CẤY VI KHUẨN vào môi TRƯỜNG CHẨN đoán (THỰC HÀNH VI SINH)

Buổi CẤY VI KHUẨN VÀO MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Mục tiêu: Giới thiệu số dụng cụ, môi trường nuôi cấy vi khuẩn Giới thiệu phương pháp nuôi cấy vào loại mơi trường chẩn đốn Cách đọc kết sinh lý, sinh hóa số chủng vi khuẩn sau ni cấy, phân tích MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Dụng cụ môi trường: o Que cấy trùng/ống Pasteur o Đèn cồn o Bình dung dịch thuốc sát trùng o Bút chì kính/ bút lơng o Các mơi trường giá ống nghiệm MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Cách cấy: Chuẩn bị: Kiểm tra lại môi trường→ sử dụng tốt Đánh dấu ống hay đĩa môi trường chẩn đốn Chọn khuẩn lạc/mơi trường phân lập→ cấy vào mơi trường chẩn đốn MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Cách cấy: Chuẩn bị: Đánh dấu theo thứ tự giá ống nghiệm/mỗi vi khuẩn Cho vào tủ ấm 37ºC 18 – 24 đọc kết Lưu ý: Mơi trường chẩn đốn tùy thuộc Bệnh phẩm Vi khuẩn cần định danh MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Bệnh phẩm Máu Cầu khuẩn Cầu khuẩn Trực Gr(+) Gr(-) VK Môi trường Tº thời gian khuẩn kỵ phân lập ủ Gr(+) khí (+) Trực khuẩn Gr(-) (+) (+) BA 37º/CO2 /24h CA, Mủ (++) (±) (+) (+) MC BA 37º/CO2 /24h MSA BHI, Đàm (+) Lên men(+/-) MC H.Influenza BA CA 37º/CO2 /24h MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Bệnh phẩm Phân Cầu khuẩn Cầu khuẩn Trực Gr(+) Gr(-) VK Môi trường Tº thời gian khuẩn kỵ phân lập ủ Gr(+) khí MC 35º-37ºC/24 SS(HE) 42ºC S aureus Trực khuẩn Gr(-) TK đường ruột Camp-CAP Nước tiểu (+) Lên men(+/-) MC 37º/CO2 /24h BA Các loại dịch (++) (±) (+) (+) MC BA MSA BHI, 37º/CO2 /24h Mơi trường chẩn đốn o Mơi trường lỏng/đặc chứa hóa chất o Phát một/nhiều tính chất sinh lý, sinh hóa → chủng vi khuẩn Mơi trường chẩn đốn Mannitol Salt Agar (MSA) Streak-stab Blood Agar Plates Glucose broth with Durha m tubes Sulfur Indole Motility Media technique (BAP) Bile Esculin Agar (SIM) (SS) Kliger’s Iron Agar (KIA) Nitrate Broth Catalase Test Oxidase Test Taxos A Coagulase Test (bacitracin sensitivity testing) Methyl Red / Taxos P (optochin MacConkey agar sensitivity testing) (MC) Citrate Agar CAMP Test Urease test Di động Simmon’s Voges-Proskauer Spirit Blue agar Starch hydrolysis test (MR/VP)       Môi trường chẩn đốn • SS Khả sinh sắc tố: Salmonella Enterobacter-kit oSinh Trực khuẩn gram (-) đường ruột Durham/Glucose broth(*) Đường Phenol red (a) P aeruginosa (b) Shigella dysenteriae (c) Escherichia coli Proteus mirabilis (*)glucose, lactose, mannitol oLên men đường (a) (b) (c) CẦU KHUẨN Cầu khuẩn Gram(+) Staphylococci Gram(-) Neisseria Streptococci N gonorrhoeae N meningitidis VIÊM CÓ MỦ Cầu khuẩn Tính chất sinh Staphylococci Streptococcci N gonorrhoeae N meningitidis Catalase (+) (-) (+) (+) Coagulase (+) (-) (-) (-) Oxidase (-) (-) (+) (+) Tan máu (+) (+) (-) (-) Taxo A (-) (+) Taxo P (-) (-) Glucose (-) (+) (+) Maltose (+) (+) (-) Esculin (-) hóa (+) 22 Cầu khuẩn Gram (+) catalase (+) (-) Staphylococci Coagulase (+) S aureus Streptococci toxo A (-) S epidermidis (+) toxo P (-) (+) (-) Strep pyogene Strep.pneumoniae Chẩn đốn cầu khuẩn gram (+) • Catalase • Bile Esculin • VPYR & LAP • 6.5% NaCl • Camp • Coagulase • Vancomycin positive • Taxos A • Bile solubility • Taxos P or Optochin BA Khả tiêu huyết Streptococcus pyogenes Streptococcus mitis Staphylococcus epidermidis Ure Chapman Xác định: Enterococcus (E faecalis and E faecium) Streptococcus Bile Esculin Agar Mật: ức chế Gram(+) Sodium azide: ức chế Gr(-) Esculin/ mật hydrolyze/VK, esculetin +ferric citrate- phenolic iron →đen Esculin (-) Esculin (+) 3% hydrogen peroxide streptococci staphylococci β-hemolytic streptococci: Toxo A (bacitracin sensitivity o Streptococcus agalactiae (kháng bacitracin) testing) oStreptococcus pyogenes (nhạy bacitracin) Toxo P (optochin sensitivity testing) α-hemolytic streptococci: oStreptococcus pneumoniae oStreptococcus mitis Camp (+) Group B β-streptococci: Streptococcus agalactiae Camp (-) Spirit Blue agar TK Gr(+) có lipase hydrolyzes Bacillus subtilis triglycerides Vầng hào quang Starch hydrolysis test Clostridium and Bacillus Có enzymes a-amylase oligo-1,6-glucosidase để hydrolyze amylose amylopectin Bacillus subtilis PHẦN THỰC HÀNH Đọc kết buổi 4: Ria cấy hộp thạch Xem mơi trường chẩn đốn chưa cấy Xem hướng dẫn cấy tự thực tập cấy Tự đọc kết qủa chẩn đốn mơi trường cấy: S aureus, E coli, Shigella flexneri, Salmonella paratyphi A, ... TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Cách cấy: Chuẩn bị: Kiểm tra lại môi trường? ?? sử dụng tốt Đánh dấu ống hay đĩa môi trường chẩn đốn Chọn khuẩn lạc/mơi trường phân lập→ cấy vào mơi trường chẩn đốn MƠI TRƯỜNG CHẨN...MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Mục tiêu: Giới thiệu số dụng cụ, môi trường nuôi cấy vi khuẩn Giới thiệu phương pháp nuôi cấy vào loại mơi trường chẩn đốn Cách đọc kết sinh lý, sinh hóa số chủng vi khuẩn. .. Cách cấy: Chuẩn bị: Đánh dấu theo thứ tự giá ống nghiệm/mỗi vi khuẩn Cho vào tủ ấm 37ºC 18 – 24 đọc kết Lưu ý: Mơi trường chẩn đốn tùy thuộc Bệnh phẩm Vi khuẩn cần định danh MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN