Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl

Khảo sát khả năng ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô sẹo tạo dịch huyền phù cây Drosera burmanni Vahl

      Drosera burmanni Vahl N    2003-2007  U  9/2007   C **************************  Drosera burmanni Vahl     PGS.TS.   TS.  ThS.  T 9/2007 iii   , . : PGS., .                       , , ,   ,  . HCM. .  , .  29 . ,  ,  , , , . 9/2007  iv   ,  Drosera burmanni   h,  ,  ,  : - M   D. burmanni Vahl  B5 : NAA (0,2 mg/l)/2,4-D (0,2 mg/l), 20 g/l, PVP (1,25 mg/l) 5,8, . -  ,  D. burmanni in vitro.  Drosera burmanni Vahl. -  : 3,03% so , (2,78%);  2,8%  0,78%;  0,02% (  ), trong khi . v SUMMARY The thesis         Drosera burmanni  was carried out at Plant Biotechnology lab, University of Natural Sciences; and Chromatography room, Research Institute for Biotechnology and Enviromental Technology, University of Agriculture and Forestry, HCM city from March to August, 2007. Results: - Callus of D. burmanni Vahl was cultured successfully by using Gamb 2,4-D (0,2 mg/l), succrose (20g/l), PVP (1,25 mg/l), pH was adjusted to 5,8 before autoclaving. - Column Chromatography and Thin Layer Chromatography were used to purify anthraquinone compound in D. burmanni. This compound was used as authentic sample for HPLC technique. - Roots of D. burmanni contained 3,01% dry weight (DW) of anthraquinone, larger than 2,78% in leaves. - Anthraquinone content of red-leaf D. burmanni Vahl took 0,78% of DW, compared with 2,78% DW in green-leaf trees. - Biomass of D. burmannis suspension contained 0,02% of fresh weight of anthraquinone, while no quantifiable amounts of anthraquinone has been found in spent medium. Ho Chi Minh city, September, 2007. Hoang Thi Thu vi    . .i  . iii  . iv Summary . v  . vi  ix  . x  xii  xiii  1 1.1.  . 1 1.2.  2 1.3.  2 1.4.  2  3 2.1. Drosera burmanni Vahl 3 2.1.1.  3 2.1.2.  . 3 2.1.3.  . 4 2.1.4.  6 2.1.5.  7 2.1.6.  . 8 2.1.7.  11 2.1.8.  12 2.1.8.1.  12 2.1.8.2.  . 12 2.1.8.3.  . 12 2.1.8.4.  14 2.1.8.5.  15 2.1.9.  16  h 17 2.2.1.  . 17 2.2.2.  . 18 2.2.2.1.   . 18 2.2.2.2.  19 2.2.3.  19 2.2.3.1.  . 19 2.2.3.2.  19 vii 2.2.3.3.  . 20 2.2.3.4.  . 20 2.2.3.5.   22 2.2.4.   . 22 2.2.4.1.  . 22 2.2.4.2.  . 22 2.2.4.3.  . 22 2.2.4.4. o . 23 2.2.4.5.  23 2.2.4.6.  23 2.3.  24 2.3.1.   24 2.3.1.1.  24 2.3.1.2.  . 26 2.3.1.3.  . 27 2.3.2.  . 28   31  31 3.1.  . 31 3.1.1.  31 3.1.2.  33 3.1.2.1.  33 3.1.2.2.  . 34 3.1.2.3. 3: 2,4- . 35 3.1.2.4.  . 36 3.1.2.5.   37 3.2.  D. burmanni 38 3.2.1.  38 3.2.2.  39 in vitro  40  40  . 40  . 40  . 41 viii ong  . 41 in vitro 43   . 44  45  . 45 -  46 4.1.  . 46  46   . 48 4.1.3. 3: 2,4- . 49  . 54 4.1.5. 5:  56 4.2.  D. burmanni 58 4.3.  . 59  . 59  . 61 in vitro 62  64  . 66   . 68 5.1.  . 68 5.1.1.   68 5.1.2.  . 68 5.2.  69  . 70  ix  2,4-D : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid BAP : 6-benzylaminopurine CRD : Completely Randomized Design ()  HPLC : High Performane Liquid Chromatography () IAA : 3-indolyl-acetic acid IBA : 3-indolebutyric acid MS : Murashige & Skoog, 1962 NAA : naphthalene acetic acid PVP : poly vinyl pyrrolidone TCL : Thin Cell Layer () TLC : Thin Layer Chromatography () x  TRANG Drosera burmanni  4 nh  Drosera burmanni Vahl 4 D. burmanni 5 nh 2.4. D. burmanni Vahl  . 7  10 2.6. Drosera  . 15  . 21  . 21 2.9.  . 24 2.10.  . 26  . 27 2.12.  29 D. burmanni in vitro 31 4.1. D.burmanni  5 (0,2 mg/l) 2,4- i . 52 4.2.  D. burmanni 5  (0,2 mg/l) 2,4-D  . 53  55   . 55  55 4.4.   D. burmanni 57 pm . 60  . 60 [...]... thành công, đề tài: “KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ SẸO TẠO DỊCH HUYỀN PHÙ CÂY Drosera burmanni Vahl TRONG THU NHẬN HỢP CHẤT ANTHRAQUINONE ” đã ra đời 1.2 Mục tiêu  Khảo sát khả năng tạo mô sẹo từ cây Drosera burmanni Vahl  Khảo sát khả năng tạo dịch huyền phù tế bào cây Drosera burmanni Vahl  Khảo sát hàm lƣợng hợp chất quinone thu đƣợc từ nuôi cấy dịch huyền phù... từ cây [12] Hồ Thụy Bích Tuyền (2006) ly trích và khảo sát hoạt tính sinh học của hợp chất quinone từ cây Drosera burmanni Vahl nuôi cấy in vitro [3] Nguyễn Đa ̣i Hải (2006) đã n uôi cấ y mô cây bắ t ruồ i (Drosera burmanni Vahl) và khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của hợp chất chiết thô plumbagin [5]  Thế giới K Javaram và M N V Prasad (2005) đã công bố nhân nhanh chồi cây Drosera burmanni. .. nƣớc Đỗ Đăng Giá p (2003) đã khảo sát, thu thập, thuần dƣỡng và thử nghiệm in vitro những loài cây bắt mồi ở khu bảo tồn thiên nhiên Bình Châu - Phƣớc Bửu [1] Trần Thị Bích Chiêu (2004) khảo sát vòng đời và tái tạo chồi từ phát hoa cây Drosera burmanni Vahl [13] Quách Ngô Diễm Phƣơng (2006) hoàn thiện qui trình nuôi cấy in vitro cây Drosera indica L và khảo sát hoạt tính sinh học... h Ghi chú Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl Khu vực không có sự hiện diện của Drosera burmanni Vahl Hình 2.1: Khu vực phân bố của Drosera burmanni Vahl trên thế giới [30] 2.1.3 Mô tả hình thái Drosera burmanni Vahl là loài cây cỏ, cao 5 - 30 cm, có nhiều màu sắc khác nhau: xanh lá, xanh đậm, xanh có ánh vàng với lông tuyến màu đỏ hay toàn cây màu đỏ [6], [15], [33], [35]... sinh ra những cây bé xíu (cây mầm) Thu thập những cây mầm này và trồng thành những cây mới Một cách để thu thập cây mầm là giữ những chậu chứa cây trút ngƣợc xuống 1 tờ giấy và dùng tăm gạt cây mầm ra khỏi cây mẹ Gieo chúng trên hỗn hợp đất Cây sẽ mọc rễ và phát triển thành cây trƣởng thành  Nhân giống in vitro Hầu hết những nghiên cứu trên thế giới về nuôi cấy mô Drosera đều cho... thực vật thì mô sẹo hình thành Khối mô sẹo có khả năng tái sinh thành cây hoàn chỉnh trong điều kiện môi trƣờng không có chất kích thích tạo mô sẹo [7] 2.2.2.2 Ứng dụng của nuôi cấy mô sẹo - Nhân giống in vitro các loài thực vật mà phƣơng pháp nhân giống đỉnh sinh trƣởng ít hiệu quả hay khó thực hiện - Nghiên cứu quá trình hình thành cơ quan - Làm nguồn nguyên liệu để nuôi cấy tế bào... 4.10 Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D burmanni đƣợc xử lý theo quy trình A 61 Hình 4.11 Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D burmanni đƣợc xử lý theo quy trình B 61 Hình 4.12 Sắc ký đồ HPLC của mẫu rễ cây D burmanni Vahl 63 Hình 4.13 Sắc ký đồ HPLC của mẫu thân lá cây D burmanni Vahl 63 Hình 4.14 Sắc ký đồ HPLC của mẫu cây D burmanni Vahl có sắc tố đỏ 65 Hình... các phƣơng pháp nuôi cấy mô, nuôi cấy tế bào in vitro không những góp phần vào việc sản xuất và thu nhận mà còn giúp ta đảm bảo đƣợc một cách chủ động số lƣợng các hợp chất có giá trị trị liệu Ở Việt Nam, ngƣời ta đã thu thập đƣợc 3 loài Drosera trong đó Drosera burmanni Vahl gần đây đã đƣợc nghiên cứu về việc thu nhận hợp chất quinone từ nuôi cấy in vitro, khảo sát hoạt tính... MS 1/2 bổ sung 0,2 M BA và 0,2 M NAA Môi trƣờng lỏng làm gia tăng đáng kể khả năng nhân chồi của mẫu cấy D anglica và D binata [25] 17 Ingrid L I Hook (2001) đã nuôi cấy D binata, D rotundifolia, D capensis trong cả môi trƣờng MS lỏng và có agar; nuôi cấy dịch huyền phù D rotundifolia trên môi trƣờng Gamborg’s B5; nuôi dịch huyền phù D capensis trong môi trƣờng MS và McCowns Woody Plant... chiết từ Drosera 9 Bảng 2.3 Dƣợc tính và một số hoạt tính ứng dụng khác của dịch chiết Drosera .13 Bảng 3.1 Bố trí nghiệm thức khảo sát ảnh hƣởng thành phần khoáng và nồng độ đƣờng lên sự phát triển mẫu cấy lớp mỏng 33 Bảng 3.2 Bố trí nghiệm thức khảo sát sự kết hợp 2 loại hormone thích hợp cho việc kích ứng tạo mô sẹo 34 Bảng 3.3 Bố trí nghiệm thức khảo .       Drosera burmanni Vahl        Drosera burmanni Vahl A F E D C B 5  .  Drosera burmanni Vahl TRONG   1.2.    Drosera burmanni