Đánh giá sự ảnh hưởng của dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn của cây medinilla sp

TÓM TẮT Cây thuốc dân gian từ lâu nguồn tài nguyên phong phú nƣớc ta có ý nghĩa lớn đời sống ngƣời dân tộc thiểu số Ngƣời dân tộc thiểu số sử dụng thuốc dân gian theo kinh nghiệm truyền miệng để trị số bệnh thông thƣờng nhƣ vết thƣơng, tiêu chảy Tuy nhiên, thuốc dân gian đƣợc sử dụng theo kinh nghiệm nên hoạt tính khơng đƣợc kiểm chứng rõ ràng Mục tiêu nghiên cứu hƣớng đến việc góp phần đánh giá xác hoạt tính thuốc Mẫu Medinilla đƣợc thu từ Vƣờn Quốc Gia Bidoup – Núi Bà, tỉnh Lâm Đồng đƣợc phơi khô xay thành bột Sau ngâm loại dung mơi cồn 50%, 70%, 90%, nƣớc methanol 75% với tỷ lệ 1:20 (w/v) thời gian 24h lọc thu dịch Bã đƣợc ngâm lặp lại thời gian ngày Tất dịch mẫu đƣợc cô cạn đến khối lƣợng không đổi 700C Hiệu suất thu hồi cao chiết dung môi ethanol 70% cao đạt 21,41% Cao mẫu đƣợc pha DMSO 1% nồng độ 100 mg/ml đƣợc đánh giá khả kháng khuẩn với 20 chủng vi khuẩn thị phƣơng pháp khuếch tán giếng thạch Kết cho thấy loại cao chiết để thể hoạt tính kháng khuẩn nhƣng cao chiết ethanol 70% thể hoạt tính cao phổ kháng khuẩn rộng kháng đƣợc 20/20 chủng Kết xác định số MIC cao chiết ethanol 70% thay đổi theo chủng vi khuẩn khảo sát biến thiên từ 15,625 mg/ml – 25,000 mg/ml Tiến hành đánh giá sơ thành phần hố học cao chiết ethanol nhận thấy có diện nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học, có hai thành phần quan trọng flavonoid tannin, hai hợp chất có tính kháng khuẩn mạnh i LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, nhóm nghiên cứu xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh, Phịng Khoa học Cơng nghệ Đảm bảo Chất lƣợng xét duyệt đề tài để nghiên cứu tiến hành thực Nhóm nghiên cứu đƣợc bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trƣờng tạo điều kiện thuận lợi để nghiên cứu đƣợc thực tiến độ Bên cạnh đó, nhóm gửi lời cảm ơn thầy Phịng Thí nghiệm Khoa Cơng nghệ sinh học - Thực phẩm - Mơi trƣờng nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để nhóm hồn thành tốt đề tài Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể thành viên nhóm nghiên cứu thực đề tài thu đƣợc kết tốt Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2017 TM Nhóm nghiên cứu Phạm Minh Nhựt ii MỤC LỤC MỤC LỤC .iii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH SÁCH CÁC BẢNG vii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Medinilla sp 1.1.1 Đặc điểm chung 1.1.2 Đặc điểm thực vật học chi Medinilla sp 1.1.3 Các thành phần hóa học từ thực vật 1.2 Tổng quan chế kháng khuẩn hợp chất có nguồn gốc từ thực vật 1.2.1 Cơ chế kháng khuẩn hợp chất có nguồn gốc từ thực vật 1.2.4.Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 12 1.3.Ảnh hƣởng dung môi đến khả tách chiếtcao từ thực vật 12 CHƢƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Địa điểm thời gian 14 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 14 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 14 2.2 Vật liệu 14 iii 2.2.1 Nguồn mẫu 14 2.2.2 Vi khuẩn thị 14 2.2.3 Hóa chất, dung môi 14 2.2.4 Thiết bị dụng cụ 15 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp thu xử lý nguồn mẫu 16 2.3.2 Phương pháp tách chiết thu nhận cao thực vật 16 2.3.4 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 17 2.3.5 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 18 2.3.6 Phương pháp xác định thành phần hóa học có cao chiết 20 2.4 Bố trí thí nghiệm 21 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng dung môi tách chiết đến hiệu suất thu hồi cao chiết từ Medinilla sp 22 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng loại dung mơi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn cao chiết từ Medinilla sp chủng vi khuẩn gây bệnh 25 2.4.3 Thí nghiệm 3: Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết Medinilla sp chủng vi khuẩn gây bệnh 26 2.4.4 Thí nghiệm 4: Định tính số thành phần hóa học có cao chiết Medinilla sp 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Kết đánh giá hiệu suất thu hồi cao chiết Medinilla sp từ dung môitách chiết khác 29 3.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp với loại dung môi tách chiết khác chủng vi khuẩn gây bệnh 30 iv 3.2.1 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Escherichia coli 31 3.2.2 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Listeria spp 32 3.2.3 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Salmonella spp 34 3.2.4 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Shigella spp 35 3.2.5 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Vibrio spp 37 3.2.6 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn gây bệnh hội da 38 3.2.7 Tổng hợp kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết 20 vi khuẩn gây bệnh gây bệnh 40 3.3 Kết xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết Medinilla sp từethanol 70% chủng vi khuẩn gây bệnh 43 3.4 Kết định tính số thành phần hóa học cao chiết Medinillasp từ ethanol 70% 46 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 50 4.1 Kết luận 50 4.2 Đề nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 v DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT TSB: Trypton Soya Broth TSA: Trypticase Soya Agar MeOH: Methanol EtOH: Ethanol MIC: Nồng độ ức chế tối thiểu DMSO: Dimethyl Sulfoxide vi DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Sự phân bố số loài Medinilla sp.ở khu vực Châu Á (Arora, 1992; Jie Renner, 2007) Bảng 1.2.Chức sinh lý số amino acid trình trao đổi chất Bảng 1.3 Những nhóm hợp chất tự nhiên có hoạt tính kháng khuẩn (theo Cowan, 1999) 16 Bảng 3.1 Kết qủa đƣờng kính vịng ức chế (mm) cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác 20 chủng vi khuẩn gây bệnh 65 Bảng 3.2.Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết Medinilla sp từethanol 70% 20 chủng vi khuẩn gây bệnh 68 Bảng 3.4 Kết định tính số thành phần hóa học cao chiêt Medinilla sp từ ethanol 70% 71 vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Một số lồi thuộc chi Medinilla sp Hình 1.2 Đặc điểm thực vật học số loài thuộc chi Medinilla Hình 1.3 Cấu trúc hóa học hợp chất flavonoid 11 Hình 1.4 Phân loại nhóm phenolics theo cấu trúc hóa học 12 Hình 1.5 Vị trí hợp chất tự nhiên có hoạt tính kháng khuẩn tác động lên vi khuẩn 15 Hình 1.6 Cấu trúc hóa học phân tử Solamargine 17 Hình 1.7 Cấu trúc hóa học phân tử quinone, anthraquinone hypericin 18 Hình 1.8 Cấu trúc hóa học phân tử Capsaicin 21 Hình 2.1 Mẫu thực vật đƣợc ngâm dung mơi ethanol (1:20 (w/v)) 36 Hình 2.2 Đƣờng kính vùng ức chế vi khuẩn cao ethanol 70% Ciprofloxacin 38 Hình 2.3 Sự thay đổi màu sắc chất thị vi khuẩn resazurin 39 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 41 Hình 2.5 Quy trình tách chiết thu hồi cao Medinilla sp 42 Hình 2.6 Mẫu bột Medinilla sp 43 Hình 2.7 Dịch chiết mẫu Medinilla sp ngâm với dung môi EtOH 70% 44 Hình 2.8 Giếng thạch trƣớc sau bỏ sung dịch cao chiết 46 Hình 2.9.So sánh màu sắc resazurin thử nghiệm với đối chứng 47 Hình 2.10 Quy trình định tính số thành phần hóa học cao chiếttừ Medinilla sp 48 Hình 3.1 Hiệu suất thu hồi cao chiết từ Medinilla sp.với dung môi khác 53 Hình 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác Ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Escherichia coli 55 Hình 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác Ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Listeria spp 57 viii Hình 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung mơi khác Ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Salmonella spp 58 Hình 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung mơi khác Ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Shigella spp 60 Hình 3.6 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác Ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Vibriosp 61 Hình 3.7 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác Ciprofloxacin nhóm vi khuẩn gây bệnh hội da ……………………………………………………………… 63 ix MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Thuốc chữa bệnh thành phần thiếu đƣợc sống Từ xƣa nay, ngƣời biết sử dụng cáccây cỏ vào việc điều trị bệnh Mặc dù loại thuốc tây y chiếm phần lớn phƣơng pháp điều trị nhƣng thảo dƣợc chiếm vị trí quan trọng Mặt khác, việc sử dụng thuốc kháng sinh tùy tiện, tràn lan, thiếu kiểm soát để phòng, trị bệnh gây hậu nghiêm trọng, ngày có nhiều chủng vi khuẩn gây bệnh kháng thuốc ảnh hƣởng đến hiệu điều trị sức khỏe ngƣời Giải pháp cho vấn đề sử dụng nhóm chất kháng khuẩn có nguồn gốc từ thực vật để thay dần loại kháng sinh cấm sử dụng, gây ảnh hƣởng xấu đến thể ngƣời;chúng vừa mang lại hiệu điều trị bệnh vừa đảm bảo an toàn Việt Nam nằm vùng khí hậu nhiệt đới với nguồndƣợc liệu phong phú đa dạng Theo số liệu thống kê gần đây, hệ thực vật Việt Nam có 10000 lồi theo Võ Văn Chi nƣớc ta có khoảng 3200 lồi thảo dƣợc.Cùng với phát triển khoa học công nghệ đại việc nghiên cứu loại thảo dƣợc nƣớc ta năm gần có nhiều bƣớc phát triển.Hoạt tính kháng khuẩn loại thảo dƣợc đƣợc nghiên cứu song song việc xác định thành phần hoạt chất có thực vật Các loại thảo dƣợc điển hình nhƣ Trầu khơng (Piper betle L.)(Datta ctv, 2011), Sống đời (Kalanchoe pinnata (Lam) Pers.) (Biswas and Sinha, 2015), Lô hội (Aloe barbadensis) (Irshad ctv, 2011), Dâu Tằm (Morus acidosa Griff) (Huỳnh Kim Diệu, 2010) đƣợc xác định có hoạt tính kháng khuẩn mạnh nhiều loại vi khuẩn nhƣ Escherichia coli, Salmonellaspp.,Shigellaspp … Bên cạnh nguồn thảo dƣợc đƣợc nghiên cứu, số lƣợng lớn loại thảo dƣợc đƣợc dộc thiểu số sử dụng để trị bệnh theo kinh nghiệm dân gian Do đó, việc sử dụng phƣơng tiện khoa học để xác định lại tính cơng dụng thuốc dân gian điều cần thiết Và đối B.3.Kết đánh giá khả kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác (nồng độ 100 mg/ml) Ciproffloxacin (500 µg/ml) nhóm vi khuẩn Salmonellaspp.(d = 6mm) Vi khuẩn thị MeOH 75% S dublin 13 S enteritidis 13,5 13 13 S typhii 14 14 14,5 11 S typhimurium 10 10,5 11 13 EtOH 50% 13,5 11 12 EtOH 70% 10,5 13,5 15 10,5 11 - 14,5 11 14,5 12,5 13 12 11,5 13 11 10,5 - 13,5 13 12,5 10 9,5 13 12 12,5 13,5 12 13,5 10,5 11,5 10,5 11 11 11 14,5 14,5 14,5 - - 13,5 13 15 11 11,5 10,5 11,5 11 11,5 13 - 11,5 11 - Ciproffloxacin (500 µg/ml) Nƣớc EtOH 90% - - 9,5 B.4.Kết đánh giá khả kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác (nồng độ 100 mg/ml) Ciproffloxacin (500 µg/ml) nhóm vi khuẩn Shigellaspp.(d = mm) Vi khuẩn thị MeOH 75% EtOH 50% S boydii 10,5 11 12 12 11,5 10,5 S flexneri 10 9,5 10 11 12 S sonnei 10,5 11 11 - - EtOH 70% 12 11,5 12 Ciproffloxacin (500 µg/ml) - 16 10 10 9,5 13 - 9 10 15 14 15 11 12 11,5 11 14,5 15 14 15 16 - 14 - - 13,5 13,5 Nƣớc EtOH 90% 13 13,5 33,5 33 32,5 B.5.Kết đánh giá khả kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác (nồng độ 100 mg/ml) Ciproffloxacin (500 µg/ml) nhóm vi khuẩn Vibrio spp.(d = mm) Vi khuẩn thị MeOH 75% V alginolyticus 15 V.cholerae 15,5 15,5 14,5 14 V harveyi 16 V parahaemolyticus 16 16 EtOH 50% 12 15,5 - Nƣớc EtOH 90% 16,5 11,5 12 11,5 13 15 14 16,5 17 16 EtOH 70% 12 13 12,5 10 12 10 Ciproffloxacin (500 µg/ml) 16,5 16 16 14 12,5 12 12 13,5 15 13 13 14 15,5 15 11 10 13 12 12 12 12,5 13,5 13 18,5 11 9,5 10,5 17,5 18 12 12 12,5 12.5 12 11,5 10,5 10 11,5 11,5 11 B.6.Kết đánh giá khả kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp từ loại dung môi khác (nồng độ 100 mg/ml) Ciproffloxacin (500 µg/ml) nhóm vi khuẩn gây bệnh hội da(d= mm) Vi khuẩn MeOH 75% EtOH 50% EtOH 70% thị P aeruginosa 11 11 10.5 11.5 11.5 12.5 13.5 14 14 S aureus 11.5 11 11.5 10 10.5 10 15 15 14.5 E feacalis 10 10.5 11 12.5 12.5 11.5 14 13 14.5 EtOH 90% Nƣớc - 9.5 11 - - 12 12.5 11.5 10 - 9.5 10 - - 8.5 9.5 10 Ciproffloxacin (500 µg/ml) 12.5 11.5 12.5 12 12 12.5 12 11.5 12.5 PHỤ LỤC C KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU THỐNG KÊ KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CÁC LOẠI CAO CHIẾT TỪ MEDINILLA SP ĐỐI VỚI CÁC NHÓM VI KHUẨN GÂY BỆNH C.1.Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Medinilla sp nhóm vi khuẩn Escherichia coli C.1.1 E.coli O157:H7 ANOVA Table for KK by E0157H7 Source Sum of Squares Between groups 370.167 92.5417 Within groups 10 0.266667 2.66667 Df Mean Square F-Ratio 347.03 P-Value 0.0000 Total (Corr.) 372.833 14 Multiple Range Tests for 0157H7.KK by E0157H7 Method: 95.0 percent Tukey HSD E0157H7 Count Mean Homogeneous Groups ET90 ME ET50 3 0.0 10.1667 11.6667 X CIP ET70 3 13.1667 13.3333 X X X X C.1.2 E coli 0208 ANOVA Table for E0208.KK by E0208 Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 377.833 75.5667 Within groups 5.16667 12 0.430556 Total (Corr.) 383.0 17 175.51 Multiple Range Tests for E0208.KK by E0208 Method: 95.0 percent Tukey HSD E0208 Count Mean ET90 NUOC ME ET50 CIP ET70 3 3 3 Homogeneous Groups 0.0 X 10.6667 X 11.1667 X 12.0 X 12.3333 XX 13.8333 X C.1.3 E.Coli ANOVA Table for ECOLI.KK by ECOLI Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 57.8333 11.5667 24.49 0.0000 Within groups Total (Corr.) 5.66667 63.5 12 17 0.472222 Multiple Range Tests for ECOLI.KK by ECOLI Method: 95.0 percent Tukey HSD ECOLI Count Mean Homogeneous Groups ET50 10.0 X NUOC 10.1667 X CIP 13.1667 X ET70 13.3333 X ME 13.5 X ET90 14.8333 X C.1.4.ETEC ANOVA Table for ETEC.KK by ETEC Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 896.736 179.347 0.0000 Within groups Total (Corr.) 12 17 0.319444 3.83333 900.569 Multiple Range Tests for ETEC.KK by ETEC 561.43 Method: 95.0 percent Tukey HSD ETEC Count Mean Homogeneous Groups NUOC ET50 ET90 ET70 ME CIP 3 3 3 9.83333 X 11.3333 XX 12.6667 X 14.6667 X 14.6667 X 31.0 X C.2 Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Medinilla sp nhóm vi khuẩn Listeria spp C.2.1 L innocua ANOVA Table for LISINNO.KK by LISINNO Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 26.0694 5.21389 Within groups Total (Corr.) 12 17 0.236111 2.83333 28.9028 22.08 Multiple Range Tests for KK by LISINNO Method: 95.0 percent Tukey HSD LISINNO Count Mean Homogeneous Groups NUOC ET50 ET90 ME CIP ET70 3 3 3 10.1667 11.1667 11.8333 11.8333 12.0 14.1667 X XX X X X X C.2.2 L Monocytogene Source Sum of Squares Df Between groups 14.125 Mean Square F-Ratio P-Value 2.825 0.0001 13.56 Within groups 2.5 12 Total (Corr.) 16.625 17 0.208333 Multiple Range Tests for LISMONO.KK by LISMONO Method: 95.0 percent Tukey HSD LISMONO Count Mean Homogeneous Groups CIP ME ET50 NUOC ET70 ET90 3 3 3 12.1667 12.3333 12.6667 12.8333 13.8333 14.6667 X X XX XX XX X C.3 Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Medinilla sp nhóm vi khuẩn Salmonella spp C.3.1 S dublin ANOVA Table for SDUBLIN.KK by SDUBLIN Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 15.05 0.0001 27.1667 5.43333 Within groups 4.33333 12 0.361111 Total (Corr.) 31.5 17 Multiple Range Tests for SDUBLIM.KK by SDUBLIN Method: 95.0 percent Tukey HSD SDUBLIN Count Mean NUOC ET50 ET90 CIP ME ET70 3 3 3 11.0 11.1667 11.1667 12.1667 13.1667 14.3333 Homogeneous Groups X X X XX XX X C.3.2.S enteritidis ANOVA Table for SENTER.KK by SENTER Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 16.3917 0.0062 3.27833 7.01 Within groups 4.20833 0.467593 Total (Corr.) 20.6 14 Multiple Range Tests for SENTER.KK by SENTER Method: 95.0 percent Tukey HSD SENTE R NUOC ET50 ET90 CIP ME ET70 Count Mean Homogeneous Groups 2 3 10.75 10.75 12.25 13.0 13.1667 13.3333 X X XX X X X C.3.3 S typhii ANOVA Table for STYPHI(K).KK by STYPHI Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 434.0 86.8 1041.60 groups Within groups 1.0 12 0.0833333 Total (Corr.) 435.0 17 Multiple Range Tests for STYPHI(K).KK by STYPHI Method: 95.0 percent Tukey HSD STYPHI Count Mean ET90 NUOC ET50 CIP ME ET70 3 3 3 Homogeneous Groups 0.0 X 9.66667 X 11.1667 X 12.5 X 14.1667 X 14.5 X C.3.4 S typhimurium P-Value 0.0000 ANOVA Table for KK by STYPHIMURIUM Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 376.569 0.0000 75.3139 186.99 Within groups 4.83333 12 0.402778 Total (Corr.) 381.403 17 Multiple Range Tests for STYPHIMURIUM.KK by STYPHIMURIUM Method: 95.0 percent Tukey HSD STYPHIMURIUM Count Mean ET50 ME NUOC CIP ET90 ET70 3 3 3 Homogeneous Groups 0.0 X 10.5 X 10.8333 X 11.0 X 13.0 X 13.8333 X C.4 Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Medinilla sp nhóm vi khuẩn Shigella spp C.4.1.S boydii ANOVA Table for SHIBOYDII.KK by SHIBOYDII Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 388.833 77.7667 349.95 groups Within groups 2.66667 12 0.222222 P-Value 0.0000 Total (Corr.) 391.5 17 Multiple Range Tests for SHIBOYDII.KK by SHIBOYDII Method: 95.0 percent Tukey HSD SHIBOYDII CIP ME ET50 ET90 NUOC ET70 Count 3 3 3 Mean 0.0 10.6667 11.3333 11.5 11.8333 14.6667 Homogeneous Groups X X X X X X 10 C.4.2 S flexneri ANOVA Table for SHIFLEXNERI.KK by SHIFLEX Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 89.9444 17.9889 92.51 groups Within groups 2.33333 12 0.194444 P-Value 0.0000 Total (Corr.) 92.2778 17 Multiple Range Tests for SHIFLEXNERI.KK by SHIFLEX Method: 95.0 percent Tukey HSD SHIFLEX ME NUOC ET50 CIP ET70 ET90 Count 3 3 3 Mean 9.83333 9.83333 11.3333 13.1667 14.5 15.6667 Homogeneous Groups X X X X X X C.4.3 S sonnei ANOVA Table for SHISONNEI.KK by SHISONNEI Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 2207.4 0.0000 441.481 3531.84 Within groups 1.5 12 0.125 Total (Corr.) 2208.9 17 Multiple Range Tests for SHISONNEI.KK by SHISONNEI Method: 95.0 percent Tukey HSD SHISONNEI ET50 ET90 NUOC ME ET70 CIP Count 3 3 3 Mean 0.0 0.0 9.33333 10.8333 13.6667 33.0 Homogeneous Groups X X X X X X C.5 Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Medinilla sp nhóm vi khuẩn Vibrio spp 11 C.5.1 V algino ANOVA Table for VALGINO.KK by VALGINO Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 75.5694 15.1139 27.21 groups Within groups 6.66667 12 0.555556 Total (Corr.) 82.2361 P-Value 0.0000 17 Multiple Range Tests for VALGINO.KK by VALGINO Method: 95.0 percent Tukey HSD VALGINO NUOC ET50 ET90 ET70 ME CIP Count 3 3 3 Mean 10.6667 11.6667 12.5 14.0 15.8333 16.1667 Homogeneous Groups X X XX XX XX X C.5.2.V cholerea ANOVA Table for VCHOLERAE.KK by VCHOLERAE Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 55.6111 11.1222 20.53 groups Within groups 6.5 12 0.541667 P-Value 0.0000 Total (Corr.) 62.1111 17 Multiple Range Tests for VCHOLERAE.KK by VCHOLERAE Method: 95.0 percent Tukey HSD VCHOLERAE NUOC ET70 CIP ET50 ME ET90 Count 3 3 3 Mean Homogeneous Groups 10.0 X 12.5 X 13.3333 XX 13.5 XX 15.1667 X 15.1667 X 12 C.5.3 V Harveyi ANOVA Table for VHARVEYI.KK by VHARVEYI Source Sum Squares Between groups 116.778 of Df Mean Square F-Ratio P-Value 23.3556 0.0000 0.430556 Within groups 5.16667 12 Total (Corr.) 121.944 17 54.25 Multiple Range Tests for VHARVEYI.KK by VHARVEYI Method: 95.0 percent Tukey HSD VHARVEYI Count Mean NUOC ET50 ET90 ET70 ME CIP 3 3 3 10.3333 12.3333 13.3333 13.8333 16.5 18.0 Homogeneous Groups X X X X X X C.5.4.V.para ANOVA Table for VPARA.KK by VPARA Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 432.903 86.5806 479.52 groups Within groups 2.16667 12 0.180556 Total (Corr.) 435.069 17 Multiple Range Tests for VPARA.KK by VPARA Method: 95.0 percent Tukey HSD VPARA ET50 NUOC CIP ET90 Count 3 3 Mean 0.0 9.83333 11.3333 12.0 Homogeneous Groups X X X X 13 P-Value 0.0000 ET70 ME 3 12.1667 15.8333 X X C.6 Kết xử lý số liệu thống kê khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết từ Medinilla sp nhóm vi khuẩn gây bệnh hội da C.6.1 P aeruginosa ANOVA Table for PSEU.KK by PSEU Source Sum of Df Mean Squares Square Between 369.278 73.8556 groups Within groups 4.83333 12 0.402778 F-Ratio P-Value 183.37 0.0000 Total (Corr.) 374.111 17 Multiple Range Tests for PSEU.KK by PSEU Method: 95.0 percent Tukey HSD PSEU ET90 NUOC ME ET50 CIP ET70 Count 3 3 3 Mean 0.0 9.66667 10.8333 11.8333 12.1667 13.8333 Homogeneous Groups X X XX X XX X C.6.2 S aureus ANOVA Table for SAUREUS.KK by SAUREUS Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 48.2778 9.65556 86.90 groups Within groups 1.33333 12 0.111111 Total (Corr.) 49.6111 17 Multiple Range Tests for SAUREUS.KK by SAUREUS Method: 95.0 percent Tukey HSD SAUREUS NUOC ET50 Count 3 Mean 9.83333 10.1667 Homogeneous Groups X X 14 P-Value 0.0000 ME ET90 CIP ET70 3 3 11.3333 12.0 12.1667 14.8333 X X X X C.6.3 E.feacalis ANOVA Table for EFEACALIS.KK by EFEACALIS Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum Squares 369.667 of Df Mean Square 73.9333 3.33333 12 373.0 17 F-Ratio P-Value 266.16 0.0000 0.277778 Multiple Range Tests for EFEACALIS.KK by EFEACALIS Method: 95.0 percent Tukey HSD EFEACALIS ET90 NUOC ME CIP ET50 ET70 Count 3 3 3 Mean 0.0 9.5 10.5 12.0 12.1667 13.8333 Homogeneous Groups X X X X X X 15 PHỤ LỤC D CÁCH PHA CÁC LOẠI THUỐC THỬ D.1 Thuốc thử Molisch Hòa tan 5g α- napthol vào ethanol 95% pha loãng thành 100 ml D.2 Thuốc thử Fehling * Thuốc thử Fehling A: 34,6 g CuSO4.5H2O đƣợc hịa tan hồn tồn vào nƣớc cất, sau tiếp tục định mứcđến 500ml * Thuốc thử Fehling B: Hòa tan 125g KOH và173g Kali Natri tartrate.7H2O vào nƣớccất định mức 500ml D.3 Thuốc thử Barfoed Cân 66,5g Copper (II) acetate monohydrate hòa tan vào dung dịch gồm 10 ml acid acetic glacial 1000ml nƣớccất Hỗn hợp đƣợc mang đunvàkhuấyđếnkhi tan hồntồn D.4.Thuốc thử Mayer: Hịa tan 1,358g HgCl2 60ml nƣớc cất Tiếp tục cân 5g KI hịa tan 10ml nƣớc cất Sauđó tiến hành trộn dung dịch lại với địnhmức nƣớc cất đến100 ml D.5 Thuốc thử Dragendroff:Gồm dung dịch: -Dung dịch A: hòa tan 0,5 g Bismuth nitrate (Bi(NO3)3.5H2O) 20 ml acid acetic 20% -Dung dịch B: dung dịch KI 40% hòa tan trongnƣớc cất Khisửdụng, trộn 20 ml dung dịchAvới ml dung dịch B 70ml nƣớc cất D.6.Thuốc thử Hager Hòa tan g acid picric vào 100ml nƣớccất, sau lọc dung dịch thu dịch lọc D.7 Thuốc thử Wagner Hòa tan 2g I2 6g KI vào nƣớccất định mức đến 100ml Thuốc thử dung dịch tan hoàn toàn, tránh tiếp xúc ánh sáng 16 D.8 Natri nitro prusside Hòa tan1g Natri nitroferricyanide vào 10 ml nƣớccất D.9 Thuốc thử Resazurin Resazurin có dạng viên nén, nghiền nhuyễn viên Resazurin hòa tan với 100 ml nƣớc cất vô trùng, bảo quản tủ lạnh 17 ... sát ảnh hưởng loại dung môi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn củacao chiết t? ?Medinilla sp chủng vi khuẩn gây bệnh Trong thí nghiệm này, tiến hành đánh giá hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết. .. tiến hành đánh giá ảnh hƣởng dung mơi tách chiết đến hoạt tính kháng khuẩn Medinilla sp đƣợc trình bày Hình 2.4 Mẫu Medinillasp Xử lý mẫu Tách chiết thu hồi cao Cao chiết Medinilla sp loại dung mơi... 3.1 Kết đánh giá hiệu suất thu hồi cao chiết Medinilla sp từ dung môitách chiết khác 29 3.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết Medinilla sp với loại dung môi tách chiết khác