Kiểm tra hoạt tính chống ung thư trên động vật thí nghiệm của cisplatin tổng hợp tại việt nam

ĐẠI HỌ C Q U Ố C GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN KIỂM TRA HỌAT TÍNH CHốNG ƯNG THƯ TRÊN ĐỘNG VẬT THÍ NGHIỆM CỦA CISPLATIN TổNG HỢP TẠI VIỆT NAM (Dáo cáo tổng hợp đ ể tài nghiên cứu khoa học đặc b iệ t cấp Đại học Q u ố c gia Hà Nội) Mã số: Q G - 0 - Chủ nhiệm đ ổ tồi: P G S T S T R Ẩ N c ô n g y ên Những cán b ộ phối hợp: TS NGUYỄN TH Ị QUỲ PGS TS TRẦN TH Ị ĐÀ GS TS TRẦN VÃN HANH PGS TS TRỊNH ĐÌNH ĐẠT PGS TS ĐỖ NGỌC LIÊN Hà Nôi - 2002 M ỤC LỤC Trang GIẢI THÍCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT .1 DANH SÁCH NHŨNG NGƯỜI THỰC HIỆN ĐỂ T À I DANH MỤC CÁC BẢNG s ố LIỆU DANH MỤC CÁC HÌNH BÁ O C Á O T Ó M T Ắ T SUM M ARY BÁO CÁO TỔNG HỢP 11 I MỞ ĐẦU 12 II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 13 Đối tượng nguyên l i ệ u 13 Mơ hình thí n g h iệ m 13 Phương pháp nghiên c ứ u 14 Xác định liều tiêm C IS P L A T IN 14 Xác định tỷ số phát triển u hiệu lực kháng u t h u ố c 14 X c đ ị n h c h ỉ s ố p h â n b o u n g t h 14 Xác định m ật độ hồng cầu bạch cầu máu ngoại v i 15 Xác định số lượng TBUT di vào m u 15 Xác định hàm lượng albumin globulin tổng s ố 15 10 Phân tích hệ enzym esteraza huyết th a n h .15 11 Nghiên cứu hình thái học tế bào ung t h 15 12 Xác định thời gian sống t h ê m 15 13 Bảo quản tế bào ung thư ni tơ lỏ n g 16 14 Đ ịa điểm tiến hành thí n g h iệ m 16 15 Thời gian tiến hành thí n gh iệ m 16 III KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u VÀ THẢO LUẬN 16 Tổng họp tinh chế C IS P L A T IN 16 Duy trì mơ hình ung thư thực n g h iệ m 16 Xác định liều tiêm CISPLATIN tổng hợp Việt N a m 18 Hiệu ứng ức chế sinh khối u CISPLATIN tổns hợp Việt N a m 19 Khả ức chê phân bào CISPLATEN tổng hựp Việl Nam 21 Ảnh hưởng CISPLATIN lên số tiêu sinh lýmáu ngoại vi chuột bị ung thư (xem thêm chi tiết phụ lục5 ) 22 Ánh hưởng CISPLATEN tới thành phần số protein chủ yếu huyết chuột bị ung thư 23 Kết điện di hệ enzym ESTERAZA 26 Sự gây độc tế bào (cytotoxic) CISPLATTN hình ánh siêu cấu trúc tế bào u báng Sarcoma 180 27 10 Tác dụng kéo dài thời gian sống thêm chuột bị ung thư điều trị bằne CISPLATIN (xem thêm chi tiết phụ lục ) 30 11 Bảo quản tế bào uns thư nitơ lỏng 31 12 Cơ chế tác động CISPLATIN lên tế bào uns thư hiệu kháng u nói chun£ cúa .31 IV KẾT L U Ậ N .34 V ĐỀ N G H I 35 TÀI LIỆU THAM K H Ả O 36 PHỤ LỤC .43 I NHỦNG báo cáo B ổ SUNG: P h ụ lục 1- Liều tiêm thích hợp CISPLATIN tổng hợp Việt Nam cho chuột nhắt tráne Swiss Trần CơiiiỊ n, Nguvển Thị Quỳ, Hồng Tlụ M ỹ N h u n g P h ụ lục - 44 Nghiên cứu ảnh hướne CISPLATIN đến En/ym E ST ER A Z A trone huyết m áu chuột m ane u bánii Sarcoma 180 Trịnh Đình Đạt Nguyễn Thị Q u ỳ 4Ọ P h ụ lục - Báo cáo kết thí nghiệm giữ e iố n s tế bào đ ộns vật Irone đône lạnh N guyễn Tliị Quỳ Trần Cóng Yên H o n ° Thị M ỹ N h u n g II NHŨNG CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG Bố Phụ lục - Trần Cịng n, Hoàng Thị Mỹ Nhung, Nguyền Thị Quỳ (200 ): Bước đáu khảo sát hiệu ứns ức c h ế sinh khối u CISPLATIN tổne 52 hợp Việt Nam Tc Sinh học, T23.(3A), 9, 2001: 227 - 231 Phụ lục - Trần Công Yên, Nguyễn Thị Quỳ, Hoàng Thị Mv Nhung ( 2001 ) Ánh hưởng cúa CISPLATIN tổng hợp Việt Nam mơt số chí tiêu sinh lý m áu ngoại vi củ a chuột nhắt trắng Swiss m ane u bánii Sarcoma 180 Ts Sinh học, số đầu 2003 nhận b i Phụ lục - Trần Cơng n, Hồng Thị Mỹ Nhung, Nguyễn Thị Quỳ, Trần Thị Đà, Lê Hải Đãng (2000): Đánh giá hiệu ứne cúa CISPLATIN sản xuất Việt Nam lên thời gian sốn e thêm chuột nhắt trắne Swiss m ane u báne Sarcoma 180 Tc Dược học, số 296, 12, 2000: 16 - 68 Phụ lục - Trần Công Yén, Nguyền Thị Quỳ (2001): Một chạne đườnsỉ nghiên cứu une thư thực nghiệm (1987 - 2001 ) Toàn tập, Hội tháo quốc tế Sinh học, Hà Nội - Việt Nam - 5/7/2001: 285 - 290 72 Phụ lục - Nguvễn Thị Trâm (2002): Điều trị una thư bằns thuốc nội: Hiệu rõ rệt qua thực niihiém Báo Giáo dục & Thời đại, số 151, 17/12/2002 79 KẾT QUÁ ĐÀO TẠO Phụ lục - Các khóa luận, luận văn luận án hướng dán: 9.1 - Luận án Tiến sỹ Hóa học: Dương Bá Vũ H0 9.2 - Luận văn Thạc sỹ Hóa học: N guyễn Thị Thanh Chi XI 9.3 - Luận văn Thạc sỹ Sinh học: Hoàng Thị Mỹ Nhung 82 9.4 - Khóa luận Cử nhân Hóa học: Đồn Thị Kim Duna 83 9.5 - Khóa luận Cử nhãn Sinh học: Hà Thị Duna 84 9.6 - Khóa luận Cừ nhân Công nghệ Sinh học: Nguyền Trọng Tuấn K5 9.7 - Khóa luận Cử nhãn Sinh học: Khuất Thị K iều Oanh X6 IV PHIẾU ĐẢNG KÝ KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u KHOA HOC - CÒNG NGHỆ 87 G IẢ I T H ÍC H C Á C C H Ữ V IẾ T T Ắ T A lb : Albumin CISPLATIN : Cis - dicloro diam m ino platin G lob : Globulin G R : Grovvth Ratio (tỷ số phát triển) H V Đ T : Hiển vi điện tử IA : Inhibitive Activity (Hiệu lực ức chế) ILS : Increase in Life Span (Sự tăng thêm thời gian SƠÌ1C) ip : Intraperitoneal (trong màng bụne) L D 50 : 50% Lethal Dose (liều gây chết nửa) M I : Mitotic Index (Chỉ số gián phân) O D : Optical Density (Mật độ quang học) TBU T : T ế bào ung thư T D : Therapeutic Dose (Liều điều trị) U T : Ung thư U T T N : Ung thư thực nghiệm D A N H SÁC H N H Ũ NG NG Ư Ờ I T H ự C HIÊN ĐỂ TÀ I H ọc h m TT H ọ tên C q u a n cồng tác H ọc vị Khoa Sinh học, Trường Đại học Trần Công Yên PGS.TS (Chủ trì) K HTN - ĐHQG Hà Nội Khoa Sinh học, Trường Đại học Nguyễn Thị Quỳ Trần Thị Đà Trần Văn Hanh TS K HTN - ĐHQG Hà Nội Khoa Hóa, Trường Đại học K H T N PGS.TS - Đ H Q G Hà Nội Bộ môn Mô - Phôi Đại tá GS.TS Học viện Quân y Khoa Sinh học, Trường Đại học Trinh Đình Đat • PGS.TS Đỗ Ngọc Liên PGS.TS KHTN - ĐHQG Hà Nội Khoa Sinh học, Trường Đại học KHTN - Đ HQ G Hà Nội D A N H M Ụ C C Á C B Ả N G s ố L IỆ U Bảng - Số liệu tổng hợp thí nghiệm khảo sát hiệu ứng kháng u báng Sarcoma 180 CISPLATIN Bảng - Kết thăm dò ảnh hưởng CISPLATIN lên máu ngoại vi chuột thí nghiệm Bảng - Mật độ quang học dịch chiết albumin globulin tổns số huyết chuột Bảng - Hàm lượng albumin globulin tổng số huyết chuột thí nghiệm D A N H M Ụ C C Á C H ÌN H Hình - Sơ đồ bố trí thí nghiệin Hình - Mơ hình UTTN chuột nhắt trắng Swiss Hình - Một ca mổ chuột để lấy mẫu xét nghiệm Hình - Đường cong biểu diễn tỷ lệ chết chuột tác động cứa CISPLATIN với liều lirợníĩ khác H ìn h - Á n h hướng C IS P L A T IN lên tỷ s ố phát triển u bán g H ình - Sự thoái lui sinh khối u tác đ ộ n s c ủ a C IS P L A T IN H ình - Á n h h ỏng C IS P L A T IN lên chì số phán b o UIIS thư Hình - Ảnh hưởn£ củaCISPLATIN lên pha phân bào une thư H ìn h - T ế bào ung thư di vào m u chuột H ìn h 10 - Đ iện di đồ protein h u y ế t c h u ộ t thí n ghiệm H ìn h 11 - Sự biến đ ộ n c h m lượng a lb u m in globu lin t ổ n số tro n h uy ế t chuột thí nghiệm H ình 12 - Đ iệ n di đồ hệ e n z y m E S T E R A Z A h u yế t th a nh c hu ột thí nghiệm H ìn h 13 - Ả nh hiển vi điện tử tế b o u ng thư Sa rc o m a 180 binh thườim H ình 14 - Ả n h H V Đ T T B U T S a rc o m a 180 ch ế t theo k iể u hoại tứ giai đoạn sớm Hình 15 - Ảnh HVĐT TBUT Sarcoma 180 chết theo kiểu hoại tử giai đoạn muộn H ìn h 16 - Ả n h H V Đ T c ú a T B U T c h ế t theo c h n g trình sia i đo ạn sớm H ìn h 17 - Á nh H V Đ T c ủ a T B U T c h ế t theo c h n g trình sia i đ o n cuối H ìn h 1S - Biểu đổ so sánh thời gian sốn g trung bình c ủ a c h u ộ t lị dổi c liứ n s lơ điều trị H ìn h 19 - Cấu trúc k h ị n s g ian c ủ a C IS P L A T IN Hình 20 - Anh hường chế phám thử lên chi số phát triến 11 bán.ị ã c d ù h iê n q u c (im., trực ục-p (lộn khố i II khô ng cao nliưny mót so chõ' p lú in nlnr A S I.K N !, P À N A C R 1N có tác dụnc lãne CƯ-; (lập ứ n g miiĩ-11 clịcli 1 | ; (liic.ivii - m ó i c h o pliàni ịiiàu v ii.im in A c o t c dụĩi p l i ò i ĩ " 11111’ t h u [5] ìl.u'.- ' c c (lơn vị d ợ c p l ũ m h o c h é I l ú n h Iln; ) 2.5111” k " ( l l ấ l II c.ic ll llll.ìl ■> ( V -.lvp.ll 1.11c 11'!; (1 1' ì ilic u I I M o - lliio s c in K iic lu / ii 1h-asp.il I.iic 2‘ CiS.-l '.11: 6 s Bỏ i ii)á V ị CƯ '!'a: i.j ỉ-.-. K I1T N T ic ;n (1 p I (h a i Im i;i” /k'.: \ 1.1:1 61.7 Bó inõn 1lo.i V ó co Tíơ, ;• lioc K i IT N ICI1I II ; 5íỉì: 'k l: \ ì I.I.: 55 110:: 1 1’ J ih a i 1; 2< ' l ì ì J ' kc \ 1.1 5-1 ì ( ' li -1 l i u 'SCI n i c a c b ; ! / - H (V ICIIÌ ( l.|' I :O n i'j/k ‘_’ \ I.Ht i ! ic ; i ( ' i s - i l i t l o n H l i a i n i i i 'I '| ; i u s ililiv c li 1>\I) p l.u in ( l \ ' 1 IC11I (1 p ) (licu I m s c 1s 1-111 ( |V ) ' \ l.líl s m '_í / k l; \ 1.111 14.7 r, IỈ;\I!” A n h In ió in ! ciiti cho phiim Tótiii h(>i’ lniií hoe lứn chi só '1' T 1’ lllK III" 11nic l;ic c lo ii” N lc lh io n s [- 1111Ị 11 ni i 11 1ly ilm c h ln r iil ( |\lc i 1' 1K 'l h ;iv A S L IiM ) ■> I lõm ( I.p ) i l i c u III lii 1:1ÓII 11'i.i Vc ■ hoe Sư p h iìiii 1i.i nơi liỏ ;;ió n 2.5 m ji/'ka nliãl c.Í l Ì i 6S.4 M o -ih io s c m ic iic h íi/.ii 'Ỉlỉ-a s p iii (.Iio 66 s 1iOm d - l’ ) ilk -ll u i ìO m cA ụ \ l 1:"1i 61.7 T i O m (1 p ) 50 in c /k ii \ ] 1.111 55 T iê m (1 1' ) (lic u I I Jf'iM2/'kụ \ 1.111 -U T k lll ( i p ) (lllUI li 2l)lltL’ /k!Ị \ 1.111 (1 p.) C (|IIMM hu|) l:ic ||"I| d iu R.-1 Smli ||(|;Í ỈÌ!'| niỏn 1l Iir L ti i ữ i i II Ihìiiíị Siircinii.i C hi su ph.it t r iin 11 k ; k ^ ) I.k-U l i i i i n ” m ^,/rke \ 1.111 T ic m ( c - a s p u ta lc -1 li< > n ó n K ú V õ cu '1: ÍI (i c l u i õ l n h a i t r ắ n g S w is V l én t h i ' p lih in B ó : r, ỏ, ì i.).í V ỏ c ì:!r' 1; V' S n h m i ỉ 1,1 1’,ÔI i licu II1 /iW T iíf'-::' C((, i , K! n N II1 11ic | >1 ; H1i 1111 i 11 IM:11 i 11 ( 11 ) lỉ-'> I ií-.i V ó li, : K H I N t i i l avp.ii l.ilo Bỏ 1:1011 Sinh hn í 0.11 Ikv !.' i.i r.ÍM ) ỉ: 11 III 1 r/c) (11” 1h CI11 II I S ', ; ) Viiiimin A l In n i: p lió n n \ ỈKi.i latnicn U d iil ! C h -d id o ro c lI.iíiìin 1’l.iH ii ( I I ) (Ì.IĨ.IMI p 11'>! U o n y 11i w11 || 1 lõ m (1 p ) llió ph.ìm I ’ ( p m iu II)) l'lun hiíị) ca } c he p h m \ A i l i c u ti ilihvtlioxo 1’ l.ilm (1 ) i l i c u !l 1 ỉiô m ô n 1ỈIŨ \ , õ Cv< 11 ƯUII'J f ) Ỉ Í S I ) Lt nõ! V ic il I0 S ( ) lM ll \ 11U!1J ưiMỈ J H> t IIU H I ị X um ilưv>w t )l 1 )ư vic 11.1 l l õ l H o i n o u S m li lic i n 1 ỈI'C 1)if> V 1.I I U '1 ) \': c n )if« k ÍK ‘11 1i m u ưv'ir_' < 1 s s ) s 7' < III'J \ 1.tn r k ' 111 ! 1' ) (’t, il k l m o lỉi.iH ỉin ’l I.IIIS \ ’ iõn ( h ù m \ T i u n i! ưíiU '|fJS t : j 111.1 i 'J \ 2(' 1 1s l Io n -j ) S I ', -S 111L' k'J l k I ) n li.ll i l i c t l li i 1? t S.5 II'J.IV j ( ) J ;, ( 1-l.s ) C K li Ii li i l M dliiom l f 'i i i i i ii i n i n Iiv iIk k IiIí h u I i Mv-i 1 K I li.iv ASI |- \ || V i c ii Q u n \ ms •1(1.I I ' f 2(1(1 i H ’j / k i í 1111nu tro iỉ'! IN 5' , V IU'.'tVI ‘(l Ii)(-1) U l/ k \ 21 l)LM\ l 'o n i ! p l i ị n i : liv.mk.i ((';»*• NO c ;ìy k c o i l m ) l ỉ !/k ir j i\ 10« in i k L! \ 21 s i:;/!L' )iv/ .Vi’//U7/ Ha Ọu) 1•' >•' ỉ ' )lhì N g h i ê n c ứ u i l m o c ú c c l i c u P A N A C U I N l I1.-M.M1 ( I t r v l i c u V ú - i I1.M1! l i n ụ Ho l i ; J i c u III m ụ : ilur Dề tài c a p nhà mrớc m ã sò K I l('N l - í ,5 - ' ’2 - ' í học C ỏ n ũ nu liẹ M õ i in rờ n y I '1'1 'i ì- ỉ ì - 1; ■ ' Ssuvcti Thị Ọuv Trán CÕIIL’ Ycn T:.!:i ! i:i / ,.j N u l i ic n CÚII !;ic (h n iL : irc_' L'1'.c Tạp chí D irợc học, N c\3 ( I !: ^'11 ! •• : : ; 'J 12 ỉ ■ - ữ.iu CíVìL’ Ycn, íXiỉtivcn Thi Ọtiỳ / ' hìM ót m ó hình líiiii ilu r iltưc nniiion: ! Tạp ch í D i tn iv c n học \'à irn u lỉm ic N i’ í i 1lV 1’ ’ i'.‘ ! n : c ; - i i a l i i > n : > l ' V o r k s h o p OI K i o i o ị ỉ Y ỉ l i n o i - V i c l n n m - Ị l i ì ' 0 X IriỉnĩYtnn ) m ,T ậ |) 107 N o f > -7 ó Trán ( ì/c''• tí; / iK iu n c n ; 'iic iì;ic !ì'.i:v ; / íC M iiis ; / > ' iv V c c C ' i ’.;1 • ; 'i: l< :'.KIl í ' 1.' I' ! c o i r p V V ! ; L ! ' ĩ 1:1: u i ,! ; ;l;: ' l ỉ u ' 1, i : l ! í ' Ci ”7 ' ■ hic'ì : ’A N ' - ' C R ! N c i 1': ' c -K ;;n đ ■ ÙHV- • :U o (> ) - V í ‘-O iìiro lc ti ụi'0 '.ip o í i i : i ' l' V/\V' \ h i 2T i i c i n : r c i s c 11 l i l c m ro ic -l :n ic o ( 'r i, 1VO o f :cn t ! s I ' 1.■ ;1:1 ( ! ĩ ) , l l i ,’X ' / ; v v 7w' u: í:/t' V ’ S Ị1.I11 O l ' c i i i c c , '.'.VA - l u ' ■ b u l c \ : p i i :k t i u - ;.- i ICC J V crc s ■’ ; ; !' v' í v.as i :.í J i ’ '■ - ■ >• • 76 th a n g đ n h g iá h o t t í n h k h n g u T IIE O II ITOKANVA 1989 +++ o ó ClSPLATlN (II) y CO Ó o i ĩ ĩ p r đ s y - Mip.\H UỊUinumj ỊM! U|P[\; - THỰC Ổ U I H U Ọ l | ui ; l II ị Ị t l i ì o p U1UỊ, Ị o + + V) NRIDY.\Y r> u ro i| ỊỊU 1|UỊ-]J ) g ỉ \ y Id Ị Ị I D n CÁC >'.-0 ) a ív y ild g n o K'-I1 chi sỏ piiát Irión l ỉ h:in;; Niircnma I i i : q n i : o i n i r » s o i i | j - 0Ị\J d:i thư o m n n d s v - q.[ cùn c;ic '.'In' ph;im o n :p n đ s y - P D Anh hướng i!Zi?q :'i::>Hur>so ụ|j - r c ) C / , ‘ 1 ri N y l U l NVO.L D X V \ ỌII ( m ' | > >''''1 si; T