1. Trang chủ
  2. » Thể loại khác

Bước đầu khảo sát tác dụng sinh học của dược liệu tứ bạch long (blepharis maderspatensis (L.) roth)

6 191 0

Đang tải... (xem toàn văn)

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 6
Dung lượng 509,88 KB

Nội dung

Nghiên cứu thực hiện các khảo sát ban đầu về những hoạt tính sinh học liên quan đến khả năng điều trị vết thương áp‐ xe của các cao chiết từ dược liệu tứ bạch long (blepharis maderspatensis (L.) roth). Mời các bạn cùng tham khảo bài viết.

Trang 1

BƯỚC ĐẦU KHẢO SÁT TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA DƯỢC LIỆU TỨ BẠCH LONG (BLEPHARIS MADERSPATENSIS (L.) ROTH)

Văn Đức Thịnh*, Lê Thị Hồng Quý**, Trần Công Luận*

TÓM TẮT

Đặt vấn đề - Mục tiêu nghiên cứu: Thực hiện các khảo sát ban đầu về những hoạt tính sinh học liên quan

đến khả năng điều trị vết thương áp‐ xe của các cao chiết từ dược liệu Tứ Bạch Long (Blepharis maderaspatensis (L.) Roth)

Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Chiết dược liệu bằng 2 loại dung môi là cồn 96% và nước Cao

cồn tổng được lắc phân đoạn bằng 4 dung môi có độ phân cực tăng dần: ether dầu hỏa, chloroform, ethyl acetat,

và n‐buthanol bão hòa nước Khảo sát tính kháng khuẩn trên ba chủng vi khuẩn gram âm (Escherichia coli, E coli kháng ampiciclin, Pseudomonas aeruginosa), ba vi khuẩn gram dương (Staphylococcus aureus, MRSA, Streptococcus pyogenes), nấm men Candida albicans và nấm da Trychophyton mentagrophytes bằng phương pháp đặt đĩa giấy tẩm và xác định MIC bằng phương pháp pha vi pha loãng trên phiến 96 giếng.Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa bằng đánh giá năng lực khử, khả năng quét gốc tự do DPPH và khả năng quét gốc hydroxyl

tự do.Thăm dò hoạt tính kháng viêm, giảm đau bằng khả năng ức chế biến tính albumin do nhiệt

Kết quả: MIC của cao phân đoạn chloroform và ethyl acetat trên S aureus, MRSA, St pyogenes, P

aeruginosa, E coli và C albicans lần lượt từ 12,5 – 50 mg/ml và 32,5 – 250 mg/ml.Cao cồn tổng thể hiện khả năng chống oxy hóa tốt hơn cao nước tổng Cao ethyl acetat quét gốc DPPH tự do tốt nhất (IC50=8,3µg/ml), cao ether quét gốc hydroxyl tự do tốt nhất.Cao cồn tổng và cao nước tổng đều có tiềm năng kháng viêm và cao cồn tổng nổi trội hơn Phân đoạn ethyl acetat thể hiện tiềm năng kháng viêm mạnh nhất

Kết luận: Tứ Bạch Long có hoạt tính kháng khuẩn rất yếu Trong khi đó, hoạt tính chống oxy hóa thể hiện

rất tốt Ngoài ra còn ghi nhận được tiềm năng về hoạt tính kháng viêm, giảm đau, có thể tiến hành khảo sát in

vivo để có kết luận chính xác hơn

Từ khóa: Blepharis maderaspatensis, kháng khuẩn, kháng oxy hóa, kháng viêm

SUMMARY

PRELIMINARY STUDY ON BIOACTIVITIES OF BLEPHARIS MADERSPATENSIS (L.) ROTH

Van Đuc Thinh, Le Thi Hong Quy, Tran Cong Luan

* Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 16 - Supplement of No 1 – 2012 : 199 – 206

Background: Preliminarily evaluate the bioactivities relating the healing abces ability of the herbal extracts

from Blepharis maderaspatensis (L.) Roth

Materials and Methods: Extracting with two solvents: 96% alcohol and water The alcohol crude extract

antibiotic resistance on (1) ‐ three Gram‐negative bacteria: Wild‐typed Escherichia coli, Ampicillin‐resistant E coli, and Pseudomonas aeruginosa, (2) – three Gram‐positive bacteria: Staphylococcus aureus, MRSA, Streptococcus pyogenes, (3) – two types of fungi: Candida albicans, and Trychophyton mentagrophytes by using diffusion method (5µl of 500 mg/ml extracts in DMSO) The MIC of the extracts were test using the micro‐ dilution method.Antioxidant activity of the extracts was carried out with reduction power, DPPH radical

* Trung tâm Sâm và Dược liệu Tp HCM  Khoa Sinh học - Trường ĐH Khoa học tự nhiên TPHCM

Tác giả liên lạc: CN Văn Đức Thịnh ĐT: 0908992221 , Email: princetoad1985@yahoo.com

Trang 2

scavenging and hydroxyl radical scavenging tests.Evaluating the potentiality of the anti‐ inflammatory activity of extracts by the inhibition of the heat denaturation of serum albumin

Results: The MIC of chloroform and ethyl acetate extracts on S aureus, MRSA, St pyogenes, P

aeruginosa, E coli, and C albicans were 12.5 – 50 mg/ml, and 32.5 – 250 mg/ml, respectively.Both alcohol crude extract and water crude extract had antioxidant activity, but the alcohol crude extract was better The ethyl acetate

the best in hydroxyl radical scavenging activity.Both alcohol crude extract and water crude extract had anti‐ inflammatory potentiality, but the alcohol crude extract was better The ethyl acetate extract was the best in all of extract separated from the alcohol crude extract

Conclusion: Blepharis maderaspatensis show weak antimicrobial activity However, B maderaspatensis

displayed a strong antioxidant activity Besides, B maderaspatensis also had anti‐ inflammatory potentiality, that must be studied further on experiments in vivo

Key words: Blepharis maderaspatensis, antibacteria, antioxidant, antiinflammatory

ĐẶT VẤN ĐỀ

Trong suốt thời gian kháng chiến và đến

nhiều năm sau giải phóng, nhân dân tỉnh Bình

Thuận sử dụng Tứ Bạch Long (TBL), một loài

cây thân thảo mọc bò ven rạch nước, như một

dược liệu điều trị vết thương áp- xe phần mềm

sau khi đã được nạo hút hết mủ Sau khi định

danh, TBL được xác định tên khoa học là

Blepharis maderaspatensis (L.) Roth, một loài thuộc

họ Acanthaceae (họ Ô rô)(4).Theo những khảo sát

về cây thuốc dân gian nhiều vùng trên thế giới,

TBL cũng được sử dụng nhiều trong các bài

thuốc chữa vết thương phần mềm, viêm họng,

phỏng, gout…(2)

Nhằm góp phần phát huy tiềm lực cây

thuốc của Việt Nam và củng cố cho phương

pháp điều trị dân gian, chúng tôi đã bước đầu

khảo sát về những hoạt tính liên quan đến khả

năng làm lành vết thương áp- xe của TBL Các

khả năng kháng khuẩn, khả năng chống oxy hóa

và tiềm năng kháng viêm của TBL sẽ được làm

rõ trong báo cáo này

VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP

TBL được cung cấp bởi Hội Đông y huyện

Bắc Bình, tỉnh Bình Thuận, dưới dạng phơi khô

cả rễ, thân và lá, trong đó, thân và lá chiếm sinh

khối chủ yếu

Chiết xuất dược liệu

2 kg bột dược liệu khô chiết với cồn 96%

bằng phương pháp ngấm kiệt (tỷ lệ 1:10), và 50 g bột dược liệu khô chiết với nước bằng phương pháp siêu âm gia nhiệt 60 oC (tỷ lệ 1:25) Cao cồn tổng được tiến hành lắc phân đoạn với các dung môi có độ phân cực tăng dần là ether dầu hỏa, chloroform, ethyl acetat và n-buthanol bão hòa nước Gộp dịch chiết của từng dung môi, cô giảm áp đến cắn, thu được 5 phân đoạn cao(8)

Xác định tính kháng khuẩn

Thăm dò tính kháng khuẩn bằng phương pháp đặt đĩa giấy tẩm 5 µl cao hoà trong DMSO

ở nồng độ 500 mg/ml, trên môi trường TSA Xác định MIC dựa vào phương pháp vi pha loãng trên phiến 96 giếng Các chủng khuẩn thử

nghiệm gồm Staphylococcus aureus (MSSA), S

Streptococcus pyogenes (StrP), Escherichia coli

(ASEC), E coli đề kháng ampiciclin (AREC),

Pseudomonas aeruginosa (PA), nấm men Candida albicans (CA) và nấm da Trychophyton

Xác định hoạt tính chống oxy hóa

Xác định năng lực khử

Theo phương pháp của Yen và Duh (1993)(11) Thí nghiệm được thực hiện 3 lần lặp

Trang 3

lại Năng lực khử của mẫu được xác định dựa

trên công thức: ∆OD = ODthử - ODchứng

ODthử là mật độ quang của hỗn hợp sau

phản ứng của mẫu thử

ODchứng là mật độ quang của hỗn hợp sau

phản ứng có mẫu thử được thay thế bằng

nước cất

Xác định khả năng quét gốc tự do DPPH

Theo phương pháp của

Brand-Williams-1995(9) Thí nghiệm được thực hiện 3 lần lặp lại

Hoạt tính chống oxi hóa (HTCO) được tính theo

công thức:

ODc là mật độ quang của dung dịch DPPH

và MeOH

ODt là mật độ quang của dung dịch DPPH

và mẫu thử

Xác định khả năng quét gốc hydroxyl tự do

Theo phương pháp của Li và cộng sự (2007)

(7) Thí nghiệm được thực hiện 3 lần lặp lại

Hoạt tính chống oxi hóa (KGOH) được tính theo

ODtk ODdc

ODtk ODm

KGOH

ODm: độ hấp thu của mẫu thử ở bước sóng

520 nm

ODtk: độ hấp thu của mẫu thử không ở bước

sóng 520 nm

ODdc: độ hấp thu của mẫu đối chứng ở bước

sóng 520 nm

Xác định khả năng kháng viêm

Theo phương pháp khảo sát tác dụng ức chế

biến tính albumin do nhiệt của Mizushima

(1964)(5) Thí nghiệm được thực hiện 3 lần lặp lại

Hoạt tính chống oxi hóa (UCBT) được tính theo

ODc

ODm ODc

ODm: mật độ quang của mẫu thử có mang

chất thử nghiệm

ODc: mật độ quang của mẫu mà chất thử

nghiệm được thay bằng đệm

KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Hoạt tính kháng khuẩn

Ở nồng độ mẫu thử là 500 mg/ml, chỉ có cao cồn tổng và 2 cao phân đoạn là chloroform, ethyl acetat thể hiện khả năng kháng khuẩn Khả năng kháng khuẩn chủ yếu là đối với Gram

dương là Staphylococcus aureus, Streptococcus

pyogenes; ngoài ra còn có khả năng kháng đối

với Gram âm là Pseudomonas aeruginosa và nấm men Candida albicans Trong đó, S aureus đặc biệt nhạy cảm và P aeruginosa cũng bị đáp ứng khá

cao

Bảng 1 Kết quả khảo sát hoạt tính kháng khuẩn

MSS

A

MRS

ARE

Cao nước

Cao

Cao ethyl

Cao n –

Cao nước

Phân đoạn chloroform và ethyl acetat thể hiện tính kháng khuẩn nhưng đều cho kết quả MIC rất cao, 12,5 – > 50 mg/ml đối với phân đoạn chloroform và 62,5 – 250 mg/ml đối với phân

đoạn ethyl acetat

Bảng 2 Kết quả MIC cao chloroform và ethyl acetat

MIC cao chloroform (mg/ml)

MIC cao ethyl acetat (mg/ml)

Trang 4

Hoạt tính chống oxi hóa

Năng lực khử

Năng lực khử của các loại cao tăng theo

nồng độ khảo sát và so với chất đối chiếu

vitamin C thì năng lực khử của các loại cao thấp

hơn nhiều

Bảng 3 Năng lực khử của TBL

Mẫu

Năng lực khử

200 µg/ml

400 µg/ml

600 µg/ml

800 µg/ml

1000 µg/ml

Hình 1 Năng lực khử của các loại cao chiết TBL

Trong 2 dạng cao tổng thì cao cồn tổng có

năng lực khử mạnh hơn cao nước tổng Năng

lực khử của 5 phân đoạn cao chiết từ cao cồn

tổng giảm dần theo thứ tự sau: ethyl acetat >

chloroform > ether > n-buthanol > nước Phân

đoạn ethyl acetat cho năng lực khử mạnh nhất

và nổi trội hơn hẳn so với các phân đoạn khác

Khả năng quét gốc tự do DPPH

Bảng 4 Kết quả quét gốc tự do DPPH của TBL

(µg/ml)

hỏa

Hai dạng cao chiết đều có hoạt tính chống oxy hóa bằng cơ chế quét gốc tự do DPPH, nhưng cao chiết bằng cồn có hoạt tính cao hơn cao chiết bằng nước Trong các phân đoạn dịch chiết từ cao chiết cồn thì phân đoạn ethyl acetat cho hoạt tính quét gốc tự do DPPH mạnh nhất, mạnh hơn gấp nhiều lần các phân đoạn ether dầu và gần bằng với hoạt tính của vitamin C tinh khiết

Khả năng quét gốc hydroxyl tự do

Bảng 5 Khả năng quét gốc hydroxyl tự do của TBL

Mẫu

Khả năng kháng hydroxyl tự do (%)

200 µg/ml

400 µg/ml

600 µg/ml

800 µg/ml

1000 µg/ml

Hình 2 Khả năng kháng gốc tự do của các loại cao

chiết TBL

Cao cồn tổng có khả năng kháng gốc hydroxyl tự do và khả năng có liên quan đến nồng độ của cao chiết Trong khi đó, cao nước

Khả năng kháng gốc hydroxyl tự do

0 10 20 30 40 50 60 70

200 400 600 800 1000

nồng độ mẫu (µg/ml)

Cao tổng cồn Cao tổng nước Cao ether dầu Cao chloroform Cao ethyl acetat Cao n-Buthanol Cao nước còn lại Vitamin C

Năng lực khử

0

0.5

1

1.5

2

2.5

Nồng độ mẫu (µg/ml)

Cao tổng cồn Cao tổng nước Cao ether dầu Cao chloroform Cao ethyl acetat Cao n-Buthanol Cao nước còn lại Vitamin C

Trang 5

tổng thể hiện khả năng kháng gốc hydroxyl tự

do rất thấp và không ổn định khi thay đổi nồng

độ của cao chiết Như vậy có thể xem như cao

cồn tổng của TBL có khả năng kháng hydroxyl

tự do và cao nước tổng lại không có khả năng

này Tương tự trên, trong các phân đoạn cao

chiết từ cao cồn tổng của TBL, 3 phân đoạn thể

hiện khả năng kháng gốc hydroxyl tự do theo

trật tự giảm dần là ether > chloroform > ethyl

acetat; và 2 phân đoạn n-buthanol, phân đoạn

nước còn lại không có khả năng kháng gốc hydroxyl tự do

Hoạt tính kháng viêm

Thuốc kháng viêm không có steroid (NSAIDs – Non- steroidal anti- inflammatory drugs) ở nồng độ thấp, dưới 1mM đối với chất tinh khiết, sẽ làm giảm độ nhớt và làm giảm sự biến tính dưới tác nhân nhiệt Những hợp chất hay dịch chiết từ cây thuốc có khả năng kháng viêm cũng có hoạt tính này (1, 5, 7, 10)

Bảng 6 Kết quả khảo sát khả năng ức chế biến tính albumin của TBL

Mẫu

(µg/ml)

Khả năng ức chế biến tính (%)

-450

-400

-350

-300

-250

-200

-150

-100

-50

0

50

nồng độ (µg/ml)

Cao ether dầu Cao chloroform Cao ethyl acetat Cao n-Buthanol Cao nước còn lại Cao tổng cồn Cao tổng nước Indom ethacin

Hình 3 Kết quả khảo sát khả năng ức chế biến tính

albumin của TBL nồng độ cao

Tác động ức chế biến tính albumin do nhiệt

-50

-40

-30

-20

-10

0

10

20

30

nồng độ (µg/m l)

Cao ether dầu Cao chloroform Cao ethyl acetat Cao n-Buthanol Cao nước còn lại Cao tổng cồn Cao tổng nước Indomethacin

Hình 4 Kết quả khảo sát khả năng ức chế biến tính

albumin của TBL nồng độ thấp

Williams và cộng sự chọn mức hoạt tính ức

chế biến tính albumin do nhiệt là trên 20% làm

ngưỡng đánh giá tiềm năng kháng viêm của chất khảo sát (10) Như vậy, dựa vào nồng độ ức chế biến tính được trên 20% albumin (IC20) ta có thể dự đoán được khả năng kháng viêm của dịch chiết từ TBL Dựa vào các giá trị khảo sát được từ bảng 6, ta có thể xác định một cách tương đối giá trị IC20 của các loại cao chiết từ TBL và được thể hiện như bảng 7

Bảng 7 Khả năng ức chế biến tính albumin của TBL

(µg/ml)

(µg/ml)

Kết quả đánh giá IC20 cho thấy cao cồn tổng

có khả năng ức chế biến tính albumin cao hơn cao cao nước tổng Trong 5 phân đoạn cao chiết,

2 phân đoạn không có khả năng ức chế biến tính albumin là ether dầu và phần dịch nước còn lại,

do trong khoảng tuyến tính giữa nồng độ mẫu thử với khả năng ức chế, 2 phân đoạn này không thể đạt được giá trị IC20; 3 phân đoạn có khả năng ức chế biến tính albumin do nhiệt được xếp theo thứ tự khả năng giảm dần là ethyl

Trang 6

acetat > chloroform > n-buthanol Trong đó,

phân đoạn ethyl acetat có hoạt tính gần như

ngang bằng với indomethacin

KẾT LUẬN

Tứ Bạch Long được địa phương sử dụng

như một kháng sinh thực vật, nhưng hoạt tính

kháng khuẩn, kháng nấm của Tứ Bạch Long rất

yếu, hầu như không có Tứ Bạch Long kháng

đặc biệt mạnh với Staphylococcus aureus,

Streptococcus pyogenes và Pseudomonas aeruginosa,

tuy nhiên, khả năng cũng chỉ thể hiện ở nồng độ

mẫu thử rất cao (MIC = 12,5 – 250mg/ml) Ở

nồng độ cao thì phân đoạn chloroform thể hiện

khả năng kháng khuẩn mạnh hơn phân đoạn

ethyl acetat, và 2 phân đoạn này là phân đoạn

chủ yếu thể hiện tính kháng khuẩn của Tứ Bạch

Long.Hoạt tính chống oxy hóa của Tứ Bạch

Long, được đánh giá bằng các phương pháp

khảo sát năng lực khử, khảo sát khả năng quét

gốc tự do, nhìn chung khá mạnh Phân đoạn

ethyl acetat có năng lực khử và khả năng quét

gốc tự do DPPH mạnh nhất, phân đoạn ether

dầu có hoạt tính quét gốc hydroxyl tự do mạnh

nhất.Thử nghiệm hoạt tính kháng viêm bằng

phương pháp khảo sát khả năng ức chế biến

tính albumin do nhiệt là phương pháp in vitro

mới lần đầu tiên được công bố tại Việt Nam

Theo phương pháp này, kết quả cho thấy Tứ

Bạch Long có tiềm năng là thực vật kháng viêm

và phân đoạn ethyl acetat quyết định hoạt tính

kháng viêm của Tứ Bạch Long

TÀI LIỆU THAM KHẢO

of serum albumin by anti‐inflammatory drugs, Biochem

Pharmacol 19, pp 715-722

Karandamalai, Dindigul District, Tamil Nadu, India,

Ethnobotany Leaflets 12, pp 195 – 203

characterization and antioxidant of naringenin schiff base and its

Cu (II), Ni(II), Zn (II) complexes, Chem Pharm Bull 55, pp 26 –

28

được chữa bằng “Kháng sinh thực vật”, Bài tham luận Hội thảo

Cây Dược liệu Quý Hiếm ở Địa phương, Hội Đông y tỉnh Bình Thuận

‐inflammatory drugs with serum proteins, especially with some biologically active proteins, J Pharm Pharm 20, pp 169-173

đánh giá chất có tiềm năng kháng khuẩn, Y học TP Hồ Chí Minh

6(1), pp 309-313

Silvestrini B (2001), Inhibition of heat‐induced denaturation of

albumin by nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAIDs), Arch

Pharm Res 24(2), pp 150-158

Bộ môn dược liệu , Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh,

tr 1-9, 33-36

lý của thuốc từ dược thảo, NXB Khoa học và kỹ thuật, tr

289-291

S., Whittaker J A., Conrad J., Vogler B., Rosner H., Kraus W

(2008), The in vitro Anti‐denaturation Effects Induced by Natural

Products and Non‐steroidal Compounds in Heat Treated (Immunogenic) Bovine Serum Albumin is Proposed as a Screening Assay for the Detection of Anti‐inflammatory Compounds, without the use of Animals, in the Early Stages of the Drug Discovery Process, West Indian Med J 57(4), pp 327-331

11 Zhang Z., Jin J., Shi L (2008), Antioxidant activities of the derivatives of polysaccharide extracted from Chinese medical

herb (Ramuulus mori), Food Sci.Technol Res., 14, pp 160-168

Ngày đăng: 21/01/2020, 22:48

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w