khảo sát tác dụng trị nám của cao chiết từ lá tía tô trên mô hình thỏ gây nám da bằng progesteron kết hợp chiếu tia uv

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỖ THANH HẢO KHẢO SÁT TÁC DỤNG TRỊ NÁM CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ TÍA TƠ TRÊN MƠ HÌNH THỎ GÂY NÁM DA BẰNG PROGESTERON KẾT HỢP CHIẾU TIA UV LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỖ THANH HẢO KHẢO SÁT TÁC DỤNG TRỊ NÁM CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ TÍA TƠ TRÊN MƠ HÌNH THỎ GÂY NÁM DA BẰNG PROGESTERON KẾT HỢP CHIẾU TIA UV LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Chuyên ngành: Dược lý Dược lâm sàng Mã số: 8720205 Người hướng dẫn Khoa học: PGS TS Huỳnh Ngọc Trinh Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan Luận văn cơng trình nghiên cứu khoa học riêng Tôi hướng dẫn Thầy PGS TS Huỳnh Ngọc Trinh Các số liệu, kết báo cáo Luận văn Tôi nghiên cứu, tham khảo tài liệu, kế thừa tiến hành làm thực nghiệm cách trung thực, khách quan cố vấn Thầy hướng dẫn chưa cơng bố cơng trình khác Các trích dẫn mà Tơi viết Luận văn nêu rõ nguồn gốc TP Hồ Chí Minh, ngày 23 tháng 10 năm 2020 Học viên ĐỖ THANH HẢO TÓM TẮT Mục tiêu Khảo sát tác động ức chế tyrosinase trình tổng hợp melanin cao chiết tía tơ in vitro Mơ mơ hình gây nám da thỏ progesteron kết hợp chiếu tia UV Khảo sát tác động ức chế tyrosinase trình tổng hợp melanin cao chiết tía tơ in vivo Đối tượng phương pháp nghiên cứu Cao tồn phần (cao TP) Tía tô chiết phương pháp ngấm kiệt với ethanol 50% Các cao phân đoạn chiết phương pháp lắc phân bố lỏng-lỏng với cloroform ethylacetat thu cao ethylacetat (EA) acetat/clorofom (EA/CF) Tác động ức chế tyrosinase trình tổng hợp melanin cao Tía tơ đánh giá thơng qua hoạt độ tyrosinase, hàm lượng melanin tế bào B16F10 Mô mô hình gây nám da progesteron kết hợp chiếu tia UV thỏ British giant New Zeland, giống cái, khoảng - tháng tuổi Đánh giá tác động ức chế tyrosinase trình tổng hợp melanin cao Tía tơ mơ hình thỏ gây nám Kết Hoạt tính ức chế tyrosinase với IC50 cao EA cao EA/CF 89,96 µg/ml; 105,78 µg/ml Mơ hình gây nám da chiếu tia UV 30 phút/ngày kết hợp với tiêm Progesteron liều mg/kg cách ngày cho thấy có khác biệt rõ rệt lô chứng bệnh với lô sinh lý Cao phân đoạn EA nồng độ 5% 10% cho tác động phòng ngừa tương đương Cao EA 5% cho hiệu điều trị tương đương Hydroquinon 4% Kết luận Cao EA EA/CF ức chế tyrosinase trình tổng hợp melanin tế bào B16F10 Tác động phòng ngừa cao EA 5% tương đương 10% Tác động điều trị cao EA 5% tương đương Hydroquinon 4% Từ khóa: melanin, tyrosinase, Tía tơ SUMMARY Objectives Investigation of tyrosinase inhibitory effects and melanin synthesis of perilla leaf extract in vitro Simulating the model of skin pigmentation in rabbits with progesterone combined with UV irradiation Investigating the inhibitory effect of tyrosinase and melanin synthesis of perilla leaf extract in vivo Materials and methods Total extract (TP) was obtained by maceration method with 50% ethanol from perilla leaves TP extract were then by fractionaited by a liquid-liquid distribution with chloroform and ethylacetate to obtain extract ethylacetate (EA) and acetate/chloroform (EA/CF) The inhibitory effect of tyrosinase and melanin synthesis of the perilla extracts were assessed by tyrosinase activity, melanin content in B16F10 cells Simulating upper skin pigmentation by progesterone combined with UV irradiation in British giant and New Zealand rabbits, female, about 4-5 months old Evaluation of tyrosinase inhibitory effects and melanin synthesis of perilla extract in a rabbit model causing melasma Results Tyrosinase inhibitory activity with IC50 of EA and EA/CF were 89.96 µg / ml, respectively; 105.78 µg / ml The model of 30 minutes / day UV irradiated skin pigmentation combined with progesterone injection at a dose of mg/kg every other day showed that there was a clear difference between the control group and the physiological group EA concentrations of 5% and 10% gave equivalent preventive effects EA 5% for effective treatment equivalent to Hydroquinon 4% Conclusions All studies extracts inhibited tyrosinase and melanin synthesis on B16F10 cells Preventive effectiveness of EA 5% is equivalent to 10% Therapeutic effectiveness of EA 5% equivalent to Hydroquinon 4% Key words: melanin, tyrosinase, Perilla MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cấu trúc chức da 1.1.1 Cấu trúc da 1.1.2 Chức sinh lý da 1.2 Quá trình tạo sắc tố da .3 1.2.1 Nguồn gốc tế bào hắc tố (melnaocyte) 1.2.2 Hình thái tế bào hắc tố 1.2.3 Vai trò enzym tạo sắc tố 1.2.4 Tính chất melanin 1.2.5 Sinh tổng hợp melanin 1.3 Nám da 1.3.1 Nguyên nhân 1.3.2 Các phương pháp chẩn đoán nám da 1.3.3 Dịch tễ 10 1.3.4 Sinh lý bệnh 11 1.3.5 Điều trị 12 1.4 Một số thử nghiệm ức chế hoạt tính ức chế tyrosinase tổng hợp melanin in vitro 15 1.5 Mơ hình gây nám da in vivo 16 1.5.1 Mơ hình gây viêm tăng sắc tố tia UV 16 1.5.2 Mô gây tăng sắc tố hormon 17 1.5.3 Mơ hình gây tăng sắc tố thuốc 18 1.6 Dược liệu tía tơ 19 1.6.1 Thành phần hóa học 19 1.6.2 Công dụng 21 1.6.3 Tác dụng dược lý 21 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu .24 2.1.1 Dược liệu tía tơ 24 2.1.2 Động vật thí nghiệm 26 2.1.3 Tế bào melanoma B16F10 27 2.1.4 Hóa chất thuốc thử 28 2.1.5 Dụng cụ trang thiết bị 29 2.2 Phương pháp nghiên cứu .30 2.2.1 Khảo sát ức chế tyrosinase tổng hợp melanin in vitro 30 2.2.2 Thử nghiệm ức chế tyrosinase tổng hợp melanin in vivo 34 2.2.3 Khảo sát tác động cao chiết tía tơ 35 2.2.4 Đánh giá kết 36 2.2.5 Xử lý số liệu 39 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 40 3.1 Đánh giá dược liệu cao chiết 40 3.1.1 Xác định độ ẩm bột dược liệu cao chiết 40 3.1.2 Hiệu suất chiết 40 3.2 Tác động ức chế tyrosinase tổng hợp melanin in vitro 41 3.2.1 Thử nghiệm MTT 41 3.2.2 Xác định hoạt độ tyrosinase tế bào 42 3.2.3 Xác định hàm lượng melanin 45 3.3 Mô mô hình gây nám da 47 3.3.1 Khảo sát giống thỏ 47 3.3.2 Khảo sát thời gian chiếu tia UV 48 3.3.3 Đánh giá đáp ứng thuốc đối chứng HQ 4% 49 3.4 Khảo sát tác động cao tía tơ 50 3.4.1 Khảo sát tác động phịng ngừa cao chiết tía tơ 50 3.4.2 Khảo sát tác động điều trị cao tía tơ 52 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 57 4.1 Thử nghiệm ức chế tyrosinse tổng hợp melanin in vitro 57 4.2 Mơ mơ hình gây nám da 58 4.3 Khảo sát tác động trị cao tía tơ 59 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 10 Phụ lục 14 Hình tỷ lệ % nám lơ điều trị cao tía tơ 5% Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 22 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Phụ lục 15 Hình tỷ lệ % nám lơ phịng ngừa tía tơ 10% Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 10 Phụ lục 16 Hình tỷ lệ % nám lơ phịng ngừa cao tía tơ 5% Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 Ngày 10 Ngày Ngày 14 Ngày 21 Ngày 28 ... tài: “KHẢO SÁT TÁC DỤNG TRỊ NÁM CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ TÍA TƠ TRÊN MƠ HÌNH THỎ GÂY NÁM DA BẰNG PROGESTERON KẾT HỢP CHIẾU TIA UV? ?? với mục tiêu sau: Khảo sát tác động ức chế tyrosinase trình tổng hợp. .. DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ĐỖ THANH HẢO KHẢO SÁT TÁC DỤNG TRỊ NÁM CỦA CAO CHIẾT TỪ LÁ TÍA TƠ TRÊN MƠ HÌNH THỎ GÂY NÁM DA BẰNG PROGESTERON KẾT HỢP CHIẾU TIA UV LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Chuyên ngành:... HẢO TÓM TẮT Mục tiêu Khảo sát tác động ức chế tyrosinase trình tổng hợp melanin cao chiết tía tơ in vitro Mơ mơ hình gây nám da thỏ progesteron kết hợp chiếu tia UV Khảo sát tác động ức chế tyrosinase