Chọn lọc chất phụ gia tạo chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học từ nuclear polyhedrosis virus npv kiểm soát sâu khoang ăn tạp

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP HCM ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP CHỌN LỌC CHẤT PHỤ GIA TẠO CHẾ PHẨM THUỐC TRỪ SÂU SINH HỌC TỪ NUCLEAR POLYHEDROSIS VIRUS (NPV) KIỂM SOÁT SÂU KHOANG ĂN TẠP (Spodoptera litura FAB.) Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực MSSV: 0851110110 : NGUYỄN THANH LÂM Lớp: 08DSH2 TP Hồ Chí Minh, 2012 Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu cá nhân hướng dẫn Cô Nguyễn Thị Hai Những kết số liệu đồ án trung thực chưa công bố hình thức Tơi hồn tồn chịu trách nhiệm trước nhà trường hội đồng cam đoan Tp Hồ Chí Minh, ngày 21 tháng 07 năm 2012 Sinh viên Nguyễn Thanh Lâm i Đồ án tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Để hồn thành chương trình đào tạo kỹ sư Cơng nghệ sinh học trường Đại học Kỹ thuật Công nghệ thành phố Hồ Chí Minh Con xin khắc ghi cơng ơn sâu sắc cha, mẹ người thân gia đình ln ủng hộ động viên suốt đoạn đường dài tinh thần tạo điều kiện tốt cho học tập Em xin gởi lời tri ân sâu sắc đến Cơ Nguyễn Thị Hai, Cơ dạy tận tình tạo điều kiện cho em trình học tập thực đồ án tốt nghiệp Em xin gởi lời cám ơn chân thành đến Thầy Hồng Hưng, Thầy Nguyễn Tiến Thắng, Cơ Nguyễn Hồi Hương, Cô Nguyễn Thị Sáu, Cô Đỗ Thị Tuyến, Thầy Bùi Đức Chí Thiện, Thầy Bùi Văn Thế Vinh, Thầy Phạm Minh Nhựt, Cô Trịnh Thị Lan Anh, Cô Nguyễn Thị Thu Hương nhiều thầy cô cho em học lý thú bổ ích Em xin cám ơn Thầy Huỳnh Văn Thành, Thầy Nguyễn Trung Dũng tổ thí nghiệm khoa Mơi trường Cơng nghệ sinh học tạo điều kiện cho em tiến hành thực nghiệm nội dung nghiên cứu đồ án Xin gởi lời chia đến bạn Trần Hữu Ý, Võ Thị Mai, Phạm Thị Thùy Dương, Hồ Hoàng Đăng Khoa, Nguyễn Thị Tiền, Mai Thị Huỳnh Trân, Trần Mộng Hương Duyên, Lê Thị Mận đồng hành trình học tập thực đồ án tốt nghiệp Tp Hồ Chí Minh, ngày 21 tháng 07 năm 2012 Sinh viên Nguyễn Thanh Lâm ii Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG viii DANH MỤC HÌNH ix MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Phạm vi đối tượng nghiên cứu 3.1 Phạm vi nghiên cứu 3.2 Đối tượng nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cơ sở khoa học đề tài 1.2 Virus đa diện nhân NPV 1.2.1 Sơ lược virus đa diện nhân NPV 1.2.2 Vai trò virus đa diện nhân NPV tự nhiên 1.2.3 Cơ chế tác động virus đa diện nhân NPV 10 1.2.4 Ưu điểm nhược điểm virus đa diện nhân NPV 11 iii Đồ án tốt nghiệp 1.3 Quy trình sản xuất chế phẩm virus đa diện nhân NPV 12 1.3.1 Nhân sâu hàng loạt 12 1.3.2 Lây nhiễm virus đa diện nhân NPV lên vật chủ tạo chế phẩm 12 1.4 Sơ lược sâu khoang 14 1.4.1 Đặc điểm sinh học, sinh thái sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 14 1.4.2 Tác hại biện pháp phòng trừ sâu khoang Việt Nam 16 1.5 Những nghiên cứu giới Việt Nam sử dụng chất phụ gia bảo vệ virus NPV 18 1.5.1 Những nghiên cứu giới 18 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 21 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Thời gian thực đề tài 22 2.2 Địa điểm thực đề tài 22 2.3 Dụng cụ vật liệu thí nghiệm 22 2.3.1 Dụng cụ thí nghiệm 22 2.3.2 Vật liệu thí nghiệm 22 2.4 Nội dung nghiên cứu 24 3.5 Phương pháp nghiên cứu 24 2.5.1 Dịch virus NPV bổ sung lượng nhỏ thuốc trừ sâu 24 2.5.2 Dịch NPV virus bổ sung Tween 80, rỉ đường 27 2.5.3 Dịch virus NPV bổ sung bột ngô, bột đậu nành 28 iv Đồ án tốt nghiệp 2.5.4 Dịch virus NPV bổ sung chất lọc tia cực tím tác dụng động ánh sáng mặt trời 30 2.5.5 Dịch virus NPV bổ sung bột cao lanh số chất phụ gia 32 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 33 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Tìm hiểu hiệu lực virus NPV bổ sung hoạt chất hóa học 34 3.1.1 Đánh giá hiệu lực virus NPV bổ sung thuốc trừ sâu nhóm Cypermethrin (Sherpa 25EC) 34 3.1.2 Đánh giá hiệu lực virus NPV bổ sung thuốc trừ sâu nhóm Abamectin (Alibaba 1.8EC) 36 3.1.3 Đánh giá hiệu lực virus NPV bổ sung acid boric 37 3.2 Ảnh hưởng Tween 80, rỉ đường tăng cường hiệu lực diệt sâu virus NPV 40 3.2.1 Ảnh hưởng Tween 80 virus NPV 40 3.2.2 Ảnh hưởng rỉ đường virus NPV 40 3.3 Ảnh hưởng bột ngô bột đậu nành tăng cường hiệu lực diệt sâu virus NPV 41 3.3.1 Ảnh hưởng bột ngô virus NPV tăng khả diệt sâu khoang 41 3.3.2 Ảnh hưởng bột đậu tương virus NPV tăng khả diệt sâu khoang 42 3.4 Tìm hiểu khả lọc tia cực tím bảo vệ virus NPV trà xanh rỉ đường trì hiệu lực diệt sâu virus NPV 42 3.4.1 Chọn lọc tỷ lệ rỉ đường thích hợp bảo vệ virus NPV 42 3.4.2 Chọn lọc nồng độ trà xanh thích hợp bảo vệ virus NPV 44 v Đồ án tốt nghiệp 3.5 Đánh giá hiệu lực virus NPV bổ sung bột cao lanh số chất phụ gia 45 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận 47 4.2 Kiến nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHAO 49 PHỤ LỤC -1Phụ lục A: Các hình ảnh minh họa -1Phụ lục B: Bảng xử lý thống kê Statgraphics -7- vi Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BVTV : Bảo vệ thực vật FAO : Tổ chức nông lương quốc tế IPM : Quản lý dịch hại tổng hợp LE : Sâu chết bệnh NPV (Larval equipveilent) NPV : Virus đa diện nhân ký sinh sâu PIB : Hạt thể vùi đa diện vii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Cypermethin vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 34 Bảng 3.2: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Abamectin vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 36 Bảng 3.3: Ảnh hưởng việc bổ sung acid boric vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 39 Bảng 3.4: Ảnh hưởng việc bổ sung Tween 80 vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 40 Bảng 3.5: Ảnh hưởng việc bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 41 Bảng 3.6: Ảnh hưởng việc bổ sung bột ngô vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 42 Bảng 3.7: Ảnh hưởng việc bổ sung bột đậu nành vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 42 Bảng 3.8: Ảnh hưởng việc bổ sung cao lanh vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 46 viii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Sơ đồ sản chế phẩm HaNPV phịng trừ sâu xânh 14 Hình 1.2: Sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 15 Hình 3.1: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Cypermethrin vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 35 Hình 3.2: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Abamectin vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 37 Hình 3.3: Ảnh hưởng việc bổ sung Acid boric vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 39 Hình 3.4: Ảnh hưởng việc bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 41 Hình 3.5: Ảnh hưởng việc bổ sung trà xanh vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 43 Hình 1: NPV kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần -1Hình 2: Chuẩn bị sâu khoang thí nghiệm -1Hình 3: Lá thầu dầu chuẩn bị sơ -2Hình 4: Lá thầu dầu cảm nhiễm NPV phương pháp nhúng -2Hình 5: Mẫu thí nghiệm bổ sung rỉ đường lọc tia cực tím ánh sáng mặt trời -3Hình 6: Mẫu thí nghiệm bổ sung bột ngô, Tween 80, rỉ đường tăng cường khả ăn sâu khoang tăng độ bám dính lên NPV -3Hình 7: Mẫu thí nghiệm NPV bổ sung Sherpa 25EC -4Hình 8: Sâu khoang chết NPV -4- ix Đồ án tốt nghiệp 3.1 Dịch NPV bổ sung lượng nhỏ thuốc trừ sâu 3.1.1 Đánh giá hiệu lực virus NPV bổ sung thuốc trừ sâu nhóm Cypermethrin (Sherpa 25EC) Đối với sâu khoang Spodoptera litura ăn nhiều loại rau họ thập tự loại đậu đỗ có khả kháng nhanh với loại thuốc hóa học (Đỗ Bích Vân, 2010) [17] Nên virus đa diện nhân NPV phân lập nghiên cứu tạo chế phẩm chuyển giao cho nông dân sử dụng quản lý loại sâu hại Tuy nhiên hạn chế NPV làm cho chế phẩm chưa sử dụng rộng rãi hiệu lực trừ sâu chưa cao, thời gian sâu chết bệnh cịn dài (Ngơ Trung Sơn, 1998) [6] Để hạn chế nhược điểm NPV cao hiệu lực rút ngắn thời gian sâu chết bệnh, sinh viên tiến hành nghiên cứu bước đầu bổ sung hoạt chất Cypermethrin để trừ sâu khoang Kết thí nghiệm cho thấy bổ sung với liều lượng 100 ppm Cypermethrin tỷ lệ sâu chết bệnh NPV lên 96,58% so với sử dụng NPV đơn độc 91,40% chế phẩm Sherpa 25EC chứa hoạt chất Cypermethrin 93,07% Bảng 3.1: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Cypermethin vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) sau ngày STT Công thức Tỷ lệ sâu chết (%) Hiệu lực diệt sâu (%) 91,40 ± 2,90a 93,07 ± 3,12a CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) 91,67 CT2: Sherpa 25EC (30ml/16L 93,33 nước) CT3: NPV + Cypermethin (5,8 x 96,67 96,58 ± 2,96a 10 PIB/ml + 100 ppm Cypermethin) CT4: Đối chứng (nước cất) Bên cạnh việc cao hiệu lực diệt sâu, hoạt chất Cypermethin giúp rút ngắn thời gian chết bệnh NPV Để đạt hiệu lực 91,40% chế phẩm NPV không bổ sung hoạt chất Cypermethin phải thời gian ngày (thời gian theo dõi 34 Đồ án tốt nghiệp thí nghiệm), chế phẩm NPV có bổ sung 100 ppm Cypermethin ngày (thời gian theo dõi thí nghiệm) đạt hiệu lực 96,58% Tuy nhiên thời gian chết bệnh chế phẩm NPV có bổ sung Cypermethrin cịn kéo dài so với việc sử dụng Sherpa 25EC ngày đạt hiệu lực 93,07% (thời gian theo dõi thí nghiệm) CHẾ PHẨM NPV BỔ SUNG HOẠT CHẤT CYPERMETHRIN 120 100 Hiệu lực 80 NPV 60 Sherpa 25EC NPV + Cypermethrin 40 20 Ngày Hình 3.1: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Cypermethin vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) Kết nghiên cứu cho thấy trùng khớp với kết nghiên cứu Trang Chaudhari Ấn Độ vào năm 2002 Sự khác biệt cơng thức hiệu lực diệt sâu khơng có ý thống kê Tuy nhiên rút ngắn thời gian ủ bệnh ký chủ cơng thức khác biệt có ý nghĩa thống kê độ tin cậy 95% 3.1.2 Đánh giá hiệu lực virus NPV bổ sung thuốc trừ sâu nhóm Abamectin (Alibaba 1.8EC) 35 Đồ án tốt nghiệp Nhầm rút ngắn thời gian chết bệnh NPV cao hiệu lực diệt sâu khoang ăn tạp Sinh viên bước đầu nghiên cứu bổ sung hoạt chất Abamectin vào chế phẩm NPV Kết hiệu lực chế phẩm có bổ sung Abamectin đạt 91,40% sau ngày (thời gian theo dõi thí nghiệm) Nhưng cao chế phẩm có NPV, hiệu lực sau ngày (thời gian theo dõi thí nghiệm) 89,96% Tuy nhiên kết thí nghiệm lần khẳng định hiệu việc sử dụng NPV quản lý sâu hại, hiệu lực cao số loại thuốc hóa học, cụ thể thí nghiệm sinh viên sử dụng chế phẩm Alibaba 1.8EC hiệu lực sau ngày (thời gian theo dõi thí nghiệm) đạt 82,61% Bảng 3.2: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Abamectin vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) STT Công thức Tỷ lệ sâu chết (%) 90 83,33 Hiệu lực diệt sâu (%) CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) 89,65 ± 0,31a CT2: Alibaba 1,8EC (20ml/16L 82,81 ± 2,43b nước) CT3: NPV + Abamectin (5,8 x 91,67 91,40 ± 2,90a 107 + 10 ppm Abamectin) CT4: Đối chứng (nước cất) Hoạt chất Abamectin giúp rút ngắn thời gian ủ bệnh sâu khoang, làm sâu chết nhanh Kết nghiên cứu cho thấy thời gian ủ bệnh chế phẩm NPV bổ sung Abamectin rút ngắn ngày so với công thức NPV đơn độc 36 Đồ án tốt nghiệp CHẾ PHẨM NPV BỔ SUNG HOẠT CHẤT ABAMECTIN 100 90 80 70 Hiệu lực 60 NPV 50 Alibaba 1.8EC NPV + Abamectin 40 30 20 10 Ngày Hình 3.2: Ảnh hưởng việc bổ sung hoạt chất Abamectin vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) Sự khác biệt hiệu lực diệt sâu thời gian ủ bệnh công thức sử dụng Alibaba 1.8EC NPV đơn độc có ý nghĩa thống kê độ tin cậy 95% 3.1.3 Đánh giá hiểu hiệu lực virus NPV bổ sung Acid boric [31] Acid Boric (H3BO3) trước sử dụng thuốc trừ sâu để kiểm soát kiến gián (Hayes and Laws, 1991) Gần nhà khoa học chứng minh làm tăng hiệu lực B thuringgiengsis số loài Baculoviruses (Shapiro and Bell, 1982; Morris et al., 1995) Tại Ấn Độ, Bujjur et al 1991, báo cáo kết nghiên cứu việc kiểm soát Helicoverpa armigera hướng dương HaNPV + 0.5% acid boric hiệu tăng gấp lần so việc sử dụng HaNPV báo cáo Chundurwar et al (1990) quan trọng việc kiểm soát H armigera HaNPV + 0.5% acid boric Acid boric làm tăng hiệu lực B 37 Đồ án tốt nghiệp thuringiensis Lepidoptera tương tự quan sát cho Baculoviruses (Doane and Wallis, 1964; Govindarajan et al., 1976; Morris et al.) Mặc dù hiệu thực tế acid boric Baculoviruses cơng nhận, có nghiên cứu đánh giá hiệu virus NPV trộn acid boric (Yadava, 1970) Theo Juan Cisneros cộng (2002), kết hợp acid boric với công thức Baculoviruses đề xuất hấp dẫn khơng tốn có độc tính thấp với lồi động vật có vú Từ thực tế nghiên cứu nhà khoa học giới, sinh viên bước đầu nghiên cứu bổ sung acid boric vào NPV nhằm mục đích xác định tiềm lực NPV quản lý Spodoptera litura Fab Kết thí nghiệm cho thấy việc bổ sung 1% aicd boric tỷ lệ tử vong sâu khoang ăn tạp tăng lên so với NPV đơn độc Hiệu lực chế phẩm NPV có bổ sung 1% acid boric sau ngày (thời gian theo dõi thí nghiệm) 98,33% cịn cơng thức có NPV hiệu lực đạt 91,67% (thời gian theo dõi thí nghiệm) Cũng thí nghiệm khơng có chứng cho thấy acid boric có tác dụng gây chết Spodoptera litura Kết công thức sử dụng acid boric với nồng độ 1% diệt 8,33% ấu trùng sâu khoang Với kết phù hợp với nghiên cứu Juan Cisneros cộng sự, 2002, thấp báo cáo Shapiro Bell (1982) ấu trùng L Dispar Cho tới thời điểm này, tác động tiềm ẩn acid boric công thức bổ sung vào virus Spodoptera litura Fab chưa biết Nhưng theo giả thuyết Ya-dava (1970) Shapiro and Bell (1982) đưa ra, acid boric ảnh hưởng đến điều kiện hoạt động ruột trùng, cách làm thay đổi tính tồn vẹn màng bao chất dinh dưỡng tế bào lớp biểu bì ruột Ngồi ra, độc tính acid boric gây căng thẳng sinh lý trùng (Juan Cisneros cộng sự, 2002) Bảng 3.3: Ảnh hưởng việc bổ sung acid boric vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 38 Đồ án tốt nghiệp Công thức STT Tỷ lệ sâu chết (%) 91,67 93,33 Hiệu lực diệt sâu (%) CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) 91,40 ± 2,90a CT2: Sherpa 25EC (30ml/16L 91,31 ± 3,19a nước) CT3: NPV + Acid Boric (5,8 x 98,33 96,49 ± 3,04a 10 + 1% A.Boric) CT4: Acid Boric 1% 8,33 5,19 ± 5,01b CT5: Đối chứng (nước cất) Tuy nhiên việc bổ sung acid boric không làm rút ngắn thời gian chết bệnh NPV so với công thức không bổ sung acid boric CHẾ PHẨM NPV BỔ SUNG ACID BORIC 120 100 Hiệu lực 80 NPV Sherpa 25EC 60 NPV + Acid boric Acid boric 40 20 Ngày Hình 3.3: Ảnh hưởng việc bổ sung Acid boric vào chế phẩm NPV đến thời gian ủ bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) Kết xử lý thống kê cho thấy hiệu lực diệt sâu công thức NPV đơn độc NPV bổ sung acid boric khơng có khác biệt mức nghĩa 95% Kết chưa 39 Đồ án tốt nghiệp cho thấy rõ tìm acid boric Nên ngược lại kết luận Juan Cisneros cộng (2002), báo cáo trước nhiều nhà khoa học Nguyên nhân sử dụng nồng độ NPV cao 5,8x107 PIB/ml, nên làm tỷ lệ chết bệnh sâu khoang công thức NPV đơn độc tương đương với công thức NPV bổ sung acid boric 3.2 Ảnh hưởng Tween 80, rỉ đường tăng cường hiệu lực diệt sâu khoang virus NPV 3.2.1 Tìm hiểu ảnh hưởng Tween 80 virus NPV đến khả diệt sâu khoang Khi phun NPV tự nhiên, hiệu lực diệt sâu khoang chúng bị giảm ảnh hưởng nhiều yếu, song yếu tố rửa trơi khả bám dính lên đặc biệt cần quan tâm Nên sinh viên bước đầu tiến hành thí nghiệm đánh giá hiệu lực NPV bổ sung Tween 80 tăng khả bám dính Qua kết nghiên cứu bảng 4.4 ảnh hưởng việc bổ sung Tween 80 vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết sâu khoang có khác biệt cơng thức NPV NPV có bổ sung Tween 80 Nếu sử dụng NPV tỷ lệ chết Spodoptera litura đạt 91,25% bổ sung thêm 1% Tween 80 tỷ lệ chết đạt 95% Bảng 3.4: Ảnh hưởng việc bổ sung Tween 80 vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) STT Công thức Tỷ lệ sâu chết (%) 91,25 95 Hiệu lực diệt sâu (%) CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) 92,17 ± 3,12a CT2: NPV + Tween 80 (5,8 x 107 96,06 ± 2,63a + 1% Tween 80) CT5: Đối chứng (nước cất) 3.2.2 Tìm hiểu ảnh hưởng rỉ đường virus NPV đến khả diệt sâu khoang 40 Đồ án tốt nghiệp Qua kết nghiên cứu bảng 4.5 ảnh hưởng việc bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết sâu khoang có khác biệt cơng thức NPV NPV có bổ sung rỉ đường Nếu sử dụng NPV tỷ lệ chết Spodoptera litura đạt 88,42% bổ sung thêm 3% rỉ đường tỷ lệ chết đạt 97,43% Bảng 3.5: Ảnh hưởng việc bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) Công thức STT Tỷ lệ sâu chết (%) 88,75 97,50 Hiệu lực diệt sâu (%) CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) 88.42 ± 2,82b CT2: NPV + rỉ đường (5,8 x 107 94,87 ± 4,30a + 3% rỉ đường) CT5: Đối chứng (nước cất) 3.3 Ảnh hưởng bột ngô, bột đậu nành tăng cường hiệu lực diệt sâu khoang virus NPV 3.3.1 Tìm hiểu ảnh hưởng bột ngô virus NPV đến khả diệt sâu khoang Kết nghiên cứu tác giả điều khẳng định sâu khoang mẫn cảm với NPV, sâu tuổi nhỏ mẫn cảm với NPV sâu tuổi lớn, nồng độ, liệu lượng NPV tăng tỷ lệ sâu chết tăng lên (Senthil Kumar, N Sathiah and R J Rabindra, 2005, B S Ravishankar and M G Venkatesha, 2010, C M.) Từ thực tế nghiên cứu trước sinh viên bước đầu nghiên cứu bổ sung bột ngô vào chế phẩm NPV để kích thích sâu khoang ăn tăng lượng PIB vào thể sâu, tăng tỷ lệ sâu chết rút ngắn thời gian ủ bệnh Qua kết nghiên cứu bảng 4.6 ảnh hưởng việc bổ sung bột ngô vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết sâu khoang có khác biệt cơng thức NPV NPV có bổ sung bột ngơ Nếu sử dụng NPV tỷ lệ chết Spodoptera litura đạt 89,87% bổ sung thêm 3% bột ngô tỷ lệ chết đạt 97,43% 41 Đồ án tốt nghiệp Bảng 3.6: Ảnh hưởng việc bổ sung bột ngô vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) Công thức STT Tỷ lệ sâu chết (%) 90 97,5 Hiệu lực diệt sâu (%) CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) 89,87 ± 6,95a CT2: NPV + Bột ngô (5,8 x 107 + 97,44 ± 2,96a 3% bột ngô) CT5: Đối chứng (nước cất) 3.2.2 Tìm hiểu ảnh hưởng bột đậu nành virus NPV đến khả diệt sâu khoang Qua kết nghiên cứu bảng 4.7 ảnh hưởng việc bổ sung bột đậu nành vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết sâu khoang có khác biệt cơng thức NPV NPV có bổ sung bột ngơ Nếu sử dụng NPV tỷ lệ chết Spodoptera litura đạt 91,25% bổ sung thêm 3% bột đậu nành tỷ lệ chết đạt 98,75% Bảng 3.7: Ảnh hưởng việc bổ sung bột đậu nành vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) STT Công thức Tỷ lệ sâu chết (%) 91,25 98,75 Hiệu lực diệt sâu (%) CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) 90,99 ± 2,69b CT2: NPV + đậu nành (5,8 x 107 98,69 ± 2,63a + 3% đậu nành) CT5: Đối chứng (nước cất) 3.4 Tìm hiểu khả lọc tia cực tím bảo vệ virus NPV trà xanh rỉ đường trì hiệu lực diệt sâu virus NPV 3.4.1 Khảo sát tỷ lệ rỉ đường thích hợp phối trộn với virus NPV Theo kết nghiên cứu Ngô Trung Sơn cộng (1991) Ninh Thuận cho thấy sau phun ruộng ngày, NPV bị hiệu lực hoàn toàn ánh sáng mặt trời [6] Nguyên nhân tia cực tím ánh sáng mặt trời tiêu 42 Đồ án tốt nghiệp diệt NPV (Maiorov, V.I cộng sự, 1984) [27] Theo nhiều nhà khoa học, tự nhiên có nhiều chất có khả lọc tia cực tím ánh sáng mặt trời, chúng có khả bảo vệ NPV phun ngồi tự nhiên Tiếp theo cơng trình nghiên cứu Ngơ Trung Sơn (1991) Nguyễn Hồng Nam (2011), sinh viên tiếp tục tiến hành thí nghiệm bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV Kết thí nghiệm sơ đồ hình 4.1 cho thấy: tất khoảng thời gian để tự nhiên, tỷ lệ sâu khoang chết NPV công thức bổ sung rỉ đường cao công thức không rỉ đường CHẾ PHẨM NPV BỔ SUNG RỈ ĐƯỜNG LỌC TIA CỰC TÍM 90 a b 80 c a 70 Hiệu lực 60 b a d c b 50 NPV NPV-3 NPV-5 NPV-7 c 40 d d 30 20 10 Ngày Hình 3.4: Ảnh hưởng việc bổ sung rỉ đường vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) Tuy nhiên, ảnh hưởng tỷ lệ rỉ đường khác đến hiệu lực NPV khác Trong thí nghiệm sinh viên sử dụng tỷ lệ rỉ đường 3%, 5%, 7%, 43 Đồ án tốt nghiệp qua kết thí nghiệm cho thấy tỷ lệ 5% cho kết tốt qua móc thời gian ngày, ngày, ngày đạt hiệu lực 81,40%, 72,89%, 63,16% Kế tiếp tỷ lệ 7% đạt hiệu lực 76,23%, 64,39%, 51,63% Hiệu lực thấp tỷ lệ 3% kết đạt 69,47%, 54,21%, 42,11% Kết sử dụng tỷ lệ 3% phù hợp với kết nghiên cứu Ngơ Trung Sơn (1991) cịn tỷ lệ 5% 7% hiệu lực cao nghiên cứu tác giả cộng Kết phù hợp với nghiên cứu trước Ignffo, C.M et al (1971) Rabindra, R.J (1988) rỉ đường có tác dụng lọc tia cực tím, trì hiệu lực trừ sâu NPV [30] Cịn nguyên nhân tỷ lệ 5% cho kết tơt 3% 7%, cần có ngun cứu sâu ảnh hưởng tỷ lệ rỉ đường đến khả ăn sâu khoang, hay tỷ lệ sống sót NPV 3.4.1 Khảo sát tỷ lệ trà xanh thích hợp phối trộn với virus NPV Tiếp theo cơng trình nghiên cứu Nguyễn Hồng Nam (2011), sinh viên tiếp tục tiến hành thí nghiệm bổ sung trà xanh vào chế phẩm NPV Kết thí nghiệm hình 4.2 cho thấy: tất khoảng thời gian để tự nhiên, tỷ lệ sâu khoang chết NPV công thức bổ sung trà xanh cao công thức không trà xanh Tuy nhiên, ảnh hưởng nồng độ trà xanh khác đến hiệu lực NPV khác Tăng nồng độ trà xanh cố định nồng độ virus nhất, tỷ lệ tử vong Spodoptera litura tỷ lệ thuận với nồng độ tăng Trong thí nghiệm sinh viên sử dụng nồng độ trà xanh 2%, 4%, 6%, qua kết thí nghiệm cho thấy nồng độ 6% cho kết tốt qua móc thời gian ngày, ngày, ngày đạt hiệu lực 86,40%, 86,40%, 84,21% Kế tiếp nộng độ 4% đạt hiệu lực 84,82%, 82,98%, 78,95% Hiệu lực thấp nộng độ 2% kết đạt 79,65%, 77,98%, 73,68% Kết sử dụng nồng độ 2% phù hợp với kết nghiên cứu Nguyễn Hoàng Nam (2011) nồng độ 4% 6% hiệu lực cao 44 Đồ án tốt nghiệp CHẾ PHẨM NPV BỔ SUNG TRÀ XANH LỌC TIA CỰC TÍM 120 100 a a a a a b b a b Hiệu lực 80 NPV NPV-2 NPV-4 NPV-6 c 60 c 40 c 20 Ngày Hình 3.5: Ảnh hưởng việc bổ sung trà xanh vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) 3.5 Đánh giá hiệu lực virus NPV bổ sung bột cao lanh số chất phụ gia Đối với sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura) sâu xanh da láng (S exigua) ăn rau đậu kháng thuốc nhanh nên chế phẩm từ vi rút NPV (Nucleopolyhedrovirus) phân lập (SpltNPV cho sâu ăn tạp) bước đầu sản xuất để chuyển giao cho nông dân sử dụng chỗ khó sản xuất chế phẩm dạng khơ (Đỗ Bích Vân, 2010) [17] Còn theo Nguyễn Văn Huỳnh (2012) nhược điểm để chế phẩm chưa sử rộng rãi thị trường thời gian bảo quản ngắn [17] Nhược điểm thời gian bảo quản ngắn chế phẩm NPV dạng lỏng nhà khoa học giới khắc phục đường nghiên cứu tạo chế phẩm dạng bột để 45 Đồ án tốt nghiệp kéo dài thời bảo quản Năm 2002, Juan Cisneros cộng nghiên cứu tạo chế phẩm NPV dạng bột với chất mang bột ngô thử nghiệm cánh đồng ngơ Mexico kiểm sốt Spodoptera frugiperda [31] Các thí nghiệm ngồi đồng với tỷ lệ sử dụng thích hợp xác định 24Kg/ha (J Cisneros and T.Williams,2002) Hạt có chứa 25x1012 PIB/ Kg hạt tương đương 1,5x1012 PIB/ha tỷ lệ ứng dụng tiêu chuẩn xác định nguyên cứu trước (Martı´nez et al., 2000) [31] Cũng từ thực tế nghiên cứu nhà khoa học, nên sinh viên bước đầu nghiên cứu bổ sung bột cao lanh yếu tố hút ẩm bảo vệ NPV, nhằm kéo dài thời gian tồn chúng Trong thí nghiệm sinh viên tiến hành với công thức (i) NPV đơn độc, (ii) NPV bổ sung cao lanh, (iii) NPV bổ sung cao lanh chất phụ gia Qua kết nghiên cứu bảng 4.8 cho thấy cơng thức bổ sung cao lanh khơng có tiềm lực tăng tỷ chết bệnh NPV so với công thức NPV Nhưng cơng thức có bổ sung thêm chất phụ gia hiệu lực diệt sâu tăng lên đáng kể kết đạt 100% tỷ lệ sâu chết bệnh NPV, so với cơng thức NPV NPV bổ sung cao lanh đạt 91,40% 93,16% Bảng 3.8: Ảnh hưởng việc bổ sung cao lanh vào chế phẩm NPV đến tỷ lệ chết bệnh sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) STT Công thức CT1: NPV (5,8 x 107 PIB/ml) CT2: NPV + Cao lanh (5,8 x 107 PIB/ml + 10% cao lanh) CT3: NPV + Cao lanh + Phụ gia (5,8 x 107 PIB/ml + 10% + 3% bột ngô + 5% rỉ đường + 1% acid boric) CT4: Đối chứng (nước cất) Tỷ lệ sâu chết (%) 91,67 93,33 Hiệu lực diệt sâu (%) 100 100 ± 0,00a - - 46 91,40 ± 2,90b 93,16 ± 2,74b Đồ án tốt nghiệp 4.1 Kết luận Bổ sung hoạt chất hóa học vào chế phẩm NPV khơng tăng tỷ lệ chết bệnh sâu khoang Spodoptera litura mà rút ngắn thời gian ủ bệnh Nếu sử dụng chế phẩm NPV đơn độc hiệu lực đạt 91,40%, có bổ sung 100 ppm Cypermethrin hiệu lực đạt 96,58% Thời gian chết ký chủ rút ngắn thay ngày cơng thức NPV cơng thức có bổ sung lượng nhỏ hoạt chất Cypermethrin ngày Hiệu lực chế phẩm NPV cao chế phẩm Alibaba 1.8EC ngang với chế phẩm Sherpa 25EC Bổ sung acid boric vào chế phẩm NPV không làm rút ngắn thời gian ủ bệnh ký chủ Rỉ đường Tween 80 có khả làm tăng hiệu lực diệt sâu chế phẩm NPV, nhiên rỉ đường cho kết tốt Tween 80 Bột ngơ bột đậu nành có khả làm tăng hiệu lực diệt sâu khoang chế phẩm NPV Nếu chế phẩm NPV có bổ sung 3% bột ngơ 3% bột đậu nành hiệu lực đạt lần lược 97,44 98,69% so với công thức NPV đơn độc 89,87 90,99% Chế phẩm NPV dễ bị hiệu lực tia cực tím ánh sáng mặt trời Nếu phơi nắng ngày hiệu lực 52,46% cịn phơi nắng ngày hiệu lực lại 26,32% so với chế phẩm không phơi nắng 90% Trộn thêm chất phụ gia: rỉ đường, trà xanh, có khả hạn chế ảnh hưởng xấu tia cực tím NPV Tuy nhiên, ảnh hưởng tỷ lệ rỉ đường nồng độ trà xanh khác đến khả bảo vệ NPV khác Sử dụng tỷ lệ rỉ đường 5% nồng độ trà xanh 6% cho kết tốt 47 Đồ án tốt nghiệp Cao lanh có khả hút ẩm tốt, nên sử dụng chất mang bảo vệ NPV chế phẩm NPV dạng bột Tuy nhiên cao lanh khơng có tiềm lực tỷ lệ chết sâu khoang, không làm giảm hiệu lực chế phẩm NPV 4.2 Kiến nghị Khảo sát tỷ lệ thích hợp hoạt chất Cypermethrin, acid boric, bột ngơ, bột đậu tương, phối trộn với NPV, để chế phẩm đạt hiệu lực diệt sâu tốt Tiến hành đánh giá hiệu lực chế phẩm NPV có bổ sung chất phụ gia tốt lựa chọn quy mơ chậu ngồi đồng Khảo sát ảnh hưởng chất phụ gia đến khả sống sót NPV thời gian bảo quản Hồn thiện quy trình sản xuất chế phẩm NPV có bổ sung chất phụ gia tốt lựa chọn 48 ... từ thực tế trên, sinh viên tiến hành: ? ?Chọn lọc chất phụ gia tạo chế phẩm thuốc trừ sâu sinh học từ Nuclear polyhedrosis virus (NPV) quản lý sâu khoang ăn tạp (Spodoptera litura Fab.)” nhằm chọn. .. chọn lọc chất phụ gia thích hợp kết hợp với NPV làm tăng cường hiệu lực diệt sâu khoang chế phẩm Mục tiêu đề tài Để sản xuất sử dụng NPV quản lý Spodopera litura có hiệu quả, phải chọn lọc chất phụ. .. nghĩa khoa học thực tiễn đề tài - Cung cấp số liệu ban đầu khả diệt sâu khoang (Spodoptera litura Fab.) NPV có bổ sung chất phụ gia, để làm sở lựa chọn chất phụ gia thích hợp tạo chế phẩm NPV sử