1.3.4.1 Samonella spp
Hình thái học
Khả năng gây bệnh
Hình thái học
Clostridium perfingens vi khuẩn gram dương (+) hình gậy,ngắn kị khí không bắt buộc, ít tạo bào tử ( bào tử hình bầu dục ), không chuyển động.
Khả năng gây bệnh
Clostridium perfingens có khả năng tạo nhiều loại độc tố. Dựa vào các loại độc tố người ta chia làm 5 loại kháng nguyên (A, B,C, D, E). Các độc tố có bản chất là các protein có khả năng gây một số bệnh:
- Toxin α gây hoại thư, sinh hơi, là một phospholipase C có ở tất cả các type. Là toxin chủ yếu ở type A.
- Toxin β gây viêm ruột hoại tử có ở type B và C.
- Độc tố ruột gây nhiễm độc thức ăn được tiết ra khi bào tử nảy mầm có ở type A và C.
C. perfingen lên men được đường glucose và lactose.
C. Perfingens có khả năng khử sunfite tạo H2S.
Phát hiện
Để phát hiện Clostridium perfingens cần phải trải 3 qua các giai đoạn:
- Tăng sinh
- Phân lập
- Khẳng định
1.3.4.3 Shigella
Chi:Shigella
Hình thái học
Khả năng gây bệnh
Phát hiện gồm 4 bước:
1.3.4.4 Staphylococcus aureus
Hình thái học
Khả năng gây bệnh
Phát hiện
Staphylococcus aureus được phát hiện dựa trên cơ sở đặc điểm tăng trưởng và phản ứng đông huyết tương của các dòng thuần từ các khuẩn lạc đặc trưng trên môi trường phân lập.
Đặc điểm để các nhà khoa học phân biệt giữa các staphylococci là khả năng sinh tổng hợp coagulase và mannitol.
1.3.4.5 Escherichia Coli
Hình thái học
Khả năng gây bệnh
Phát hiện
1.3.4.6 Vibrio cholera và Vibrio parahaemolyticus
Hình thái học
Khả năng gây bệnh
Phát hiện
2.3.1. Vibio cholera – Vibrio pharahaemolyticus (TCVN 7905- 1: 2008)
2.3.1.1. Nguyên tắc
- Số tế bào V.cholera và V.pharahaemolyticus suy giảm đáng kể khi bảo quản ở nhiệt độ lạnh. Do đó cần tránh bảo quản mẫu, dịcg huyền phù ở nhiệt độ thấp.
- Phân lập và nhận dạng: cấy dịch thu được vào môi trường đặc chọn lọc TCBS. Ủ ở 370C trong 24h ± 3h.
- Khẳng định: các khuẩn lạc V.cholera và V.pharahaemolyticus giả định đã phân lập được khẳng định bằng các thử nghiệm sinh hóa thích hợp.
2.3.1.2. Môi trường nuôi cấy và thuốc thử
2.3.1.3. Tiến hành
- Tăng sinh chọn lọc lần thứ hai: chuyển 1ml dịch cấy từ trên vào ống nghiệm chứa 10ml ASPW ủ lại trong 18h± 1 ở 41.50C.
- Phân lập và nhận dạng:
- Khẳng định: từ môi trường chọn lọc chọn ra ít nhất năm khuẩn lạc điển hình để cấy truyền sang SNA ủ ở 370C trrong 24h± 3h.
Các phép thử nhận dạng giả định:
+ Phép thử phản ứng oxidasa: Lấy mẫu từ môi trường SNA cấy vạch lên giấy lọc đã làm ẩm bằng thuốc thử oxidasa. Phản ứng dương tính khi xuất hiện xanh màu tím trong khoảng 10s.
+ Kiểm tra bằng kính hiển vi: sử dụng khuẩn lạc nghi ngờ từ môi trường TCBS để tiến hành nhuộm gram và tiếp tục cấy vào ASPW ủ ở 370C trong 1- 6h và kiểm tra dưới kính hiển vi về hình thái và phản ứng Gram và tính di động.
+ Phát hiện ornithin tách nhóm cacboxyl (ODC): cấy dung dịch ODC ngay dưới bề mặt. Thêm 1ml dầu khoáng vô trùng lên môi trường. Ủ 370C trong 24h± 3h.
+ Phát hiện L-lyzin tách nhóm cacboxyl (LDC): cấy dung dịch LDC ngay dưới bề mặt. Thêm 1ml dầu khoáng vô trùng lên môi trường. Ủ 370C trong 24h± 3h.
+ Phát hiện β- galactoxidase (ONPG): cấy dung khuẩn lạc nghi ngờ vào 0.25ml dung dịch muối Nacl. Thêm 1 giọt toluen và lắc ống. Đặt ống vào nồi cách thủy để 370C và để yên khoảng 5 phút. Thêm 0.25ml ONPG và trộn. Đặt ống vào nồi cách thủy để 370C và đ...
+ Phát hiện indol: cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống chứa 5ml môi trường muối tryptophan. Ủ 370C trong 24h± 3h. Sau khi ủ thêm 1ml thuốc thử Kovacs.
+ Phép thử khả năng chịu mặn: chuẩn bị một dãy nước pepton với nồng độ muối tăng dần: 0%, 2%, 6%, 10%. Cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào mỗi ống. Ủ 370C trong 24h± 3h.
Diễn giải các phép thử sinh hóa.
Dấu “+” nghĩa là có từ 76%- 89% dương tính
2.3.1.4. Sơ đồ tiến hành phân tích V. cholera và V. pharahemolyticus:
3.3.2 Salmonella spp (TCVN 4829: 2005):
2.3.2.1 Môi trường hóa chất
2.3.2.2 Tiến hành
Cấy 25g mẫu thử trong 225ml dung dịch đệm pepton ở nhiệt độ phòng, sau đó ủ ở 370C± 10C trong 18h± 2h.
2.3.2.3 Tăng sinh chọn lọc
2.3.2.4 Phân lập
2.3.2.5 Khẳng đinh
Hình 2.3 : Samonella spp trên XLD Hình 2.4 : phản ứng Salmonella spp trên TSI
2.3.3 Shigella spp
2.3.3.1. Môi trường hóa chất
- Tăng sinh sơ bộ không chọn lọc: cấy 25g mẫu thử trong 225ml dung dịch đệm pepton ở nhiệt độ phòng, sau đó ủ ở 370C± 10C trong 24h± 3h.
- Tăng sinh chọn lọc: cấy 0,1ml dịch tăng sinh sơ bộ vào 10ml môi trường TT ủ ở 370C± 10C trong 24h± 3h.
- Phân lập
- Khẳng đinh: cấy ria các khuẩn lạc đã chọn trên bề mặt thạch dinh dưỡng đã được làm khô trước sao cho các khuẩn lạc phân lập tốt phát triển.
2.3.3.3 Diễn giải các phép thử sinh hóa
Bảng 2.4 phản ứng sinh hóa Shigella spp
2.3.3.4. Sơ đồ tiến hành
2.3.4.1 Môi trường hóa chất
Thạch Baird Parker
2.3.4.2 Tiến hành
- Đồng nhất và pha loãng mẫu: cân 1g mẫu + 90ml dung dịch nước muối sinh lý (đồng nhất mẫu trong 30s. Ta thu được mẫu có độ pha loãng là 10-1. Tiếp tục pha loãng mẫu với nồng độ pha loãng: 10-2, 10-3 , 10-4 …
- Phân lập trên môi trường chọn lọc: ứng với mỗi mẫu pha loãng, cấy 0,1ml vào các đĩa petri có chứa môi trường Baird Parker. Mỗi độ pha loãng cấy 2- 3 đĩa. Lật ngược đĩa, ủ ở 370C± 10C trong 48h.
2.3.4.3 Khẳng định
- Test coagulase: Cấy các khuẩn lạc khả nghi lên môi trường Brain Heart Infusion ủ ở 370C± 20C trong 24h±3h.
2.3.4.4 Tính toán khuẩn lạc