tần suất các alen của 15 gene hệ identifiler từ quần thể người hoa ở các tỉnh phía nam

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG TẦN SUẤT CÁC ALEN CỦA 15 GENE HỆ IDENTIFILER TỪ QUẦN THỂ NGƯỜI HOA Ở CÁC TỈNH PHÍA NAM Mã số: Chủ nhiệm đề tài: PGS TS BS Lê Xuân Trường Tp Hồ Chí Minh, Tháng 4/ Năm 2018 BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG TẦN SUẤT CÁC ALEN CỦA 15 GENE HỆ IDENTIFILER TỪ QUẦN THỂ NGƯỜI HOA Ở CÁC TỈNH PHÍA NAM Mã số: Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) Tp Hồ Chí Minh, Tháng 4/ Năm 2018 DANH SÁCH THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU Chức danh Họ tên, học hàm học vị q trình thực nhiệm vụ Đơn vị cơng tác PGS TS Lê Xuân Trường Chủ nhiệm đề tài Đại học Y Dược TP HCM ThS Trần Tú Qun Thành viên Viện Khoa học Hình - Bộ Công an MỤC LỤC CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ VÀ TỔNG QUAN Y VĂN .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Tổng quan 1.2.1 Cơ sở khoa học đời giám định ADN 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước khảo sát tần suất alen gen sử dụng giám định ADN 12 1.2.3 Tình hình nghiên cứu khảo sát tần suất alen gen sử dụng giám định ADN người Hoa 16 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng nghiên cứu 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 18 2.2.2 Phương pháp chọn mẫu: 18 2.2.3 Cỡ mẫu nghiên cứu 18 2.2.4 Cách tiến hành 20 2.2.5 Kiểm soát sai lệch 21 2.2.6 Xử lý kết 22 2.3 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU 22 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ BÀN LUẬN .23 3.1 Kết 23 3.1.1 Kết thu, bảo quản mẫu, tách chiết định lượng ADN 23 3.1.2 Kết thực PCR, điện di phân tích kiểu gen 24 3.1.3 Kết quan sát kiểu gen gen số kiểm định 25 3.1.4 Kết tính tần suất alen 15 locus gen 32 3.2 Bàn luận 32 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG – HÌNH Bảng 1: Tần số kiểu kết hôn tần số kiểu gen hệ sau theo định luật Hardy-Weinberg Bảng 2: Các locus gen hệ Identifiler 13 Bảng 3: Tần suất tối thiểu alen thay đổi tương ứng với số lượng mẫu khảo sát 19 Bảng 4: Nồng độ ADN tách chiết từ 100 mẫu máu người Hoa 23 Bảng 5: Số lượng kiểu gen quan sát locus D8S1179 25 Bảng 6: Số lượng kiểu gen quan sát locus D21S11 26 Bảng 7: Số lượng kiểu gen quan sát locus D7S820 26 Bảng 8: Số lượng kiểu gen quan sát locus CSF1PO 27 Bảng 9: Số lượng kiểu gen quan sát locus D3S1358 27 Bảng 10: Số lượng kiểu gen quan sát locus TH01 27 Bảng 11: Số lượng kiểu gen quan sát locus D13S317 28 Bảng 12: Số lượng kiểu gen quan sát locus D16S539 28 Bảng 13: Số lượng kiểu gen quan sát locus D2S1338 29 Bảng 14: Số lượng kiểu gen quan sát locus D19S433 29 Bảng 15: Số lượng kiểu gen quan sát locus vWA 30 Bảng 16: Số lượng kiểu gen quan sát locus TPOX 30 Bảng 17: Số lượng kiểu gen quan sát locus D18S51 30 Bảng 18: Số lượng kiểu gen quan sát locus D5S818 31 Bảng 19: Số lượng kiểu gen quan sát locus FGA 31 Hình Bộ kit thương mại Identifiler hãng Applied Biosystems 15 Hình Sơ đồ gen hệ Identifiler 16 Hình 3: Sơ đồ qui trình giám định ADN 21 Hình Hình ảnh điện di điển hình máy điện di 3130 số hình ảnh kiểu gen cá thể người Hoa đại diện cho 200 cá thể phân tích 25 THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG Thơng tin chung - Tên đề tài: Tần suất alen 15 gene hệ Identifiler từ quần thể người Hoa tỉnh phía Nam - Mã số: - Chủ nhiệm đề tài: PGS TS BS Lê Xuân Trường Điện thoại: 01269872057 Email: lxtruong1957@gmail.com - Đơn vị quản lý chun mơn: mơn Hóa Sinh, Khoa Y, Đại học Y Dược TP.HCM - Thời gian thực hiện: từ tháng 8/2016 đến tháng 4/2018 Mục tiêu Khảo sát xây dựng sở liệu tần suất alen 15 gen hệ Identifiler từ quần thể người Hoa tỉnh phía Nam Nội dung Hiện nay, Phân viện khoa học hình thành phố Hồ Chí Minh lực lượng kỹ thuật hình nước sử dụng kit Identifiler hãng AppliedBiosystem giám định ADN (Kit Identifiler gồm 15 gen NST thường gen NST giới tính) Do đó, nghiên cứu thực tiến hành khảo sát alen 15 gen NST thường Người Hoa Việt Nam có dân số 823.071 người, cư trú tập trung Thành phố Hồ Chí Minh, rải rác tỉnh phía Nam, điểm nóng tình hình an ninh trật tự an toàn xã hội Việc tiến hành nghiên cứu: “Khảo sát xây dựng sở liệu tần suất alen 15 gen hệ Identifiler từ quần thể người Hoa tỉnh phía Nam” yêu cầu cấp thiết để đảm bảo tính xác khách quan kết luận giám định ADN vụ việc có liên quan đến người Hoa, liệu trích xuất từ nhánh nghiên cứu Đề tài khoa học cấp Bộ Dữ liệu đề tài sở vững để phân tích, đánh giá kết luận giám định, có ý nghĩa cao kể khoa học thực tiễn Kết đạt (khoa học, đào tạo, kinh tế-xã hội, ứng dụng, ): - Về đào tạo: 01 Thạc sĩ chun ngành Hóa Sinh - Cơng bố tạp chí nước: Tạp chí Y học TP.HCM, xuất năm 2018 Hiệu kinh tế - xã hội đề tài mang lại Tần suất alen 15 gen hệ Identifiler từ 100 cá thể người Hoa thu nghiên cứu đủ điều kiện dùng giám định ADN cho quần thể người Hoa CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ VÀ TỔNG QUAN Y VĂN 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Giám định gen ứng dụng kỹ thuật, công nghệ đại sinh học phân tử nhằm phân tích đặc điểm dấu vết mẫu vật hay cá thể người dựa tảng giám định sinh học Giám định gen phân tích đặc điểm dấu vết, mẫu vật cá thể người mức độ phân tử Trong giám định gen, phân tử cần nghiên cứu, phân tích ADN (Axit Deoxyribo Nucleic), thành phần quan trọng cấu tạo nhiễm sắc thể (NST), ADN vật liệu mang thơng tin di truyền đóng vai trò định việc di truyền đặc điểm từ hệ đến hệ khác thể sống [4] Có nhiều phương pháp sử dụng để xác định cá thể người: nhận biết qua vân tay, tiếng nói, nhận biết yếu tố di truyền như: xác định nhóm kháng nguyên hồng cầu (nhóm máu), xác định số yếu tố protein huyết thanh, xác định số enzym, khả phân biệt thấp Phải đến năm cuối kỷ 20, đặc biệt thập kỷ 80, 90 nhà khoa học hình ứng dụng cơng nghệ gen (DNA- Technology) vào xác định tội phạm Vấn đề đặt độ tin cậy phân tích ADN Trong giám định ADN, để xác định (truy nguyên) cá thể địi hỏi bắt buộc phải tính xác suất người ngẫu nhiên quần thể có cấu trúc di truyền trùng lặp với ADN mẫu vật cần giám định hay khơng Để tính tốn xác suất phải có liệu tần suất alen [13, 4], với xác suất tính lớn độ tin cậy giám định cao Theo lý thuyết di truyền học, quần thể khác có đặc điểm di truyền đặc trưng, thể phân bố tần suất alen quần thể khác áp dụng sở liệu quần thể cho quần thể khác Tần suất alen xác định nghiên cứu, khảo sát nhiều gen quần thể người định thông qua việc thu thập mẫu người quần thể người nhiều vùng địa lý khác khơng có quan hệ họ hàng huyết thống Số lượng mẫu cần phân tích phải đủ lớn để bảo đảm độ tin cậy, có nghĩa kết phân tích thống kê tần số alen kiểu gen phải phù hợp mẫu nghiên cứu quần thể lý thuyết [13, 14] Tần suất có giá trị 22 2.2.6 Xử lý kết Để số liệu nghiên cứu locus gen sử dụng cho ứng dụng cụ thể, điều cần thiết cần đánh giá xem mẫu nghiên cứu với locus gen phân tích có đảm bảo cấu trúc di truyền mẫu (tần số tương đối alen tần số kiểu gen) ổn định hay không qua hệ, nghĩa mẫu có tuân theo định luật Hardy Weinberg hay không Cần kiểm tra phù hợp mẫu với quần thể cân lý thuyết thông qua đánh giá chênh lệch tần số quan sát thực tế với phân bố lý thuyết kiểu gen locus gen nghiên cứu có sai khác hay không Kiểm định phù hợp phân bố tần số kiểu gen mẫu khảo sát quần thể lý thuyết dựa vào tiêu chuẩn chi bình phương 2 Việc tính tốn tần suất sốđược thực phần mềm Microsoft Excel, gồm: HWE (kiểm tra phù hợp với định luật Hardy - Veinberg), Hobs (dị hợp tử quan sát), Hexp (dị hợp tử mong đợi), số MP (khả trùng lặp), số PD (khả phân biệt), sốPIC (mức độ đa hình locus gen), số PE (khả loại trừ), FEB (xác suất không bao gồm quan hệ dòng Y) Các số giúp đánh giá tính đa hình alen quần thể đồng thời xác định tần suất thu thập có đủ độ tin cậy để sử dụng vào việc xác định cá thể xác định huyết thống cha, mẹ - chưa 2.3 ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU Nghiên cứu khơng có tác động có hại lên đối tượng Đối tượng không tốn thêm chi phí cho xét nghiệm nghiên cứu Thơng tin thu thập nghiên cứu lấy từ hồ sơ ADN Ngoài ra, người tham gia nghiên cứu có quyền tự nguyện từ chối trả lời câu hỏi khơng thích mà khơng ảnh hưởng đến chất lượng phục vụ suốt trình đến giám định Họ biết thông tin họ cung cấp phục vụ cho mục đích nghiên cứu mà khơng mục đích khác nghiên cứu không vi phạm vấn đề y đức 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ BÀN LUẬN 3.1 KẾT QUẢ 3.1.1 Kết thu, bảo quản mẫu, tách chiết định lượng ADN Thu ngẫu nhiên 100 mẫu máu 100người Hoa thẻ thu mẫu FTA với thông tin cá nhân người thu mẫu bảo quản theo quy định phịng thí nghiệm ANDcủa Phân viện Khoa học hình Kết định lượng ADN từ mẫu máu thu tính tốn cho nhân bội mẫu thể bảng sau: Bảng 4: Nồng độ ADN tách chiết từ 100 mẫu máu người Hoa STT Ký hiệu HOA1 Nồng độ ADN (ng/ul) 5.5 51 HOA51 Nồng độ ADN (ng/ul) 9.5 HOA2 5.8 52 HOA52 9.6 HOA3 6.0 53 HOA53 5.5 HOA4 7.0 54 HOA54 6.5 HOA5 8.1 55 HOA55 8.7 HOA6 9.9 56 HOA56 5.2 HOA7 5.5 57 HOA57 8.9 HOA8 6.5 58 HOA58 8.7 HOA9 8.7 59 HOA59 2.8 10 HOA10 5.2 60 HOA60 9.5 11 HOA11 8.9 61 HOA61 15.2 12 HOA12 8.7 62 HOA62 6.5 13 HOA13 2.8 63 HOA63 7.5 14 HOA14 9.5 64 HOA64 7.8 15 HOA15 6.5 65 HOA65 8.6 16 HOA16 7.5 66 HOA66 6.9 17 HOA17 9.5 67 HOA67 6.2 18 HOA18 3.8 68 HOA68 7.5 19 HOA19 7.3 69 HOA69 4.8 20 HOA20 8.1 70 HOA70 8.6 21 HOA21 9.4 71 HOA71 14.0 22 HOA22 9.6 72 HOA72 3.6 STT Ký hiệu 24 23 HOA23 9.8 73 HOA73 8.9 24 HOA24 16.0 74 HOA74 7.7 25 HOA25 12.5 75 HOA75 7.2 26 HOA26 5.5 76 HOA76 5.8 27 HOA27 6.5 77 HOA77 9.4 28 HOA28 8.0 78 HOA78 4.8 29 HOA29 7.6 79 HOA79 8.5 30 HOA30 7.5 80 HOA80 8.6 31 HOA31 9.5 81 HOA81 8.7 32 HOA32 9.6 82 HOA82 8.1 33 HOA33 9.8 83 HOA83 6.1 34 HOA34 11.1 84 HOA84 12.3 35 HOA35 10.2 85 HOA85 4.8 36 HOA36 9.4 86 HOA86 10.3 37 HOA37 9.5 87 HOA87 8.6 38 HOA38 2.1 88 HOA88 7.5 39 HOA39 4.8 89 HOA89 9.5 40 HOA40 6.6 90 HOA90 3.8 41 HOA41 6.5 91 HOA91 7.3 42 HOA42 8.0 92 HOA92 8.1 43 HOA43 7.6 93 HOA93 9.4 44 HOA44 7.5 94 HOA94 8.1 45 HOA45 8.9 95 HOA95 5.5 46 HOA46 8.7 96 HOA96 5.8 47 HOA47 6.4 97 HOA97 6.0 48 HOA48 8.6 98 HOA98 7.0 49 HOA49 5.7 99 HOA99 8.1 50 HOA50 9.6 100 HOA100 9.9 Ơ 3.1.2 Kết thực PCR, điện di phân tích kiểu gen Chúng tơi thực 100 phản ứng PCR với KIT Identifiler dựa nồng độ ADN định lượng (thành phần phản ứng chu kỳ nhiệt theo nhà sản xuất, điện di 25 máy giải trình tự ADN ABI 3130 phân tích kiểu gen phần mềm GenemaperID v3.2) Kết thu 100 bảng kiểu gen khác 100 mẫu AmpFlSTR® Identifiler™ D8S1179 6FAM (blue) D3S1358 D7S820 D21S11 TH01 D13S317 D16S539 CSF1PO D2S1338 VIC (green) TPOX D19S433 D18S51 VWA NED (yellow) AMEL D5S818 FGA PET (red) GS500 LIZ size standard LIZ (orange) Hình Hình ảnh điện di điển hình máy điện di 3130 số hình ảnh kiểu gen cá thể người Hoa đại diện cho 200 cá thể phân tích 3.1.3 Kết quan sát kiểu gen gen số kiểm định Từ 100 kiểu gen hệ Identifiler 100 cá thể người Hoa, đếm tổng số 3000 alenvới tần suất số loại alen locus gen khác (Phụ lục 3) Gen D8S1179 Bảng 5: Số lượng kiểu gen quan sát locus D8S1179 Các alen D8 10 11 12 13 14 15 16 10 3 14 11 12 26 13 14 1 15 16 Trong tổng số 100 cá thể có 13 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 87 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D21S11 Bảng 6: Số lượng kiểu gen quan sát locus D21S11 Alen D21 28 29 29.2 29.3 30 31 31.2 31.3 32 32.2 32.3 33.2 33.3 28 29 29.2 0 29.3 30 0 31 31.2 31.3 32 32.2 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 32.3 33.2 33.3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Trong tổng số 100 cá thể có 14 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 86 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D7S820 Bảng 7: Số lượng kiểu gen quan sát locus D7S820 Alen D7 9.1 9.1 0 10 0 11 11.1 1 12 11 13 0 27 10 11 11.1 12 13 14 11 2 13 0 Trong tổng số 100 cá thể có 28 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 72 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen CSF1PO Bảng 8: Số lượng kiểu gen quan sát locus CSF1PO Alen CSF 10 11 12 13 10 11 11 12 14 19 13 Trong tổng số 200 cá thể có 34 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 66 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D3S1358 Bảng 9: Số lượng kiểu gen quan sát locus D3S1358 Alen D3 14 15 16 17 18 14 15 16 27 11 17 20 18 0 Trong tổng số 100 cá thể có 22 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 78 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen TH01 Bảng 10: Số lượng kiểu gen quan sát locus TH01 Alen TH01 6 9.3 10 28 9.3 10 0 18 13 27 0 Trong tổng số 100 cá thể có 34 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 66 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D13S317 Bảng 11: Số lượng kiểu gen quan sát locus D13S317 Alen D13 10 11 12 13 0 0 9 11 3 10 11 10 12 13 Trong tổng số 100 cá thể có 21 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 79 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D16S539 Bảng 12: Số lượng kiểu gen quan sát locus D16S539 Alen D16 10 11 12 13 14 10 11 18 12 10 12 13 14 3 Trong tổng số 100 cá thể có 16 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 84 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D2S1338 29 Bảng 13: Số lượng kiểu gen quan sát locus D2S1338 Alen D 9.1 10 11 12 14 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 9.1 14 10 11 12 0 0 0 24 16 17 18 19 20 21 22 23 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 4 0 1 0 0 1 0 0 0 0 5 25 0 0 0 2 0 Trong tổng số 100 cá thể có cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 95 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D19S433 Bảng 14: Số lượng kiểu gen quan sát locus D19S433 Allele D19 12 13 13.2 14 14.2 15 15.2 15.3 16 16.2 12 13 13.2 14 11 14.2 15 0 15.2 15.3 0 2 1 16 0 0 0 16.2 1 0 0 0 18 0 0 0 0 0 23 0 0 0 0 0 30 18 Trong tổng số 100 cá thể có 17 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 73 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen vWA Bảng 15: Số lượng kiểu gen quan sát locus vWA Alen vWA 14 15 16 17 18 19 20 14 15 0 16 17 18 18 19 4 20 0 2 Trong tổng số 100 cá thể có 20 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 80 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen TPOX Bảng 16: Số lượng kiểu gen quan sát locus TPOX Alen TPOX 10 11 12 19 11 10 0 11 35 10 12 0 0 Trong tổng số 100 cá thể có 32 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 68 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D18S51 Bảng 17: Số lượng kiểu gen quan sát locus D18S51 Alen D18S51 10 11 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 31 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 1 0 12 4 0 1 0 0 1 1 0 2 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 Trong tổng số 100 cá thể có 10 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 90 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen D5S818 Bảng 18: Số lượng kiểu gen quan sát locus D5S818 Alen D5S818 10 11 12 13 0 1 0 0 11 0 7 10 11 12 13 Trong tổng số 100 cá thể có 16 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 84 cá thể với kiểu gen dị hợp tử Gen FGA Bảng 19: Số lượng kiểu gen quan sát locus FGA Alen FGA 18 18 19 20 21 21.2 22 22.2 23 24 24.2 25 26 27 0 0 0 0 0 32 19 20 21 21.2 22 22.2 23 24 24.2 25 26 27 3 0 0 1 1 0 0 0 12 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 Trong tổng số 100 cá thể có 12 cá thể với kiểu gen đồng hợp tử 88 cá thể với kiểu gen dị hợp tử 3.1.4 Kết tính tần suất alen 15 locus gen So sánh số kiểm định 2 tính tốn (2tt) với lý thuyết (2lt) đánh giá phù hợp với định luật Hardy – Weinberg Tính tốn số 2TTcho locus gen hệ số tự (theo công thức 2.2 2.3), tra bảng phân phối 2 theo hệ số tự tính, ta kết tuân theo định luật Hardy - Weinberg chấp nhận với độ tin cậy 95% Có nghĩa tần suất phân bố alen 15 locus gen hệ Identifiler 100 mẫu khảo sát ứng dụng để tính tốn xác suất trình giám định ADN 3.2 BÀN LUẬN Với kết khảo sát xây dựng bảng liệu tần suất alen 15 locus hệ Identifiler từ quần thể người Hoa, tác giả đề tài nhóm nghiên cứu có số bàn luận sau: Qua phân tích 100 kiểu gen thu từ mẫu máu quần thể người Hoa xây dựng bảng tần suất alen, chúng tơi xác định có tổng cộng 3000 alen với số loại alen tần số phân bố quần thể khác Xác định alen khơng có thang alen chuẩn Một số alen quan sát thấy xuất người Hoa mà chưa thấy xuất quần thể khác, alen đặc trưng cho quần thể người Hoa 33 - Các khái niệm alen alen đặc trưng trình bày sau: + Alen alen có thật, khơng nằm hệ thống thang chuẩn quốc tế công bố [14] + Alen đặc trưng : thấy xuất người Hoa mà chưa thấy xuất quần thể khác.Khi gặp mẫu có alen này, mẫu mang tính truy nguyên cao người Hoa - Kết nghiên cứu đề tài phát hiện: có 11 alen hiếm, khơng có hệ thống thang chuẩn quốc tế.Các alen là: gen D7 có alen: 9.1, 11.1; gen D21 có alen: 29.3, 31.3, 32.3, 33.3; gen D19 có alen 15.3; gen FGA: có alen 21.2, 22.2, 23.2 24.2 Có alen alen đặc trưng có người Hoa mà khơng thấy có quần thể người khác, alen 11.1 (locus gen D7S820), alen 15.3 (locus gen D19S433), alen 29.3; 31.3; 32.3 33.3 (locus D21S11) Trong 15 locus gen khảo sát gen có giá trị truy nguyên cá thể cao (tính đa hình cao), gen: - Gen D21S11: với số loại alen 13 có alen - Gen D2S1338: với số loại alen 15 có alen alen 9.1 khơng có thang alen chuẩn - Gen D19S433: với số loại alen 14 có alen alen 9.1 khơng có thang alen chuẩn - Gen FGA: với số loại alen 12 có alen alen 9.1 khơng có thang alen chuẩn Những alen đặc điểm có khả truy nguyên cá thể xác định quan hệ huyết thống cha - mẹ - Việc xác định alen đặc trưng có ý nghĩa đặc biệt quan trọng sàng lọc, định hướng công tác giám định q trình phân tích kết luận giám định, làm tăng giá trị truy nguyên cá thể người Hoa độ tin cậy kết luận giám định.Ứng dụng sở liệu tần suất giám định gen (ADN) Viện Khoa học hình nói riêng lực lượng KTHS nói chung, kết thu chứng khoa học xác 34 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ Nghiên cứu tiến hành thu thập mẫu máu 100 cá thể người Hoa tỉnh phía Nam Tiến hành phân tích mẫu theo qui trình chuẩn gồm: tách chiết ADN phương pháp vô cơ, sử dụng Chelex 100 (BioRad - Mỹ).Định lượng ADN KIT Human DNA Quantification (Hãng AB- Mỹ) máy Realtime 7500 - ABI Nhân bội gen (PCR) điện di KIT Identifiler (Hãng AB-Mỹ) máy PCR 9700 máy điện di mao quản 3130 (Hãng AB-Mỹ) Kết quả: - Bảng liệu tần suất đầy đủ alen 15 locus gen hệ Identifiler phân tích từ 100 mẫu máu người Hoa tỉnh phía Nam Bảng liệu tần suất kiểm định cho thấy 100 mẫu khảo sát (mẫu thực nghiệm) phù hợp với quần thể lý thuyết Các phương pháp kỹ thuật sử dụng nghiên cứu chuẩn hoá, đảm bảo tính xác, khoa học khách quan, đủ độ tin cậy - Bảng tần suất alen 15 gen hệ Identifiler từ 100 cá thể người Hoa thu nghiên cứu đủ điều kiện dùng giám định ADN cho quần thể người Hoa - Nghiên cứu 100 kiểu gen bảng tần suất thu được, chúng tơi xác định được: có 11 alen (chưa có thang alen chuẩn quốc tế); 06 alen 15 locus gen vừa alen vừa đặc trưng cho quần thể người Hoa,đó alen 11.1 (locus D7S820), alen 15.3 (locus D19S433), alen 29.3; 31.3; 32.3 33.3 (locus D21S11) Trong 15 gen khảo sát gen D21S11, D19S433, D2S1338 FGA gen có giá trị truy ngun cá thể cao (tính đa hình cao với alen đặc trưng) Trong phạm vi nghiên cứu đề tài nhiều hạn chế, với số mẫu giới hạn 100 mẫu máu người Hoa (một nhánh đề tài nghiên cứu cấp Bộ khảo sát xây dựng sở liệu tần suất alen 15 gen hệ Identifiler quần thể người Hoa), tiến hành nghiên cứu với số mẫu lớn hoàn thiện bảng tần suất Bổ sung vào Quy trình giám định ADN để tính xác suất Kết luận giám định ADN lực lượng Kỹ thuật hình tổ chức giám định khác vụ việc liên quan đến người Hoa Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hà Quốc Khanh (2000), "Điều tra xây dựng sở liệu tần suất gen hệ Nineplex người Việt (Kinh) ứng dụng giám định gen", Đề tài khoa học cấp Bộ, Bộ Công An-Phân viện Khoa học hình Lê Thị Thu Thủy (2012), "Khảo sát xây dựng sở liệu tần suất alen 15 gene hệ Identifiler quần thể người Việt (Kinh) ứng dụng giám định gene (ADN) lực lượng Kỹ thuật hình sự", Đề tài khoa học cấp Bộ, Bộ Công AnPhân viện Khoa học hình Phạm Ngọc Sơn (2016), Khảo sát xây dựng sở liệu tần suất alen 15 locus gen hệ Identifiler từ quần thể người dân tộc Khmer ứng dụng giám định ADN", Đề tài khoa học cấp Bộ, Bộ Công An-Phân viện Khoa học hình Viện Khoa học hình (2013), Tiêu chuẩn Quốc gia (TCVN-AN): Quy trình giám định KTHS Pháp Y CAND, Ban hành kèm theo thông tư 46/2013/TT-BCA, tr4752 Tiếng Anh ADN Technology in Forensic Science (1992) “Committee on DNA Technology in Forensic Science”, National Research Council Commission on Life Sciences (CLS) Buckleton JS, Triggs CM, Walsh SJ, (2005), “Forensic DNA Evidence Interpretation, CRC PRESS, p195-198 Butler JM (2012), “Advanced Topics in Forensic DNA typing”, Thomson brooks/ Cole, 3nd edition, p123-134 Carracedo A (2005), Forensic DNA Typing Protocols, Humana Press Inc, ISBN-10: 1588292649 Chakraborty R (2006), "Sample size requirements for addressing the population genetic issues of forensic use of DNA typing", Human Biology 64: 141-159 10 Forensic Science International 158 (2006), Volume 159, Issues 2-3, p234 -237 11 Fung WK, Ye J, Hu L, Zhao X, Liu B, Wong DM, Law MY (2001), “Allele frequencies for nine STR loci”, Beijing Chinese Forensic Sci Int, 121(3): 207-9 12 Gavazaj FQ, et al (2012), “Optimization of DNA concentration to amplify short tandem repeats of human genomic DNA”, Bosn J Basic Med Sci, 12(4): 236–239 13 Hamilton MB (2009), “Population Genetics”, Elserier Churchill livingstone, 4th edition, chapter 5, p79-86 14 He Y, et al (2015): “Allele frequencies for fifteen autosomal STR loci in a Nakhi population from Yunnan Province, Southwest China”, Forensic Science International: Genetics 15 Huang Q, et al (2012), “Allele frequencies of 15 STRs in five ethnic groups (Han, Gelao, Jing, Shui and Zhuang) in South China”, Forensic Science International: Genetics, Vol 7, Issue 2, p31–p34 16 Kobilinsky L, Levine L, Margolis-Nunno H (2007), “Forensic DNA Analysis”, Infobase Publishing, ISBN-13: 978-0791089231 17 Koblinsky L, Liotti TF, Oeser-Sweat J (2005), “DNA forensic ADN legal applications”, A John Wiley & Sons, Inc Publication, Chapter 4, p149-196 18 The Evaluation of Forensic DNA Evidence (1996), “Commission on Life Sciences (CLS) 19 Zhivotovsky et al (2009), "An STR database on the Volga-Ural population", Forensic Science International: Genetics 3, e133-e136 20 Zhivotovsky et al (2009), "Developing STR databases on structured populations: The native South Siberian population versus the Russian population", Forensic Science International: Genetics 3, e111-e116 ... TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG TẦN SUẤT CÁC ALEN CỦA 15 GENE HỆ IDENTIFILER TỪ QUẦN THỂ NGƯỜI HOA Ở CÁC TỈNH PHÍA NAM Mã số: Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên)... tần suất alen 15 gen hệ Identifiler từ quần thể người Hoa tỉnh phía Nam 1.2 TỔNG QUAN 1.2.1 Cơ sở khoa học đời giám định ADN Di truyền học quần thể Di truyền học quần thể nghiên cứu phân bố alen. .. học, quần thể khác có đặc điểm di truyền đặc trưng, thể phân bố tần suất alen quần thể khác áp dụng sở liệu quần thể cho quần thể khác Tần suất alen xác định nghiên cứu, khảo sát nhiều gen quần thể