama A., Shimizu S., Sakiyama M., Funayama M., Nishioka K., Shimizu T., Kaida K., Kamakura K., Toda T., Hattori N., Shinomiya N (2015), "ABCG2 variant has opposing effects on onset ages of Parkinson's disease and gout" Ann Clin Transl Neurol, (3), 302-6 Noguchi K., Katayama K., Sugimoto Y (2014), "Human ABC transporter ABCG2/BCRP expression in chemoresistance: basic and clinical perspectives for molecular cancer therapeutics" Pharmgenomics Pers Med, 7, 53-64 36 ... MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG XÂY DỰNG QUY TRÌNH ASO PCR XÁC ĐỊNH ĐIỂM ĐA HÌNH rs2231142 TRÊN GEN ABCG2 Mã số: Chủ nhiệm đề tài: TS.BS.MAI PHƯƠNG THẢO Tp Hồ... thuật ASO PCR xác định điểm đa hình rs2231142 gen ABCG2 Nội dung chính: - So sánh kết ASO PCR với phương pháp PCR giải trình gen kỹ thuật Sanger - Xác định cặp mồi tối ưu cho phản ứng ASO PCR. .. phản ứng ASO PCR nhận diện điểm đa hình rs2231142 gen ABCG2 Kết đạt được: - Xác định cặp mồi đặc hiệu nhận diện điểm đa hình rs2231142 gen ABCG2 kỹ thuật ASO PCR - Hướng dẫn 01 học viên cao