Nghiên cứu một số hoạt động tính sinh học của đài hoa bụp giấm hibiscus sabdariffal

tên đề tài.txt Nghiên cứu số hoạt động tính sinh học đài hoa bụp giấm - Hibiscus Sabdariffal (Giảng viên hướng dẫn: Th.s Phạm Minh Nhựt) SV: Lê Ngọc Kiều Như Lớp 13DSH04 MSSV: 1311101077 Page Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT iv DANH SÁCH CÁC BẢNG v DANH SÁCH CÁC HÌNH vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đại cương atiso đỏ 1.1.1 Tên gọi phân loại thực vật 1.1.1.1 Tên gọi 1.1.1.2 Phân loại thực vật 1.1.2 Mô tả thực vật 1.1.3 Phân bố 1.2 Giá trị sử dụng atiso đỏ 1.3 Các thành phần hóa học từ thực vật 1.3.1 Carbohydrate 1.3.2 Alkaloid 1.3.3 Glycoside 1.4 Tổng quan chế kháng khuẩn hợp chất có nguồn gốc từ TV 19 1.4.1 Khái niệm hoạt tính kháng khuẩn 19 1.4.2 Cơ chế kháng khuẩn 19 1.4.3 Một số hợp chất có khả kháng khuẩn từ thực vật 21 1.4.4 Tình hình nghiên cứu kháng khuẩn thực vật giới VN 27 1.4.5 Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) 30 1.5 Ảnh hưởng dung môi đến khả tách chiết cao từ thực vật 31 1.6 Tổng quan số nhóm vi khuẩn gây bệnh 32 1.6.1 Nhóm vi khuẩn Escherichia coli 32 1.6.2 Nhóm vi khuẩn Salmonella spp 33 1.6.3 Nhóm vi khuẩn Shigella spp 35 i Đồ án tốt nghiệp 1.6.4 Nhóm vi khuẩn Listeria spp 36 1.6.5 Nhóm vi khuẩn Vibrio spp 37 1.6.6 Nhóm vi khuẩn thuộc dòng Pseudomonas spp 38 1.6.7 Nhóm vi khuẩn thuộc dịng Enterococcus spp 39 1.6.8 Nhóm vi khuẩn Staphylococcus aureus 40 CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Địa điểm 42 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 42 2.1.2 Thời gian nghiên cứu 42 2.2 Vật liệu nghiên cứu 42 2.2.1 Nguồn mẫu 42 2.2.2 Vi khuẩn thị 42 2.2.3 Hóa chất dung môi 42 2.2.4 Dụng cụ thiết bị 43 2.3 Phương pháp nghiên cứu 44 2.3.1 Phương pháp thu xử lý nguồn mẫu 44 2.3.2 Phương pháp tách chiết thu nhận cao thực vật 44 2.3.3 Phương pháp bảo quản giữ giống vi sinh vật 45 2.3.4 Phương pháp tăng sinh, xác định mật độ tế bào vi sinh vật thị 46 2.3.5 Phương pháp pha loãng mẫu 46 2.3.6 Phương pháp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn 47 2.3.7 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu MIC 48 2.3.8 Phương pháp xác định thành phần hóa học có cao chiết 49 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 52 2.4 Bố trí thí nghiệm 52 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ ethanol đến hiệu suất thu hồi cao chiết từ đài hoa atiso đỏ 54 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng loại cao chiết ethanol VSV thị 56 ii Đồ án tốt nghiệp 2.4.3 Thí nghiệm 3: Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết ethanol 50% từ bụp giấm chủng vi khuẩn gây bệnh 59 2.4.4 Thí nghiệm 4: Định tính số thành phần hóa học cao chiết ethanol 50% từ đài hoa atiso đỏ 62 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 64 3.1 Kết đánh giá hiệu suất thu hồi cao chiết đài hoa bụp giấm từ dung môi tách chiết khác 64 3.2 Kết khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chiết bụp giấm loại dung môi tách chiết khác chủng vi khuẩn thị 65 3.2.1 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Escherichia coli 65 3.2.2 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Listeria spp 67 3.2.3 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Salmonella spp 69 3.2.4 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Shigella spp 71 3.2.5 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn Vibrio spp 72 3.2.6 Kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết nhóm vi khuẩn gây bệnh hội da 75 3.2.7 Tổng hợp kết hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết 20 vi khuẩn gây bệnh gây bệnh 76 3.3 Kết định tính số thành phần hóa học cao chiết bụp giấm từ ethanol 50% 86 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 90 4.1 Kết luận 90 4.2 Đề nghị 90 TÀI LIỆU THAM KHẢO 91 iii Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT DMSO: Dimethyl sulfoxide DNA: Deoxyribonucleic acid MBC: Minimal Bactericidal Concentration: Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu MIC: Minimum Inhibition Concentration: Nồng độ ức chế tối thiểu RNA: Ribonucleic acid TSA: Trypton Soya Agar TSB: Trypton Soya Broth NA: Non - activity iv Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 1.1 Chức sinh lý số amino acid trình trao đổi chất 17 Bảng 1.2 Những nhóm hợp chất tự nhiên có hoạt tính kháng khuẩn (theo Cowan, 1999) 20 Bảng 3.1 Kết đường kính vịng ức chế (mm) cao chiết bụp giấm từ loại dung môi ethanol khác 20 chủng vi khuẩn gây bệnh 81 Bảng 3.2 Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết bụp giấm từ ethanol 50% 20 chủng vi khuẩn gây bệnh 84 Bảng 3.3 Kết định tính số thành phần hóa học cao chiết bụp giấm từ ethanol 50% 87 v Đồ án tốt nghiệp DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 1.1 Cây đài hoa atiso đỏ Hình 1.2 Sơ đồ phân loại nhóm carbohydrate Hình 1.3 Cấu trúc hóa học số chất thuộc nhóm alkaloids Hình 1.4 Sơ đồ phân loại glycoside Hình 1.5 Sơ đồ phân loại nhóm saponin 10 Hình 1.6 Cấu trúc hóa học flavonoid (A) dạng flavonoid, (B) Euflavonoid, (C) Isoflavonoid, (D) Neoflavonoid 13 Hình 1.7 Caffeic acid 14 Hình 1.8 Phân loại nhóm phenolics theo cấu trúc hóa học 14 Hình 1.9 Những vị trí vi khuẩn bị tác động hợp chất thực vật (Burt, 2004) 19 Hình 1.10 Cấu trúc hóa học phân tử quinone, anthraquinone hypericin 22 Hình 1.11 Cấu trúc hóa học catechine 23 Hình 1.12 Cấu trúc hóa học coumarine 24 Hình 1.13 Cấu trúc hóa học phân tử Solamargine 25 Hình 1.14 Cấu trúc hóa học berberine 26 Hình 1.15 E.coli quan sát kính hiển vi với kích thước µm (Bact, 2005) 33 Hình 1.16 Hình thái vi khuẩn Salmonella spp (Taragui, 2005) 34 Hình 1.17 Hình thái vi khuẩn Shigella spp (Reynolds, 2011) 35 Hình 1.18 Vi khuẩn Listeria spp 36 Hình 1.19 Hình thái vi khuẩn Vibrio spp (Microscopy, 2004) 37 Hình 1.20 Vi khuẩn Pseudomonas 39 Hình 1.21 Vi khuẩn Enterococcus 40 Hình 1.22 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 41 Hình 2.1 Mẫu bụp giấm ngâm ethanol (tỷ lệ 1:20 (w/v)) 45 Hình 2.2 Phương pháp pha loãng mẫu 47 Hình 2.3 Đường kính vùng ức chế vi khuẩn cao EtOH 70% ciprofloxacin 48 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát 53 vi Đồ án tốt nghiệp Hình 2.5 Quy trình tách chiết thu hồi cao từ atiso đỏ 54 Hình 2.6 Mẫu bụp giấm cắt nhỏ 55 Hình 2.7 Dịch chiết mẫu từ bụp giấm ngâm với ethanol 70% 55 Hình 2.8 Quy trình đánh giá khả kháng khuẩn cao chiết 57 Hình 2.9 Giếng thạch trước sau bổ sung cao 58 Hình 2.10 Vòng kháng khuẩn cao chiết ethanol 70% (100 mg/ml) chủng Staphylococcus aureus (A) Samolnella enteritidis (B) 59 Hình 2.11 Quy trình xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết 60 Hình 2.12 Quy trình định tính số thành phần hóa học cao chiết ethanol 50% từ atiso đỏ 62 Hình 3.1 Hiệu suất thu hồi cao chiết từ bụp giấm với dung mơi khác 64 Hình 3.2 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết bụp giấm từ loại dung môi khác ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Escherichia coli 66 Hình 3.3 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết bụp giấm từ loại dung môi khác ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Listeria spp 68 Hình 3.4 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết bụp giấm từ loại dung môi khác ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Salmonella spp 69 Hình 3.5 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết bụp giấm từ loại dung môi khác ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Shigella spp 71 Hình 3.6 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết bụp giấm từ loại dung mơi khác ciprofloxacin nhóm vi khuẩn Vibrio spp 73 Hình 3.7 Hoạt tính kháng khuẩn cao chiết bụp giấm từ loại dung môi khác ciprofloxacin nhóm vi khuẩn gây bệnh hội da 75 vii Đồ án tốt nghiệp MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Từ năm 1992, bụp giấm du nhập vào Việt Nam đỡ đầu nhà khoa học Mai Thị Tấn Bà nhân giống loại toàn quốc điều chế từ bụt giấm trà, mứt, rượu, nước cốt Những sản phẩm vừa thực phẩm vừa có nhiều tác dụng dược lý cơng nhận người sử dụng nên bụp giấm ngày ưu chuộng trở nên gần gũi đời sống Cây bụp giấm có tên khoa học Hibiscus sabdariffa L., thuộc họ Cây cao từ 1,5 – m, thân màu lục đỏ tía, phân nhánh gần gốc, cành nhẵn có rang cưa Hoa đơn độc, mọc nách, gần khơng có cuống, đường kính từ – 10 cm Tràng hoa màu vàng hồng hay tía, có trắng Quả nang hình trứng, có lơng thơ mang đài màu đỏ sáng tồn bao quanh Hạt màu đen, gần trịn thơ, chứa nhiều tinh dầu Đài hoa bụp giấm loại dược liệu có lợi cho sức khỏe Tính theo hàm lượng chất khơ đài hoa bụp giấm chứa khoảng 1,5% anthocyanin, axit hữu khoảng 15 – 30%, vitamin A, B1, B2, C, E, F nhiều loại khoáng chất sắt, đồng, canxi, magie, kẽm… Đài hoa bụp giấm chứa loại chất chống oxy hóa flavonoid lên tới 12% Chất oxy hóa chậm hay ngăn cản cách hiệu q trình oxy hóa gốc tự do, nguyên nhân khiến tế bào hoạt động khác thường Từ giúp làm chậm q trình lão hóa Theo nghiên cứu nhà khoa học dinh dưỡng Diane McKay trình bày hội nghị thường niên Hiệp hội Tim mạch Mỹ rằng:”Chỉ với ba tách trà đài hoa bụp giấm ngày hỗ trợ giảm cao huyết áp người có nguy mắc bệnh tim, đột quỵ hay vấn đề thận” Theo tìm hiểu bụp giấm đặc biệt đài hoa Việt Nam, có số tác giả có cơng trình nghiên cứu sơ từ đài hoa bụp giấm Để đa dạng nghiên cứu kháng khuẩn loại nên thực đề tài nghiên cứu ”Nghiên cứu số hoạt tính sinh học đài hoa bụp giấm - Hibiscus Đồ án tốt nghiệp Sabdariffa L,.” đề tài thực phịng thí nghiệm Khoa Cơng nghệ Sinh học – Thực phẩm – Môi trường, trường Đại học Công nghệ Thành phố Hồ Chí Minh Mục tiêu nghiên cứu - Khảo sát khả kháng khuẩn cao chiết Đài hoa bụp giấm với nhiều loại dung môi tách chiết khác Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết đài hoa bụp giấm - Khảo sát sơ thành phần hóa học cao chiết từ đài hoa bụp giấm Nội dung nghiên cứu - Đánh giá ảnh hưởng loại dung môi đến hiệu suất thu hồi cao chiết từ đài hoa bụp giấm với dung môi ethanol 50%, 70% 90% - Khảo sát sơ hoạt tính kháng khuẩn loại cao chiết Đài hoa bụp giấm từ loại dung môi khác chủng vi khuẩn gây bệnh - Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) cao chiết Đài hoa bụp giấm - Xác định diện số thành phần hóa học cao chiết Đài hoa bụp giấm Phạm vi nghiên cứu - Mẫu đài hoa bụp giấm tách chiết cao từ loại dung môi khác nhau: ethanol (50%, 70% 90%) khảo sát hoạt tính kháng khuẩn nhóm vi khuẩn: Escherichia Coli, Samonella spp., Vibrio spp., Shigella spp., Listeria spp., Pseudomonas spp., Enterococcus spp., Staphylococcus spp - Định tính thành phần hóa học: carbohydrate, saponin, alkaloid, cardiac glycoside, anthraquinone glycoside, flavonoid, phenolic compound, tannin, steroid, amino acid Đồ án tốt nghiệp EtOH90(200) 17.6667 X EtOH50(200) 20.8333 X S flexneri ANOVA Table for duong kính kháng khuân by nong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 1652.73 12 137.728 Within groups 5.0 26 0.192308 Total (Corr.) 1657.73 38 716.18 Multiple Range Tests for duong kính kháng khuân by nong Method: 95.0 percent LSD Nong Count Mean Homogeneous Groups EtOH50(25) 0.0 X EtOH70(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X EtOH70(50) 9.5 X EtOH50(50) 11.0 X EtOH90(50) 11.6667 X EtOH70(100) 11.6667 X CIP 13.1667 X EtOH50(100) 13.3333 X EtOH90(100) 14.3333 X EtOH70(200) 15.0 X EtOH50(200) 16.3333 X 15 Đồ án tốt nghiệp EtOH90(200) 22.0 X S sonnei ANOVA Table for duong kính kháng khuân by nong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 3064.58 12 255.381 Within groups 128.5 26 4.94231 Total (Corr.) 3193.08 38 51.67 Multiple Range Tests for duong kính kháng khuân by nong Method: 95.0 percent LSD Nong Count Mean Homogeneous Groups EtOH70(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X EtOH50(25) 0.0 X EtOH50(100) 9.66667 X EtOH70(50) 11.0 X EtOH90(50) 11.5 X EtOH70(100) 12.0 XX EtOH50(50) 12.3333 XX EtOH90(100) 13.1667 XX EtOH70(200) 15.6667 XX EtOH50(200) 18.3333 XX EtOH90(200) 21.3333 X CIP 33.0 X 16 Đồ án tốt nghiệp V parahaemolyticus ANOVA Table for duong kính kháng khuân by nong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 1519.08 12 126.59 Within groups 13.1667 26 0.50641 Total (Corr.) 1532.24 38 249.97 Multiple Range Tests for duong kính kháng khuân by nong Method: 95.0 percent LSD Nong Count Mean Homogeneous Groups EtOH50(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X EtOH70(25) 0.0 X EtOH70(50) 9.66667 X EtOH90(100) 11.5 X EtOH50(50) 11.8333 XX EtOH70(100) 12.1667 XX EtOH50(100) 12.5 XX EtOH90(50) 12.8333 X EtOH70(200) 14.3333 X CIP 16.1667 X EtOH90(200) 16.1667 X EtOH50(200) 19.5 X 17 Đồ án tốt nghiệp V alginolyticus ANOVA Table for duong kính kháng khn by nơng dơ Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 1695.6 12 141.3 Within groups 17.1667 26 0.660256 Total (Corr.) 1712.77 38 214.01 Multiple Range Tests for duong kính kháng khuân by nông dô Method: 95.0 percent LSD Nông dô Count Mean Homogeneous Groups EtOH50(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X EtOH70(25) 0.0 X EtOH70(50) 10.3333 X EtOH90(50) 11.0 XX EtOH50(50) 11.1667 XX EtOH70(100) 11.8333 X CIP 13.3333 X EtOH70(200) 14.8333 X EtOH50(100) 15.5 X EtOH90(100) 15.6667 X EtOH50(200) 17.5 X EtOH90(200) 20.8333 X V harveyi ANOVA Table for duong kính kháng khn by nơng dơ Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio 18 P-Value Đồ án tốt nghiệp Between groups 2096.24 12 174.687 Within groups 90.0 26 3.46154 Total (Corr.) 2186.24 38 50.47 0.0000 Multiple Range Tests for duong kính kháng khn by nơng dơ Method: 95.0 percent LSD nông dô Count Mean Homogeneous Groups EtOH50(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X EtOH70(25) 0.0 X EtOH70(50) 8.66667 X EtOH90(50) 9.66667 X EtOH50(50) 11.0 XX EtOH50(100) 14.0 XX EtOH90(100) 15.0 XX EtOH70(200) 17.1667 XX CIP 18.0 XX EtOH70(100) 18.1667 X EtOH50(200) 18.3333 X EtOH90(200) 21.8333 X V.cholerae ANOVA Table for duong kính kháng khn by nơng dơ Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 1403.64 12 116.97 Within groups 31.1667 26 1.19872 Total (Corr.) 1434.81 38 97.58 Multiple Range Tests for duong kính kháng khn by nơng dơ 19 Đồ án tốt nghiệp Method: 95.0 percent LSD nông dô Count Mean Homogeneous Groups EtOH90(25) 0.0 X EtOH70(25) 0.0 X EtOH70(50) 10.5 X CIP 11.3333 X EtOH50(25) 11.3333 X EtOH90(50) 11.5 XX EtOH50(50) 12.1667 XX EtOH70(100) 13.3333 X EtOH90(100) 15.6667 X EtOH50(100) 15.8333 X EtOH70(200) 17.8333 X EtOH50(200) 19.0 XX EtOH90(200) 20.0 X E feacalis ANOVA Table for duong kính kháng khuân by nông dô Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 1361.81 12 113.484 Within groups 10.5 26 0.403846 Total (Corr.) 1372.31 38 281.01 Multiple Range Tests for duong kính kháng khn by nơng dô Method: 95.0 percent LSD Nông dô Count Mean Homogeneous Groups EtOH50(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X 20 Đồ án tốt nghiệp EtOH70(25) 0.0 X EtOH70(50) 9.5 X EtOH70(100) 11.1667 X EtOH90(50) 11.5 X CIP 12.0 X EtOH90(100) 12.1667 X EtOH50(50) 13.8333 X EtOH50(100) 14.5 XX EtOH50(200) 15.3333 XX EtOH70(200) 15.8333 XX EtOH90(200) 16.6667 X S aureus ANOVA Table for duong kính kháng khn by nơng dơ Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 1425.47 12 118.79 Within groups 12.3333 26 0.474359 Total (Corr.) 1437.81 38 250.42 Multiple Range Tests for duong kính kháng khn by nơng dơ Method: 95.0 percent LSD Nông dô Count Mean Homogeneous Groups EtOH50(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X EtOH70(25) 0.0 X EtOH70(50) 9.66667 X EtOH50(50) 10.5 XX EtOH90(50) 11.1667 XX 21 Đồ án tốt nghiệp CIP 12.1667 XX EtOH50(100) 12.1667 XX EtOH90(100) 12.6667 XX EtOH70(100) 13.5 X EtOH70(200) 15.8333 X EtOH90(200) 16.6667 X EtOH50(200) 18.1667 X P aeruginosa ANOVA Table for duong kính kháng khuân by nông dô Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.0000 Between groups 1341.9 12 111.825 Within groups 12.0 26 0.461538 Total (Corr.) 1353.9 38 242.29 Multiple Range Tests for duong kính kháng khn by nơng dô Method: 95.0 percent LSD Nông dô Count Mean Homogeneous Groups EtOH50(25) 0.0 X EtOH70(25) 0.0 X EtOH90(25) 0.0 X EtOH70(50) 8.33333 X EtOH50(50) 10.0 X EtOH70(100) 11.3333 X EtOH90(50) 11.8333 XX EtOH50(100) 12.0 XX CIP 12.0 XX EtOH90(100) 12.5 X EtOH70(200) 14.3333 X 22 Đồ án tốt nghiệp EtOH50(200) 14.8333 X EtOH90(200) 19.1667 X 23 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC D CÁCH PHA CÁC LOẠI THUỐC THỬ D.1 Thuốc thử Molisch Hòa tan 5g α- napthol vào ethanol 95% pha loãng thành 100 ml D.2 Thuốc thử Fehling * Thuốc thử Fehling A: 34,6 g CuSO4.5H2O hịa tan hồn tồn vào nước cất, sau tiếp tục định mức đến 500ml * Thuốc thử Fehling B: Hòa tan 125g KOH 173g Kali Natri tartrate.7H2O vào nước cất định mức 500ml D.3 Thuốc thử Barfoed Cân 66.5g Copper (II) acetate monohydrate hòa tan vào dung dịch gồm 10 ml acid acetic glacial 1000ml nước cất Hỗn hợp mang đun khuấy đến tan hoàn tồn D.4.Thuốc thử Mayer: Hịa tan 1.358g HgCl2 60ml nước cất Tiếp tục cân 5g KI hòa tan 10ml nước cất Sau tiến hành trộn dung dịch lại với định mức nước cất đến100 ml D.5 Thuốc thử Dragendroff: Gồm dung dịch: - Dung dịch A: hòa tan 0.5 g Bismuth nitrate (Bi(NO3)3.5H2O) 20 ml acid acetic 20% - Dung dịch B: dung dịch KI 40% hòa tan nước cất Khi sử dụng, trộn 20 ml dung dịch A với ml dung dịch B 70ml nước cất D.6 Thuốc thử Hager Hòa tan g acid picric vào 100ml nước cất, sau lọc dung dịch thu dịch lọc D.7 Thuốc thử Wagner Hòa tan 2g I2 6g KI vào nước cất định mức đến 100ml Thuốc thử dung dịch tan hoàn toàn, tránh tiếp xúc ánh sáng D.8 Natri nitro prusside Hòa tan 1g Natri nitroferricyanide vào 10 ml nước cất 24 Đồ án tốt nghiệp D.9 Thuốc thử Resazurin Resazurin có dạng viên nén, nghiền nhuyễn viên Resazurin hịa tan với 100 ml nước cất vơ trùng, bảo quản tủ lạnh PHỤ LỤC E KẾT QUẢ HÌNH ẢNH XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CAO CHIẾT TỪ BỤP GIẤM TỪ ETHANOL 70% E.1 Kết dương tính thử nghiệm định tính Carbohydrate B A C A Thử nghiệm Molisch; B Thử nghiệm Fehling; C Thử nghiệm Benedict E.2 Kết dương tính thử nghiệm định tính Saponin 25 Đồ án tốt nghiệp Thử nghiệm Foam E.3 Kết dương tính thử nghiệm định tính Cardiac Glycosides Thử nghiệm Keller Killiani E.4 Kết dương tính thử nghiệm định tính Tannin 26 Đồ án tốt nghiệp A B A Thử nghiệm Ferric chloride; B Thử nghiệm Lead Acetate 27 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đồ án nghiên cứu riêng thực sở lý thuyết, tiến hành nghiên cứu thực tiễn hướng dẫn ThS Phạm Minh Nhựt Các số liệu, kết nêu đồ án trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Tp.Hồ Chí Minh, ngày… tháng… năm… Sinh viên Lê Ngọc Kiều Như i Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Trước hết, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu Trường Đại học Công Nghệ Tp Hồ Chí Minh, q thầy giảng dạy Khoa Công nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trường tất thầy cô truyền dạy kiến thức quý báu cho em suốt năm học vừa qua Qua em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thầy Th.s Phạm Minh Nhựt, người định hướng nghiên cứu, quan tâm, tận tình hướng dẫn giúp đỡ em suốt thời gian làm khố luận tốt nghiệp Bên cạnh em xin cảm ơn thầy Phịng Thí nghiệm Khoa Công nghệ sinh học - Thực phẩm - Môi trường anh chị, bạn bè nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em hồn thành tốt đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình ln bên cạnh, động viên lúc khó khăn, nản lòng suốt thời gian học tập, nghiên cứu sống Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm Sinh viên Lê Ngọc Kiều Như ii ... hiểu bụp giấm đặc biệt đài hoa Việt Nam, có số tác giả có cơng trình nghiên cứu sơ từ đài hoa bụp giấm Để đa dạng nghiên cứu kháng khuẩn loại nên thực đề tài nghiên cứu ? ?Nghiên cứu số hoạt tính sinh. .. diện số thành phần hóa học cao chiết Đài hoa bụp giấm Phạm vi nghiên cứu - Mẫu đài hoa bụp giấm tách chiết cao từ loại dung môi khác nhau: ethanol (50%, 70% 90%) khảo sát hoạt tính kháng khuẩn nhóm... hóa học cao chiết từ đài hoa bụp giấm Nội dung nghiên cứu - Đánh giá ảnh hưởng loại dung môi đến hiệu suất thu hồi cao chiết từ đài hoa bụp giấm với dung môi ethanol 50%, 70% 90% - Khảo sát sơ hoạt