Nghiên cứu hoạt tính ức chế enzym α glucosidade của một số cây thuốc an giang và thành phần các hoạt chất của thân cây ngũ linh chỉ embelia ribes burm f

ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÊ THỊ NGỌC HẠNH NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM α-GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC AN GIANG VÀ THÀNH PHẦN CÁC HOẠT CHẤT CỦA THÂN CÂY NGŨ LINH CHỈ Embelia ribes Burm.f LUẬN VĂN THẠC SĨ HĨA PHÂN TÍCH TP HỒ CHÍ MINH – 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÊ THỊ NGỌC HẠNH NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM α-GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC AN GIANG VÀ THÀNH PHẦN CÁC HOẠT CHẤT CỦA THÂN CÂY NGŨ LINH CHỈ Embelia ribes Burm.f Chun ngành: HĨA PHÂN TÍCH Mã số: 60 44 29 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA PHÂN TÍCH NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS NGUYỄN THỊ THANH MAI TP HỒ CHÍ MINH – 2011 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành đề tài luận văn này, tơi nhận nhiều góp ý, bảo giúp đỡ tận tình nhiều thầy cơ, bạn bè, đồng nghiệp gia đình Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Tiến sĩ Nguyễn Thị Thanh Mai, hết lịng dạy bảo, động viên, truyền thụ kinh nghiệm quý báu dẫn tơi suốt q trình học tập thực đề tài luận văn Xin bày tỏ lòng biết ơn đến GS.TSKH Nguyễn Công Hào, PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh, PGS TS Trần Lê Quan, TS Tôn Thất Quang, TS Nguyễn Trung Nhân có góp ý q báu để hồn thành luận văn Xin bày tỏ lịng biết ơn đến thầy cô anh chị, bạn học viên cao học khóa 17, 18, 19, 20, em sinh viên trường Đại học Khoa học tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh động viên, giúp đỡ có góp ý quý báu cho tơi suốt q trình học tập, thực nghiệm hoàn chỉnh đề tài tốt nghiệp Xin bày tỏ lịng biết ơn đến thầy cơ, đồng nghiệp trường Đại học An Giang tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành q trình học tập hoàn thành đề tài luận văn Và tất cả, xin cám ơn cha mẹ gia đình ln bên cạnh động viên hỗ trợ suốt trình học thực đề tài luận văn Tôi xin cám ơn tất thầy cơ, bạn bè, đồng nghiệp gia đình tôi! Xin cám ơn người! Thành phố Hồ Chí Minh, tháng 11 năm 2011 Lê Thị Ngọc Hạnh MỤC LỤC Trang LỜI MỞ ĐẦU DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ TỔNG QUAN KHÁI QUÁT VỀ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 1.1 Định nghĩa bệnh đái tháo đường 1.2 Phân loại bệnh đái tháo đường 1.2.1 Đái tháo đường loại 1.2.2 Đái tháo đường loại 1.3 Tác hại bệnh đái tháo đường 1.3.1 Các biến chứng cấp tính 1.3.2 Các biến chứng mãn tính 1.4 Phương pháp chữa trị bệnh đái tháo đường 1.4.1 Phương pháp điều trị bệnh đái tháo đường loại 1.4.2 Phương pháp điều trị bệnh đái tháo đường loại ENZYM a-GLUCOSIDASE 2.1 Sơ lược enzym 2.2 Chất ức chế enzym 2.3 Sơ lược enzym α-glucosidase 2.4 Tác nhân ức chế enzym α-glucosidase 10 2.4.1 Disaccharid 11 2.4.2 Iminosugar 12 2.4.3 Carbasugar pseudoaminosugar 14 2.4.4 Thiosugar 14 2.4.5 Hợp chất khơng có liên kết glycosidic 15 2.4.6 Một số chất ức chế tổng hợp 16 2.5 Nguyên tắc thử hoạt tính ức chế enzym a-glucosidase 18 2.5.1 Nguyên tắc 18 2.5.2 Phần trăm ức chế I% 18 2.5.3 Cách xác định IC50 19 KHÁI QUÁT VỀ CÂY NGŨ LINH CHỈ 20 3.1 Danh pháp 20 3.2 Mô tả thực vật 21 3.3 Phân bố 21 3.4 Công dụng dân gian 22 3.5 Tính chất dược lý 23 3.5.1 Kháng khuẩn 23 3.5.2 Kháng viêm, làm lành vết thương 23 3.5.3 Ngừa thai 23 3.5.4 Trừ giun, sán 24 3.5.5 Ức chế enzym acetyl cholinesterase 24 3.5.6 Ức chế enzym α-amylase 24 3.5.7 Chữa bệnh đái tháo đường 24 3.5.8 Chống co giật 25 3.6 Các hợp chất cô lập từ Ngũ Linh Chỉ 25 3.6.1 Các hợp chất cô lập từ rễ 25 3.6.2 Các hợp chất cô lập từ hạt 27 3.6.3 Các hợp chất cô lập từ 27 3.6.4 Các hợp chất cô lập từ 27 THỰC NGHIỆM HÓA CHẤT, DỤNG CỤ VÀ THIẾT BỊ 28 1.1 Hóa chất 28 1.2 Dụng cụ 28 1.3 Thiết bị 29 QUY TRÌNH SÀNG LỌC HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM α-GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC AN GIANG 29 2.1 Chuẩn bị mẫu nguyên liệu 29 2.2 Quy trình điều chế cao thơ 30 2.3 Quy trình thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase số thuốc An Giang 34 2.3.1 Chuẩn bị hóa chất 34 2.3.2 Quy trình thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase 34 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA THÂN CÂY NGŨ LINH CHỈ 36 3.1 Quá trình ly trích mẫu thân Ngũ Linh Chỉ 36 3.2 Q trình lập hợp chất từ cao etyl acetat thân Ngũ Linh Chỉ 38 3.2.1 Cô lập hợp chất từ phân đoạn A 38 3.2.2 Cô lập hợp chất từ phân đoạn C 40 3.3 Xác định cấu trúc hợp chất cô lập từ thân Ngũ Linh Chỉ 43 3.4 Khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase hợp chất cô lập từ thân Ngũ Linh Chỉ 43 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT QUẢ SÀNG LỌC HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM a-GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC AN GIANG 44 1.1 Kết điều chế cao thô số thuốc An Giang 44 1.2 Kết thử hoạt tính ức chế enzym a-glucosidase số thuốc An Giang 45 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA THÂN CÂY NGŨ LINH CHỈ 49 2.1 Kết thử hoạt tính ức chế enzym a-glucosidase mẫu cao thân Ngũ Linh Chỉ 49 2.2 Kết thử hoạt tính ức chế enzym a-glucosidase mẫu cao phân đoạn từ cao etyl acetat thân Ngũ Linh Chỉ 50 2.3 Biện luận cấu trúc hợp chất cô lập từ thân Ngũ Linh Chỉ 52 2.3.1 Hợp chất 53 2.3.2 Hợp chất 56 2.3.3 Hợp chất 58 2.3.4 Hợp chất 63 2.3.5 Hợp chất 65 2.3.6 Hợp chất 70 2.3.7 Hợp chất 72 2.4 Kết thử hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase chất cô lập từ thân Ngũ Linh Chỉ 73 KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC LỜI MỞ ĐẦU Hiện nay, giới, bệnh đái tháo đường (hay gọi bệnh tiểu đường) bệnh không lây phổ biến nhất, gây nhiều biến chứng trầm trọng, ảnh hưởng đến sống bệnh nhân xã hội Tại Việt Nam, tình hình mắc bệnh đái tháo đường có chiều hướng gia tăng, đặc biệt thành phố lớn Đái tháo đường gánh nặng cho kinh tế xã hội tồn giới kỉ 21 Chính vậy, việc nghiên cứu tìm phương pháp điều trị bệnh đái tháo đường thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học giới Trong phương pháp điều trị bệnh đái tháo đường loại phương pháp ức chế enzym α-glucosidase phương pháp quan tâm có chế đơn giản an tồn Tuy nhiên, thuốc ức chế enzym αglucosidase sử dụng tác dụng phụ, chủ yếu xảy hệ tiêu hóa Do đó, để hạn chế tối đa tác dụng phụ này, nhà khoa học ln mong muốn tìm hợp chất có khả ức chế enzym α-glucosidase có nguồn gốc từ tự nhiên Và nhiều nhà khoa học giới cơng bố nhiều cơng trình nghiên cứu hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase, lập nhiều hợp chất thiên nhiên có hoạt tính ức chế mạnh Việt Nam nước nhiệt đới gió mùa, có hệ thực vật phong phú Từ xưa, dân gian lưu truyền nhiều thuốc dùng để chữa bệnh đái tháo đường loại dược thảo Song, thật loại dược thảo có khả ức chế enzym α-glucosidase hay khơng? Và có, thành phần hóa học định khả này? Để trả lời cho câu hỏi này, tiến hành khảo sát hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase số thuốc An Giang chọn mẫu có hoạt tính mạnh để tiếp tục khảo sát thành phần hoạt chất nhằm tìm chất có hoạt tính ức chế enzym α-glucosidase, góp phần làm cho ngành hóa dược nước ta ngày phát triển Đây mục tiêu nghiên cứu đề tài DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 13 C-NMR : phổ cộng hưởng từ hạt nhân 13C H-NMR : phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H brs : mũi đơn bành rộng (broad singlet) CD3OD : metanol deuteri hóa CDCl3 : cloroform deuteri hóa CHCl3 : cloroform COSY : phổ tương quan (COrrelation SpectroscopY) 1H-1H d : mũi đôi (doublet) dd : mũi đôi- đôi (doublet of doublets) DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer dq : mũi đôi-bốn (doublet of quartets) dt : mũi đôi-ba (doublet of triplet) HMBC : phổ tương quan 1H-13C qua 2, nối (Heteronuclear Multiple-Bond Correlation spectroscopy) HSQC : phổ tương quan 1H-13C qua nối (Heteronuclear Single-Quantum Correlation spectroscopy) Hz : hertz IC50 : nồng độ ức chế 50 % enzym (Inhibitory Concentration 50 %) J : số ghép m : mũi đa (multiplet) MeOH : metanol MHz : megahertz MS : khối phổ (Mass Spectrometry) NMR : phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy) NXB : nhà xuất pp : trang (paper) ppm : part per million quin : mũi năm (quintet) s : mũi đơn (singlet) SKBM : sắc kí mỏng SKC : sắc kí cột t : mũi ba (triplet) δH, δC : độ dịch chuyển hóa học 1H, 13C HỢP CHẤT - CDCl3 - HMBC Phụ lục 5.13: Phổ HMBC mở rộng hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - HMBC Phụ lục 5.14: Phổ HMBC mở rộng hợp chất HỢP CHẤT - MS Phụ lục 5.15: Phổ MS hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - 1H 1-OCH3 4-OCH3 Phụ lục 6.1: Phổ 1H-NMR hợp chất 3a 3b HỢP CHẤT - CDCl3 - 13C Phụ lục 6.2: Phổ 13C-NMR hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - 13C & DEPT Phụ lục 6.3: Phổ 13C-NMR DEPT hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - COSY Phụ lục 6.4: Phổ COSY hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - HSQC Phụ lục 6.5: Phổ HSQC hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - HSQC Phụ lục 6.6: Phổ HSQC mở rộng hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - HMBC Phụ lục 6.7: Phổ HMBC hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - HMBC Phụ lục 6.8: Phổ HMBC hợp chất HỢP CHẤT - MS Phụ lục 6.9: Phổ MS hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - 1H -OCH3 Phụ lục 7.1: Phổ 1H-NMR hợp chất HỢP CHẤT - CDCl3 - 13C Phụ lục 7.2: Phổ 13C-NMR hợp chất HỢP CHẤT - MS Phụ lục 7.3: Phổ MS hợp chất ... GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LÊ THỊ NGỌC HẠNH NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM α- GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC AN GIANG VÀ THÀNH PHẦN CÁC HOẠT CHẤT CỦA THÂN CÂY... a-GLUCOSIDASE CỦA MỘT SỐ CÂY THUỐC AN GIANG 44 1.1 Kết điều chế cao thô số thuốc An Giang 44 1.2 Kết thử hoạt tính ức chế enzym a-glucosidase số thuốc An Giang 45 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN... chất cô lập từ thân Ngũ Linh Chỉ 43 3.4 Khảo sát hoạt tính ức chế enzym α- glucosidase hợp chất cô lập từ thân Ngũ Linh Chỉ 43 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT QUẢ SÀNG LỌC HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYM